专利名称：一种新的制备复方脑蛋白水解物的方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种新的制备复方脑蛋白水解物的方法。
背景技术：
脑蛋白水解物最早由奥地利EBEWE药厂以Cerebrolysin为商品名出售。脑蛋白水 解物是是无蛋白质的标准化器官特异性氨基酸混合物的水溶液，其中含有多种人体必需的 氨基酸、非必需氨基酸、活性多肽、唾液酸等，可用于颅脑外伤、脑血管病后遗症伴有记忆减 退及注意力集中障碍，对于治疗器质性脑性精神综合症、脑血管代偿不足，神经衰竭状态， 幼儿脑发育不全，癫痫中风、脑炎、脑震荡等具有良好的功效。脑蛋白水解物中，游离氨基酸、活性多肽和唾液酸对脑功能障碍的恢复起着不可 忽视的作用，但是现有的制备方法得到的脑蛋白水解物中游离氨基酸含量很低，尤其是游 离氨基酸的含量非常低，达不到国家规定标准。
发明内容
本发明采用纳滤技术提供一种从哺乳动物脑组织中制备的复方脑蛋白水解物，使 用该技术制备的复方脑蛋白水解物中唾液酸的含量较高、含天然的游离氨基酸较低，通过 补加外源性注射用L-氨基酸，其很大优点在于通过血脑屏障并确保疗效，对于提高脑蛋白 水解物的质量及质量可控性、保证脑蛋白水解物的安全性和有效性、扩大临床应用具有重 要的意义。本发明的技术方案如下一种从哺乳动物脑组织中制备脑蛋白水解物的方法，包括如下步骤(1)胃酶液水解取新鲜冷冻的哺乳动物脑组织，加纯化水或注射用水勻浆，勻浆 液加入胃酶液搅拌均勻，水解，水解完毕加热微沸，过滤，得胃酶水解液；(2)胰酶水解胃酶水解液，加入胰酶搅拌均勻，水解，过滤，得脑蛋白水解物粗提 液；(3)除碱性蛋白；(4)超滤分离；(5)纳虑浓缩；(6)检查细菌内毒素，得脑蛋白水解物精制品。本发明脑蛋白水解物的制备方法，优选为(1)胃酶液水解取新鲜冷冻的哺乳动物脑组织，缓化，按照1 1 2的比例加纯 化水或注射用水，胶体磨勻浆，勻浆液加热80 90°C，保温10 20min，降温至35 40°C， 调PH值为2. 5 3. 5，加入胃酶液搅拌均勻，37 45°C水解12 18h，水解完毕，加热微沸 20min，滤布过滤，得胃酶水解液；(2)胰酶水解胃酶水解液调节pH值7. 5 8. 5，胰酶(按原料1 %加入)加入激 活剂，0. 04mol/LCaCl2室温放置1小时加入胃酶水解液中，再用5mol/L NaOH调节pH值为7. 5-8. 0,45-55 °C水解4h，水解完毕，调节pH值为4. 0 5. 0，按原料总量加入1 %活性炭 100°C加热20min，用滤布过滤，得脑蛋白水解物粗提液；(3)除碱性蛋白取脑蛋白水解物粗提液，调节pH值为9.0 10.0，加热80 900C，保温lOmin，降温30°C以下，用滤纸过滤，得滤液；(4)超滤分离将(3)中所得滤液调pH值为6. 5 7. 5，用10000分子量的超滤柱 超滤，超滤液冷冻48h;(5)纳滤浓缩、活性炭处理将⑷中所得冷冻的超滤液缓化，用0.8μπι滤膜过 滤，除去溶液中脂肪蛋白及杂蛋白，过滤液纳滤，纳滤液用6mol/LLHcl调pH值为4. O 5. 0，并加入0. 1 0. 4%活性炭(w/w)，充分搅拌下100°C保温20 30min，降温30°C以下， 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，滤液取样，检测折光率、氨基酸。(6)补加注射用氨基酸按折光率稀释纳滤液，补加注射用氨基酸，调整折光率、 氨基酸至质量标准规定。(7)超滤、检查细菌内毒素将(6)中所得滤液调整pH值为7. O 7. 5，再经10000 分子量的超滤柱超滤，超滤液取样检查细菌内毒素，合格后，得复方脑蛋白水解物精制品。3.复方脑蛋白水解物制备处方
权利要求
一种从哺乳动物脑组织中制备脑蛋白水解物的方法，其特征在于，包括如下步骤(1)胃酶液水解取新鲜冷冻的哺乳动物脑组织，加纯化水或注射用水匀浆，匀浆液加入胃酶液搅拌均匀，水解，水解完毕加热微沸，过滤，得胃酶水解液；(2)胰酶水解胃酶水解液，加入胰酶，搅拌均匀，水解，过滤，得脑蛋白水解物粗提液；(3)除碱性蛋白；(4)超滤分离；(5)纳虑浓缩；(6)检查细菌内毒素，得脑蛋白水解物精制品。
2.如权利要求1所述的脑蛋白水解物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤(1)胃酶液水解取新鲜冷冻的哺乳动物脑组织，缓化，按照1 1 2的比例加纯化 水或注射用水，胶体磨勻浆，勻浆液加热80 90°C，保温10 20min，降温至35 40°C， 调PH值为2. 5 3. 5，加入胃酶液搅拌均勻，37 45°C水解12 18h，水解完毕，加热微沸 20min，滤布过滤，得胃酶水解液；(2)胰酶水解胃酶水解液调节pH值7.5 8. 5，胰酶(按原料1 %加入)加入激活 剂，0.0411101/101(12室温放置1小时加入胃酶水解液中，再用5mol/L NaOH调节pH值为 7. 5-8. 0,45-55 °C水解4h，水解完毕，调节pH值为4. 0 5. 0，按原料总量加入1 %活性炭 100°C加热20min，用滤布过滤，得脑蛋白水解物粗提液；(3)除碱性蛋白取脑蛋白水解物粗提液，调节pH值为9.0 10.0，加热80 901， 保温lOmin，降温30°C以下，用滤纸过滤，得滤液；(4)超滤分离将(3)中所得滤液调pH值为6.5 7. 5，用10000分子量的超滤柱超 滤，超滤液冷冻48h;(5)纳滤浓缩、活性炭处理将(4)中所得冷冻的超滤液缓化，用0.8μπι滤膜过滤，除 去溶液中脂肪蛋白及杂蛋白，过滤液纳滤，纳滤液用6mol/LLHcl调pH值为4. O 5. 0，并加 入0. 1 0. 4%活性炭(w/w)，充分搅拌下100°C保温20 30min，降温30°C以下，0. 45 μ m 微孔滤膜过滤，滤液取样，检测折光率、氨基酸。(6)补加注射用氨基酸按折光率稀释纳滤液，补加注射用氨基酸，调整折光率、氨基 酸至质量标准规定。(7)超滤、检查细菌内毒素将(6)中所得滤液调整pH值为7.O 7. 5，再经10000分 子量的超滤柱超滤，超滤液取样检查细菌内毒素，合格后，得复方脑蛋白水解物精制品。
3.复方脑蛋白水解物制备处方复方脑蛋白水解物300000ml纳滤液75000ml补加纯化水或注射用水225000ml注射用L-天门冬氨酸840g
4.如权利要求1或2制备的脑蛋白水解物，其特征在于，含有活性多肽10 12mg/mL 和唾液酸0. 1 0. 2mg/mL。
5.如权利要求2(5)(6)所述的脑蛋白水解物与一种或多种药用载体和/或稀释剂制的 药物组合物，可以制成药学上可接受的任一剂型。
6.如权利要求2(5)(6)所述的脑蛋白水解物在制备治疗和/或预防脑功能障碍的药物 中的应用。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种新的制备脑蛋白水解物的方法，通过本发明的方法制备的脑蛋白水解物，含活性多肽10～12mg/ml和唾液酸0.1～0.2mg/ml。通过本发明方法制备的脑蛋白水解物有效成分含量高，安全可控。
文档编号A61P25/00GK101991602SQ20091007269
公开日2011年3月30日 申请日期2009年8月18日 优先权日2009年8月18日
发明者张树信, 王佰荣 申请人:张树信;哈尔滨三联药业有限公司