专利名称：一种治疗由于肝脏损伤所造成的低蛋白血证的中药制剂的制作方法
技术领域：
本发明公开一种治疗由于肝脏损伤所造成的低蛋白血证的中药制剂，属于中医制 药技术领域。
背景技术：
现阶段治疗由肝损伤所造成的低蛋白血症通常都是以静脉注射人血白蛋白为主。 不过目前国内市场正规人血白蛋白注射液明显短缺，价格昂贵，体内停留时间较短，有一定 的应用局限。症状比较严重的，如产生腹水以及下肢出现水肿的症状，多以利尿剂促使尿 量增加，缓解水潴留的情况。虽暂时缓解，但长久使用会产生较严重的抗药性，严重的，最后 会导致给药后无法达到利尿的效果。如果腹水量超大，为缓解病情一般都会进行腹水抽取 以及抽取回注的医疗手段。但众所周知，此办法无法从根本上解决腹腔水液溢出，腹水越抽 越滑，严重的，会导致身体机能严重下降以及诸多的并发症产生。目前临床纠正低白蛋白血症主要采用静脉滴注或静脉推注人血白蛋白治疗，尚未 见既能保护肝功能，逆转肝纤维化，又能纠正肝硬化腹水伴血浆白蛋白低下的标本兼治的 药物。
发明内容
本发明提供一种治疗由于肝脏损伤所造成的低蛋白血证的中药制剂，解决了肝损 伤患者导致的低蛋白血症。本发明采用以下解决方案以中医理论为指导，重在提高患者自身免疫机能，调理 脏腑运化功能，多方位治疗，不但改善肝脏功能，而且重视加强身体机能的养护调整，标本 兼治，以正抗邪，从而实现既治疗脏器病症又扶正身体机能，使之整体康复的医疗效果。本发明的治疗由于肝脏损伤所造成的低蛋白血证的中药制剂，主要是由以下原料 重量份制成的(简称制剂A)人参5 30份、黄精5 30份、生地5 30份、当归5 30份、玄参5 30份、 龟甲胶5 30份、川芎5 30份、白术5 30份、柴胡5 30份。具体制备方法如下①取川芎、当归粉碎，将两者混合，加水浸泡l_6h，水蒸气蒸馏，加热提取5_15h， 萃取，得挥发油备用；水溶液与③的前两次水煮液合并，残渣加入到③的第二残渣中合并。②取柴胡、玄参粉碎，用50% -90%的乙醇提取2-4次，每次为0. 5_3h，合并滤液， 回收乙醇，浓缩，用2-5倍量95%乙醇沉淀；过滤，残渣弃掉，滤液回收至稠膏状，与烘箱中 烘干，研碎。③取人参、生地、黄精、白术粉碎，加水5-12倍量煮2-4次，每次0. 5_3h合并，过 滤，浓缩稠膏状。④取龟甲胶粉碎，过80目筛。⑤将上述得到的稠膏，粉末及龟甲胶粉末充分混合在一起，与烘箱中烘干，取出，加入上述得到的挥发油，混合。⑥按制剂工艺制成所需制剂类型，如散剂，胶囊剂，丸剂等。本发明还可以是由上述组方中的原料以及下述重量份数配比的原料制成的(简 称制剂B)鹿茸5 30份、赤芍5 30份、甘草5 30份、香附5 30份。制备方法如下①取川芎、当归、香附粉碎，将三者混合，加水浸泡l_6h，水蒸气蒸馏，加热提取 5-15h，萃取，得挥发油备用。水溶液与③的前两次水煮液合并，残渣加入到③的第二残渣中
口井O②取柴胡、赤芍、玄参粉碎，用50 % -90 %的乙醇提取2-4次，，每次为0. 5_3h，合并 滤液，回收乙醇，浓缩，用2-5倍量95%乙醇沉淀。过滤，残渣弃掉，滤液回收至稠膏状，与烘 箱中烘干，研碎。③取人参、生地、黄精、白术、干草粉碎，加水5-12倍量煮2-4次，每次0. 5_3h合 并，过滤，浓缩稠膏状。④取鹿茸、龟甲胶粉碎，过80目筛。⑤将上述得到的稠膏，粉末及龟甲胶粉末充分混合在一起，与烘箱中烘干，取出， 加入上述得到的挥发油，混合。⑥按制剂工艺制成所需制剂类型，如散剂，胶囊剂，丸剂等。用量用法2 3次/日5 10g/次；适应症由肝脏损伤所造成的低蛋白血症；方解本发明以大补元气入手，以人参、黄精为君，重在补其先后天之不足；以生 地、龟甲胶、玄参、赤芍、鹿茸、当归、川弯为臣，取其滋阴潜阳，清肝补肾之功，生血、凉血及 活血之用，前后阴阳相济，调养肝肾；以白术、甘草为佐，养胃健脾，增强水谷精微的吸收运 化；以香附、柴胡为使，行气和里，调畅气机，通条水道。经多年临床观察，由肝脏损伤所造成的低蛋白血症，无论其成因或是现状皆源于 以下中医学的有关病因病理。一是元气不足，脏腑功能减退；二是脏器郁结，造成气滞血瘀； 三是脾失运化，后天精微吸收输布降低。以下试验表明本发明药物制剂对肝脏损伤所造成的低蛋白血证具有明显疗效课题组通过皮下注射CCL4花生油溶液建立大鼠实验性肝纤维化模型，观察了参 龟保肝升白丸对实验性肝纤维化大鼠血清蛋白、肝功能、肝组织胶原及氧化损伤的影响，得 出如下结论①制剂A及制剂B均能明显升高肝纤维化大鼠血清ALB含量及A/G比值，显著 降低血清GL0含量，提示其可能通过促进肝组织蛋白质的合成，尤其是增加白蛋白的合成， 纠正肝纤维化引起的低白蛋白与白球比例倒置，对肝功能有较好的改善作用；②制剂A及 制剂B均可明显降低血清AST及ALT活力，减少肝组织中Hyp的生成，提示其可降低血清转 氨酶，改善肝功能，抑制肝脏胶原纤维的大量生成和异常沉积；③制剂A及制剂B均可明显 降低肝组织中MDA含量，显著升高SOD活性及GSH含量。提示其可能通过减少脂质过氧化， 增强机体清除氧自由基能力，减轻肝细胞脂质过氧化损伤，减轻肝细胞坏死，对肝组织有较 好的抗氧化作用；④制剂A及制剂B均可降低肝组织N0S活性及血清NO含量，并呈现一定 的剂量依赖关系。提示其可抑制肝组织N0S活性并减少血清NO含量，有一定的改善肝脏微循环，减轻肝组织自由基损伤的作用，这对抗肝纤维化有一定意义。急性毒性试验无法求出LD50，表明该药毒性低，安全范围大。如果按治疗肝硬化腹 水伴白蛋白低下的中药6类新药进行研制，开发出具有完全自主知识产权的新药，将突破 人血白蛋白市场缺乏的瓶颈，为广大肝病患者带来福音。制剂A及制剂B对实验性肝损伤大鼠低蛋白血证的保护作用1实验材料1. 1实验动物健康Wistar大鼠，雄性，体重180 220g，由吉林大学基础医学院动 物实验中心提供，质量合格证号SCXK-(吉)2007-0003。1. 2药品与试剂A方及B方由吉林大学化学学院天然药物化学研究室提供(参见 实施例1和实施例4)，批号20090215 ；马洛替酯片由锦州九肽药业有限公司提供，批号 20090220 ；由四氯化碳由北京化工厂生产，批号20080106 ；花生油，由青岛胡姬花集团有 限公司生产，批号20081005 ；白蛋白、蛋白定量(考马斯亮兰)、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转 氨酶、总胆红素、胆碱酯酶、超氧化歧化酶、丙二醛、还原型谷胱甘肽-S转移酶及羟脯氨酸 测试盒均由南京建成生物工程研究所提供，批号20091012。2实验方法2. 1动物分组及模型建立1)将200只雄性Wistar大鼠，按体重随机选取20只作为对照组，其余180只均作 为造模组，予以复制大鼠实验性肝纤维化模型。2)大鼠实验性肝纤维化模型制备方法如下首次皮下注射(sc)40% CC14花生油 溶液5ml/kg;从第3日开始均sc 40% CC14花生油溶液3ml/kg，每3日一次，正常饮食饮 水。对照组大鼠首次sc纯花生油溶液5ml/kg ；从第3日开始均sc纯花生油溶液3ml/kg， 每3日一次，正常饮食饮水。3)于第18次造模后，尾静脉采血测定大鼠血清白蛋白含量。然后按照血清白蛋白 水平并结合大鼠体重，将造模大鼠随机分为8组模型组，A方小、中、大剂量组，B方小、中、 大剂量组及阳性药马洛替酯组。2. 2给药方案1)对照组 灌胃给予0. 5%羧甲基纤维素钠10ml/kg2)模型组 灌胃给予0. 5%羧甲基纤维素钠10ml/kg3) A方小剂量组灌胃给予A方lg/kg4) A方中剂量组灌胃给予A方2g/kg5) A方大剂量组灌胃给予A方4g/kg6)B方小剂量组灌胃给予B方lg/kg7)B方中剂量组灌胃给予B方2g/kg8)B方大剂量组灌胃给予B方4g/kg9)阳性药组灌胃给予马洛替酯片0. lg/kg每天上午8:00 9:00灌胃给药1次，共持续5周。在给药期间，模型组，A方小、 中、大剂量组，B方小、中、大剂量组及阳性药马洛替酯组大鼠继续按上述造模方法维持肝纤 维化模型，直到实验结束。2. 3血样与组织样的采集与制备
杀鼠前12小时，动物禁食不禁水。杀鼠时将动物用10%水合氯醛溶液(300mg/kg) 腹腔注射麻醉，进行如下处置1)腹主动脉采血，静置分离血清。按试剂盒要求测定血清白蛋白(ALB)、总蛋白 (TP)、胆红素(BIL)含量及胆碱酯酶(CHE)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST) 活性。2)取肝脏，称重，根据体重计算肝脏系数(肝脏重量/体重X 100)。3)取部分肝组织，制备勻浆。按试剂盒要求测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)及 谷胱甘肽-S转移酶(GSH-ST)活性，丙二醛(MDA)及组织蛋白含量。4)按考马斯亮兰测试盒方法测定血清和组织总蛋白(TP)含量。以血清TP含量减 去血清ALB含量得血清球蛋白(GL0)含量。5)取200mg肝组织制备勻浆，按试剂盒要求测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量。2. 4统计学方法实验数据以均值士标准差(X±S)表示，采用组间差异比较Student-t检验进行统 计分析。3实验结果3. 1肝脏系数与对照组比较，模型组大鼠肝脏系数显著增加(P<0.01)；与模型组 比较，A方中、大剂量组，B方小、中、大剂量组及阳性药马洛替酯组均能显著性降低肝脏系 数(P < 0. 05或卩 < 0.01)，见表 1。表1A方及B方对实验性肝纤维化大鼠肝脏系数的影响(〒ts，n= 10)
与对照组比较##P < 0.01 ；与模型组比较*P <0. 05, **P < 0.013.2血清白蛋白(ALB)与对照组比较，模型组大鼠血清ALB含量显著降低(P
<0. 001)。与模型组比较，A方中、大剂量组及B方小、中、大剂量组对血清ALB含量均有不 同程度的升高作用(P < 0. 05 P < 0. 001)，阳性药马洛替酯亦能显著升高血清ALB含量 (P < 0. 05) ；A方大剂量组及B方中、大剂量组对血清ALB含量的升高作用明显优于阳性药 马洛替酯组(P<0. 05)，见表2。3. 3血清球蛋白(GL0)与对照组相比，模型组大鼠血清GL0含量显著升高(P
<0. 01)。与模型组比较，A方大剂量组及B方中、大剂量组均能显著降低大鼠血清GL0含 量(P< 0.05)，阳性药马洛替酯组对大鼠血清GL0含量无明显影响(P> 0.05)，见表2。
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3. 4血清总蛋白(TP)与对照组相比，模型组大鼠血清TP含量有所降低，但差异不 显著(P > 0. 05)。与模型组比较，A方、B方及阳性药马洛替酯组对血清TP含量均有不同 程度的升高作用，但无显著差异(P >0.05)，见表2。3. 5血清白蛋白/球蛋白(A/G)与对照组相比，模型组大鼠A/G比值显著降低(P
<0.01)。与模型组比较，A方中、大剂量组，B方小、中、大剂量组均显著升高A/G比值(P
<0. 05或P < 0. 01)，B方中、大剂量组对A/G比值的升高作用明显优于阳性药马洛替酯组 (P < 0. 05)，见表 2。表2A方及B方对实验性肝纤维化大鼠血清ALB、GL0、TP及A/G的影响(〒±s，η = 10) 与对照组比较##Ρ < 0. 01，###Ρ < 0. 001与模型组比较*Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01，***Ρ < 0. 001与马洛替酯组比较ΔΡ < 0. 053. 6血清转氨酶(ALT及AST)与对照组比较，模型组大鼠血清ALT及AST活性均显 著升高(P <0.001)。与模型组比较，A方中、大剂量组，B方小、中、大剂量组及阳性药马洛 替酯组均能显著降低血清ALT及AST活性(P < 0. 05或P < 0. 01)，三者之间无明显差异 (P > 0. 05)，见表 3。表3A方及B方对实验性肝纤维化大鼠血清ALT及AST的影响(〒±s，η = 10) 与对照组比较###P < 0. 001与模型组比较*P < 0. 05，**P < 0. 013. 7血清胆碱酯酶(CHE)及胆红素(BIL)与对照组比较，模型组大鼠血清CHE活性 显著升高，BIL含量显著下降(P < 0. 05或P < 0. 01)。与模型组比较，A方和B方中、大剂量 组及阳性药马洛替酯组均能显著降低血清CHE活性，并显著升高血清BIL含量(P < 0. 05)， 三者之间无明显差异(P > 0. 05)，见表4。表4A方及B方对实验性肝纤维化大鼠血清CHE及BIL的影响(〒ts，n = 10) 与对照组比较#P < 0. 05，##P < 0.01 ；与模型组比较*P < 0. 053. 8肝组织MDA、SOD、GSH-ST及Hyp与对照组比较，模型组大鼠肝组织SOD及 GSH-ST活性均明显降低(P < 0. 05或P < 0. 01)，MDA及Hyp含量均明显升高(P < 0. 01)。 与模型组比较，A方和B方中、大剂量组及阳性药马洛替酯组均能显著升高SOD及GSH-ST活 性(P < 0. 05或P < 0. 01)，明显降低MDA及Hyp含量(P < 0. 05或P < 0. 01)，三者之间 无明显差异(P > 0. 05)，见表5。表5A方及B方对实验性肝纤维化大鼠肝组织MDA、S0D、GSH_ST及Hyp的影响(无土s, n = 10) 与对照组比较#P < 0. 05，##P < 0.01 ；与模型组比较 *P < 0. 05，**P < 0.01本发明药物的积极效果在于由人参及龟板胶等13味纯中药组成，其功效为舒肝 健脾，活血化淤，软坚散结，补养正气。对于肝硬化腹水伴白蛋白低下患者，不仅能消除腹 水，还能明显升高血浆白蛋白，整体调节身体脏腑机能，不顾此失彼，可长期服用，无毒副作用。
具体实施例方式为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而 非对本发明的任何形式的限制。实施例1 制剂A 人参30g、黄精30g、生地15g、当归15g、玄参15g、龟甲胶15g、川芎15g、白 术15g、柴胡20g。制法①取川芎、当归粉碎，将三者混合，加水浸泡2h，水蒸气蒸馏，加热提取10h， 萃取，得挥发油，备用。水溶液与③的前两次水煮液合并，残渣加入到③的第二残渣中合并， 水煮(第三遍)，过滤，合并滤液。②取柴胡、玄参粉碎，用60%的乙醇提取3次，第一次为2h，第二次为2h，第三次 为lh，合并滤液，回收乙醇，浓缩，用5倍量95%乙醇沉淀。过滤，残渣弃掉，滤液回收至稠 膏状，与烘箱中烘干，研碎。③取人参、生地、黄精、白术粉碎，加水8倍量煮3次，第一次为2. 5h，第二次为2h， 第三次为1.5h，合并，过滤，浓缩稠膏状。④取龟甲胶粉碎，过80目筛。⑤将上述得到的稠膏，粉末及龟甲胶粉末充分混合在一起，与烘箱中烘干，取出， 加入上述得到的挥发油，混合。⑥再次烘干，取出，放冷，装瓶或成袋，灭菌后密封。性状本品为棕红色粉末，味微苦，油脂。实施例2 制剂A 人参30g、黄精20g、生地15g、当归15g、玄参10g、龟甲胶10g、川芎15g、白术20g、柴胡15g。制备方法的①②③④⑤步骤同实施例1，⑥加酒精润湿，做成水丸。性状本品为 棕红色药丸。实施例3:制剂A 人参30g、黄精30g、生地30g、当归20g、玄参10g、龟甲胶10g、川芎20g、白 术20g、柴胡5g。制备方法的①②③④⑤步骤同实施例1，⑥加适量糊精，制粒，装囊。每粒 0. 3g。实施例4制剂B 人参30g、黄精30g、生地15g、当归15g、玄参15g、龟甲胶15g、川芎15g、白 术15g、柴胡20g、鹿茸5g、赤芍15g、甘草15g、香附15g。制法①取川芎、当归、香附粉碎，将三者混合，加水浸泡2h，水蒸气蒸馏，加热提 取10h，萃取，得挥发油，备用。水溶液与③的前两次水煮液合并，残渣加入到③的第二残渣 中合并，水煮(第三遍)，过滤，合并滤液。②取柴胡、赤芍、玄参粉碎，用60%的乙醇提取3次，第一次为2h，第二次为2h，第 三次为lh，合并滤液，回收乙醇，浓缩，用5倍量95%乙醇沉淀。过滤，残渣弃掉，滤液回收 至稠膏状，与烘箱中烘干，研碎。③取人参、生地、黄精、白术、干草粉碎，加水8倍量煮3次，第一次为2. 5h，第二次 为2h，第三次为1.5h，合并，过滤，浓缩稠膏状。④取鹿茸、龟甲胶粉碎，过80目筛。将上述得到的稠膏，粉末及鹿茸和龟甲胶粉末充分混合在一起，与烘箱中烘干，取 出，加入上述得到的挥发油，混合。⑥再次烘干，取出，放冷，装瓶或成袋，灭菌后密封。性状本品为棕红色粉末，味微 苦，油脂。实施例5:人参30g、黄精20g、生地15g、当归15g、玄参10g、龟甲胶10g、川芎15g、白术20g、 柴胡15g、鹿茸10g、赤芍10g、甘草5g、香附15g。制备方法的①②③④⑤步骤同实施例4， ⑥加酒精润湿，做成水丸。性状本品为棕红色药丸实施例6:人参30g、黄精30g、生地30g、当归20g、玄参10g、龟甲胶10g、川芎20g、白术20g、
柴胡5g、鹿茸5g、赤芍15g、甘草5g、香附20g。制备方法的①②③④⑤同实施例4。⑥加适 量糊精，制粒，装囊。每粒0.3g。
权利要求
一种治疗由于肝脏损伤所造成的低蛋白血证的中药制剂，其特征在于由包括下述重量份数配比的原料制成的人参5～30份、黄精5～30份、生地5～30份、当归5～30份、玄参5～30份、龟甲胶5～30份、川芎5～30份、白术5～30份、柴胡5～30份。
2.根据权利要求1所述的中药制剂，其特征在于由权利要求1中的原料以及下述重 量份数配比的原料制成的鹿茸5 30份、赤芍5 30份、甘草5 30份、香附5 30份。
3.根据权利要求1所述中药制剂的具体制备方法，包括如下步骤①取川芎、当归粉碎，将两者混合，加水浸泡l_6h，水蒸气蒸馏，加热提取5-15h，萃取， 得挥发油备用；水溶液与③的前两次水煮液合并，残渣加入到③的第二残渣中合并；②取柴胡、玄参粉碎，用50%-90%的乙醇提取2-4次，每次为0. 5-3h，合并滤液，回收 乙醇，浓缩，用2-5倍量95%乙醇沉淀；过滤，残渣弃掉，滤液回收至稠膏状，与烘箱中烘干， 研碎；③取人参、生地、黄精、白术粉碎，加水5-12倍量煮2-4次，每次0.5-3h合并，过滤，浓 缩稠膏状；④取龟甲胶粉碎，过80目筛；⑤将上述得到的稠膏，粉末及龟甲胶粉末充分混合在一起，与烘箱中烘干，取出，加入 上述得到的挥发油，混合；⑥按制剂工艺制成所需制剂类型。
4.根据权利要求2所述中药制剂的具体制备方法，包括如下步骤①取川芎、当归、香附粉碎，将三者混合，加水浸泡l_6h，水蒸气蒸馏，加热提取5-15h， 萃取，得挥发油备用。水溶液与③的前两次水煮液合并，残渣加入到③的第二残渣中合并；②取柴胡、赤芍、玄参粉碎，用50%-90%的乙醇提取2-4次，，每次为0. 5-3h，合并滤 液，回收乙醇，浓缩，用2-5倍量95%乙醇沉淀。过滤，残渣弃掉，滤液回收至稠膏状，与烘箱 中烘干，研碎；③取人参、生地、黄精、白术、干草粉碎，加水5-12倍量煮2-4次，每次0.5-3h合并，过 滤，浓缩稠膏状；④取鹿茸、龟甲胶粉碎，过80目筛；⑤将上述得到的稠膏，粉末及龟甲胶粉末充分混合在一起，与烘箱中烘干，取出，加入 上述得到的挥发油，混合；⑥按制剂工艺制成所需制剂类型。
全文摘要
本发明提供一种治疗由于肝脏损伤所造成的低蛋白血证的中药制剂，由人参、黄精、生地、当归、玄参、龟甲胶、川芎、白术、柴胡等制成，其功效为舒肝健脾，活血化淤，软坚散结，补养正气。对于肝硬化腹水伴白蛋白低下患者，不仅能消除腹水，还能明显升高血浆白蛋白，整体调节身体脏腑机能，不顾此失彼，可长期服用，无毒副作用。
文档编号A61P1/16GK101884730SQ20101017870
公开日2010年11月17日 申请日期2010年5月21日 优先权日2010年5月21日
发明者于晓风, 曲绍春, 王志才, 睢大筼, 许恩伯, 许磊, 陈燕萍, 马兴元 申请人:吉林大学;许磊