专利名称：21(r)阿加曲班的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，特别是涉及一种直接凝血酶抑制剂21 (R)阿加曲班的应用。
背景技术：
1978年日本Mitsubishi化学公司S. Okamoto等首次报导了阿加曲班 (Argatroban) —水合物抗凝血酶活性US 4 101 653。随后20多年期间，众多研究者对阿加曲班的生物活性及作为医药的价值进行了深入研究。1981年，S. Okamoto在动物体内将该药与肝素进行了比较Okamoto，S. et al.，Biochem. Biophys. Res. Commun. 101， 440(1981)；T. Kumoto等对其立体选择活性进行了报导Kumada，Τ. et al.，Thromb. Res. 24,285(1981)；1984 年，R. Kumato 进行了临床血液透析评价Kikumoto，R. et al.， Biochemistry 23,85(1984)；1986年该作者报导了阿加曲班抑制哺乳动物凝血酶活性， 可作为治疗和预防血栓药剂和血小板凝聚抑制剂。阿加曲班一水合物可作为选择性抗血栓剂、治疗慢性动脉堵塞和脑血栓等JP 61-48829]0 1992年和1993年，Taparelli 和J. A. Jakubowski先后报导了阿加曲班抗凝血酶的可逆性Taparel 1 i，C.，Trends Pharmacol. Sci.，1993，14，366，Jakubowski, J. A. et al, Rep. Med. Chem.，1992，27，99；90 年代L. R. Buch等多位研究者报导了相关研究Buch，L. R.，Cadiosvasc. Drug Rev.，1991， 9,247, Strupcnewski, J.D. et al. , Academic :San Diego,1991；Vol. 26, p299, Brundish, D. et al. ， J.Med. Chem. 1999 ；42,4584, Shebuski, R.J. ， Academic :San Diego,1999 ； Vol. 26，p98。1992年日本批准作为非肠道使用凝血酶抑制剂Hijikata-Okunomiya，Α.， et al, Thromb. Hemostasis,1992,18,135。阿加曲班是L-精氨酸的衍生物，其只与凝血酶活性位点相互作用，是凝血酶的竞争性抑制剂。它直接灭活凝血酶(因子IIa)的活性；对凝血酶的产生没有直接作用，其作用不依赖于体内的抗凝血酶；不仅灭活血液中游离状态的凝血酶，还能够灭活与纤维蛋白血栓结合了的凝血酶；阻断凝血瀑布的正反馈；极低浓度时即可抑制由凝血酶诱导的血小板凝聚反应，间接抑制凝血酶的产生。阿加曲班分子量小，它能进入到血栓内部，直接灭活已经与纤维蛋白血栓结合的凝血酶，对那些陈旧的血栓仍能发挥抗栓作用。此外，阿加曲班能大大降低血浆中TAT (凝血酶-抗凝血酶复合物)的水平，有效改善患者的高凝状态，在慢性血栓栓塞性疾病中有非常好的临床效果。但是，目前临床上多使用21 (R)阿加曲班和21⑶阿加曲班的混合物，一般来说， 药物混合物要比单一成分的药物生物活性低，治疗效果差、用量高，而且近年来，世界各国对药物的成分要求越来越严格，除了严格限定杂质含量和单一杂质含量之外，对各种异构体分离鉴定及其含量也进行了严格规定，因此单独研究21 (R)阿加曲班的生物活性具有重要的意义
发明内容
本发明的目的在于提供一种21(R)阿加曲班在治疗和预防血栓以及血小板凝聚抑制药物，即凝血酶抑制剂中的应用。所述的药物为一种新的凝血酶抑制剂，含有单一成分的非对映异构体21 (R)阿加曲班和药学上可接受的辅料。21 (R)阿加曲班的化学式为2R，4R)-l-K2S)-5-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-氧代-2-{[(3ΙΟ-(1，2，3，4-四氢-3-甲基-8-喹啉基)磺酰]氨基} 戊基}-4_甲基-2-哌啶甲酸。所述的药物可按照通常的方法制成液体制剂。所述的药物中有效活性成分的浓度为医学上可接受的21 (R)阿加曲班的量。本发明提供的单一成分的21 (R)阿加曲班对延长正常犬全血凝固时间(CT)作用显著，其作用效果是空白对照组的7倍；21 (R)阿加曲班对延长正常犬复钙时间(RT)作用显著，其作用效果是空白对照组的2倍；21 (R)阿加曲班对延长正常犬凝血酶原时间(PT) 作用显著，其作用效果是空白对照组的15倍；21 (R)阿加曲班对延长正常犬白陶土部分凝血活酶时间(APTT)，延长正常犬凝血酶时间(TT)有一定作用，其作用效果比空白对照组略强；21 (R)阿加曲班对正常犬血小板粘附率和血小板聚集率有降低作用。
具体实施例方式为了验证本发明提供的21(R)阿加曲班药物的药效，本申请人先按照下述方法将其配制成21 (R)阿加曲班静脉注射液(以下简称R体)，以供其后的药效分析实验用。21 (R)阿加曲班静脉注射液
21 (R)阿加曲班
盐酸，USP
NaCl, USP渗透调节剂盐酸或NaOH 注射用水，USP制备方法将混合、过滤和填充用的设备及玻璃器皿彻底洗涤并除热原，将过滤器组件、填充管组件和其他部件及设备灭菌。将上述所示用量的21 (R)阿加曲班加入到20ml的安瓿瓶中，加注射用水至最终体积的80%，加入所示重量的盐酸作为增溶剂，再加入所示重量的渗透调节剂，混合，接着，如果有必要，用IN的氢氧化钠或者盐酸调节溶液pH值至5. 5，加注射用水至20ml，混合均勻。 然后将产品装入高压灭菌器，在121°C的温度下灭菌20min即可制成所述的21 (R)阿加曲班静脉注射液。一、21 (R)阿加曲班静脉注射液的动物实验试验材料1、供试品上述21 (R)阿加曲班静脉注射液。
IOmg 0. 32mg 0. 5g
按需调节PH 加至20ml
无色澄明液体，规格20ml: 10mg，贮存遮光、室温密闭保存。2、试剂0.9%氯化钠注射液，规格500ml，批号D510150401，由济南三九益民制药有限公司生产；枸橼酸钠，分析纯，规格500g，批号20021105，由山东博山化学试剂厂生产，用时用生理盐水配成3. 2%的溶液；凝血酶原时间、凝血酶时间、活化部分凝血活酶时间试剂盒均由上海太阳生物技术有限公司提供；ADP 由北京东方普利生科贸有限公司提供。3、实验动物普通家犬(Canis familiar is Linne)，12只，雌雄各半，10_15kg，由市场购入。4、主要仪器设备HEMAVET_950型全自动血球计数仪，由Drew Scientific公司生产；C2000型血凝仪，由北京东方普利生科贸有限公司生产；LBY-NJ2型血小板聚集仪，由北京东方普利生科贸有限公司生产；血小板粘附仪，由北京东方普利生科贸有限公司生产；二、试验方法1.动物分组取健康普通家犬(Canis familiar is Lirme) 12只，随机分为2组，分别为空白对照组和R体试验组，每组6只动物。2.给药剂量选择及依据供试品临床用法通常成人在开始的2日内是将1日6支(阿加曲班60mg)以适当量的输液稀释，经M小时持续静脉滴注。在其后的5日中，将1日2支(阿加曲班20mg) 以适当量的输液稀释，每日早晚各1次，每次1支(阿加曲班IOmg)，1次静脉滴注3小时。参考阿加曲班注射液临床用量，以成人每天15mg计，按成人70kg和12kg犬等效剂量折算系数法可得犬用药剂量为人用量XO. 32/12，初步定为0. %ig/kg。3.药物配制0. 4mg/kg剂量溶液取相应的供试品溶液0. 8ml+0. 9%氯化钠注射液9. 2mL·4.试验过程每只动物在给药前取血测定全血凝固时间(CT)、复钙时间(RT)、白陶土部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、血小板粘附率、血小板聚集率等指标作为药前值，测定完毕，每组动物按10ml/kg体积给予相应的药物溶液，每天一次，连续3 天，第三天给药后15分钟取血测以上凝血相关指标。全血凝固时间的测定方法取试管3个，标号为1、2、3号。用一次性无菌注射器顺利地抽取犬静脉血:3ml，自血流入针头开始计时，去针头后沿管壁每管缓慢注入血液1ml， 置37°C水浴中。每隔一定时间将第一管倾斜1次，直至将试管倒置血液不流动为止；再依次观察第二管，第二管凝固后，再观察第三管。以第三管凝固时间为凝血时间。复钙时间测定方法取枸橼酸钠抗凝血1ml，离心取血浆0. anl，加0. 025mol/L的氯化钙溶液0. anl，混勻后置于37°C水浴，从加钙起计时，直至凝固的时间为复钙时间。其它测试采用仪器测定。
5.数据统计及结果判定每组动物药前和药后各个指标以均数士标准差(表示。将各药物组药后变化值与空白对照组药后变化值进行t检验，以判断药物的效果。试验结果见表1-7。表1 :R体对正常犬全血凝固时间(CT)的影响G ±SD，η = 6)
权利要求
1.21 (R)阿加曲班在治疗和预防血栓以及血小板凝聚抑制药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的药物包括单一成分的21(R)阿加曲班以及药用辅料。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述药物为液体制剂。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的药物中有效活性成分的浓度为医学上可接受的21 (R)阿加曲班的量。
全文摘要
一种21(R)阿加曲班在治疗和预防血栓以及血小板凝聚抑制药物中的应用。药物中包括单一成分的21(R)阿加曲班以及药用辅料。本发明提供的单一成分的21(R)阿加曲班对延长正常犬全血凝固时间(CT)作用显著，其作用效果是空白对照组的7倍；21(R)阿加曲班对延长正常犬复钙时间(RT)作用显著，其作用效果是空白对照组的2倍；21(R)阿加曲班对延长正常犬凝血酶原时间(PT)作用显著，其作用效果是空白对照组的15倍；21(R)阿加曲班对延长正常犬白陶土部分凝血活酶时间(APTT)，延长正常犬凝血酶时间(TT)有一定作用，其作用效果比空白对照组略强；21(R)阿加曲班对正常犬血小板粘附率和血小板聚集率有降低作用。
文档编号A61K38/05GK102258764SQ201110195540
公开日2011年11月30日 申请日期2011年7月13日 优先权日2011年7月13日
发明者孙致远, 宋洪海, 张冉, 高巨 申请人:天津市炜杰科技有限公司