专利名称：一种阿加曲班的分离方法
技术领域：
本发明涉及一种旋光异构化合物阿加曲班(Argatroban)的分离方法，特别是21(S)-阿加曲班纯品的分离方法。
背景技术：
1978年日本Mitsubishi化学公司S.Okamoto等首次报导了阿加曲班(Argatroban)一水化物抗凝血酶活性US 4 101 653。随后20多年期间，众多研究者对Argatroban的生物活性及作为医药的价值进行了深入研究。1981年，S.Okamoto在动物体内与肝素进行了比较Okamoto，S.et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.101，440(1981)；T.Kumoto等对其立体选择活性进行了报导Kumada，T.et al.，Thromb.Res.24，285(1981)；1984年，R.Kumato进行了临床血液透析评价Kikumoto，R.et al.，Biochemistry23，85(1984)；1986年该作者报导了Argatroban抑制哺乳动物凝血酶活性，可作为治疗和预防血栓药剂和血小板凝聚抑制剂。Argatroban的一水合物可作为选择性抗血栓剂、治疗慢性动脉堵塞和脑血栓等JP 61-48829。1992年和1993年，Taparelli和J.A.Jakubowski先后报导了Argatroban抗凝血酶的可逆性Taparelli，C.，Trends Pharmacol.Sci.，1993，14，366，Jakubowski，J.A.et ak，Rep.Med.Chem.，1992，27，99；90年代L.R.Buch等多位研究者报导了相关研究Buch，L.R.，Cadiosvasc.Drug Rev.，1991，9，247，Strupcnewski，J.D.et al.，AcademicSan Diego，1991；Vol.26，p299，Brundish，D.et al.，J.Med.Chem.1999；42，4584，Shebuski，R.J.，AcademicSan Diego，1999；Vol.26，p98。1992年日本批准作为非肠道使用抗凝血酶药剂Hijikata-Okunomiya，A.，et al，Thromb.Hemostasis，1992，18，135。阿加曲班的化学名称(2R，4R)-1-[(2S)-5-[(Aminoiminomethyl)amino]-1-oxo-2-[[(1，2，3.4-tetrahydro-3-methyl-8-quinolinyl)sulfonyl]amino]pentyl]-4-methyl-2-piperidinecarboxylic acid，其化学成分是21(R)和21(S)的混合物，通常是64-6536-3US 6440417，Cossy.J.，et al，Bioorganic&Medicine Chemistry Letters，11(2001)，1989-1992，Journal of PharmaceuticalSciences，Vol.82，No.6，672(1993)。结构式为
1Argagroban(21(R)∶21(S)＝65∶35) 1aX＝H，Y＝CH3，21-(R)-Argatroban1bX＝CH3，Y＝H，21-(S)-Argatroban现报导的Argatroban(阿加曲班)合成路线都是以硝基-L-精氨酸为起始原料、以哌啶羧酸酯或喹啉磺酰氯缩合先后次序不同，构成两条主要路线。当首先与哌啶羧酸酯缩合时，称氨基保护法硝基-L-精氨酸的氨基用t-Boc保护、再与哌啶羧酸酯缩合、去Boc保护基、与喹啉磺酰氯缩合、酯水解、氢化去硝基得Argatroban。若首先与喹啉磺酰氯缩合时称非保护法硝基精氨酸与喹啉磺酰氯缩合后再与哌啶羧酸酯缩合、酯水解、氢化去硝基，得目标产物。实验证明不论采取哪条路线，其产物Argatroban均是21(R)和21(S)的混合物，R∶S＝64-65∶36-35。21(R)和21(S)物化性质极为接近，彻底分离难度很大，现已报导衍生后制备色谱分离，柱层析法和proteinA层析法分离US 6440417，Journal of Pharmaceutical Sciences，Vo1.82，No.6，672(1993)，分离量小，收率低，尚达不到实用级水平。具体说氨基保护法1.硝基精氨酸t-Boc保护后与(2R，4R)哌啶甲酸酯缩合EP 8746，US 4258192，US 4201863，JP 81-15,267，US 6440417，特许公报平2-31055。反应路线如图1。
2.硝基精氨酸t-Boc保护后与反式哌啶羧酸酯缩合、分离、拆分，再与喹啉磺酰氯缩合Cossy.J.，et al，Bioorganic&Medicine Chemistry Letters，11(2001)，1989-1992。具体反应路线如图2。
非保护法
当L-精氨酸直接与喹啉磺酰氯缩合时反应副产物多、不易分离，不适于工业化生产特许公报 平1-35000。硝基-L-精氨酸为原料时反应产品单一，操作简易，适于工业化生产EP 823 430。具体反应路线如图3。
文献报导，通过X-衍射确定Argatroban内高含量异构体为21(R)Hosckawa，K.，Mitsubishi Kasei Corporation，personal communication。选择适当的条件，HPLC可将R和S体分离，先出现的主峰为21(R)，后者为21(S)。
发明内容
本发明的目的是提供一种阿加曲班的分离方法，它是使用醇与水的混合物为溶剂，将右旋体21(R)和左旋体21(S)的混合物通过多次重结晶的方法得到单一光学活性体21(S)阿加曲班，本发明对阿加曲班(Argatroban)进行了实用级的分离，获得≥98％的21(S)阿加曲班(Argatroban)。
本发明提供的阿加曲班，21(S)阿加曲班的重量比≥98％，其分离方法包括的步骤1)以21(S)与21(R)的阿加曲班Argatroban为原料，在醇与水的混合物为溶剂加热回流5-10小时，溶液至透明；2)冷却到室温，静置3-8小时，析出白色晶体，过滤，得产物；3)产物80～100℃下干燥；4)高效液相色谱法(HPLC)测定21(S)的含量；5)步骤1)-4)重复2～6次，母液合并，脱除溶剂，S体＞35％循环套用作为初始原料。
所述的初始原料阿加曲班21(R)与21(S)的比例是21(R)∶21(S)＝65∶35；所述的醇是甲醇、乙醇或异丙醇；所述的醇与水的重量(体积)比例1∶1～6；所述的原料和溶剂的重量比为1∶15～30；所述的醇的重量百分浓度为15％～85％；本发明采用HPLC定量分析方法，检测每次重结晶后R和S的含量。重结晶过程中，21(S)＞35％循环，将≥80％21(R)部分淘汰，其他母液合并，脱除溶剂，循环套用作为初始原料，通过上述过程，其21(S)的重结晶收率约为10～15％。
本发明使用醇甲醇、乙醇或异丙醇与水的混合物为溶剂进行重结晶，通常通过一次重结晶，使21(S)含量提高10％-15％，不同含量的21(S)为原料，采用不同的溶剂比例，经过5-7次重结晶，可获得≥98％的21(S)。
本发明将21(R)和21(S)的混合物通过多次重结晶的方法得到单一光学活性体21(S)阿加曲班，本发明对阿加曲班(Argatroban)进行了实用级的分离，获得≥98％的21(S)阿加曲班(Argatroban)。
图1硝基精氨酸t-Boc保护后与(2R，4R)哌啶甲酸酯缩合反应路线图示。
图2硝基精氨酸t-Boc保护后与反式哌啶羧酸酯缩合、分离、拆分，再与喹啉磺酰氯缩合反应路线图示。
图3非保护法反应路线图示。
具体实施例方式
实施例1.将7克Argatroban(R∶S＝65∶35)，加入210ml85％的甲醇水溶液中，加热回流6小时至透明，冷却到室温，静置5小时，析出白色晶体，过滤、80℃下干燥，重量5.6克，21(S)含量42.5％(HPLC法)。
实施例2.将5克Argatroban(R∶S＝30∶70)，加入100ml 50％的甲醇水溶液中，加热回流5小时至透明，冷却到室温，静置4小时，析出白色晶体，过滤、干燥，重量2.5克，21(S)含量85.0％(HPLC法)。
实施例3.将2克Argatroban(R∶S＝23∶76)，加入60ml20％的甲醇水溶液中，加热回流3小时至透明，冷却到室温，静置3小时，析出固体，过滤、干燥，得白色晶体0.9克，21(S)含量94.9％(HPLC法)。
实施例4.将10克Argatroban(R∶S＝7∶93)，加入300ml80％的甲醇水溶液中，加热回流10小时至透明，冷却到室温，静置8小时，析出产品，以此为原料，再重结晶三次，得白色晶体3.2克，21(S)含量98.1％(HPLC法)。
权利要求
1.一种阿加曲班的分离方法，其特征在于它的步骤是1)以21(S)与21(R)的阿加曲班为原料，在醇与水的混合物为溶剂加热回流5～10小时，溶液至透明；2)冷却到室温，静置3～8小时，析出白色晶体，过滤，得产物；3)产物80～100℃下干燥；4)高效液相色谱法测定21(S)的含量；5)步骤1)-4)重复2～6次，母液合并，脱除溶剂，S体＞35％循环套用作为初始原料。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的醇是甲醇、乙醇或异丙醇。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的醇与水的重量比例1∶1～6。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的原料和溶剂的重量比为1∶15～30。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的醇的重量百分浓度为15％～85％。
全文摘要
本发明涉及一种旋光异构化合物阿加曲班(Argatroban)的分离方法，特别是21(S)－阿加曲班纯品的分离方法。以21(S)与21(R)的阿加曲班为原料，在醇与水的混合物为溶剂加热回流5－10小时，冷却，静置，过滤，得白色晶体产物，干燥；重复2～6次，母液合并，脱除溶剂，高效液相色谱法测定21(S)的含量。本发明对阿加曲班进行了实用级的分离，获得≥98％的21(S)阿加曲班。
文档编号C07B57/00GK1951936SQ200610129330
公开日2007年4月25日 申请日期2006年11月10日 优先权日2006年11月10日
发明者宋洪海 申请人:天津市炜杰科技有限公司