专利名称：一种积雪草三萜酸单葡萄糖苷组合物及其制备方法、定量分析方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属中药领域，涉及一种积雪草三萜酸单葡萄糖苷组合物。另外，本发明还提供了一种生物转化积雪草提取物制备积雪草三萜酸单葡萄糖苷组合物的制备方法及其组合物的定量分析方法和用途。积雪草(Centella asiatica(L. )Urb)又称落得打、崩大碗、半边钱，为伞形科积雪草属植物，其始载于《神农本草经》，列为中品。其性寒，味苦、辛，具有清热利湿、解毒消肿之功效，主要用于湿热黄疸，中暑腹泻，砂淋血淋，痈肿疮毒，跌打损伤。积雪草是民间广东地区常用中草药，利用积雪草外用及内服治病在我国已有两千多年历史。现代研究表明， 积雪草具有抗菌消炎、抗抑郁、抗肿瘤、促进创伤愈合和治疗增生性瘢痕的作用，积雪草提取物对硬皮病及烧伤瘢痕等纤维化疾病有明显的疗效，能有效地促进伤口愈合。积雪草通过增加角质化细胞中MCP-I的表达从而促进VEGF的生成，同时促进MCP-I巨噬细胞生成 IL-I β，提高烧伤处血管的生成而达到治疗烧伤的目的。积雪草富含乌索烷型和齐墩果烷型两类五环三萜皂苷，其中主要成分为积雪草苷 (asiaticoside)、羟基积雪草苷(madecassoside)和积雪草苷 B (asiaticoside B)。目前已经分离到的五环三萜成分的结构式如下
权利要求
1.一种积雪草三萜酸单葡萄糖苷组合物，其特征在于，该组合物主要由乌索烷型的积雪草酸单葡萄糖苷、羟基积雪草酸单葡萄糖苷和齐墩果烷型的切布苷II组成。
2.权利要求1所述的组合物，其特征在于，积雪草酸单葡萄糖苷、羟基积雪草酸单葡萄糖苷、切布苷II的质量比为1 0.5 2 0.1 1，三者在组合物中质量百分 比之和不小于 50%。
3. 权利要求2所述的组合物，其特征在于，积雪草酸单葡萄糖苷、羟基积雪草酸单葡萄糖苷、切布苷II的质量比为1 0.7 1.5 0.3 0.8，三者在组合物中质量百分比之和不小于80%。
4.权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)在积雪草提取物的水溶液中加入积雪草提取物重量0.1 50%的葡萄糖苷酶或固载的β -葡萄糖苷酶，20 60°C水解0. 5 72小时；或者加入微生物培养基，灭菌处理，接种能产生β葡萄糖苷酶的微生物，20 45°C发酵2 8天；反应体系中积雪草提取物的质量浓度为0. 1 20% ；(2)过滤或离心分离得到含积雪草三萜酸单葡萄糖苷组合物的发酵液或酶解液；(3)将所含积雪草三萜酸单葡萄糖苷组合物的酶解液或酵解液进行分离纯化，包括以下步骤a、将酶解液浓缩至体积与积雪草提取物重量比例为1 5L/kg，用1 10倍体积水饱和正丁醇分1 3次萃取，合并所得正丁醇相，即得组合物的正丁醇萃取液；或将酶解液上大孔吸附树脂柱吸附，3 5倍柱床体积水洗除去杂质，2 5倍柱床体积20 80%体积浓度乙醇或甲醇水溶液洗脱，得醇洗脱液；b、将正丁醇萃取液或醇洗脱液减压浓缩、真空干燥，即得组合物。
5.权利要求4所述的组合物的制备方法，其特征在于，所述的积雪草提取物选自积雪草总苷、积雪草醇提取物、积雪草水提取物或积雪草醇水混合溶液提取物。
6.权利要求4所述的组合物的制备方法，其特征在于，酶解液在上大孔吸附柱吸附前有一预处理步骤减压浓缩至固形物重量百分含量为1-30% ；或，减压浓缩至固形物重量百分含量为30-60%，加入3-4倍体积95%乙醇沉淀，过滤或离心分离沉淀，上清液浓缩除去乙醇，加水稀释至固形物重量百分含量为1-30%。
7.权利要求4所述的组合物的制备方法，其特征在于，所述的β-葡萄糖苷酶为主要水解断裂β_1，6糖苷键的葡萄糖苷酶。
8.权利要求4所述的组合物的制备方法，其特征在于，所述的能产生β葡萄糖苷酶的微生物选自青霉属真菌、曲霉属真菌、木霉属真菌、酵母属真菌、芽孢杆菌属细菌或乳酸菌属细菌。
9.权利要求4所述的组合物的制备方法，其特征在于，所述的能产生β葡萄糖苷酶的微生物选自拟青霉、扩展青霉、桔青霉、米曲霉、灰绿曲霉、黑曲霉、李氏木霉、康氏木霉、绿色木霉、啤酒酵母、面包酵母、多粘性芽孢杆菌或乳酸菌。
10.权利要求1所述所述组合物在制备疤痕治疗药物或肿瘤疾病治疗药物中的应用。
11.权利要求1所述组合物与医药学上可接受的辅料配合制成的口服制剂、注射剂或皮肤外用制剂。
12.权利要求1所述组合物的HPLC定量分析方法，其特征在于，HPLC流动相由β-环糊精、水以及甲醇和乙腈中的至少一种组成。
13.权利要求12所述组合物的HPLC定量分析方法，其特征在于，HPLC流动相为含 0. 1 lmmol/Li3-环糊精的水溶液，且含有体积百分比为15% 50%甲醇或乙腈，或者含有体积百分比为15% 50%甲醇和乙腈。
全文摘要
本发明涉及一种积雪草三萜酸单葡萄糖苷组合物，该组合物主要由乌索烷型的积雪草酸单葡萄糖苷、羟基积雪草酸单葡萄糖苷和齐墩果烷型的切布苷II组成，其中积雪草酸单葡萄糖苷、羟基积雪草酸单葡萄糖苷、切布苷II的质量比为1∶0.5～2∶0.1～1，且三者质量百分含量之和不小于50％。该组合物是以积雪草提取物为底物，经β-葡萄糖苷酶水解或能产生β-葡萄糖苷酶的微生物发酵水解，再经过正丁醇萃取或大孔吸附树脂分离纯化得到。本发明还提供了一种定量分析方法，即利用添加适量β-环糊精的流动相进行三种组分的HPLC定量分析。该组合物经药效学研究证明，具有显著地抑制肿瘤细胞和成纤维细胞的活性，可以用于肿瘤和疤痕增生的治疗。
文档编号A61P35/00GK102349924SQ20111023430
公开日2012年2月15日 申请日期2011年8月16日 优先权日2011年8月16日
发明者叶晓平, 司鹏鹏, 吴博, 宋纯清, 杜鹏, 茅仁刚, 袁萍 申请人:上海师范大学, 上海新康制药厂