专利名称：一种抗hiv病毒、提高免疫力的中药制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于中药领域，具体涉及一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂及其制备方法。
背景技术：
艾滋病全称为获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)引起的慢性致死性的传染病。随着艾滋病迅速蔓延，艾滋病已经成为全球高度重视的卫生问题和社会问题。现今用于治疗艾滋病的药物多为西药，价格昂贵、毒副作用较多。目前，从中医中药中寻找抗HIV病毒药物是研究的热门课题，一些从天然植物中分离得到的化学成分如秋水仙碱、黄芪素、杨梅黄素等都具有抗HIV活性。中医以辩证施治为精髓，从中医病因学角度分析，艾滋 病的外因是邪毒外侵，内因是正气亏虚。中医药的治疗有着自身的优势，具体体现在可以提 高机体免疫功能，抑制或杀灭HIV病毒等方面，总体改善患者临床症状，提高患者生存质量
坐寸ο本发明所述的中药组合制剂在制备抗HIV病毒、提高免疫力药物中的新用途，至今尚未见文献报道和专利公开。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂，它具有滋补肾阳、清热解毒和通经络的功效。本发明的技术方案如下一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂及其制备方法，其特征在于所述组合物由下列重量百分比的原料制成
锁阳 30%-45%、老鹳草 20%-35%、石斛 10%_25%、石榴皮 10%_15%、甘草 2%_10%。优选的是所述锁阳为34. 5%、老鹳草为24. 4%、石斛为21. 5%、石榴皮为13. 4%、甘草为6. 2%ο优选的还可以是所述锁阳为40. 8%、老鹳草为26. 5%、石斛为12. 6%、石榴皮为
11.7%、甘草为 8. 4%O一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂的其制备方法，包括以下步骤
(1)各药物组分按重量百分比进行称量，将石斛、甘草加水煎煮2-4次，过滤，合并煎液，浓缩至相对密度为I. 03-1. 08的清膏，备用；
(2)将石榴皮、锁阳加5-8倍量体积百分比为65-95%的乙醇水溶液回流提取2_4次，每次1-2. 5小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为I. 02-1. 20的浸膏，备用；
(3)将老鹳草加体积百分比为45-60%的乙醇水溶液微波提取1-2次，每次O.2-0. 5h，合并提取液，过滤，提取液加入热明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀为止，静置l_3h，离心，弃去上清液得沉淀，沉淀加丙酮溶解，浓缩得浸膏；
(4)合并上述水提浸膏和醇提浸膏，减压干燥，得干浸膏，粉碎成细粉，加入适宜的辅料，制成适合的剂型，即得。本发明的有益效果在于
本发明药方中锁阳为君，味甘，性温，归肝、肾、大肠经，以补肾助阳为长。石斛为臣，味甘，性微寒，归胃、肾经，因此石斛与锁阳配伍，增强了益肾效果。老鹳草和石榴皮为佐，老鹳草味辛、苦，性平，归肝肾脾经，具有祛风湿，通经络，清热毒的功效。石榴皮味酸、涩，性温，归大肠经具有涩肠止泻，杀虫的功效。甘草味甘，性平，归肺脾经，具有补脾益气、缓急止痛、清热解毒，调和诸药的功效，现代药理研究表明，其对HIV病毒具有抑制作用，作为使药。综上所述，本发明中药组合制剂的主要治疗功能是益肾健脾，清热解毒，通经络。用于抗HIV病毒、提高机体免疫力。本发明药物组合中药制剂经毒性试验证明无毒副作用，经药效学试验证明本中药 制剂是一种有效、价格低廉的抗Hiv病毒、提高机体免疫力的药物。
具体实施例方式 下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。一、制备例
实施例I:
一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂，按重量百分比由以下组分组成锁阳为39. 1%、老鹳草为25. 4%、石斛为18. 2%、石榴皮为13. 1%、甘草为3. 6%。实施例2
一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂，按重量百分比由以下组分组成锁阳为
33.4%、老鹳草为21. 8%、石斛为25. 0%、石榴皮为11. 5%、甘草为8. 3%。实施例3:
一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂，按重量百分比由以下组分组成锁阳为
34.5%、老鹳草为24. 4%、石斛为21. 5%、石槽皮为13. 4%、甘草为6. 2%。实施例4:
一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂，按重量百分比由以下组分组成锁阳为41. 8%、老鹳草为30. 5%、石斛为10. 4%、石槽皮为10. 9%、甘草为6. 4%。实施例5:
一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂的制备方法，采用以下步骤(I)按重量百分比称取，锁阳为35. 2%、老鹳草为33. 1%、石斛为13. 7%、石榴皮为14. 3%、甘草为3. 7% ; (2)将所述石斛和甘草分别加8倍量的水煎煮3次，过滤，合并提取液，浓缩至相对密度I. 05，得到清膏备用；(3)将所述石榴皮、锁阳分别加入体积百分比为85%的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次I. 5h，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为I. 14的浸膏，备用；(4)将所述老鹳草加入6倍量体积百分比为50%的乙醇水溶液微波提取2次，每次30min，合并提取液，过滤，提取液加入热明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀为止，静置I. 5h，离心，弃去上清液得到沉淀，沉淀加丙酮溶解，浓缩得到浸膏；(5)将上述水提浸膏和醇提浸膏合并，减压干燥得到干浸膏，粉碎成细粉，过100目筛，加2%重量体积百分比的聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液作粘合剂，制粒，真空干燥，加入适量微晶纤维素和微粉硅胶的预混辅料，填充胶囊，制得胶囊剂。实施例6:一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂，按重量百分比由以下组分组成锁阳为37. 6%、老鹳草为28. 6%、石斛为20. 6%、石榴皮为10. 4%、甘草为2. 8%，按实施例5的步骤
(2)、(3)、(4)、(5)制成。实施例7:
一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂，按重量百分比由以下组分组成锁阳为45. 0%、老鹳草为20. 8%、石斛为24. 9%、石榴皮为12. 3%、甘草为7. 0%，按实施例5的步骤
(2)、(3)、(4)、(5)制成。实施例8
一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂的制备方法，采用以下步骤(I)按重量百分 比称取，锁阳为43. 5%、老鹳草为21. 4%、石斛为15. 5%、石榴皮为13. 7%、甘草为5. 9% ；(2)将所述石斛和甘草分别加10倍量的水煎煮2次，过滤，合并提取液，浓缩至相对密度I. 03，得到清膏备用；(3)将所述石榴皮、锁阳分别加入体积百分比为65%的乙醇水溶液加热回流提取4次，每次I. Oh,过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为I. 20的浸膏，备用；(4)将所述老鹳草加入8倍量体积百分比为60%的乙醇水溶液微波提取2次，每次15min，合并提取液，过滤，提取液加入热明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀为止，静置3h，离心，弃去上清液得到沉淀，沉淀加丙酮溶解，浓缩得到浸膏；(5)将上述水提浸膏和醇提浸膏合并，减压干燥得到干浸膏，粉碎成细粉，过100目筛，加1%重量体积百分比的聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液作粘合齐U，制粒，真空干燥，加入适量乳糖，制得片剂。实施例9:
一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂的制备方法，采用以下步骤(I)按重量百分比称取，锁阳为30. 2%、老鹳草为34. 7%、石斛为17. 3%、石榴皮为10. 0%、甘草为7. 8% ; (2)将所述石斛和甘草分别加8倍量的水煎煮4次，过滤，合并提取液，浓缩至相对密度I. 08，得到清膏备用；(3)将所述石榴皮、锁阳分别加入体积百分比为95%的乙醇水溶液加热回流提取2次，每次2. 5h，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为I. 08的浸膏，备用；(4)将所述老鹳草加入5倍量体积百分比为45%的乙醇水溶液微波提取I次，每次25min，合并提取液，过滤，提取液加入热明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀为止，静置2h，离心，弃去上清液得到沉淀，沉淀加丙酮溶解，浓缩得到浸膏；(5)将上述水提浸膏和醇提浸膏合并，减压干燥得到干浸膏，粉碎成细粉，过100目筛，加2%重量体积百分比的聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液作粘合剂，制粒，真空干燥，加入适量微粉硅胶，制得片剂。实施例10
一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂的制备方法，采用以下步骤(I)按重量百分比称取，锁阳为40. 8%、老鹳草为26. 5%、石斛为12. 6%、石榴皮为11. 7%、甘草为8. 4% ；(2)将所述石斛和甘草分别加10倍量的水煎煮3次，过滤，合并提取液，浓缩至相对密度I. 06，得到清膏备用；(3)将所述石榴皮、锁阳分别加入6倍量体积百分比为90%的乙醇水溶液加热回流提取2次，每次2. Oh,过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为I. 02的浸膏，备用；(4)将所述老鹳草加入体积百分比为55%的乙醇水溶液微波提取2次，每次12min，合并提取液，过滤，提取液加入热明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀为止，静置lh，离心，弃去上清液得到沉淀，沉淀加丙酮溶解，浓缩得到浸膏；(5)将上述水提浸膏和醇提浸膏合并，减压干燥得到干浸膏，粉碎成细粉，过100目筛，加1%重量体积百分比的聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液作粘合齐 ，制粒，真空干燥，加入适量微晶纤维素，填充胶囊，制得胶囊剂。二、试验例本发明中药制剂对小鼠淋巴细胞免疫调节功能的影响。试验例I :本发明中药制剂对小鼠体重和脏器指数的影响。体重16-18gICR小鼠，雌雄各半，购自上海斯莱克实验动物有限公司。将小鼠随机分为正常对照组和实验组，每组10只，实验组包括本发明中药制剂低、中、高剂量组，所用剂量分别为O. 245g/kg体重、O. 490g/kg体重、I. 470g/kg体重。本发明中药制剂样品(按实施例3方法制备所得)加蒸馏水配制所需浓度，正常对照组给予等体积的蒸馏水，灌胃给药，各组均每次灌胃O. 5ml/10g，每日I次，连续给药30日。各组灌胃给药30日，于末次给药后24h，称体重，摘眼球放血处死，摘出胸腺和脾脏称重。以胸腺或脾脏重量(mg)与体重(g)之比作为胸腺或脾指数。
试验结果本发明中药制剂的低、中、高剂量组与蒸馏水正常对照组比较，无显著差异性(P > O. 05)，结果见表I。表I本发明中药制剂对小鼠体重及脏器指数的影响(X土S)
组别I剂量(g/kg体重) I体重I胸腺指数I脾指数
正常对照组 O_21. 30±1. 102. 13±0. 415. 84±0. 69
低剂量组0.245 20.60±1.202.23±0. 52 3±0. 73
中剂量组0.490 20·50±1·402· 19±0· 33H7±0.66
高剂量组| ·470 |20·70±1·30丨2· 25±0· 47|6· 04±0· 56
试验例2 :本发明中药制剂对小鼠T淋巴细胞增殖的影响。体重16_18gICR小鼠，雌雄各半，购自上海斯莱克实验动物有限公司。将小鼠随机分为正常对照组和实验组，每组10只，实验组包括本发明中药制剂低、中、高剂量组，所用剂量分别为O. 245g/kg体重、O. 490g/kg体重、I. 470g/kg体重。本发明中药制剂样品(按实施例3方法制备所得)加蒸馏水配制所需浓度，正常对照组给予等体积的蒸馏水，灌胃给药，各组均每次灌胃O. 5ml/10g，每日I次，连续给药30日。ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(按文献“保健食品检验与评价技术规范”中方法测定):采用MTT法检测小鼠淋巴细胞转化及增殖情况。无菌取脾，于无菌Hanks液中制成细胞悬液，200目筛网过滤，Hanks液洗涤3次。用RPMl 1640培养液调整细胞浓度为3 X IO6个.mL, —孔加ConA液50 μ L, 一孔作对照，置5%C02、37°C培养72h。培养结束前4h，每孔吸去上清液O. 7mL,加入不含小牛血清的RPMl 1640培养液和MTT(5mg/mL，每孔50 μ L)。培养结束后，每孔加入酸性异丙醇lmL，吹打混匀，波长570nm处用酶标仪测定吸光度值(A值)。淋巴细胞的增殖能力=加ConA孔的A值-不加ConA孔的A值。试验结果本发明中药制剂的低、中、高剂量组与蒸馏水正常对照组比较，差异有极显著性，结果见表2。试验例3 :本发明中药制剂对小鼠迟发型变态反应和小鼠抗体生成脾细胞数的影响。体重16_18gICR小鼠，雌雄各半，购自上海斯莱克实验动物有限公司。将小鼠随机分为正常对照组和实验组，每组10只，实验组包括本发明中药制剂低、中、高剂量组，所用剂量分别为O. 245g/kg体重、O. 490g/kg体重、I. 470g/kg体重。本发明中药制剂样品(按实施例3方法制备所得)加蒸馏水配制所需浓度，正常对照组给予等体积的蒸馏水，灌胃给药，各组均每次灌胃O. 5ml/10g，每日I次，连续给药30日。
末次给药后各组小鼠均腹腔注射2% (V/V)SRBC悬液O. 2 μ L，致敏4日后，测量左后足趾厚度，然后再测量部位皮下注射20% (V/V) SRBC20 μ L，24h后测量左后足趾肿胀厚度，同一部位连续测量3次，取平均值。以前后足趾厚度差值表示DTH程度。试验结果本发明中药制剂的低、中、高剂量组与正常蒸馏水对照组相比，足趾肿胀度均有明显的增高趋势，中、高剂量组与对照组相比，P < O. 05，具有显著性差异，结果见表2。表2本中药制剂对小鼠迟发型变态反应和淋巴细胞转化的影响(X土S)) 组别I剂量(g/kg体重) I淋巴细胞增殖能力I足趾肿胀差值(mm)
正常对照组_0孓 062±0.03O. 74±0. 13
低剂量组一O. 245—O. 074±0. 03O. 86±0. 15
中剂量组一O. 490—O. 102±0. 02O. 98±0. 20
高剂量组 | .470|θ. 117±0.05|l.06±0.24
试验例4 :本发明中药制剂抗HIV病毒实验。选用人T淋巴细胞C8166、MT_4以及HIV-1实验株HIV-I1iib测试本发明中药制剂(按实施例3制备而得)对C8166细胞的毒性作用，本发明中药制剂对HIV-I1iib诱导C8166细胞病变的抑制作用，本发明中药制剂对HIV-I1iib感染MT-4细胞死亡的保护作用，由此测出本发明中药制剂的毒性值CC5tl、活性值EC5tl和综合治疗指数TI，TI= CC50/ EC500一、对C8166细胞的毒性实验
将本发明中药制剂做倍比稀释，将4 X 105/mlC8166细胞悬液100 μ L与不同浓度的待测药物溶液混合，设3个重复孔。同时设置不含药物的空白对照孔，37°C，5%C02培养3天，采用MTT法测定其对C8166细胞毒性。ELx800酶标仪测定OD值，测定波长为595nm，参考波长为630nm，计算得到CC5tl值，即对50%的正常T淋巴细胞系C8166产生毒性时的药物浓度。二、对HIV-I1iib诱导C8166细胞病变的抑制作用实验
将8X 105/mlC8166细胞50 μ L/孔接种到含有100 μ L/孔梯度倍比稀释药物的96孔细胞培养板上，然后加入50 μ L的HIV-I1iib稀释上清，1300TCID50/孔。设3个重复孔，同时设置不含药物的空白对照孔。AZT为阳性对照药物。于37°C，5%C02培养3天，倒置显微镜下(100X )计数合胞体的形成。EC5tl为抑制合胞体形成50%的药物浓度。三、HIV-I1iib感染MT-4细胞死亡的保护作用实验
在96孔细胞培养板上，对药物进行5倍倍比稀释，每个稀释度设4个孔，共6个稀释度。每孔100 μ L，同时设置不含药物的未感染或感染HIV-I1iib的细胞对照组。AZT作为阳性对照药物。表3本发明中药制剂的细胞毒性作用
权利要求
1.一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂及其制备方法，其特征在于所述组合物由下列重量百分比的原料制成 锁阳 30%-45%、老鹳草 20%-35%、石斛 10%_25%、石榴皮 10%_15%、甘草 2%_10%。
2.根据权利要求I所述的抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂，其特征在于所述锁阳为34. 5%、老鹳草为24. 4%、石斛为21. 5%、石槽皮为13. 4%、甘草为6. 2%。
3.根据权利要求I所述的抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂，其特征在于所述锁阳为40. 8%、老鹳草为26. 5%、石斛为12. 6%、石槽皮为11. 7%、甘草为8. 4%。
4.一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂的其制备方法，其特征是包括以下步骤 (1)各药物组分按重量百分比进行称量，将石斛、甘草加水煎煮2-4次，过滤，合并煎液，浓缩至相对密度为I. 03-1. 08的清膏，备用； (2)将石榴皮、锁阳加5-8倍量体积百分比为65-95%的乙醇水溶液回流提取2_4次，每次1-2. 5小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为I. 02-1. 20的浸膏，备用； (3)将老鹳草加体积百分比为45-60%的乙醇水溶液微波提取1-2次，每次0.2-0. 5h，合并提取液，过滤，提取液加入热明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀为止，静置l_3h，离心，弃去上清液得沉淀，沉淀加丙酮溶解，浓缩得浸膏； (4)合并上述水提浸膏和醇提浸膏，减压干燥，得干浸膏，粉碎成细粉，加入适宜的辅料，制成适合的剂型，即得。
全文摘要
本发明涉及一种抗HIV病毒、提高免疫力的中药制剂及其制备方法，它由锁阳、老鹳草、石斛、石榴皮、甘草组成，按特定工艺制成片剂、颗粒剂或胶囊剂等药学上可接受的剂型。本发明药物具有滋补肾阳、清热解毒和通经络的功效，对HIV病毒具有显著的抑制作用，并提高机体免疫力。
文档编号A61P31/18GK102846965SQ20121036013
公开日2013年1月2日 申请日期2012年9月25日 优先权日2012年9月25日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司