一种从半枝莲中提取降糖物质的方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及从半枝莲中提取降糖物质的方法及其应用，有效解决从半枝莲提取用于制备降糖药物的物质，方法是，将半枝莲粉碎成药粉，用8倍药粉重量的、体积浓度为75%的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，弃去滤渣，得提取液，提取液减压浓缩至无醇味，用乙醇调整药液醇浓度为95%，静置12h，沉淀弃去；上清液浓缩至无醇味，调整药液浓度为相当于含生药0.6g/ml，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，得洗脱液Ⅰ弃去；续用体积浓度为10%的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅱ弃去；继续用体积浓度为80%的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅲ，减压回收乙醇，浓缩干燥，得半枝莲总黄酮，本发明原料丰富，制备方法简单，制备的半枝莲总黄酮具有降糖作用，有效用于制备降糖药物。
【专利说明】一种从半枝莲中提取降糖物质的方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药，特别是一种从半枝莲中提取降糖物质的方法及其应用。
【背景技术】
[0002]糖尿病是由环境因素和遗传因素相互作用而引起的以慢性高血糖为共同特征的慢性代谢性疾病，国内对其病征通常称作“高血糖”。长期的高血糖会导致微血管内皮产生病变，伴随的蛋白质、脂肪代谢异常会引起心、脑、肾、神经、血管等组织结构和功能的异常，甚至会造成器官功能衰竭而危及生命。果味给它的别名叫“沉默的杀手”，特别是成人型的糖尿病，糖尿病患者平均可减少十年寿命。并且发生的并发症可遍布全身，糖尿病的并发症包括:自律性神经失调，神经障碍，脑血栓，脑梗塞。白内障，蛀牙，口腔炎，支气管炎，皮肤病，心肌梗塞，尿毒症，足病变等。亚洲糖尿病学会透露，截至2012年，中国患糖尿病的总人数已达到9240万，并且具有以下特征:I发病率高，可达9.7% ；2年轻化趋势，青壮年缺乏运动，导致糖尿病高发；3存在治疗误区，中国糖尿病患者注射胰岛素的时间普遍较晚。中国是人口大国，人口所占比例大，同时中国人也是糖尿病的好发人群，研究显示，在富裕国家，华人患病率多在10%以上，且近20年糖尿病的发病率上升迅速，已引起卫生部门和广大医务人员的重视。
[0003]糖尿病是由不同病因导致的代谢疾病，特征是由于胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用缺陷引起的慢性高血糖状态及碳水化合物、脂肪和蛋白质代谢紊乱。其慢性并发症有肾脏病变、神经病变等，因口服抗糖尿病药方便、快捷、无痛苦、可持续长期应用等优点，临床应用很广泛，目前常用的治疗糖尿病及并发症的药物有一下几类:1双胍类，通过肝细胞膜G蛋白恢复胰岛素对腺苷酸环化酶活性的抑制作用，减少了肝糖原的异声和肝葡萄糖输出，促进肌细胞葡萄糖的无氧酵解，增加肌肉等外周组织对葡萄糖的摄取，加强组织对胰岛素的敏感性，对正常人则无降 糖作用。代表药物有二甲双胍等，二甲双胍可增加乳酸在血液中的积聚，可致乳酸中毒并伴有胃肠道的不良反应。2磺脲类，主要作用于胰腺β细胞释放胰岛素。代表药物有格列苯脲、格列齐特、格列喹酮等。3葡萄糖糖苷酶抑制剂，代表药物有阿卡波糖、米格列醇等，在胃肠道内竞争性抑制葡萄糖苷酶，延缓肠腔内双糖、低聚糖及多糖释放葡萄糖，轻度抑制食欲，最终降低餐后血糖，且不引起低血糖。4胰岛素增敏剂，代表药物有罗格列酮、吡格列酮等，是可提高骨骼肌和脂肪细胞对葡萄糖的吸收和降低肝糖的输出，提高对胰岛素的敏感性，改善胰岛素抵抗状态，改善糖代谢，降低血糖值。5非磺脲类类促胰岛素分泌药，代表药物有瑞格列奈、那格列奈等，与胰岛β细胞膜上特异性受体结合，使胰腺β细胞去极化，从而促进胰岛素分泌。6 二肽基肽酶-4抑制剂，代表药物有西他列汀，可一直DPP-4的活性，可保护肠促胰岛素不被降解，刺激胰腺β细胞再生。
[0004]但西药治疗多具有副作用，会带来肝肾毒性，随着糖尿病患者的患病率不断上升，以往的西药带来的副作用及胰岛素使用过程中国难以控制，使得很多专家学者开始寻找治疗糖尿病的新药，从中药中筛选有效成分是一条新的有效途径，成为国内外专家的研究热点。[0005]中医认为糖尿病属于消渴的范畴，早在《内经》中，对本病之病因、病机、证治都有了明确的论述。糖尿病临床症状表现复杂多变，是由于多个脏腑功能失调所致，与脾、肾的关系最为密切。现代研究发现，血瘀与糖尿病的发生发展有着重要的影响，血瘀贯穿于糖尿病的始终。糖尿病病程中导致血瘀的原因大致如下:1阴虚致瘀，阴虚是糖尿病重要病机之一，阴津不足，由于津血同源，津亏则血少，导致血液循环涩滞，血脉运行不畅而产生血瘀。2燥热致瘀，糖尿病患者由于阴津亏耗，水亏火旺，多有燥热炽盛，煎熬阴血，使血液浓缩，脉道壅塞而产生血瘀。3气虚致瘀，糖尿病患者燥热内炽，不仅伤津亦可耗气，导致气阴两虚，气虚则推动无力，血行迟缓而产生血瘀。4气滞致瘀，情志不畅最易导致气机郁滞，气滞影响血脉运行而产生血瘀。5久病必瘀，糖尿病做为一种慢性终身性疾病，其病程迁延，日久不愈，中医认为久病入络，络脉瘀滞，血行不畅而产生血瘀。血瘀一旦形成，又可做为新的致病因素进一步引起糖尿病的发展和加重。而热毒在糖尿病病程的发生发展过程中起到重要作用，临床上糖尿病患者都伴随着燥热，体质偏颇，加以劳心过度，情志抑郁，劳力不足，及外感温热毒邪，均可导致火热伤阴耗气，而火热炽盛，或蕴结日久，即可化为热毒。经过认真的研究并完善了 “活血化瘀、清热解毒”的治则治疗糖尿病的治疗大法。
[0006]半枝莲为唇形科植物半枝莲的干燥地上部分，具清热解毒、活血祛瘀、消肿止痛、抗癌等功能。蒋仪《药镜拾遗赋》记载"半支莲解蛇伤之仙草"。民间除治毒蛇咬伤外，尚用治肿瘤，有一定的近期疗效。《校正本草纲目》记载“此草开紫白色花，草紫红色，对结对叶，七八月采用”。半枝莲含有多种化学成分，富含黄酮类、皂苷类、多糖类、氨基酸类等，且其黄酮的含量具有季节差异性。具有抑菌、抗炎、抗内毒素、增强免疫等作用，但尚未见半枝莲单味药或半枝莲提取物作用于糖尿病以及如何制备提取物，至今未见有公开报导。
【发明内容】
[0007]针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从半枝莲中提取降糖物质的方法及其应用，可有效解决从半枝莲提取用于制备降糖药物的物质。
[0008]本发明解决的技术方案是，半枝莲提取物在制备降糖药物中的应用，该提取物是，将半枝莲粉碎成过60-80目筛的药粉，用8倍药粉重量的、体积浓度为75%的乙醇浸泡
0.5h，回流提取2次，第I次1.5h，第2次Ih ;弃去滤渣，得提取液，提取液减压浓缩至无醇味，用体积浓度为99%的乙醇调整药液醇浓度为95%，静置12h，沉淀弃去；上清液浓缩至无醇味，调整药液浓度为相当于含生药0.6g/ml，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，上样量与树脂体积的比例为1:10，树脂柱径高比为1:10 ;先用8倍柱体积的水洗脱，得洗脱液I弃去；续用8倍量柱体积的、体积浓度为10%的乙醇洗脱，得洗脱液II弃去；继续用8倍量柱体积的、体积浓度为80%的乙醇洗脱，得洗脱液III，减压回收乙醇，浓缩干燥，得半枝莲总黄酮(物质)，含量> 60% ;该半枝莲总黄酮有效用于制备降糖药物，实现半枝莲总黄酮在制备降糖药物中的应用。
[0009]本发明原料丰富，制备方法简单，制备的半枝莲总黄酮具有降糖作用，有效用于制备降糖药物，开拓治疗糖尿病的新用途，是降`糖药物上的创新。
【具体实施方式】
[0010]以下结合具体情况对本发明的【具体实施方式】作详细说明。[0011]本发明在具体实施中，由以下技术方案给出:半枝莲提取物在制备降糖药物中的应用，该提取物是，将半枝莲粉碎成过60-80目筛的药粉，用8倍药粉重量的、体积浓度为75%的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，第I次1.5h，第2次Ih ;弃去滤渣，得提取液，提取液减压浓缩至无醇味，用体积浓度为99%的乙醇调整药液醇浓度为95%，静置12h，沉淀弃去；上清液浓缩至无醇味，调整药液浓度为相当于含生药0.6g/ml，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，上样量与树脂体积的比例为1:10，树脂柱径高比为1:10 ;先用8倍柱体积的水洗脱，得洗脱液I弃去；续用8倍量柱体积的、体积浓度为10%的乙醇洗脱，得洗脱液II弃去；继续用8倍量柱体积的、体积浓度为80%的乙醇洗脱，得洗脱液III，减压回收乙醇，浓缩干燥，得半枝莲总黄酮(物质)，含量> 60% ;该半枝莲总黄酮有效用于制备降糖药物，实现半枝莲总黄酮在制备降糖药物中的应用。
[0012]本发明方法简单，原材料丰富，易于制备半枝莲总黄酮，该总黄酮具有降糖作用，可用于制备降糖药物，并经实验取得了满意的效果，有关实验资料如下:
[0013]对特殊膳食诱导加链脲佐菌素造大鼠糖尿病模型
[0014]I药物试剂
[0015]本发明半枝莲黄酮；
[0016]盐酸二甲双胍片，上海信谊药厂有限公司生产，批号120523 ;羧甲基纤维素钠，天津市福晨化学试剂厂生产，批号20090826 ;链脲佐菌素，sigma公司生产，批号Z120315 ；生理盐水，郑州永和制药有限公司，批号12042401 ;冰乙酸(分析纯)，天津市恒兴化学试剂制造有限公司生产，批号20110103 ;甲醛，烟台市双双化工有限公司生产，批号20111101 ；血糖试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司生产，批号120511 ;S0D试剂盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20130115 ;尿蛋白定量试剂盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20130121 ； (GSH)试剂盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20130117 ;尿素氮(BUN)试剂盒，南京建成生物工程研 究 所生产，批号20130105 ;肌酐(Cr)试剂盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20130115 ;丙二醛(MDA)测试盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20130119 ;糖化血清蛋白(GSP)测试盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20130121 ；总胆固醇试剂盒,北京北化康泰临床试剂有限公司生产,批号20121203 ;高密度脂蛋白胆固醇试剂盒，北京北化康泰临床试剂有限公司生产，批号20120827 ;甘油三脂试剂盒，北京北化康泰临床试剂有限公司生产，批号20121212 ;低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，北京北化康泰临床试剂有限公司生产，批号20121106 ;RatIAA ELISA Kit试剂盒，R&D公司生产，L0T:20130101A ；Rat INS ELISA Kit 试剂盒，R&D 公司生产，L0T:20130101A。
[0017]2实验仪器
[0018]FA (N)/JA (N)系列电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；UV — 2000紫外可见分光光度计，上海天美科学仪器有限公司生产；TGL-16G台式离心机，上海安亭科学仪器厂生产；DZKW-4型电子恒温水浴锅，北京中兴伟业仪器有限公司生产；KDC-160HR高速冷冻离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司生产；10RAD-680酶标仪，680Microplate Reader,Bio-Rad Laboratories ;可调式移液器，由上海雷勃分析仪器有限公司生产。
[0019]3实验动物
[0020]SPF级wi star大鼠，雄性，体重180_220g，由山东鲁杭医药股份有限公司质监中心提供，动物合格证号:0013774，许可证号:SCXK鲁20080002，实验室合格证号SYXK(豫)2010-001。
[0021]4试验方法
[0022]采用舌下静脉注射链脲佐菌素加特殊膳食诱导的方法来建立大鼠II型糖尿病模型，任取12只作为空白组，不造模，其余大鼠为糖尿病组大鼠。糖尿病组大鼠喂养高糖高脂饲料(饲料组成:高糖高脂饮食(蔗糖:猪油:奶粉:鸡蛋:普通饲料=30: 20: 4: 2: 63))，空白组大鼠仅喂食普通饲料。4周后10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉糖尿病组大鼠，舌下静脉25mg/kg链脲佐菌素，空白组仅注射柠檬酸缓冲液。注射5天后尾静脉取血测血糖值，选取血糖值> 16.0mmol/L并明显具有多饮多食多尿症状的大鼠为造模成功大鼠。根据血糖值随机均匀分组，空白组和模型组给予同剂量0.1%CMC，二甲双胍组、连翘木脂素大、中、小剂量组；半枝莲黄酮大、中、小剂量组；紫花地丁黄酮大、中、小剂量组分别给予相应药物。每天给药I次，连续给药30天,分别于给药的第10、20、30天测空腹6小时血糖值，于月末，上代谢笼接取大鼠24小时尿液，测定尿蛋白含量。第31天，禁食后12h，灌胃后2h，取血，3500r/min，离心10分钟，分离血清，严格按照试剂盒说明书测血清中胰岛素、胰岛素抗体、糖基化血清蛋白、尿肌酐、尿素氮、S0D、丙二醛、谷胱甘肽、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等指标，取胸腺、脾脏、胰腺、肾脏，分别10%福尔马林液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察病理变化。
[0023]5统计方法
[0024]数据分析用SPSS 13.0 for windows医用统计包进行数据资料的统计学处理,计量资料用平均数土标准差(i±s)表示，各组间比较采用单因素方差分析，方差检验齐者用最小显著差数(LSD)法,方差不齐者用Games-Howell法检验,等级资料采用Ridit检验。
[0025]6 结果
[0026]表I对特殊膳食加链脲佐菌素所致大鼠糖尿病模型谷胱甘肽、丙二醛、S0D、糖化
血清蛋白的影响(X 土S,N= 12)
[0027]
【权利要求】
1.一种从半枝莲中提取降糖物质的方法，该提取物是，将半枝莲粉碎成过60-80目筛的药粉，用8倍药粉重量的、体积浓度为75%的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，第I次1.5h，第2次Ih ;弃去滤渣，得提取液，提取液减压浓缩至无醇味，用体积浓度为99%的乙醇调整药液醇浓度为95%，静置12h，沉淀弃去；上清液浓缩至无醇味，调整药液浓度为相当于含生药0.6g/ml，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，上样量与树脂体积的比例为1:10，树脂柱径高比为1:10 ;先用8倍柱体积的水洗脱，得洗脱液I弃去；续用8倍量柱体积的、体积浓度为10%的乙醇洗脱，得洗脱液II弃去；继续用8倍量柱体积的、体积浓度为80%的乙醇洗脱，得洗脱液III，减压回收乙醇，浓缩干燥，得半枝莲总黄酮。
2.权利要求1所述 方法提取的半枝莲总黄酮在制备降糖药物中的应用。
【文档编号】A61P3/10GK103432202SQ201310421147
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年9月16日 优先权日:2013年9月16日
【发明者】苗明三 申请人:河南中医学院