具有协同增效作用的抗癌组合物的制作方法

具有协同增效作用的抗癌组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种具有协同增效作用的抗癌组合物，具体为包括有效量的至少一种VEGF/VEGFR抑制剂和多巴胺的组合物。本发明的组合物能够明显抑制肿瘤细胞的生长，大大减少抗癌药的使用，降低治疗风险和成本，具有广阔的应用前景。
【专利说明】具有协同增效作用的抗癌组合物

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种具有协同增效作用的抗癌组合物、其制备方法及用途。

【背景技术】
[0002] 癌症，亦称恶性肿瘤，是一种由控制细胞生长增殖机制失常引起的疾病。癌细胞除 了生长失控外，还会局部侵入周遭组织甚至转移到身体其他部分。目前治疗癌症的传统方 法包括放疗或化疗，对于某些局部实体瘤可采用电疗的方法，这些传统方法有一定的疗效， 但其毒副作相当大，在治疗的过程中，给病人带来极大的痛苦。在肿瘤疾病中，实体肿瘤占 绝大多数，而实体肿瘤的发生、发展以及复发、转移均有赖于肿瘤新生血管的形成。肿瘤血 管生成是实体瘤生长和转移的必备条件。抑制肿瘤血管形成、阻断肿瘤组织血液供应的肿 瘤"饥饿疗法"，被认为是治疗实体瘤最有希望的新方法之一。
[0003] VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor，血管内皮细胞生长因子）是肿瘤血 管生成过程中的一种血管生成因子，是内皮细胞分化的激素调节剂，实体瘤的发展与VEGF 的表达呈密切相关，VEGF作为肿瘤新生血管形成中的关键性促血管生长因子，它与特异性 高表达在新生血管内皮细胞表面的VEGF受体酪氨酸激酶结合，激活酪氨酸激酶从而发挥 生物学功能。因而以VEGF受体酪氨酸激酶为靶点的肿瘤血管靶向性治疗（指使用VEGF 受体酪氨酸激酶抑制剂）已成为近几年肿瘤治疗的新途径。另外，现有技术已公开了采用 抗体与VEGF多价螯合而产生的VEGF拮抗作用能够抑制肿瘤生长（Kim，1993, Nature362， 841-844)。因此，血管内皮生长因子 VEGF 其及受体 VEGFR(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor)已然成为了抗癌药物抗血管增生疗法的重要靶点，该类药物包括多个 小分子VEGFR抑制剂和VEGF的单克隆抗体，前者包括舒尼替尼（Sunitinib，SN)、索拉非 尼（Sorafenib)、帕唑帕尼（Pazopanib)和阿西替尼（Axitinib)等。后者包括贝伐单抗 (Bevacizumab)和兰尼单抗（Ranibizumab)等。我们可以将这些药物统称为VEGF/VEGFR抑 制剂。
[0004] 内源性多巴胺（Dopamine，DA)是中枢神经系统（central nervous system，CNS) 最重要的儿茶酚胺类神经递质，其受体为多巴胺受体（Dopamine Receptor,DR)。DR主要分 布于中枢神经系统，它控制着运动、认知、情感、内分泌调节等许多CNS功能；DR也分布在心 血管、肾脏、胰腺、肾上腺等外周组织，近年来日益增多的研究表明外周组织中也存在DR信 号通路，可以调节心肌输出量、血压、肾功能、胰岛素及激素的分泌等，这是DR的外周功能。 但DA对肿瘤的作用以及DR在肿瘤细胞表达情况的研究长期以来一直非常有限。
[0005] 造血系统恶性肿瘤起源于干细胞样细胞，这一理论的建立改变了人们对于肿瘤发 生学及化学治疗的传统看法。随后，在乳腺癌、神经系统肿瘤及其他非造血系统的实体肿瘤 中，也陆续证实，存在着具有自我更新能力能特异性分化成器官各种组成成分的多能干细 胞，促使人们更深入地进行肿瘤干细胞的生物学研究。这些具有与正常干细胞相似特性的 干细胞样细胞，或称为肿瘤干细胞群体的存在，暗示了肿瘤的真正来源。
[0006] 现今肿瘤的化学治疗虽然能成功地缩小许多实体肿瘤的负荷，消灭快速增殖的细 胞，却难以达到根治其失败的根源可能就是忽略了针对肿瘤增殖池的清除，为日后的复发 和转移埋下隐患。肿瘤对于化疗药物的耐药件与肿瘤干细朐的特件相关。肿瘤干细胞独特 的抵抗药物及毒物损害的机制，可能成为肿瘤难治性基础，使得肿瘤的耐药性被视为化学 治疗中的最大障碍。对于肿瘤耐药性的研究，尤其是分析肿瘤干细胞与其之间的关系，对于 推动肿瘤化学治疗的发展具有重要意义。普遍认为，肿瘤的耐药件和肿瘤干细朐具有密切 的关系。


【发明内容】

[0007] 本发明人在研究癌症治疗的过程中，出人意料的发现，血管内皮生长因子VEGF或 其受体VEGFR的抑制剂（在本文中也可称为"VEGF/VEGFR抑制剂"）和多巴胺联合使用可 以显示出极好的肿瘤抑制效果。我们惊讶的发现两者联用后，其抗癌活性大大增强。
[0008] 因此，本发明的一个目的是提供一种具有协同增效作用的抗癌组合物，包括有效 量的至少一种抗癌药物和一种有效量的非抗癌药物，所述抗癌药物为VEGF/VEGFR抑制剂； 所述非抗癌药物为多巴胺；所述的多巴胺可使以血管内皮生长因子VEGF或其受体为靶点 的抗癌药物的治疗效果产生协同增效作用。
[0009] 根据本发明的一个方面，所述的VEGF/VEGFR抑制剂，优选为小分子的VEGFR抑制 剂和VEGF的单克隆抗体，其中，小分子的VEGFR抑制剂优选为索拉非尼（Sorafenib，Bayer/ 0]15^，2005)、舒尼替尼（31111；[1:;[11；[13，口卩丨261'，2006)、帕唑帕尼（?32(^311；[13，631(，2009)、阿 西替尼（Axitinib，pFizer，2012)及其在药学上可接受的盐中的一种或几种，最优选为舒 尼替尼（Sunitinib，SN)及其在药学上可接受的盐。VEGF的单克隆抗体优选为贝伐单抗 (Bevacizumab，Genentech，2004)、兰尼单抗（Ranibizumab，Genentech，2006)。
[0010] 所述的药学上可接受的盐是通过常规的化学方法从母体化合物合成的，所述母体 化合物包含碱性的或酸性的部分。通常，所述盐是比如通过这些化合物的游离酸或碱形式 和化学当量的合适的碱或酸在水中或在有机溶剂或在水和有机溶剂的混合物中反应而制 备的。通常，非水介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。酸加成盐的例子包 含无机酸加成盐如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐，和有机酸加成盐 如醋酸盐、三氟醋酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苹 果酸盐、扁桃酸盐、安乃近和对甲苯磺酸盐。碱加成盐的例子包含无机盐如钠、钾、钙和铵 盐，以及有机的碱金属盐如乙二胺、乙醇胺、N，N-二亚烃基乙醇胺、三乙醇胺和碱性的氨基 酸盐。
[0011] 根据本发明的一个方面，所述癌意味着包含肿瘤、瘤形成和任何其它的恶性组织 或细胞。具体包括结肠癌或直肠癌，转移性结肠直肠癌，肺癌，非鳞状非小细胞肺癌，乳腺 癌，转移性乳腺癌，转移性HER2阴性乳腺癌，脑癌，成人成胶质细胞瘤，儿童成胶质细胞瘤， 儿童抵抗性成胶质细胞瘤，胶质瘤，室管膜瘤，星形细胞瘤，成神经管细胞瘤，儿童成神经管 细胞瘤，神经胶质瘤，少突神经胶质瘤或脑膜瘤，肾癌如晚期肾细胞癌，膀胱癌，宫颈癌，结 肠癌（包括结肠直肠癌），食管癌，胃癌，头颈部癌，肝癌，肺癌（小细胞肺癌和非小细胞肺 癌），鳞状非小细胞肺癌，黑素瘤，骨髓瘤，成神经细胞瘤，卵巢癌，胰腺癌，前列腺癌，肉瘤 (包括骨肉瘤），皮肤癌（包括鳞状细胞癌），胃癌，睾丸癌，甲状腺癌，子宫癌，间皮瘤，胆管 癌，平滑肌肉瘤，脂肪肉瘤，鼻咽癌，神经内分泌癌，卵巢癌，唾液腺癌，或梭形细胞癌。
[0012] 根据本发明的一个方面，所述有效量的至少一种抗癌药物和有效量的非抗癌药物 在相同时间或不同时间施用。在相同时间施用时，所述组合物中的各组分以同一或独立的 制剂形式使用。在不同时间使用时，所述组合物的各组分可使用相同或不同的剂型。
[0013] 根据本发明的一个方面，说明书通篇使用的术语"联合"或"联用"或"联合给药" 或"联合用药"指的是包括在相同的或独立的药物制剂中的治疗剂在相同时间或不同时间 的使用。
[0014] 本发明的另一目的是提供一种抗癌制剂，其包括所述的具有协同增效作用的抗癌 组合物和药学上的常规辅料。所述常规辅料包括润滑剂、填充剂、表面活性剂、增溶剂、助溶 剂等。
[0015] 根据本发明的一个方面，所述抗癌制剂中的每种药物可单独或共同为片剂、胶囊 齐IJ、混悬剂、溶液剂、注射剂等。
[0016] 本发明实现了以下有益效果：
[0017] (1)通过一种或多种抗癌药（VEGF/VEGFR抑制剂）和多巴胺联合用于某种肿瘤的 治疗，体外可显著抑制肿瘤细胞的生长，体内可显著抑制肿瘤体积的增大且明显延长被考 察对象的生存期，其效果显著好于抗癌药单用。
[0018] (2)本发明的联合用药能够在保证相同抗癌活性的基础下大大减少了抗癌药的使 用，减少了较大剂量下抗癌药物所致的治疗风险和毒副作用（通常单用抗癌药的毒副作用 都比较大）。
[0019] (3)非抗癌药的使用使得患者的治疗成本大大降低。由于通常抗癌药物都比较贵， 联用后在达到相同药效时所需的用量显著小于单用抗癌药时的剂量，因此病人花在药物治 疗上的费用会因此大大降低。
[0020] (4)本发明的具有协同增效作用的抗癌组合物对肿瘤干细胞（与肿瘤耐药性密切 相关）的生长具有明显的抑制作用，说明本发明可作为良好的解决方案解决癌症治疗领域 令人棘手的肿瘤耐药性问题。

【专利附图】

【附图说明】
[0021] 图1为舒尼替尼（A、B、C)和多巴胺（D、E、F)分别对人乳腺癌细胞（MCF-7)，耐阿 霉素的人乳腺癌细胞（MCF-7/Adr)以及乳腺癌干细胞增殖的抑制作用。药物对细胞的半数 抑制浓度（IC 5tl)从A 到 F分别为 8. 27,8. 97,9. 41，17. 69, > 100,12.59 μΜ。
[0022] 图2为舒尼替尼和多巴胺联合给药对耐阿霉素的人乳腺癌细胞（MCF-7/Adr)及乳 腺癌干细胞增殖抑制的协同作用。图中A和B分别表示两药单用和不同联用方式对MCF-7/ Adr及乳腺癌干细胞增殖的抑制作用，数值小于0表示对细胞的杀死作用。C和D则分别表 示不同联用方式在两种细胞中的协同指数，协同指数小于1代表两种药物具有协同作用。
[0023] 图3为舒尼替尼和多巴胺联用抑制雌性荷瘤裸鼠肿瘤的生长（η = 3)。Α，耐阿霉 素的人乳腺癌细胞（MCF-7/Adr)荷瘤裸鼠分别给予空白对照、舒尼替尼（灌胃中剂量）、多 巴胺（腹腔注射）、以及两种药物联合使用时肿瘤体积的生长曲线；Β，各组肿瘤照片；C，各 组裸鼠生存期；D，各组裸鼠重量随时间的变化曲线。
[0024] 图4为不同剂量舒尼替尼和多巴胺联用抑制耐阿霉素的人乳腺癌细胞（MCF-7/ Adr)荷瘤鼠的肿瘤生长结果（η = 5)。Α，9种给药方式下荷瘤裸鼠的肿瘤体积生长曲线； B，各组裸鼠重量的时间曲线；C，各组肿瘤给药21天后的肿瘤实拍照片。

【具体实施方式】
[0025] 为了更好的理解本发明，本发明人提供了下述的实施例，然而，这些实施例仅仅是 作为说明性的目的而给出的，并且不解释为对本发明的限制，因为其中许多变化是可能的， 而不脱离本发明的主旨和范围。本发明的组合物和方法虽然在特定实施方案加以描述，但 所属【技术领域】的技术人员显而易见，可使所述组合物或/和方法的步骤或步骤的顺序发生 变化，但不偏离本发明的概念和范畴。更具体来说，显而易见的在化学上和生物学上相关的 其他药理过程类似的药物可以取代本文所述的药物，同时达到相同或相似的效果。所述技 术领域的技术人员显而易见的对所有这种相似的替换或修饰都应被认为在本发明的范畴 和概念内。
[0026] 本发明研究了 VEGFR抑制剂舒尼替尼（SN)和多巴胺（DA)单用以及两者合用对乳 腺癌细胞增殖的抑制作用以及对人乳腺癌细胞接种的裸鼠肿瘤生长的抑制作用。
[0027] 实施例1
[0028] SN和DA单用对乳腺癌细朐增葙的抑制作用。
[0029] 取对数生长期细胞，用0. 25 %胰酶-0. 53mmol/L EDTA溶液消化、计数。将 MCF-7 (人乳腺癌细胞）、MCF-7/Adr (对阿霉素耐药的MCF-7细胞）、乳腺癌干细胞按I X IO4 个/孔接种于96孔细胞培养板。培养24h后，进行给药，SN单药给药组的终浓度为0、0. 01、 0· 1、1、2、5、10、100μΜ ;DA 单药给药组的终浓度为 0、0· 01、0· 1、1、10、20、50、10(^]?，每组 设6个平行，继续孵育48h。在考察联合给药时，对于4个平行的96孔板，DA的浓度依次 设置为0、2、20、100μM，而在每l个96孔板中，SN的浓度均设置为0、l、2、5、10μM，每组 设6个平行。继续孵育48h。孵育结束后弃去培养基，每孔加入100 μ 1预先预冷的10%三 氯乙酸（TCA，w/v)溶液，4°C固定Ih ;弃去TCA溶液，自来水冲洗5次，自然晾干；每孔加入 100 μ 10. 4%磺酰罗丹明B (SRB)染料，室温下染色30min ;弃去SRB染料，用1 %醋酸溶液洗 5次，自然晾干；每孔加入200μ llOmmol/LTris溶液（ρΗΙΟ. 5)，振荡器上振摇IOmin使与肿 瘤细胞碱性氨基酸残基结合的SRB溶解，酶标仪测定540nm波长处吸光度。空白对照组和 药物处理组的吸光度表示为〇D_ tMl,54(l和0Dsample,54(l。其中一块96孔细胞培养板不给药处 理，在其他细胞培养板给完SN后按上述步骤处理，其平均吸光度设为OD cfc54tl。细胞存活率 按公式1-1计算：
[0030]

【权利要求】
1. 一种具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，该组合物包括有效量的至少一 种VEGF/VEGFR抑制剂和多巴胺。
2. 根据权利要求1所述的具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述的VEGF/ VEGFR抑制剂为VEGFR小分子抑制剂或VEGF单克隆抗体。
3. 根据权利要求2所述的具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述的VEGFR 小分子抑制剂选自舒尼替尼、帕唑帕尼、阿西替尼、索拉非尼及其在药学上可接受的盐中的 一种或几种。
4. 根据权利要求1所述的具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述VEGF单 克隆抗体为选自贝伐单抗或兰尼单抗中的一种或两种。
5. 根据权利要求1所述的具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述VEGF/ VEGFR抑制剂为舒尼替尼或其在药学上可接受的盐。
6. 根据权利要求1所述的具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述癌为实 体癌。优选为乳腺癌，膀胱癌，宫颈癌，结肠癌，食管癌，头颈部癌，肝癌，肺癌（小细胞肺癌 和非小细胞肺癌），非鳞状非小细胞肺癌，黑素瘤，骨髓瘤，成神经细胞瘤，卵巢癌，胰腺癌， 前列腺癌，肾癌，晚期肾细胞癌，肉瘤（包括骨肉瘤），皮肤癌（包括鳞状细胞癌），胃癌，睾 丸癌，甲状腺癌，子宫癌，间皮瘤，胆管细胞癌，平滑肌肉瘤，脂肪肉瘤，鼻咽癌，神经内分泌 癌，卵巢癌，肾癌，唾液腺癌，小细胞肺癌，或梭形细胞癌。
7. 根据权利要求6所述的具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述的癌为 乳腺癌。
8. 根据权利要求1所述的具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述的抗癌 组合物具有针对普通肿瘤或耐药性癌症的预防或治疗活性。
9. 一种具有抗癌作用的药物制剂，包括权利要求1的抗癌组合物和药剂学的常规辅 料。该药物制剂的剂型为药剂学领域的常规剂型，其中不同种类的药物单独包装或共同包 装，不同种类的药物为同一剂型或不同剂型。
10. 权利要求1-10中任一项所述的具有协同增效作用的抗癌组合物在制备抗癌药物 中的应用。
【文档编号】A61K31/137GK104436194SQ201310425718
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年9月18日 优先权日:2013年9月18日
【发明者】周田彦, 李良, 卢炜, 王思媛, 冀希炜, 马元亨 申请人:北京大学