一种降低泽泻肾脏毒性的炮制新工艺的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种降低泽泻肾脏毒性的炮制新工艺，其属于中药炮制【技术领域】。该工艺为按照泽泻生品饮片：9度食醋：陈皮煎汁为10kg:（1-1.5）L:1L的量混合，将混合物进行闷润2h后，加入含有与泽泻生品饮片质量比为5:1-3:1麦麸的炒药锅中，在150-160℃的温度下，炒制10-15min，取出，筛去麦麸，即得泽泻炮制品。所得炮制品的切面为淡黄棕色，有醋香气；其中24-乙酰泽泻醇Ａ的含量为0.025-0.026%，23-乙酰泽泻醇Ｂ的含量为0.069-0.071%。该工艺促进24-乙酰泽泻醇A转化为其他成分，降低了其含量，抑制其对肾脏固有细胞的刺激，从而降低其对肾脏的损伤。
【专利说明】一种降低泽泻肾脏毒性的炮制新工艺
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种降低泽泻肾脏毒性的炮制新工艺，其属于中药炮制【技术领域】。其目的主要是通过炮制技术促进泽泻中三萜类成分的转化，从而降低泽泻对肾脏的毒性作用。
【背景技术】
[0002]泽湾为泽湾科植物泽湾Alisma orientalis (Sam.) Juzep.的干燥块莖。中医理论认为其性寒，具有利水渗湿的功效。现代药理学研究表明，泽泻有利尿、降糖、降脂、降压等诸多作用，在临床实践中得到广泛使用，并被用于癃清片、五苓散、血脂灵片、山菊降压片及六味地黄丸等中成药，用于治疗高脂血症、脂肪肝、肥胖症、耳源性眩晕、腹水等病症。[0003]泽泻在临床上主要是以饮片的形式使用。泽泻的干燥块茎经软化、切制、干燥等过程制成的加工物称泽泻生品饮片。中国药典除了收载了泽泻生品饮片还收载了其盐制品，即泽泻生品饮片经盐制法(照中国药典一部附录炮制方法)制备的饮片。在实际应用中泽泻还有麸制品，即泽泻生品饮片经麸制法(照中国药典一部附录炮制方法)制备的饮片。
[0004]泽泻的化学成分以24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇A、泽泻醇B、泽醇F等三萜类化合物为主，另含留醇、生物碱、有机酸、多糖、挥发油、脂肪酸、树脂、淀粉等。其中24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B是泽泻的主要活性成分，总含量达0.08%左右。
[0005]现代临床应用发现，长期使用泽泻对肾脏有毒性作用，主要表现为对肾小管和肾小球的损害，药效学实验也证实了这一结果。祝建辉等研究发现，泽泻浸膏粉2g及4g/kg (相当于临床剂量20及40倍)混于饲料中喂养一侧肾脏切除的大鼠3个月，病理切片显示大鼠肾脏近曲小管有不同程度的浊肿与变性，且大剂量组较小剂量组明显。姜淋洁采用140只健康的昆明种小鼠进行实验(雌雄各半，共分7组，每组20只，分别为正常组、泽泻总提取物高剂量组、泽泻总提取物低剂量组、组分I高剂量组、组分I低剂量组、组分2高剂量组和组分2低剂量组)。正常组给予蒸馏水20mL/kg/d，泽泻总提取物高、低剂量组分别给予泽泻水提取物13.75g/kg/d和8.25g/kg/d，组分I和组分2高、低剂量组分别给予泽泻组分I和组分2提取物5.5g/kg/d和3.2g/kg/d。给药时间70天，给药结束后收集小鼠尿液，眼球取血并切取肾脏，称重、制备组织切片。结果显示，高剂量泽泻组分I提取物可明显升高小鼠的BUN、CR、NAG以及Y-GT的含量(P〈0.01)。高剂量泽泻提取物也可以提高小鼠的上述生化指标(P〈0.05)。高剂量泽泻组分2提取物对小鼠的血清的CG和NAG含量有明显影响(P〈0.05)。在显微镜下观察，正常组肾脏结构完整，肾小管上皮细胞和肾小管均正常。雄性小鼠中，总提物高剂量组小鼠肾小管上皮细胞、肾小管退化，且在病灶区观察到淋巴细胞浸润；组份I高剂量组小鼠肾小管萎缩，管腔中有无结构分泌物，且病灶区有坏死现象。雌性小鼠中，总提物高剂量组与组份I高剂量组相比，髓质和皮质结构清晰，且组份I高剂量组小鼠肾小球基底膜断裂和灶状区有出血现象。各给药组均未见明显的肾小管间质纤维化和扩大化、分散的淋巴细胞浸润和肾小管上皮细胞死亡，提示泽泻组分I提取物高剂量对小鼠肾脏可造成严重损害。赵筱萍等采用肾小管上皮细胞进行实验，使用高压制备色谱法分离和制备泽泻化学组分样品，用FDA荧光标记和MTT2种方法筛查肾毒性组分，对毒性最明显的化学组分进行液-质联用定性分析。结果表明，MTT法与FDA荧光标记法检测结果基本一致，泽泻中C13组分呈最明显的毒性，经液-质联用分析鉴定为泽泻醇C，16，23-环氧泽泻醇B和泽泻醇O。提示，泽泻中三萜类成分可能会引起肾毒性。
[0006]综上可见，作为常用的重要中药，泽泻长期大剂量使用可造成肾脏毒性。因此，降低泽泻的肾脏毒性具有重大应用价值。但到目前为止，除了发明人研究的炮制方法外，有关降低泽泻肾脏毒性作用的有效方法未见报道。
【发明内容】
[0007]从现有的毒性中草药研究可知，药物的毒性是由其毒性成分造成的。如果降低药物的毒性成分含量则可以有效降低药物的毒性，提高药物的安全性。因此，我们的技术方案是借助中药炮制可以促进中药的化学成分转变的技术，依据有机化学反应机理和炮制原理，经单体模拟实验和饮片实验，使用加醋、陈皮煎汁和麦麸经高温炒制方法促进泽泻的毒性成分转化，从而降低泽泻肾脏的毒性。
[0008]本发明的技术方案为:一种降低泽泻肾脏毒性的炮制新工艺，按照泽泻生品饮片:9度食醋:陈皮煎汁为10kg: (1-1.5)L:1L的量混合，将混合物进行闷润2h后，加入放有麦麸的炒药锅中，麦麸与所述泽泻生品饮片的质量比为5:1-3:1，在150-160°C的温度下，炒制10-15min，取出，筛去麦麸，得到泽泻炮制品。
[0009]所述食醋为米醋、白醋或食用醋酸。 [0010]所述陈皮煎汁为每mL含陈皮的生药量为Ig的陈皮水煎液浓缩汁。
[0011]所述泽泻炮制品的切面为淡黄棕色，有醋香气；所述泽泻炮制品中24-乙酰泽泻醇A的含量为0.025-0.026%, 23-乙酰泽泻醇B的含量为0.069-0.071%。
[0012]本发明的有益效果为:这种降低泽泻肾脏毒性的炮制新工艺，按照泽泻生品饮片:9度食醋:陈皮煎汁为10kg: (1-1.5) L:1L的量混合，将混合物进行闷润后，加入放有麦麸的炒药锅中，在150-160°C的温度下，炒制10-15min，取出，筛去麦麸，得到泽泻炮制品。该泽泻炮制品的切面为淡黄棕色，有醋香气；泽泻炮制品中24-乙酰泽泻醇A的含量为
0.025-0.026%, 23-乙酰泽泻醇B的含量为0.069-0.071%。该工艺通过控制辅料用量、炒制温度、炒制时间等炮制工艺参数，促进泽泻炮制过程中24-乙酰泽泻醇A转化为其他成分，抑制其对肾脏固有细胞的刺激，从而降低其对肾脏毒性。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1是24-乙酰泽泻醇A的高温转化物(2号峰为24-乙酰泽泻醇A)。
[0014]图2是24-乙酰泽泻醇A的转化途径。
[0015]图3是24-乙酰泽泻醇A的高温转化物与泽泻生制品的液相图谱。
[0016]图3中:1、24_乙酰泽泻醇A的高温转化产物，2、泽泻炮制品，3、泽泻生品。
[0017]图4是泽泻生品与不同工艺麸制品的HPLC谱图。
[0018]图4中:S1、24-乙酰泽泻醇A，S2、23_乙酰泽泻醇B，1、本申请专利工艺制备的泽}与炮制品，2、鉄制泽丨与(泽丨与加麦鉄炒)，3、泽丨与生品。
[0019]图5是不同实验组大鼠肾脏组织形态切片。具体实施例
[0020]结合上述附图，进行下列研究:
[0021 ] 1.24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B在高温条件下的转化 [0022]模拟炮制的高温条件，观察泽泻的主要含量成分24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B在高温条件下的变化。首次发现，23-乙酰泽泻醇B在高温下无明显变化，而24-乙酰泽泻醇A则发生明显变化，具体结果见图1。
[0023]图1是24-乙酰泽泻醇A (2号峰)在高温条件下(180°C )转化物的HPLC色谱图。由图1可见，在高温条件下，24乙酰泽泻醇A可以转化为多种化学成分。上述转化物经HPLC制备纯化，分别得到6个化合物。其光谱数据经与文献对照，分别鉴定为24-乙酰泽泻醇E(I号峰)、24_乙酰-25脱水泽泻醇A (3号峰)、24_乙酰-25-脱水-泽泻醇E (4号峰)、
23-乙酰-25-脱水-泽泻醇E(5号峰)、泽泻醇G(6号峰)。依据上述实验结果可见，24-乙酰泽泻醇A在高温条件下可以发生成分转化。依据有机合成化学机理推测，24-乙酰泽泻醇A在高温条件下可能发生如图2的转化过程。
[0024]从上述的实验结果可见，24-乙酰泽泻醇A在高温下的变化可能涉及脱水、酯键断裂和酯化反应。
[0025]2.炮制工艺过程中泽泻饮片的24-乙酰泽泻醇A变化
[0026]为了促进泽泻中化学成分在炮制过程中转化，在24-乙酰泽泻醇A高温条件下的反应机理指导下，经反复实验，最终发现泽泻采用9度食用醋、陈皮煎汁闷润后麦麸拌炒的方法进行炮制可以明显促进泽泻饮片中化学成分转化，而且这种变化与24-乙酰泽泻醇A在模拟高温炮制条件下的变化基本一致。对比24-乙酰泽泻醇A高温转化物、泽泻生品及本申请专利工艺制备的泽泻炮制品化学成分，结果见图3。由图3可见，本炮制工艺制备的泽泻炮制品成分与24-乙酰泽泻醇A高温转化物成分十分相似，说明本工艺确实能够促进泽泻中的24-乙酰泽醇A发生转化。
[0027]对比泽泻生品和不同工艺麸制品的HPLC谱图可见，采用本工艺制备的泽泻炮制品与传统麸制工艺炮制品及生品成分差异较大。最明显的成分差异是本工艺制备的泽泻炮制品中24-乙酰泽泻醇A含量明显降低，而23-乙酰泽泻醇B含量明显升高(见图4)。实验结果显示，采用本炮制方法可改变泽泻炮制品的成分组成，增加23-乙酰泽泻醇B的含量的同时可能通过促进24-乙酰泽泻醇A转化为其他成分，降低了 24-乙酰泽泻醇A的含量。
[0028]3.制备工艺
[0029]3.1炮制工艺单因素实验考察
[0030]3.1.1炒制时间的考察
[0031]取泽泻生品饮片4份，各30g，分别加入米醋-陈皮煎汁混合物6mL (9度米醋3mL加陈皮煎汁3mL)闷润2h，与麦麸IOg混合，于160°C进行炒制，炒制时间分别为lmin，5min,IOmin, 15min。取出，放凉。采用HPLC法测定上述样品中24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B的含量，结果见表1 (平行样品3份)。
[0032]表1不同炒制时间对泽泻制品中24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B含量的影响(n=3)
[0033]
【权利要求】
1.一种降低泽泻肾脏毒性的炮制新工艺，其特征在于:按照泽泻生品饮片:9度食醋:陈皮煎汁为10kg: (1-1.5)L:1L的量混合，将混合物进行闷润2h后，加入放有麦麸的炒药锅中，麦麸与所述泽泻生品饮片的质量比为5:1-3:1，在150-160°C的温度下，炒制10-15min，取出，筛去麦麸，得到泽泻炮制品。
2.根据权利要求1所述的一种降低泽泻肾脏毒性的炮制新工艺，其特征在于:所述食醋为米醋、白醋或食用醋酸。
3.根据权利要求1所述的一种降低泽泻肾脏毒性的炮制新工艺，其特征在于:所述陈皮煎汁为每mL含陈皮的生药量为Ig的陈皮水煎液浓缩汁。
4.根据权利要求1所述的一种降低泽泻肾脏毒性的炮制新工艺，其特征在于:所述泽泻炮制品的切面为淡黄棕色，有醋香气；所述泽泻炮制品中24-乙酰泽泻醇A的含量为.0.025-0.026%, 23-乙酰泽泻醇 B 的含量为 0.069-0.071%。
【文档编号】A61K125/00GK103623150SQ201310667448
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年12月9日 优先权日:2013年12月9日
【发明者】许枬, 贾天柱, 张宏达, 李岚 申请人:大连民大中药饮片有限公司