专利名称：：对降低肾毒性有用的组合物及其使用方法对降低肾毒性有用的组合物及其使用方法本申请于2008年5月22日以弗农D罗(VernonD.Rowe)申请人的名义作为PCT国际专利申请递交，指定全部成员国，并要求2007年5月25日递交的申请号为No.11/753,883的美国发明专利申请的优先权，该申请通过引用而并入于此。
背景技术：
：已知多种药物及其他的物质具有肾毒性，并能通过各种机制引起肾衰竭，包括对肾小管的直接毒性、过敏性间质肾炎以及可能导致少尿型肾衰竭(oliguricrenalfailure)的药物在肾小管内发生结晶。肾毒性的药物包括抗癌剂，例如顺铂(cisplatin)、曱氨虫某呤和阿霉素；非固醇类抗炎药(nonsteroidalantiinflammatories,NSAIDs),例如COX-2抑制剂；抗生素(例如，氨基糖普类、两性霉素)；抗病毒药(例如，阿昔洛韦(acyclovir),茚地那韦(indinivir));乙酰胆碱酯酶抑制剂；血管紧张素II受体阻断剂(ARBs);锂和射线造影剂。需要降低由肾毒性的药物造成的肾损伤。
发明内容本发明提供了用来降低由肾毒性药物造成的肾损伤的组合物和方法。本发明提供的组合物含有被阴离子取代的寡糖、肾毒性的药物以及药学上可接受载体，其中，所述寡糖存在有效的量用于抑制所述药物的肾毒性作用。本发明还提供了一种降低了肾毒性作用的组合物，该组合物含有具有肾毒性作用的药物活性化合物和多阴离子寡糖(polyanionicoligosaccharide)，其中，所述寡糖存在有效的量用于降低所述药物活性化合物的肾毒性作用。本文还公开了降低药物活性化合物的肾毒性的方法，该方法包括使该化合物与多阴离子寡糖接触。此外，公开了抑制由肾毒性的药物引起的肾毒性的方法，该方法包括用药物组合物进行给药，所述药用组合物含有环状多糖硫酸酯，所述肾毒性药物包括药物和任选的药学上可接受的载体。图1所示为甲氨蝶呤(MTX)和卡普替索(captisol)在酸性水溶液中的溶解度研究结果。图2所示为指示了由髓鞘少突月M细胞糖蛋白(MOG)诱导的实验性自身免疫'!"生月亩脊骨遺炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)小鼠才莫型中用MTX和MTX+卡普替索进行处理的总肾损伤的肾病理性得分。图3所示为对EAE小鼠用MTX或MTX+卡普替索进行处理后的临床得分。图4所示为正常小鼠中进行单次静脉推注(bolus)MTX(共存有或没有不同摩尔比的卡普替索)后的肾组织中的肾病理性得分。图5所示为对小鼠用MTX(共存有或没有不同摩尔比的卡普替索)进行处理24小时后和48小时后的肾组织中的肾病理性得分。图6所示为阿霉素诱导的肾毒性模型中，各个处理组在浅层肾皮质水平上的平均病理性得分。图7所示为对个体小鼠用阿霉素或阿霉素+卡普替索进行处理后在浅层肾皮质水平上的肾病理性得分。图8所示为阿霉素诱导的肾毒性模型中，各个处理組在深层肾皮质+外髓质水平上的平均病理性得分。图9所示为对个体小鼠用阿霉素或阿霉素+卡普替索进行处理后在深层'i皮质+外髓质水平上的肾病理性得分图10所TF力用顺钥^顺邻+卞骨膂豕近仃^:埋的組杜x平均得分。图11所示为顺铂诱导的肾毒性个体小鼠模型中，各个处理组在浅层肾皮质水平上的病理性得分。平均得分。图13所示为顺铂诱导的肾毒性个体小鼠模型中，各个处理组在深层肾皮质和外髓质水平上的病理性得分。图14所示为顺铂/HP卩CD(2-羟丙基p-环糊精)和单独使用顺铂对白血4病细胞生长产生的效果的比4交。具体实施例方式本发明的组合物通常含有被阴离子取代的寡糖、肾毒性的药物和药学上可接受载体或其他本领域常用的赋形剂。所述寡糖存在有效的量用于抑制所述药物的肾毒性作用。在一种实施方式中，所述寡糖被极性部分或带电部分取代，例如阳离子取代基或阴离子取代基。在一个实施例中，所述被阴离子取代的寡糖为多阴离子s^唐，该多阴离子寡糖包括具有一个或多个选自由磺酸基、硫酸基、羧酸基、膦酸基和磷酸基所组成的组的阴离子取代基的环糊精。在另一种实施方式中，所述寡糖为环状多糖硫酸酯，优选为a-环糊精硫酸酯、|3-环糊精石克酸酯或Y-环糊并fr琉酸酯。本发明还提供了具有降低的肾毒性作用的组合物，该组合物含有诱导肾毒性作用的药用活性化合物和多阴离子寡糖。本文所用的肾毒性表示的是对肾的毒害或损害，或它们中的任意一种所表示的。被取代的寡糖被取代的寡糖通常指的是至少具有1个取代基/分子的寡糖，所述取代基优选为带电取代基或极性取代基。所述寡糖优选为具有约5至约10个糖单位(sugarunits)的且未被取代时的分子量为约650-约1300的糖化物。其中该寡糖被阴离子取代时，取代基通常优选为选自由磺酸基、硫酸基、羧tt、膦酸基和磷酸基和它们的组合所组成的组中。所述取代基在分子中的含量为约0.5-约3个取代基/糖单位。特别优选的组合物是那些基于具有约1个磺酸取代基/糖单元的寡糖的组合物。其他优选的组合物是建立在具有约2-约3个取代基/糖单元的寡糖的&出上，其中，所述取代基包括碌u酸取代基、磺酸取代基和/或磷酸取代基。所述寡糖为通过糖苷氧原子连接多个糖单位(例如葡萄糖单位)而成的链。前缀"寡"用于本文时，表示的是与一个或最多两个(例如在蔗糖中)的单支糖单位和与含有20个或更多的糖单位且具有高分子量的多糖相比，糖单位或糖化物的数目居间。虽然认为所有这些寡糖在本发明的范围内具有可操作性，但本文中的寡糖优选具有约5-约10个糖化物单位/分子。该范围相对于分子量范围为约650-约1300的未被取代的糖化物。在本文中，通常将具有约5-10个通过对淀粉或纤维素进行降解来获得寡糖，由此得到大小相差很大的寡糖碎片。一族稍微相关的物质为糖胺聚糖(glycosaminoglycans)。这种结构含有被各种取代基(包括氮原子、硫原子和氧原子)修饰的多糖骨架，并含有多种片段例如葡萄糖胺、艾杜糖醛酸、葡萄糖醛酸等。它们的结构可以在同名基团的不同样品中变化，例如软骨素(chondroitans)、皮肤素、透明质酸、硫酸乙酰肝素(heparansulfate)和肝素。已知每一族都是异源的，即，组合物的混合物。它们的分子量范围通常为10000-25000。被取代的寡糖，更具体地说，具有极性取代基或带电取代基的简单且低分子量的寡糖具有保护肾不受到某种类别药物的肾毒性效应的损害。虽然也可以使用其他的极性取代基(例如OH)，优选至少部分被阴离子取代的环糊精，这是由于该化合物具有相对的一致性、得到改善的在水溶液(例如血流)中的溶解度、降低的毒性、改善的体内清除率以及易于生产。阴离子取代基包括在美国专利No.3,426,011中通过实施例的方式描述的那些。所述寡糖可以具有以下通式寡糖-[(O-R-Y)-(Me)l其中，R为选自由直链或支链的Cwo的烷基、烯基或炔基；(:3_8的环烷基和C3-s的芳基，各个环上任选地含有1个或更多个选自S、N和O的杂原子；以及每一个前述基团可选自地被卣素(即，F、Cl、Br、I)或羟基取代；Y为酸性基团，例如OH、COOH、S03、S04、P03H或P04,或亚磷酸、三价膦酸(Phosphinousacid)、膦酸(phosphonicacid)、次膦酸、硫代膦酸、疏代次膦酸和磺酸；或者不存在Y;Me为药学上可接受的阴离子或阳离子，例如锂、钠、钾、钙、镁或铝；或者有机类伯胺、仲胺、或叔胺，例如，曱胺、二曱胺、三曱胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二曱基替苯胺、N-曱基哌啶、N-曱基吗啉、二环己基胺、普鲁卡因(procaine)、二苄胺、N,N-二苄基苯乙胺(N,N-dibenzylphenethylamine)、l誦二苯羟甲胺(l画ephenamine)，和N,N'漏二苄乙二胺(N,N'-dibenzylethylenediamine)、乙二胺、乙醇胺(ethanolamine)、二乙醇胺、哌啶、派溱等；且n为每个寡糖中的取代基的数量，每个取代基都是被独立选择地，即，各个取代基可以相同或不同。"n"可以为大于1的整数，其上限与具体的寡糖有关。可以理解的是，许多S^唐中的n表示的是每分子中的平均取代基数量。根据一种实施方式，R为Cwo的烷基，优选为选自甲基、乙基、丙基和丁基的Cw的烷基，它们中的每一个任意地被面素或羟基取代。特别优选的是这样的寡糖在一个或多个基团中，Y为S03。结果优选的多阴离子取代的寡糖具有约1600-约4000的分子量。环糊精在一种优选的实施方式中，所述寡糖为环状多糖，优选为环糊精，并且更优选为衍生的环糊精。环糊精(也被称为"CD"或"CDs")是由至少6个吡喃葡萄糖单位组成的环状寡糖。虽然已知CDs具有高达12个吡喃葡萄糖单位，但仅对前三种同系物进行了大量的研究——分别具有6个、7个和8个吡喃葡萄糖单位的a型、P型和y型。例如说，P-环糊精分子由7个通过a-l,4-连接的吡喃葡萄糖单位形成，这形成的锥形分子具有疏水性外表面并在中心具有亲脂性空腔。人们认为环糊精以锥形分子的形式存在，该锥形分子的d、端处具有伯醇羟基且在锥形的大开口处具有仲醇羟基。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>从形状上来看，可以将CDs表示成紋孔塞(torus),它的上缘排列有一级-CH20H基团，其下缘排列有仲醇羟基。与环面同轴排列的是分别相应于a-CDs、卩-CDs和y-CDs的5个、6个或7.5个任意单位直径的通道状空腔。这些空腔是的环糊精能与具有合适直径的疏水性客分子(guestmolecule)形成包合物。已经制备了相当大量的CD衍生物并记载于文献中。通常来说，这些被化学修饰的CDs是在不干扰o(1—4)半缩醛键的前提下，通过对附着在2号、3号或6号碳原子上的伯醇羟基或仲醇羟基进行反应而形成的。克罗夫特(Croft)等人对这种制备进行了评论，四面体(Tetrahedron(1983)39(9):1417-1474)，该评论通过引用而被结合于此。吡喃葡萄糖单位上通过幾基进行的取代基对于a-CD来说可以高达18个，对于(3-CD来i兌可以高达21个，且对于y-CD来说可以高达24个。所述环糊精可以选自具有下列通式糊精环糊精-[(0-R-Y)—(Me)+]n其中，R、Y、Me和n如上文所述。显而易见的是，对于a-CD来说n为1-18，对于(3-CD来说n为1-21,且对于，CD来说n为1-24。优选地，所述环糊精可以具有一个或多个选自由羟基、磺酸基、硫酸基、羧基、膦酸基和磷酸基所组成的组的取代基。根据一种实施方式，R为直链或支链的Cwo的烷基，优选为选自甲基、乙基、丙基和丁基的C,-4的烷基，它们中的每一个任意地-陂卣素或羟基取代。特别优选的是这样的寡糖在一个或多个基团中，Y为S03。优选的CDs是a-环糊精、(3-环糊精和Y-环糊精的-克酸酯衍生物或磺酸酯衍生物。现有技术中已经描迷了大环糊精(cycloamylose)硫酸酯和大环糊精磺酸酯的制备，和被修饰的环糊精硫酸酯和环糊精石黄酸酯。例如，参见美国专利号No.2,923,704、No.4,020,160、No.4,247,535、No.4,258,180、No.4,596,795和No.4,727,064,它们中的每一个通过引用而被结合于此。这些环糊精硫酸盐和环糊精磺酸盐通常与生理可接受阳离子相连。根据另一种实施方式，羟基被具有下列通式的烷基醚磺酸酯(alkylethersulfonate)取代一O—(C广Cs的烷基)-S03。在一个实施例中，可以使用商购得到的卡普替索⑧(塞克列斯(Cyclex)),它是P-环糊精的磺基丁基醚衍生物，每个环糊精分子中平均含有7个磺基丁基醚基(即，O-R-Y为-0-(CH2)4-S03"Na+)(可选择地，本文中还将其称为磺基丁基醚p环糊精或SEB-PCD)。卡普替索与未被衍生的p-环糊精一起不表现出肾毒性。其他的环糊精书亍生物公开于美国专利No.5,134,127、No.6,165,995、No.6,479,467(例如，羟基丁烯基國环糊升青(hydroxybutenyl画cyclodextrins))，和No.6，060，597中，以及专利公开20060258537(SAE-AE-CD)，这些申请中的每一个通过引用而被结合于此。其他的CDs包括例如，平均MS为14的曱基化衍生物，和具有单糖-(Gl-b-CD)和二糖-(G2-b-CD)取代基的葡萄糖基CDs和麦芽糖基CDs。其他的环糊精在列举如下(选自莫舍(Mosher)等人，制剂技术大全(EncyclopediaofPharm.Tech.(2002)531-58))。被修饰的CDs的系统命名法基取代基结构取代基位置取代基结构a命名法^-XYZ、弁d-CDe^始尿樹潜a-CD-OHa-CD(3-CD-OHP-CDY-CD-OHY-CD豕樹撈^^/4f差梦二曱基2,6--0-CH32,6-DM14-CD甲基随机-0-CH3M#-CD三曱基2,3,6--0-CH32,3,6-TM-CD乙基衍生物随机-0-CHrCH3E#-CD羟烷基衍生物2-羟乙基随机-0-CH2-CH2OH(2HE)#-CD2-羟丙基随机-0-CH2-CHOH-CH3(2HP)#-CD或HP#-CD3-羟丙基随机-0-CH2-CH2-CH2OH(3HP)#-CD2，3-二鞋丙基随机-0-CH2-CHOH-CH2OH(2，3-DHP)#-CDiQ^橫^厉庠子凝屑發谬躯凝说明书第8/32页羧基6--C02M6-C#-CD羧基烷基羧甲基随机-0-CH2-C02MCM#-CD羧乙基随机-0-CH2-CH2-C02MCE#-CD羧丙基随机-0-CH2-CH2-CH2-C02MCP弁-CD羧甲基乙基2,6-;3--0-CH2-C02M;-0-CH2-CH3CME#-CD辟u系书于生物硫酸酯2,6-随机-0-S03MS弁-CD烷基硫酸酯6--0-(CH2)u-S03MSU#-CD磺酸酯6--S03M6-SA#-CD烷基磺酸酯磺基乙基醚随机-0-(CH2)2-S03MSEE#-CD^"基丙基瞇随机-0-(CH2)3-S03MSPE#-CD磺基丁基醚随机-0-(CH2)4-S03MSBE#-CD,M:阳离子':数字表示了在知道的情况下取代基的位置；如果制备方法是随机分布的，则不使用标记以表示在2-、3-和6-位上的不确定分布e:字母代表了取代基的缩写符号d:数字代表了四舍五入到整数的平均MSe:表示了原始CD结构，即a-CD在另一种优选的实施方式中，环糊精具有以下通式环糊精-[(0-R)—(Me)+]n其中，R为选自由直链或支链的Cwo的垸基、烯基或炔基；被l个或更多个羟基取代。在一种实施方式中，O-R为0-CH2CH(OH)CH3,即，环糊精为2-羟丙基p-环糊精(HP(3CD)。在一种实施方式中，取代度为4.7,如以下实施例中所用。肾毒性的药物可以为任何的药用制剂，包括向主体进行给药时会造成肾损伤的小分子和肽。这种药物包括(通过列举的方式)，利尿剂、非甾体抗炎药10(NSAID)、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、环孢霉素、他克莫司、放射性造影剂、白细胞介素-2、血管扩张剂(肼苯哒嗪、钙-通道阻断剂、米诺地尔(minoxidil),二氮。秦)、丝裂霉素C、结合雌激素(conjugatedestrogens)、奎宁、5-氟尿嘧啶、噻氯匹定、氯吡格雷、干扰素、伐昔洛韦(valacyclovir)、吉西他滨(gemcitabine)、博莱霉素、肝素、华法林(warfarin)、链激酶、氨基糖苷类抗生素、顺铂、奈达铂(nedaplatin)、甲氧氟烷、四环素、两性霉素B、头孢菌素(cephaloridine)、链脲佐菌素、他克莫司(tacrolimus)、卡马西平(carbamazepine)、光神霉素(mithramycin)、p奎i若酮类、膦曱酸(foscamet)、戊烷脒、静脉注射y球蛋白、环膦酰胺(fosfamide)、唑来磷酸、西多福韦(cidofovir)、阿德福韦(adefovir)、替诺福韦(tenofovir)、甘露醇、葡聚糖、羟乙基淀粉、洛伐他汀(lovastatin)、乙醇、可待因(codeine)、巴比妥类、安定、奎宁、奎尼丁、磺胺类药物、肼苯歧"秦、氨苯虫莱啶、呋喃妥因、美芬妥因、青霉素、曱氧西林、氨千西林、利福平、磺胺类药物、瘗溱类、西咪替丁、苯妥英、别噤呤醇、先锋霉素族抗菌素(cephalosporins)、阿糖胞苷(cytosineambinoside)、速尿、干扰素、环丙沙星、克拉霉素、泰利霉素(telithromycin)、罗非考昔(rofecoxib)、泮4乇4i峻(pantoprazole)、奥美4立哇(omeprazole)、阿扎那韦(ataza丽ir)、黄药(gold)、青霉胺、卡托普利(captopril)、锂、甲芬那酸(mefenamate)、非诺洛芬(fenoprofen)、汞、干扰素、氨羟二磷酸二钠、芬氯酸(fenclofenac)、托美汀(tolmetin)、膦曱酸、阿昔洛韦、曱氨蝶呤、磺胺、氨苯蝶P定、茚地那韦、膦甲酸、更昔洛韦(ganciclovir),二曱麦角新碱、麦角胺、二氢麦角胺、曱基多巴、吲哚洛尔(pindolol)、肼苯哒嗪、阿替洛尔(atenolol),紫杉醇、肿瘤坏死因子、苯丁酸氮芥、白细胞介素、博莱霉素、依托泊苦(etoposide)、氟尿嘧啶、长春碱、阿霉素、顺铂等(一般来说，参见帝瓦斯迈塔(Devasmita)等人，自然肾病学临床应用(NatureClinicalPracticeNephrology(2006)2，80-91)。曱氨蝶呤根据一种实施方式，所述肾毒性的药物为曱氨蝶呤，或其衍生物或药学上可接受载体。曱胺嘌呤(N-[4-[[(2,4-二氨基-6蝶。錄)曱基]甲基氨基]苯甲酰]丄-谷氨酸)用来治疗各种癌瘤(特别是中枢神经系统(CNS)淋巴癌)的6期化极为广泛使用的抗癌症剂，并且用于癌瘤性疾病的治疗中，例如妊娠性绒毛膜癌(gestationalchoriocarcinoma)、骨肉瘤(osteosarcoma),恶性葡萄胎、葡萄胎、急性淋巴细胞性白血病、乳腺癌、头部和颈部的表皮癌、晚期蕈样肉芽肿病、肺癌和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinslymphomas)(医生案头参考(第45版)，经济化学有限公司，1185-89，(得梅因，爱荷华州(1991))(PhysiciansDeskReference(45thed.),MedicalEconomicalCo"Inc.,1185-89(DesMoines,Iowa(1991))。MTX还是一种有效的治疗。因此，MTX可以用来治疗严重且难以治愈的牛皮癣和风湿性关节炎(霍夫麦斯特，美国医学杂志(1983)30:69-73(Hoffineister,TheAmericanJournalofMedicine(1983)30:69-73);杰变，关节炎与风湿病(1988)31:299(Jaffe,ArthritisandRheumatism(1988)31:299))。但是，以"高剂量法"施用曱氨蝶呤时会具有对肾和肝的毒性，而这种"高剂量法，，是达到最大效果所通常需要的(巴拉克等人，美国大学营养期刊(1984)3:93-96(Baraketal"J.AmericanColl.Nutr.(1984)3:93-96))。有许多专利公开了MTX与MTX类似物，这些专利中的任意一个可以用于实践本发明。例如，参见美国专利申请号No.2,512,572、No.3,892,801、No.3,989,703、No.4,057,548、No.4,067,867、No.4,079，056、No.4,080,325、No.4,136,101、No.4,224,446、No.4,306,064、No.4,374,987、No.4,421,913、No.4,767,859、No.3,981,983、No.4,043,759、No.4,093,607、No-4,279,992、No.4，376,767、No.4,401,592、No.4,489,065、No.4,622,218、No.4,625,014、No.4,638,045、No.4,671,958、No.4,699,784、No.4,785,080、No.4，816，395、No.4,886,780、No.4,918,165、No,4,925,662、No.4,939,240、No.4,983,586、No.4,997,913、No.5,024,998、No.5，028，697、No-5,030,719、No.5,057,313、No-5,059,413、No.5,082,928、No.5,106,950、No.5,108,987、No.4,106,488、No.4,558,690、No.4,662,359、No.6,559,149,这些专利通过引用而被结合于此。其他的MTX类似物及相关的抗叶酸化合物，包括曲美沙特(trimetrexate)、依达曲沙(edatrexate)、AG331、吡曲克辛(piritrexim)、1843U89、LY231514、ZD9331、雷替曲塞(raltritrexed)、洛美曲索(lometrexol)、MTA和AG337(泷本，肺瘤学论文集(1997)24:S18-40-51(Takimoto，SeminarsinOncology(1997)24:S18-40-51);索尔贝罗等人，血液学(2001)86:121-27(Sorbelloetal.,Haematoligica(2001)86:121-27)))、CB3717、LY309887(卡尔弗特，肺瘤学论文集(1999)26:S6，3-10(Calvert,SeminarsinOncology(1999)26:S6,3-10);罗守斯基，药用化学进展(1989)26:1-237(Rosowsky,ProgressinMed.Chem.(1989)26:1-237))。因此，本文^^开的组合物可以用来治疗癌症或抑制癌症的生长；并且可以用来治疗多发性硬化及与其相关的症状。该组合物可以于其他活性剂(例如干扰素)联合或结合使用。此外，该组合物可以用来治疗自身免疫性疾病，例如狼疮和风湿性关节炎。抗生素氨14唐苷类抗生素(例如庆大霉素类、卡那霉素、链霉素和托普霉素)通常被用于能有效地抵抗例如革兰氏阳性、革兰氏阴性和耐酸细菌的光谱杀菌剂。然而，氨14t苷类通常引起不期望的负效应，例如对神的毒性和对耳的毒性。其他可以用于实施本发明的抗生素包括阿昔洛韦、万古霉素(vancomicin)和先锋霉素族抗菌素，例如罗氏芬⑧(Rocephin)和凯复卓(Kefzol)。非甾体抗炎药(NSAIDs)NSAIDs均表现出对肾的毒性。通常将NSAIDs用来减少疼痛而避免使用阿片衍生物(叩iatederivatives)。两种得到广泛使用的NSAIDs为吲哚美辛(Indomethacin)和罗氏制药生产的妥拉多⑧(Toradof)。抗真菌剂已知卡泊芬净(Caspoflingin)和两性霉素B二者均具有肾毒性，并可以用于本发明实践中。抗癌症剂许多的抗癌症剂表现出了剂量限制性肾毒性，并可以用于本发明实践中。这些试剂包括(以列举的方式)顺铂、阿霉素、环磷酰胺(cyclophosphamide)、白消安(butasulfane)等。造影剂在进行X光扫描之前，将造影剂注入患者体内。造影剂是高度浓缩(50-66%溶液)的碘化合物。鉴于这种高浓度，造影剂与环糊精仅为1:l的最小比值是必要的，并且该比值高达约10:l或更高。环糊精可能用来保护肾不受到由于影剂引起的损害的实施例包括使用碘海醇和碘佛醇(Ioversol)。其他可以用来实施本发明的造影剂包括泛影葡胺(diatrizoatemeglumine)和碘克酸(ioxaglate)。给药虽然认为寡糖对组合物的抗肾毒性作用不是必要的，可以使所述寡糖与肾毒性的药物进行复合。考虑到药物经过肾的通过时间，药物与寡糖的比例范围优选使药物不会在肾内的正常pH下发生沉淀。在一些情况中，希望使寡糖在体内的量最小化。样品在体外的溶解度实验(例如在实施例中所描述的)可以用来测定能有效地保护肝脏不受损害的最小量的寡糖。可选择地，能有效地防止肝脏受到损害所需的最小量的寡糖可以通过动物实验中寡糖对药物引起的肾病理学的效果而确定。在一种实施方式中，药物寡糖的摩尔比大于l:1，并且可以为约l.l:1至约50:1，优选为约1.25:1至约25:1，更优选为约1.75:1至约2:1至约10:1。在使用了曱氨蝶呤的情况中(仅通过举例的方式)，发现摩尔比约为2:l的曱氨蝶呤卡普替索能在体外较好地保持溶液中的曱氨蝶呤，并提供了期望的肾毒性。在需要较低量的寡糖的情况中，只要组合物中寡糖的量足以提供对肾的保护效果，可以设计使用额外的增溶剂。通过举例的方式，在使用造影剂碘海醇的情况中，如实施例中所示，摩尔比约为10:l的碘海醇SBEbCD能较好地作用，从而显著地降低了由碘海醇诱导的肾损伤中小鼠的肾病理。在一些情况中，可以期望药物与寡糖的比低于1:1,例如，其中结合造影剂的药物低或者其中肾对药物进行处理的速率低于环糊精，因此寡糖的摩尔数过量可能是有利的。这对于许多种类的药物是正确的，其中，产生治疗效果所需的药物的剂量低，因此，虽然寡糖可能具有较高的摩尔比，但在体内的绝对量或浓度不一定增加。这样一来，组合物可能含有约2-约50优选约2-约20或约2-约IO倍过量的的寡糖，或优选寡糖药物的摩尔比的范围为约1-约5:1，更优选为约2-约5:1。还提供了降低药用活性化合物的肾毒性作用的方法，该方法包括使所述组合物与多阴离子寡糖接触。所包括的用来抑制或降低由肾毒性药物引起的肾毒性的方法包括用含有多阴离子寡糖、肾毒性的药物和任选的药学上可接受载体的药用组合物进行给药。虽然优选以单剂量进行给药(特别是寡糖促进了药物的溶解时)，该方法还可以通过用含有多阴离子寡糖的药用组合物和含有诱导肾毒性的药物的药用组合物进行协同给药(即，分别按剂量进行给药)而发挥作用。其中，所述药物和寡糖结合为单个剂量单位，它们可以与药学上可接受的载体结合，例如共溶液*于惰性药学上可接受的溶剂或分散剂等中。可选择地，所述寡糖可以分别地与药学上可接受的物质进行配制，并进行独立给药；或者同时与药物一起，或者在给药前或给药后1小时内进行给药。协同给药表示的是，基本上按不同的剂量进行同时给药以使寡糖和药物存在于体内。可选择地，可以依次进行给药，前提是寡糖能随着药物在肾中的浓度增加至引起药物的毒性作用时仍然能存在于肾环境中。给药模式、剂量和剂量频率(frequencyofdosage)受到通常与药物制剂一起使用的给药模式和剂量考虑的控制。因此，可以将例如本发明的各种组合通过肌肉注射或静脉注射进行给药，或者，根据与所用具体药物或制剂的期望用途相关的药物和药理学实践的规定进行而给药。可以通过经口或肠道外途径进行给药，尤其包括局部施用、静脉注射、动脉灌注或皮下注射，并包括吸收和注射并i^7v体穴(bodyapertures)或体药(bodyorifices)内。可以理解的是，对于特定患者的具体剂量水平取决于各种因素，包括所用具体化合物的活性、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、给药实践、给药途径、排泄率、联合用药(drugcombination)以及正在治疗中的特定疾病的严重程度。接下来对示例性实施方式进行的描述将使本发明的其他特征变得明确，这些实施方式是为了阐述本发明而给出的，并不意味着本发明局限于此。实施例实施例1pH对MTX的溶解度产生的作用进行溶解度研究来测定，卡普替索是否能够在超过MTX经过肾的通过时间(即，短于2分钟)的时期内防止MTX发生沉淀。按表1所示制备溶液。用HC1对每一种溶液进行酸化、离心并将移出的上清液的等分试样作为时间的函数，通过分光光度计测量MTX在溶液中的浓度。如图1所示，卡普替索防止了MTX以浓度依赖性的速率发生沉淀。当摩尔比为l:l时，MTX无限期地存在于溶液中。当摩尔比较低时，以浓度依赖的速率发生沉淀。当卡普替索MTX的摩尔比为0.50:1时，MTX在溶液中至少保留15分钟，并且当摩尔比为0.25:1时，大部分的MTX保留IO分钟。考虑到在肾中滤过的快速通过时间，可以进行体内试验来测定MTX:卡普替索的最佳比值以防止对肾造成损害。表1MTX-卡普替索溶解度添加的MTX:0.91mg/mlMTX浓度0.002MPH为5.0时存在或不存在卡普替索时的MTX的沉淀速率卡普替索MTX的摩尔比为1:1302-304nm处的光密度(OD)溶液中MTX的量稀释校正1:25稀释MTX的浓度卡普替索/MTX的比值Og/mL)|ag/mlmg/ml(M)0.00252.710.002102.2910.002152.2960.002202.1270.002302.0670.002402.2020.002502.0780.002602.00433.28800989832.200228.10877627702.719428.17058096704.264526.0815822652.039625.33992583633.498127.00865266675.216325.47589617636.897424.56118665614.02970.83220.00183080.7027190.0015460.7042650.00154940.652040.00143450.6334980.00139370.6752160.00148550.6368970.00140120.614030.0013509添力口的卡普替索(mM)加之的长.s添酸后时，E16表l-续PH为MTX-卡普替索溶解度添加的MTX:0.91mg/mlMTX浓度0.002M.0时存在或不存在卡普替索时的MTX的沉淀速率卡普替索MTX的摩尔比为1:1卡普替索MTX的摩尔比为0.5:1302-304證处的光密度(OD)溶液中MTX的量(|ag/mL)1:500稀释的校正1:25稀释|_ig/mlmg/mlMTX的浓度(M)卡普替索/MTX的比值0,00151.85422.70704574567.67610.5676760.00124890.5:10.001102.26327.76266996694.06670.6940670.00152690.5:1o扁152.59431.85414091796.35350.7963540週7520.5:1o細201.53118.7144623467.86160.4678620.00102930.5:1o逮301.04412.6946848317.36710.3173670.00069820.5:10.001400.95911.64400494291.10010.29110.00064040.5:1o扁500.86410.4697157261.74290.2617430.00057580.5:10.001600.86110.43263288260.81580.2608160.00057380.5:1添力口的卡普替索(M)0扁552.3630扁5101.7980細5151.1730扁5200.8640細5300.6860細5400.6330扁5500.5560扁5600.55628.99876391724.969122.01483313550.370814.28924598357.231110.4697157261.74298.26946848206.73677.61433869190.35856.662546354166.56376.662546354166.56370.7249690.00159490.250.5503710.00121080.250.3572310.00078590.250.2617430.00057580.250.2067370扁45480.250.1903580扁41880.250.1665640扁36640.250.1665640.00036640.25卡普替索MTX的摩尔比为O:1302-304nm处的光密度(OD)MTX的浓度(吗/mL):500稀释mg/mlMTX的摩尔浓度(M)卡普替索/MTX的比值0.2960.220.2740.3280.3253.4487021012.5092707053.1767614343.8442521633.80716934586.2175562.7317779.41卯496.106395.179230.0862180.0627320.0794190.0961060.0951790.00018970細D70細17470.00021140.00020940:10:10:10:10:1卡普替索MTX的摩尔比为0.25:1302-30=MTx的浓度1:5，稀的卡普替处的光密度释摩尔浓度索/mtx(OD)的比值(pg/mL)(ig/mlmg/ml(M)加之的长的添睃后时扭加之的长.m添酸后时ta^o5o的替A卡索looooo加之的长.m添酸后时to.的替^加普，添卡索<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>实施例2卡普替索-MTX的保护性效果在由髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的C57B6小鼠中，进行40mg/kgMTX含或不含卡普替索@(摩尔比为1:1)的效果比较。对临床症状、中枢神经系统(CNS)病理学以及肾病理学进行测量。根据以下进行EAE诱导。用阿佛丁(Avertin)(222三溴乙醇)将小鼠麻醉，并两次皮下注射150jug的在磷酸盐緩冲溶液(PBS)中的MOG(总剂量为300pg)，它已经在相同体积的含有250pg的结核分枝杆菌(M似6^rw/a^)H,37RA的弗氏不完全佐剂中进行乳化(总剂量为500吗)。一次在颈部(nape)进行注射，第二次在背部(dorsum)进行注射。在给药致脑炎因子(encephalitogen)后第0天、第3天和第7天给药百日咳毒素(100ng，通过尾静脉进行静脉注射)。按25mg/ml使用MTX抹(贝德佛德实验室(Bedfordlaboratories))。用PBS将MTX抹(stock)稀释3.67倍(2ml的MTX株+5.34ml的PBS)以使总体积达到7.34ml,浓度为6.8mg/ml(14.9mM)。将3.00ml等分试样的稀释后的MTX溶液加入96.6mg的卡普替索粉末中，随后将溶液搅拌混合。得到的溶液为几乎澄清的浅黄。在进行注射前，将所有的溶液在室温(RT)下避光保存。96.6mg/3ml=32.228mg/ml=14.9mM;MTX:卡普替索的摩尔比为1:1。用测试混合物对5组小鼠进行给药(组I-V;参见表2)表2<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>症状发作后二十四(24)小时后，通过尾静脉给药MTX(40mg/kg体重)。注射体积为100-120pl。通过尾静脉注射的MTX+卡普替索的体积为100-120^1。通过尾静脉仅注射卡普替索(32.22mg/ml)的体积为100-120nl。进行MTX注射4个小时之后，通过尾静脉注射亚叶酸(20mg/kg体重)，并在24小时后再次进行注射。作为叶酸的活性代谢产物，亚叶酸通常在抗癌化疗中与曱氨蝶呤一起使用以保护正常细胞。每天测量动物体重并对临床症状进行打分。得分建立在以下标记的基础上0-正常1-尾部+〉弛(flaccidtail),竖毛(piloerection),和/或体重下降2-后肢无力，难以直立3-后肢无力导致不能直立4-后肢轻度瘫痪，跛行，和/或失禁5-后肢局部瘫痪6-后肢完全瘫痪而且前肢无力7-后肢完全瘫痪而且前肢轻度瘫痪或瘫痪8-死亡或垂死，需要将其处死每天对小鼠的疾病严重程度进行评分，并在患病第10天将其处死。用福尔马林将大脑、肾和脾进行固定。为了评价T细胞向中枢神经系统(CNS)的浸润，在石蜡包覆的厚度为8微米的未被处理的EAE小鼠后脑切片和用MTX和卡普替索进行协同处理的EAE小鼠后脑切片进行CD3+免疫组织化学法。对于光学显微研究，将肾固定在10%的緩冲福尔马林中，并进行常规石蜡包覆。用苏木精和曙红对5微米的组织切片进行染色，并在尼康酷片(Nikoncoolpix)光学显微镜下进行检测。通过对所描述的损害进行定量测量来评估总肾损伤的严重程度。评价每个肾组织切片的肾小球结构的变性、肾小球阻塞和充血、肾小嚢腔的扩张、近端肾小管和远端肾小管的变性、和肾小管的扩张、血管充血和炎症细胞的浸润。对于肾小管的变性，将含有20个以上的核的肾小球计"0"分，而那些含有少于10个核的计"4"分。中间阶段为l、2和3。其他的标准按0-3进行计分0=无；1=轻度；2=中度；3=严重。根据各个标准累加计算每个组织的显微得分，并每个切片中至少对100个肾单位(肾小球加上周围的肾小管)进行分析。数据表示为平均值±SEM(参见图2)。MOG处理后的小鼠从第10-11天开始产生了严重的临床表现。继续喂养它们直到第13天将其处死。所有的动物都受到了感染。后肢局部瘫痪或完全瘫痪(临床得分)。40mg/kg的MTX+卡普替索的功效与单独使用MTX进行处理所观察到的功效相当。CNS病理学结果——CD3+免疫染色反映了未被处理的EAE小鼠在后脑和脊髓中发生了大范围的CD3+T细胞浸润(未示出)。发生症状后用MTX+卡普替索(40mg/kg+卡普替索，摩尔比为1:1)进行协同处理的EAE小鼠表现出减少了80-90%的T细胞浸润(未示出)。使用MTX+卡普替索的功效与单独使用MTX进行处理所观察到的药效相当。图3显示了肾病理性得分。来自3只不同的用40mg/kg的MTX处理过的EAE小鼠的肾切片显示了肾小管的扩张和近端肾小管的变性。来自使用MTX+卡普替索进行协同处理的小鼠的肾切片显示了对肾小管的保护性效果。用40mg/kg的MTX进行单次静脉推注注射(bolusinjection)造成了肾形态的变化，这大多局限于皮质内肾小管的扩张。使用卡普替索与MTX进行协同给药使得EAE小鼠中的病理性得分降低。实施例3各种摩尔比的卡普替索-MTX进行单次推注静脉注射MTX(没有协同有或协同有不同摩尔比的卡普替索)后，对肾发生的组织病理学改变进行研究。按以下配制MTX溶液。由25mg/ml的储备溶液(来自Bedford实验室的甲氨蝶呤)在无菌PBS中制备溶液A(24mg/ml(53mM))(总体积为6mL)。将3ml的溶液A在PBS中按1:1.33进行稀释得到18mg/mL(39.6mM)且pH为7.4的工作稀释液从而制备溶液B。将2ml的溶液A按l:2进行稀释得到12mg/mL(26.4mM)且pH为7.2的工作稀释液从而制备溶液C。按以下配置MTX+卡普替索溶液。向500微升试样量溶液A中加入57.32mg的卡普替索而制得溶液D(摩尔比为1:1，pH为中性)。通过向1mL试样量的溶液B中加入85.6mg的卡普替索而制得溶液E(摩尔比为1:1,pH为中性)。通过向1mL试样量的溶液C中加入57.10mg的卡普替索而制得溶液F(摩尔比为1:1，pH为中性)。通过向lmL试样量的溶液B中加入42.8mg的卡普替索而制得溶液G。通过向1mL试样量的溶液C中加入28.6mg的卡普替索而制得溶液H。通过尾静脉单次注射向8组小鼠给药MTX和卡普替索(组I-VIII，参见表3),注射体积为100-120^1。48小时后将动物处死。记录下临床症状和体重。将肾保存起来(一个进行冷冻，另一个用福尔马林固定)进行病理学研究。4小时和18小时后加入亚叶酸。尿液未发生》威化。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>图4示出了用80mg/kg的MTX、120mg/kg的MTX和MTX+卡普替索的组合(MTX:卡普替索的摩尔比为1:1和1:0.5)进行处理后，对小鼠中的总肾损伤进行的半定量分析。对于对照肾的得分为3-4(图中未示出)之间。在显微镜下分析包覆有石蜡的肾的苏木精和曙红切片中的肾损伤程度。数据表示为平均值士SEM。图中未包括160mg/kg的MTX的数据，这是由于该组中仅有一只小鼠。用苏木精和曙红进行染色的肾的石蜡切片(未示出)显示，来自用80mg/kg的MTX进行给药的小鼠的肾中发生了肾小管扩张、肾小管的退行性病变、肾小球细胞增多以及间质细胞和弯曲肾小管的非典型性聚集。来自用80mg/kg的MTX+卡普替索(MTX:卡普替索的摩尔比为1:1)和80mg/kg的MTX+卡普替索(MTX:卡普替索的摩尔比为1:0.5)进行给药的小鼠的肾显示出较轻微的肾小管的变性、正常的肾小球，且没有发生炎症细胞的浸润。然而，当MTX:卡普替索的摩尔比为1:0.5时对肾的保护程度更高。用苏木精和曙红进行染色的肾的石蜡切片(未示出)显示，来自用120mg/kg的MTX进行静脉注射给药的小鼠的肾中发生了肾小球萎缩、肾小嚢基膜的变性、肾小管的退行性病变、肾小球细胞增多以及单核细胞的浸润。来自用120mg/kg的MTX+卡普替索(MTX:卡普替索的摩尔比为1:1)和120mg/kg的MTX+卡普替索(MTX:卡普替索的摩尔比为1:0.5)进行给药的小鼠的肾显示了大部分为正常的肾小球、对近端肾小管和远端肾小管的保护，且没有发生炎症细胞的浸润。实施例4卡普替索-MTX的倍数研究按表4所列出的给药MTX-卡普替索混合物。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>对于光学显《敫研究，将肾固定在10%的緩沖福尔马林中，并进行常规石蜡包覆。用苏木精和曙红对5微米的组织切片进行染色，并在尼康coolpix光学显微镜下进行检测，使用尼康Coolpix相机完成摄影。通过对所描述的损害进行定量测量来评估总肾损伤的严重程度。评价每个肾组织切片的肾小球结构的变性、肾小球聚集和充血、肾小嚢腔的扩张、近端肾小管和远端肾小管的变性、和肾小管的扩张、血管充血和炎症细胞的浸润。对于肾小管的变性，将含有20个以上的核的肾小球计"0"分，而那些含有少于IO个核的计"4"分。中间阶#爻为1、2和3。其他的标准按0-3进行计分0=无；1=轻度；2=中度；3=严重。根据各个标准累加计算每个组织的显微得分并每个切片中至少对100个肾单位(肾小球加上周围的肾小管)进行分析。参见例如巴特等人，美国国家科学院院刊(2003)100(7)(Bhatetal.,PNAS(2003)100(7));赛内尔等人，细胞生物学与毒理学(Seneretal,,CellBiolToxicol(2006)22:470-60)。参见图5，24小时和48小时后发生的大规模组织病理学改变。在第24小时和48小时处，发生了肾小球萎缩、肾小嚢腔的变性和扩张，并且炎症细胞浸润到间质中和肾小管发生变性。使用卡普替索+MTX进行处理的组显示出了较轻微的肾小球和肾小管的改变，且较少发生炎症细胞的浸润。然而，由于第48小时的累积病理性得分比第24小时的低，因此24小时之后观察到的改变似乎具有可逆性。对注射MTX(同时给药或不给药卡普替索)后24小时的肾组织病理学改变进行研究。使用MTX或MTX+卡普替索进行协同给药24小时后，处死小鼠。使用苏木精和曙红对肾的石蜡切片进行染色(未示出)。用160mg/kg的MTX进行给药导致了肾小管结构的变性和肾小嚢腔的扩张、近端肾小管和远端肾小管的变性以及炎症细胞的浸润。在摩尔比为1:1的160mg/kg的MTX十卡普替索中观察到了较轻微的肾小球和肾小管变性。摩尔比为1:0.5的160mg/kg的MTX+卡普替索能最有效地维护了肾小球和肾小管的结构。完全没有发生炎症细胞的浸润。摩尔比为1:0.25的160mg/kg的MTX+卡普替索不能保护肾不受到损害。对注射MTX(同时给药或不给药卡普替索)后48小时的肾组织病理学改变进行研究。使用MTX或MTX+卡普替索进行协同给药48小时后，处死小鼠。用苏木精和曙红对肾的石蜡切片进行染色(未示出)。进行注射后第48小时处，给药160mg/kg的MTX(静脉注射)引起了肾小管结构的的变性、肾小嚢腔的扩张、近端肾小管和远端肾小管的变性以及炎症细胞的浸润。在160mg/kg的MTX+卡普替索(MTX:卡普替索的摩尔比为1:l)中观察到了较轻微的肾小球和肾小管变性。160mg/kg的MTX+卡普替索(摩尔比为1:0.5)能相对较好地维持肾小球和肾小管的结构。完全没有发生炎症细胞的浸润。摩尔比为1:0.25的160mg/kg的MTX+卡普替索不能有效地保护肾不受到MTX引起的损害。当MTX:卡普替索的摩尔比为1:0.5时观察到了最大的保护性。还对给药MTX—周后的肾病理组织学改变进行了研究。用160mg/kg的MTX进行单次静脉注射一周后，处死小鼠。用苏木精和曙红对肾的石蜡切片进行染色(未示出)。单独给药MTX主要导致了近端肾小管和远端肾小管的变性，偶尔会发生肾小球萎缩或聚集。核胀大了的变性细胞排列在近端肾小管和远端肾小管上。偶尔会发现一些肾小管由两层细胞进行排列。一些肾小管与嗜酸性物质聚积在一起。大部分的病理学改变发现于肾的皮质区。大多数肾小球结构是正常的。记录进行MTX+卡普替索注射后一周发生的组织病理学改变。进行MTX+卡普替索共同给药后一周，处死小鼠。使用苏木精和曙红对肾的石蜡切片进行染色(未示出)。用MTX:卡普替索的摩尔比为1:1的160mg/kg的MTX+卡普替索进行共同给药的小鼠的肾表现出少得多的肾小球破坏和对肾小管更高的保护。没有发生炎症细胞的浸润。实施例5对卡普替索在阿霉素诱导的肾毒性小鼠模型中的肾损害保护效果的评价。向雌性C57BL/6小鼠以10mg/kg的剂量单次静脉注射阿霉素。72小时后处死小鼠。通过肾组织学的方法来评估使用阿霉素和阿霉素+卡普替索后发生的肾小球和肾小管间质性损伤。切下5pM的石蜡切片，并用苏木精和曙红以及过捵酸希夫(periodicacidSchiff,PAS)进行染色。通过光学显微镜对它们进行测定，并以盲法进行打分。对30个浅层皮质(接近肾小嚢的表面)的肾小球及周围的肾小管进行评分。对100个深层肾皮质和外髓质外侧水平上的肾小J求及周围的肾小管进行评分。图6所示为各个处理组在浅层肾皮质水平上的平均病理学得分。图7所示为对个体小鼠用阿霉素或阿霉素+卡普替索进行处理后在浅层肾皮质水平上的肾病理性得分。图8所示为在深层肾皮质+外髓质水平上各个处理组的平均病理性得分。图9所示为对个体小鼠用阿霉素或阿霉素+卡普替索进行处理后在深层肾皮质+外髓质水平上的肾病理性得分。对照组或用卡普替索进行处理的小鼠均没有产生任何的肾小管间质性改变。使用阿霉素进行处理的组表现出了肾小管管型(tubularcasts)、大量的肾小管扩张以及在一些近端肾小管中发生中等程度的刷状缘脱落。一些肾小球发生崩溃并处于不同变性阶,爻。发现病理更主要地发生于在肾皮质的外周。没有发现肾小管萎缩或中性粒细胞的浸润。在使用阿霉素+卡普替索进行处理的小鼠中发生了减少了几乎71%的变性并降低了几乎72%的肾小管扩张。在更深层肾皮质和外髓质处，降低了90%的肾小球变性并降低了50°/。的肾小管扩张。实施例6对卡普替索在顺铂诱导的肾毒性小鼠模型中的肾损害保护效果的评价。向雌性C57BL/6小鼠以10mg/kg的剂量单次静脉注射顺柏(N=5)或顺铂+卡普替索(顺铂卡普替索的摩尔比为1:1、1:0.5和1:0.25(分别为N=5，N-4和N二6))。72小时后处死该动物。通过肾组织学的方法来评估使用顺铂后发生的肾小球和肾小管间质性损伤和由顺铂+卡普替索产生的保护性。切下5pM的石蜡切片，并用苏木精和曙红以及过硪酸希夫(PAS)进行染色。通过光学显微镜对它们进行测定，并以盲法进行打分。对30个浅层皮质(接近肾小嚢的表面)的肾小球及周围的肾小管进行评分。对100个深层肾皮质和外髓质外侧水平上的肾小球及周围的肾小管进行评分。图10所示为用顺铂和顺铂+卡普替索(顺铂卡普替索的摩尔比为l:1，1:0.5和l:0.25)进行处理的组在浅层皮质水平上的平均得分。图11所示为各个处理组中的个体小鼠在浅层肾皮质水平上的病理性得分。图12所示为用顺柏和顺铂+卡普替索(顺铂卡普替索的摩尔比为1:1,1:0.5和l:0.25)进行处理的組在深层皮质水平上的平均得分。图13所示为各个处理组中的个体小鼠在深层肾皮质和外髓质水平上的病理性得分。对照组中的小鼠没有发生任何的肾小管间质性改变。用顺铂进行处理的小鼠表现出了坏死、肾小管上皮细胞掉落并在一些近端肾小管中发生刷状缘的脱落。由顺铂引起的肾毒性的主要特征是具有许多扩张的肾小管。一些肾小球发生崩溃并且一些肾小球表现出了早期的变性改变。这些改变在使用顺铂+卡普替索进行处理后的显著性要小得多，这证明了在顺铂卡普替索为1:1以及顺铂卡普替索为1:0.5的情况下，卡普替索均能对肾进行保护。实施例7对SBE-卩CD在庆大霉素诱导的肾毒性小鼠中的肾损害保护效果早期的研究已经显示，以相当于临床剂量给药庆大霉素不能在小鼠内产生可测量的毒性。然而，这些剂量在人体中会产生肾毒性。因此，对SBE-卩CD在轻度肾抵抗力不足小鼠中的肾损害保护效果进行评估。这些小鼠表现出对相当于临床剂量发生病理学改变。为了得到轻度肾抵抗力不足小鼠，在第一次注射庆大霉素前15-20分钟，向该动物经腹腔注射10mg/kg的L-NAME(L精氨酸曱酯)和10mg/kg的吲咮美辛。向雌性C57BL/6小鼠以4.0mg/kg的庆大霉素(N=4)或4.0mg/kg的庆大霉素+19.2mg/kg的SBE-卩CD(N=4)的剂量进行连续10天推注静脉注射。庆大霉素SBE-卩CD的摩尔比分别为1:l和1:2。最后一次注射48小时后将动物处死。通过在光学显微镜下对肾的苏木精和曙红切片进行分析来对肾病理学进行评价。实验数据列于下表5中。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>切下5pM的石蜡切片，并用苏木精和曙红以及过硤酸希夫(PAS)进行染色。通过光学显微镜对它们进行测定，并以盲法进行打分。对各个切片中40倍放大下的5个任意视野(filed)的下述参数进行评价，并根据所提及的标准进行评分。扩张的肾小管0-正常，无扩张的肾小管1-轻度，l-2个扩张的肾小管2=中度，3-5个扩张的肾小管3=严重，6-8个扩张的肾小管4=非常严重，超过8个扩张的肾小管肾小管管型0-无管型1-轻度，1-2个管型/视野(field)2=中度，3-5个管型/视野3=严重，6-8个管型/#见野4=非常严重，超过8个管型/视野空泡(Vacuoles)0=正常，无空泡1=轻度，1-4个空泡2=中度，5-8个空泡3=严重，9-12个空泡4=非常严重，13-16个空泡肾小管变性(degeneration)0=无1=轻度，高达25%的视野中具有变性的肾小管2=中度，高达50%的视野中具有变性的肾小管3=严重，高达75%的视野中具有变性的肾小管4=非常严重，超过75%的视野中具有变性的肾小管炎症0=无，没有发现炎症细胞1=轻度，高达25%的视野被炎症细胞覆盖2=中度，高达50%的视野被炎症细胞覆盖283=严重，高达75%的视野被炎症细胞覆盖4=非常严重，超过75°/。的视野被炎症细胞覆盖水肿0=无1=轻度2=中度3=严重4=非常严重在本发明的条件下，通过静脉注入的低剂量的庆大霉素(4mg/kg)在健康肾中没有造成显著的改变。然而，当轻度地降低了小鼠肾抵抗力时，4mg/kg的庆大霉素在肾皮质中造成了大规^莫的肾小管空泡状改变和坏死；肾小管细胞变得扁平并部分不连续，而且腔室被拓宽。在远端肾小管、导尿管和肾小球处没有发现显著的变化。摩尔比为l:l和l:2的庆大霉素与SBE-卩CD的组合对由庆大霉素诱导的肾毒性产生了极大的保护作用。全部6个计算参数的平均降低的肾病理性约为62%。肾小管扩张和近端肾小管空泡状变化以及肾小管管型的形成发生了衰减，并且肾小管坏死和单核细胞的浸润也减少了。SBE-卩CD的效果与剂量有关，并且对于大多数的参数来说，摩尔比为l:2的庆大霉素SBE-卩CD比摩尔比为1:1的更有效。实施例8对SBE-PCD在阿昔洛韦诱导的肾毒性小鼠中的肾损害保护效果早期的研究已经显示，以相当于临床剂量给药阿昔洛韦不能在小鼠内产生可测量的毒性。然而，这些剂量在人体中会产生肾毒性。因此，对磺基丁基醚卩环糊精(sulfobutylether卩cyclodextrin,SBE-卩CD)在轻度肾抵抗力不足小鼠中的肾损害保护效果进行评估。这些小鼠表现出对相当于临床剂量的阿昔洛韦发生病理学改变。为了得到轻度肾抵抗力不足小鼠，在第一次注射阿昔洛韦前15-20分钟，向该动物经腹腔注射10mg/kg的L-NAME(L精氨酸曱酯)和10mg/kg的吲哚美辛。向雌性C57BL/6小鼠以10mg/kg的阿昔洛韦(N=3)或10mg/kg的阿昔洛韦+173mg/kg的SBE-卩CD(N=3),或30mg/kg的阿昔洛韦(N=3)或30mg/kg的阿昔洛韦+520mg/kg的SBE-J3CD(N=3)的剂量进行连续10天推注静脉注射(表6)。上述情况中，阿昔洛韦SBE-卩CD的摩尔比均为1:2。最后一次注射48小时后将动物处死。通过在光学显微镜下对肾的苏木精和曙红切片进行分析来对肾病理学进行评价。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>切下5pM的石蜡切片，并用苏木精和曙红以及过硪酸希夫(PAS)进行染色。通过光学显微镜对它们进行测定，并以盲法进行打分。根据以下所述参数对各个切片中在40倍放大下的5个任意视野进行评价，并根据所提及的标准进行评分。扩张的肾小管0=正常，无扩张的肾小管1=轻度，l-2个扩张的肾小管2=中度，3-5个扩张的肾小管3=严重，6-8个扩张的肾小管4=非常严重，超过8个扩张的肾小管空泡(Vacuoles)0=正常，无空泡1=轻度，1-4个空泡2=中度，5-8个空泡3=严重，9-12个空泡4=非常严重，13-16个空泡炎症0=无，没有发现炎症细胞1=轻度，高达25%的视野被炎症细胞覆盖2=中度，高达50%的视野被炎症细胞覆盖3=严重，高达75%的视野被炎症细胞覆盖4=非常严重，超过75%的视野被炎症细胞覆盖肾小管细胞数量的增加0=无1=轻度，高达25%的肾小管细胞数增加或具有重叠的细胞2=中度，高达50%的肾d、管细胞数增加或具有重叠的细胞3=严重，高达75%的肾小管细胞数增加或具有重叠的细胞4=非常严重，超过75%的肾小管细胞数增加或具有重叠的细胞对轻度肾抵抗力不足小鼠进行长期的阿昔洛韦给药导致了与剂量有关的肾形态学上的病理学改变的增加。冲艮据大量扩张的肾小管和近端肾小管上皮的不规则空泡状变化所指示的，阿昔洛韦处理导致了中毒至严重的症状。没有发现其他的肾小管发生损害的症状，例如上皮细胞的微钙化或坏死。在软组织中发现了单核细胞的轻度浸润。大多数的病理，特别是肾小管扩张发现于皮质外周。肾小球的病理纟及少。与SBE卩CD按摩尔比为1:2进行协同给药使外皮质和髓质中的肾小管扩张和肾小管内的空泡形成发生了显著的减少。此外，肾小管管型和软组织内的单核细胞浸润也发生了降低。多个评估参数的平均降低的肾病理性对于30mg/kg的剂量为62%，而对于10mg/kg的剂量为67%。实施例9对SBE-PCD在碘海醇诱导的肾毒性小鼠中的肾损害保护效果碘海醇对人类具有肾毒性并能在肾抵抗力不足的患者内引起急性肾衰竭。因此，通过轻度肾抵抗力不足小鼠对磺基丁基醚卩环糊精(SBE-PCD)在由造影剂诱导的肾病模型中的肾损害保护性效果进行评估。这些小鼠表现出对相当于临床剂量发生病理学改变。为了得到轻度肾抵抗力不足小鼠，在注射碘海醇前15-20分钟，向雌性C57BL/6小鼠经腹腔注射10mg/kg的一氧化氮合成酶抑制剂L-NAME(L精氨酸甲酯)和10mg/kg的前列腺素抑制剂吲哚美辛。向小鼠以1.5g/kg的碘海醇(N-4)或1.5g/kg的碘海醇+1.3g/kg的SBE-卩CD(N=4)进行单次静脉注射，或进行硖海醇注射前30分钟、协同注射或注射后30分钟用1.5g/kg的石典海醇+1.3mg/kg的SBE-(3CD(N=4)进行给药(表7)。在这两种情况中，协同剂量中的碘海醇SBE-卩CD的摩尔比为1:0.1。然而，在第二种情况中，摩尔浓度在体内会更高。进行碘海醇注射后24小时后将动物处死。通过在光学显微镜下对肾的苏木精和曙红切片进行分析来对肾病理学进行评价。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>切下5pM的石蜡切片，并用苏木精和曙红以及过^^典酸希夫(PAS)进行染色。通过光学显微镜对它们进行测定，并以盲法进行打分。对各个切片中40倍放大下的5个任意视野的下述参数进行评价，并根据所提及的标准进行盲法评分。每个肾进行全部4个切片进行分析。对轻度肾抵抗力不足小鼠(renal-compromisedmice)给药造影剂碘海醇造成了肾小管形态学上的病理变化。根据存在大量的扩张的肾小管、肾小管管型、近端肾小管上皮的空泡状变化以及近端肾小管的变性所指示的，碘海醇处理造成了肾小管病的中毒至严重的症状。没有发现其他的肾小管损害症状，例如嗜碱性细胞、上皮细胞的孩"丐化或坏死。大多数的病理，特别是肾小管扩张发现于皮质外周。绝大多数的肾小球表现为正常的。与SBE-卩CD—切按照碘海醇SBE-(3CD的摩尔比为1:0.1进行协同给药使外皮质和外髓质中的肾小管扩张、肾小管管型的形成以及肾小管上皮空泡状变化发生了显著的降低。当分3次剂量(极性》典海醇注射前、注射时和注射后)给药使SBE-PCD的保护性效果得到了增强。但是，在这些小鼠中发现了增加的空泡状变化,这可能是由于SBE-PCD在小鼠肾中具有了高的局部浓度。更高剂量的SBE-卩CD(小鼠中)表现出引起可逆的近端肾小管空泡状变化。虽然1.3g/kg低于在小鼠内引起空泡状变化的量，累积性剂量可以更高。当将SBE卩CD与碘海醇进行单剂量协同给药时，多个评估参数的平均降低的肾病理性约为72o/0。实施例10对HP卩CD在曱氨蝶呤诱导的肾毒性模型小鼠中的肾损害保护效果为了测定其他的环糊精分子，对2-羟丙基P-环糊精(2-hydroxypropyl(3-cyclodextrin，HP卩CD)进行评估。向雌性C57BL/6小鼠以80mg/kg的剂量单次静脉注射曱氨蝶呤，或静脉注射甲氨蝶呤+HP(3CD(曱氨蝶呤HP卩CD)的摩尔比为l:l和l:0.5。24小时后处死该动物。用光学显微镜通过肾组织学的方法来评估甲氨蝶呤后发生的肾小球和肾小管间质性损伤。4小时和18小时后加入亚叶酸。尿液未发生碱化。切下5pM的石蜡切片，并用苏木精和曙红以及过碘酸希夫(PAS)进行染色。通过光学显微镜对它们进行测定，并以盲法进行打分。对各个切片中40倍放大下的5个任意视野的实施例7中所述参数进行评价，并根据实施例7中的标准进行评分。正常小鼠中，用80mg/kg的MTX进行单次静脉注射对肾产生了肾小球发生轻度萎缩、肾小管变性、管型的形成、单核细胞的扩张和浸润的形式的组织病理学改变。在用MTX+HP卩CD(摩尔比均为1:1和1:0.5)进行协同处理的小鼠中，发现肾小管的病理发生了显著的降低，并的肾小球的结构得到了更好的保持。总体上来说，摩尔比为1:0.5的MTX:HP卩CD比摩尔比为1:0.05更有效。多个测得参数的肾病理性的平均减少约为55%。以上的说明书、实施例和数据提供了对本发明的组合物的制造和使用的全面的描述。由于在不背离本发明的实质和范围的前提下可以进行本发明的多个实施方式，因此本发明在随附的权利要求书的范围内。权利要求1.一种组合物，该组合物含有以下通式的被取代的寡糖环糊精-[(O-R)-(Me)+]n其中，R选自由直链或支链的C1-10的烷基、烯基或炔基所组成的组中；且被一个或多个羟基取代；Me为药学上可接受的阳离子或阴离子；且n为大于1的整数；肾毒性的药物或制剂；和药学上可接受的载体；所述寡糖存在有效的量用于基本上抑制所述药物或制剂的肾毒性作用。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述R为0-CH2CH(OH)CH3。3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述环糊精为选自由a-环糊精、卩-环糊精或，环糊精所组成的组中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述药物所述寡糖的摩尔比大于l:1。5.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述药物所述寡糖的摩尔比至少为约2:1。6.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述药物为曱氨蝶呤或它的衍生物或它的药学上可4妄受的盐。7.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述药物为抗生素。8.根据权利要求1所述的组合物，其中，，所述制剂为造影剂。9.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述药物为抗癌药物。10.—种抑制癌生长的方法，该方法包括向需要的受治者给药有效量的权利要求9所述的组合物。11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述药物为顺铂。12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述寡糖为羟丙基卩环糊精。全文摘要本发明提供了一种用来降低由肾毒性的药物造成的肾损伤的组合物和方法。本发明提供的组合物包括阴离子取代的寡糖、肾毒性的药物和药学上可接受的载体，其中，所述寡糖存在有效的量用于基本上抑制所述药物的肾毒性作用。文档编号A61K31/715GK101686991SQ200880017313公开日2010年3月31日申请日期2008年5月22日优先权日2007年5月25日发明者弗农·D.·罗申请人:韦罗制药有限公司