砂狗娃花头状花絮的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了砂狗娃花头状花絮的应用，该头状花絮具有明显的解热作用，且它的化学成分的研究中得到的槲皮素，芹菜素以及芦丁等查文献得知具有杀菌，止疼等药理作用，因此可看出此植物具有很高的药用价值，是一种天然药物。
【专利说明】砂狗娃花头状花絮的应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及砂狗娃花头状花絮的应用【背景技术】
[0002]砂狗娃花是菊科植物狗娃花属植物，一年生草本，高35-50厘米。茎直立，有纵条纹，被上曲或开展的粗长毛和细贴毛，通常自中部分枝。基部及下部叶在花期枯萎，卵形或倒卵状矩圆形，长5-6厘米，宽2.5-3.5厘米，顶端钝或急尖，基部狭成长柄，边缘有粗圆齿，具3脉；中部茎生叶狭矩圆形，长6-8厘米，宽1-2厘米，顶端钝或急尖，基部稍渐狭，无柄，上部边缘有粗齿或全缘，上面绿色，下面浅绿，两面被平贴的短硬毛或边缘及下面脉上被硬毛，中脉及侧脉两面均较明显；上部叶渐小，披针形至条状披针形，在小枝上的长1-1.5厘米，宽3毫米，全缘，I脉。头状花序单生枝端，径3-5厘米，基部有苞片状小叶；总苞半球形，直径13-18毫米；总苞片2-3层，草质，条状披针形，长7-8毫米，项端渐尖，背面被粗长毛和腺，内层下部边缘膜质。舌状花管部长约1.8毫米；舌片兰紫色，条状矩圆形，长14-17毫米，稀长至27晕米,宽2-2.5晕米,顶端3裂或全缘；管状花黄色，长约5晕米，管部长1-1.5晕米，疏生小硬毛，裂片5片，不等大，长0.8-1.2毫米，花柱附属物三角形。瘦果仅在管状花的能育，倒卵形，长2.2-3毫米，宽0.8-2.2毫米，扁，有边肋，被短硬毛，舌状花瘦果狭长，不育。冠毛淡红褐色，长2-4.5毫米，有25-35个不等长的糙毛，舌状花冠毛少数或较短或有时无冠毛。产于东北、内蒙古、河北、山西、陕西、甘肃东北部。也分布于朝鲜、日本、苏联远东地区。到目前为止，砂狗娃花在医药界尚无使用，而现在的研究只得到部分化学成分，而且还没有对提取鉴定的成分进行药理研究，只查些文献推断和得知所提取获得的化学成分有药理作用。只做了该植物头状花序清热作用的验证性药理实验，其他相关实验未进一步深入研究。
[0003]同时到目前为止，国内外研究此植物的报道还很少，所以研究时需要长时间的探索。目前人类“崇尚自然”、“渴望绿色”、“回归自然’’的呼声越来越高，天然药物和天然保健品的社会需求日益高涨，很多国家如日本、韩国、美国的科研人员在研究天然药物。其主要研究内容包括有天然药物的鉴别，从天然药物中提取、分离有效的药理活性成分，确定质量标准，在现代医学科学概念基础。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于根据植物亲缘关系相近，药理作用相似的规律*以清热、镇咳、祛痰、杀菌等药理学实验，研究砂狗娃花的药理作用，进一步发觉新的药理作用；确立药理作用后分离有效部位，确立有效成分及含量，为药物的标准化提供依据。
[0005]具体的为:砂狗娃花头状花絮在解热方面的应用。
[0006] 申请人:研究菊科植物紫菀花的药理作用时受到启发，经过试验发现砂狗娃花的头状花絮具有明显的解热作用，而它的化学成分的研究中得到的槲皮素，芹菜素以及芦丁等查文献得知具有杀菌，止疼等药理作用，故而我们可以继续研究更多的药理研究以及有效部位的化学成分。
【专利附图】
【附图说明】
[0007]图1为化合物I的质谱图；
[0008]图2为化合物2的质谱图；
[0009]图3为化合物3的质谱图；
[0010]图4为化合物3的质谱图。
【具体实施方式】
[0011]以下通过【具体实施方式】对本发明作进一步的说明和佐证；
[0012]实施例一
[0013]称取砂狗娃花头状花絮粉末100.00g，加入2000ml纯甲醇溶液，超声30min取出，
放冷，补足减失重量，0.45微米滤膜过滤，将过滤液蒸干至稠膏，再用60 %的甲醇稀释，高速离心，取上清液，供试验用。
[0014](2)色谱条件:HypersiI ODS 10 μ m 20mm 50mm 色谱柱，检测波长200nm,流动相:甲醇-水，流动相梯度洗脱程序见表1 ;
[0015]表1流动相梯度洗脱程序
[0016]Table2Gradient elution process of flow phase
[0017]
时间/min 体积流量/( mL.min-1) 甲醇/%水/%
O153565
5153565
10154060
53156337
57153565
[0018](3)质谱条件:LCQ.Advantage.Max型的液-质联仪,质量范围:50~2000,流速5μ Ι/min,电压:4kv，毛细管温度:250°C，碰撞气:He.[0019]2.分离化学成分:在上述色谱条件下进行分离砂狗娃花的化学成分。得到的化学成分进行鉴定。
[0020]3.鉴定:本次发明使用了质谱和核磁共振仪鉴定了化学成分。
[0021](I)化合物1:黄色粉末，如图1所示，一级质谱的分子离子峰为m/z269.17 [M-H]-，推测分子质量M = 270，其二级质谱的 225.11，151.07，149.04,117.18 分子离子峰以及 IH-NMR (500MHz，DMS0): δ H = 12.97ppm(50H)，δ H = 10.83ppm(70H)，δ H =10.34ppm(4，-OH)表明苯环上的三个 _0H 基，IH NMR(500MHz, DMS0)，δ (ppm) -J.619 (2H,d, J = 8.5Hz, H2’，6’ ) ,6.835 (2H, d, J = 8.5Hz, H3’，5’ ) ,6.806 (1H, s’ H3) ,6.332 (1H, s’H-8)，6.115 (1H，s, H6)。通过查对文献此化合物为芹菜素。[0022](2)化合物2:黄色结晶(甲醇)，如图2所示，一级质谱的分子离子峰为m/z609.18%-!1]-，推测分子质量皿=610，主要碎片峰463.12，301.15，其二级质谱的179.02分子离子峰以及 IH-NMR(500MHz，DMS0): δ (ppm):7.532 (1H, d, J = 8.7Hz)，7.532 (IH, s’J = 2.0Hz,H6’ ),6.745(IH，d，J = 8Hz，H5，)是代表 ABX 偶合系统，是 B 环的 6’，5’ 和 2’位的 H 的信号，6.417 (IH, d, J = 2.0Hz, H8), 6.107 (1H, d, J = 2.0Hz, H6)，5.370 (IH, d, J=7.4Hz,glueosylHl),4.378(IH, d, J = 2Hz, Rha HI)，1.018(3H, d, J = 6Hz，Rha60CH3)。通过查对文献此化合物为芦丁。
[0023](3)化合物3:黄色粉末，如图3、图4所示，一级质谱的分子离子峰为m/z301.17MH，303.35M+H+，推测分子质量 M = 302，主要碎片峰 M-H:179.00，151.02，M H+:285.32，275.30,257.26,247.250 IH-NMR(500MHz, DMSO): δ (ppm):7.19 (1H，d，J = 2.0Hz，H2’)，
7.612 (1H，dd, J = 2.0,8.4Hz, H_6’ ) ,6.835 (IH, d, J = 8.4Hz, H5’ ) ,6.332 (IH, d, J =1.8Hz，H8)，6.115(lH，d，J= 1.8Hz，H6)。通过查对文献此化合物为槲皮素。
[0024]实施例二 [0025]步骤一:将紫菀花细粉、紫菀花浸膏、紫菀花乙醇浸膏溶于0.5%的羧甲基纤维素钠中，成浓度为30.825mg/ml的溶液；
[0026]步骤二:取大鼠皮下注射安琪干酵母混悬液所致的发热模型作为实验对象，将步骤一所得溶液对发热模型进行注射，测肛温观察紫菀花头的解热作用；
[0027]步骤三:用毛细玻璃管法测凝血时间、断尾法测出血时间观察紫菀花的止血作用。
[0028]结果:①各处理组的动物体温给药后2小时开始降低，其数据与模型组比较有显著差异(P <0.05)。②测定出血时间的实验数据与空白对照组比较有显著差异(P< 0.05)。
[0029]实施例三
[0030]步骤一:将紫菀花根及花粉碎，过三号筛子，各称取200g于2000ml烧杯中，加蒸馏水1500ml，浸泡12小时，温火煮6小时，4层纱布过滤，滤渣加500ml蒸馏水煮2小时，挤干滤渣，过滤，合并两次滤液，减压压缩至200ml，加750ml95%乙醇，冰箱放置24小时，沉淀蛋白质，取上清液减压浓缩至100ml，上清液再加500ml95%乙醇，冰箱放置24小时，再减压抽滤，滤液浓缩至无乙醇味，蒸馏水定容至100ml，得紫菀花头水提取液；
[0031]步骤二:给小鼠灌喂步骤一所得紫菀花头水提取液，测定其半数致死量LD5tl ；
[0032]结果:紫菀花头水提取物对小鼠半数致死量为2717mg/Kg(相当于临床用量的1236 倍)，95% 的可信区间为 1382-4052mg/Kg。
[0033]实施例四
[0034]步骤一:制备水提取物:将紫菀花跟及花粉碎，过三号筛子，各称取200g于2000ml烧杯中，加蒸馏水1500ml，浸泡12小时，温火煮6小时，4层纱布过滤，滤渣加500ml蒸馏水煮2小时，挤干滤渣，过滤，合并两次滤液，减压压缩至200ml，加750ml95%乙醇，冰箱放置24小时，沉淀蛋白质。取上清液减压浓缩至100ml，上清液再加500ml95%乙醇，冰箱放置24小时,再减压抽滤,滤液浓缩至无乙醇味,蒸懼水定容至100ml,供试验用。
[0035]步骤二:制备甲醇提取:精密称取紫菀花根及花粉末1.00g，置具赛锥形瓶中，精密加入20ml80%甲醇溶液，超声30min取出，放冷，补足减失重量，离心，取上清液10ml，蒸干，加入适量80%甲醇溶解，转移至5ml量瓶，用80%甲醇稀释至刻度，0.45微米滤膜过滤。供试验用。
[0036]步骤三:制备乙醇提取液:精密称取紫菀花根及花各100.00g，用24倍量的95%的乙醇回流提取一次一小时，供试验用。
[0037]步骤四:动物模型制备及分组:实验室条件下驯养大鼠I周，每日10:00开始用电子体温计测大鼠肛内温度2次，连续7d，既可了解:大鼠体温恒定与否，又能使大鼠适应测定肛内温度这一操作。实验日10:00开始每小时测体温I次，连续2次，选取2次体温平均值作为大鼠基础体温(温差> 0.3°C者剔除)。将大鼠随机分为空白对照组(以下简称正常对照组)、模型组、给药组。正常对照组不做处理，其余以10%的鲜酵母悬液(2.4g/kg)背部皮下注射诱导体温升高，3.5h后测体温，选取体温升高I°C以上者，随机分为酵母对照组，酵母+原药组，酵母+水提取组，酵母+乙醇提取组共五个组。每组6只大鼠
[0038]步骤五:动物给药:正式实验前6h开始禁食不禁水，实验开始时，按照人与大鼠药物换算法计算给药量。灌胃给药。于造模后4h开始，正常组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃。给药组分别为10g/kg灌胃(即2mL/只)。Ih后重复给药I次，剂量同前。③观察和测定项目:a.各组体温比较:第一次给药后3h测体温，计算体温升高差值(药后3h体温值-造模3.5h体温值)。继而将动物快速断头取脑(Imin内)，干冰速冻，干冰速冻，于-20°C冰箱保存，备作下丘脑环磷酸腺苷(cAMP)和前列腺素E2(PGE2)含量的测定。b.测定下丘脑前列腺素E2 (PGE2)和环磷酸腺苷(cAMP)的含量:利用酶联免疫吸附测定法测定前列腺素E2 (PGE2)和环磷酸腺苷(cAMP)的含量。取冷冻脑组织，剥离下丘脑(以灰结节及视交叉的中心点确定下丘脑)，称取60mg左右下丘脑组织，切取其中一半30mg下丘脑组织按PGE2试剂盒说明书操作测定PGE2含量，测得cpm值根据标准曲线可算出每mg湿组织含PGE2的量，用ng/mg表示。取另一半30mg冷冻下丘脑组织以5%的三氯醋酸ImL制备匀衆,3000r/min离心lOmin，取上清加5倍体积水饱和乙醚洗3次以除去三氯醋酸，水相在75°C水浴上蒸干，干渣重溶于TE缓冲液(50mmoL/lTris，含DETA4mmoL/l，PH7.5)，取40 μ I上清液按cAMP试剂盒说明书操作测定cAMP。测得cpm值根据标准曲线可算出每mg湿组织含cAMP的含量。用PmoL/mg表示。
[0039]结果:紫菀花头通过降低下丘脑组织中PGE2的含量，起到了清热作用。与cAMP的含量无明显关系。
[0040]综上所述，根据植物亲缘关系相近，药理作用相似的规律，砂狗娃花头状花絮的头装花絮具有明显的解热作用，而它的化学成分的研究中得到的槲皮素，芹菜素以及芦丁等查文献得知具有杀菌，止疼等药理作用。
[0041] 以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.砂狗娃花头状花絮的应用，`其特征在于:砂狗娃花头状花絮在解热方面的应用。
【文档编号】A61P29/00GK103720735SQ201310698629
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年12月10日 优先权日:2013年12月10日
【发明者】松林, 美丽, 乌云罕, 水峰 申请人:内蒙古医科大学