金刚藤提取物及其制备方法
【专利摘要】本发明提供了金刚藤提取物的制备方法，它包括如下操作步骤：取金刚藤，加水煎煮，合并水煎液，去除沉淀，上清液减压浓缩至70℃测得的相对密度为1.10～1.15，喷雾干燥，即得金刚藤提取物。本发明还提供了基于上述提取物的金刚藤软胶囊。本发明意外地发现，采用特定的水提、除杂工艺制备的提取物，在治疗慢性盆腔炎时效果明显优于采用水提醇沉制备的产品，其对各项指标，如大鼠血液流变、血浆炎症指标TNF-α、IL-2、血浆免疫指标IgA、IgG和IgM的含量等的改善明显优于市售金刚藤口服液、市售金刚藤软胶囊，为临床用药提供了新的选择。
【专利说明】金刚藤提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及金刚藤提取物及其制备方法。
【背景技术】
[0002]随着人们生活节奏的加快，经济水平的提高，人们对生活质量的要求也越来越高。某些慢性疾病不会直接导致生命危险，但由于病情长时间的缠绵不愈、反复发作，也会给人们的生活带来不便和不适，慢性盆腔炎就是这类疾病之一，慢性盆腔炎(chronic pelvicinflammatory disease,CPID)是指女性生殖器官、周围结缔组织及盆腔腹膜所发生的慢性炎症，是育龄期妇女最常见的生殖器宫炎症之一，具有病程长、病情复杂、复发率高等特点。慢性盆腔炎会导致不孕、宫外孕、异位妊娠、其它妇科炎症，并影响家庭生活。[0003]盆腔炎在我国已婚妇女中属常见病，多发病。据调查:在我国育龄女性中，约41%的女性患有不同程度的妇科炎性疾病，已婚女性发病率高达70%。目前，慢性盆腔炎发病率呈上升趋势。在治疗慢性盆腔炎的临床用药中，金刚藤无论使用药材或者成药临床疗效都得到了肯定。因此，开展金刚藤相关研究就具有重要的意义。
[0004]金刚藤为百合科植物菝葜(smilax china L.)的干燥的根茎。又名铁菱角(《本草纲目》)、金刚刺、假萆解，广泛分布于长江以南丘陵地区，药用部位为根茎，茎、叶亦可入药，现常用根茎。为我国传统中药，始载于《名医别录》。其味甘，酸，性平；归肝，肾经，具有消炎止痛，活血化瘀的功效。临床用于慢性盆腔炎、附件炎及妇科多种炎症等病症。金刚藤系列制剂临床用于盆腔炎、附件炎效果显著总有效率可达85.7~98.5%。
[0005]金刚藤常用剂型为糖浆，原方采用糖浆剂给药，但服用不便，保存时间不长，不利于贮存及临床长期应用，又因其添加大量糖类辅料，不适合糖尿病人的服用，因此，若将其制成更符合现代用药需要的剂型将会扩大本品的适用范围。现有制剂的药材提取工艺均为水提醇沉，该法可以除去提取物中的部分成分，降低浸膏得率，从而减小服用量。虽然，中药材采用水提醇沉处理后所除去的成分不一定都是无效杂质，但是，仇萍等研究发现，金刚藤水提醇沉后药效活性较水提物更好(仇萍，等，菝葜不同工艺提取物对慢性盆腔炎大鼠的治疗作用，中草药，2010年41卷12期)，这一结果表明，金刚藤药材水提液中确实含有影响其药效活性的杂质成分，水提醇沉后，可有效除去此类杂质，从而提高治疗活性，这也证明了对金刚藤药材采用水提醇沉工艺的合理性。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种无需醇沉的金刚藤提取物制备方法，该方法不仅同样能够降低出膏率，减小制剂服用量，同时，该方法所得提取物药效活性更是优于金刚藤的水提醇沉类产品。本发明的另一目的在于提供一种更符合现代用药需要的金刚藤软胶囊。
[0007]本发明提供了金刚藤提取物的制备方法，它包括如下操作步骤:
[0008]取金刚藤，加水煎煮，合并水煎液，去除沉淀，上清液减压浓缩至70°C测得的相对密度为1.10~1.15，喷雾干燥，即得金刚藤提取物。[0009]其中，加水煎煮的具体操作如下:取金刚藤，加10倍重量的水，煎煮2次，每次2小时。
[0010]其中，去除沉淀的具体操作如下:取水煎液，减压浓缩至浓度为Ig原药材/2ml时，以5000~8000转/分钟的转速离心。
[0011]进一步地，离心时间为15分钟以上。
[0012]其中，减压浓缩的条件为:浓缩温度80°C、真空度-0.08~-0.1Mpa0
[0013]其中，喷雾干燥的条件为:进风温度为180~200°C、出风温度为90~100°C。
[0014]本发明还提供了上述制备方法得到的金刚藤提取物。
[0015]本发明还提供了一种金刚藤软胶囊，它是由如下重量配比的原辅料制备而成的制剂:
[0016]上述的金刚藤提取物0.5-3份、油相基质0.1-0.6份；
[0017]其中，油相基质选自植物油、有机酸或醇类溶剂；优选使用植物油。
[0018]进一步地，所述植物油为大豆油。
[0019]进一步地，它是由如下重量配比的原辅料制备而成的制剂:
[0020]上述的金刚藤提取物1份、油相基质0.2-0.3份。
[0021]进一步地，所述软胶囊中，每粒胶囊中含有薯蓣皂苷元1.2-1.4mg，含有总黄酮26-27mg0`
[0022]本发明金刚藤软胶囊的制备方法可以采用常规的中药软胶囊制备技术(可参见《中药药剂学》，1997年第I版，范碧亭主编，第355~358页)，本发明也提供了上述金刚藤软胶囊的一种制备方法，它包括如下操作步骤:
[0023]( I)按重量配比称取原辅料；
[0024](2)取金刚藤提取物，加入油相基质，混匀后，研磨，制备软胶囊即可。
[0025]进一步地,步骤(2)中,研磨时间在40分钟以上。
[0026]用研磨后的胶囊内填充物制备软胶囊时，可以采用本领域的常规方法，如压制法、滴制法等。
[0027]本发明意外地发现，采用特定的水提、除杂工艺制备的提取物，在治疗慢性盆腔炎时效果明显优于采用水提醇沉制备的产品，其对各项指标，如大鼠血液流变、血浆炎症指标TNF-a、IL-2、血浆免疫指标IgA、IgG和IgM的含量等的改善明显优于市售金刚藤口服液、市售金刚藤软胶囊。这就表明，虽然现有制备工艺中采用水提醇沉可去除提取物中影响药效活性的杂质成分，但仍然无法避免有效成分的损失；而本发明制备方法，采用特定的提取、除杂工艺，不仅具有去除杂质成分的作用，同时又避免了醇沉过程导致的有效成分或有效部位的损失，进而提高了提取物或制剂的疗效。
【专利附图】
【附图说明】
[0028]图1薯蓣皂苷元对照品色谱图
[0029]图2样品溶液色谱图
【具体实施方式】
[0030]实施例1金刚藤提取物的制备[0031](I)取菝葜10000g，加10倍量水，煎煮二次，每次2小时，合并煎液；
[0032](2)取水煎液，减压浓缩至浓度为Ig原药材/2ml时，以8000转/分钟的转速离心15分钟，上清液在80°C、真空度-0.08~-0.1Mpa下浓缩至相对密度为1.10~
1.15 (70°C )，喷雾干燥得干浸膏粉，即得金刚藤提取物。
[0033]喷雾干燥的条件为:进风温度为170~190°C、出风温度为85~95°C。
[0034]实施例2金刚藤软胶囊的制备
[0035]取实施例1制备的金刚藤提取物100g，加入20g大豆油，混匀，研磨40分钟，以此作为胶囊内填充物，制备成软胶囊，即得。
[0036]本发明中，软胶囊的制备采用压制法和滴制法均可。
[0037]实施例3金刚藤提取物制备工艺研究
[0038]本实施例中，各实验指标的测定方法如下:
[0039]( I)薯蓣皂苷元的含量测定
[0040]薯蓣皂苷元的含量测定:采用HPLC法。
[0041]HPLC色谱条 件
[0042]色谱柱:KromasiI C18(5ym, 150X4.6mm);流动相:乙腈-水(90: 10);检测波长:203nm;流速:1.0ml/min;柱温:35°C ;进样量:10 μ I。
[0043]对照品溶液的配制
[0044]精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，用甲醇溶解，配制成0.lmg/ml的溶液，即得。
[0045]供试品溶液的配制
[0046]取金刚藤提取液适量，水浴挥干溶剂，适量乙醇溶解，转移置50ml容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，取续滤液25ml，加盐酸4ml，90°C水浴I小时，取出，放冷，用石油醚(60~900C )振摇提取4次，每次20ml，合并石油醚提取液，蒸干，残渣加乙腈溶解并转移至5ml容量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，即得。
[0047]线性范围考察:取薯蓣皂苷元对照品适量，精密称定，加乙腈制成浓度分别为:20.2、40.4、80.8、161.6、333.2、666.4μg/ml 的对照品溶液，进样 10 μ I,用上述色谱条件测定。以进样量XOg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线:Υ=309751Χ-11124.3 (r=0.999，n=6)。结果表明，薯蓣皂苷元在进样量0.20~6.66 μ g范围内的线性关系良好。
[0048]专属性考察:取对照品、供试品样品溶液各10 μ 1，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，参见图1、2。
[0049]从以上图谱可以看出，样品溶液在选定的高效液相色谱条件下分离情况良好。
[0050]正交含量测定:按上述方法制备正交项下各供试品溶液，采用上述色谱方法测定含量。
[0051]薯蓣皂苷元含量=测得薯蓣皂苷元的量(mg)/正交试验中用药材的量(mg) X100%
[0052]薯蓣皂苷元转移率=薯蓣皂苷元含量/药材薯蓣皂苷元含量X 100%
[0053](2)金刚藤总黄酮含量测定方法的建立
[0054]测定波长的选择
[0055]分别取空白样品溶液、对照品溶液、供试品溶液进行全波长扫描，确定测定波长。
[0056]对照品溶液、供试品溶液均在500nm处有较大吸收，而空白在此位置上没有干扰，选500nm为测定波长。
[0057]对照品溶液配制
[0058]精密称取12.60mg芦丁对照品，用乙醇定容至25ml容量瓶中，完全溶解后，取IOml加水定容至25ml容量瓶中，摇匀，即得对照品溶液(0.202mg/ml)。供试品溶液配制
[0059]取金刚藤提取液2ml (药液浓度0.5g生药/ml)，水浴挥干溶剂，加乙醇约50ml超声溶解，转移置100mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度，摇匀，即得。线性关系考察
[0060]精密吸取对照品溶lml、2mL、3mL、4mL、5mL、6ml，分别编号为1、2、3、4、5、6，分别置于25mL量瓶中，加水至6mL，加5%的亚硝酸钠溶液lmL，摇匀，放置6分钟后加10%的硝酸铝溶液lmL，摇匀，放置6分钟后再加入氢氧化钠试液10mL，加水至刻度，摇匀，放置30分钟后，于500nm处测定吸光度。以对照品浓度(C)为横坐标，吸收度(A)为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。回归方程为y=12.312x-0.0094，(r=0.9999)。结果表明，黄酮显色后在0.008~0.049mg/ml范围内，吸收值与浓度成线性相关。
[0061]正交含量测定:按上述方法制备正交项下各供试品溶液，采用上述方法测定含量。
[0062]总黄酮含量=测得总黄酮的量(mg)/正交试验中用药材的量(mg) X 100%
[0063]总黄酮转移率=总黄酮含量/药材总黄酮含量X 100%
[0064]I药材鉴定与前处理
[0065]本实验所用药材符合国家食品药品监督管理局国家药品标准YBZ06572006-2009Z。
[0066]2提取工艺研究
[0067]依据本实验工艺设计，对金刚藤药材进行水提。
[0068]2.1金刚藤药材的吸水率考察
[0069]按处方称取金刚藤药材3组，每组60g，加入10倍量水，浸泡至透心，滤去多余的水，将浸泡后的药材称重，计算药材的吸水率，结果见表1。
[0070]表1金刚藤药材的吸水率结果
【权利要求】
1.金刚藤提取物的制备方法，其特征在于:它包括如下操作步骤: 取金刚藤，加水煎煮，合并水煎液，去除沉淀，上清液减压浓缩至70°c测得的相对密度为1.10~1.15，喷雾干燥，即得金刚藤提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:加水煎煮的具体操作如下:取金刚藤，加10倍重量的水，煎煮2次，每次2小时。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:去除沉淀的具体操作如下:取水煎液，减压浓缩至浓度为Ig原药材/2ml时，以5000~8000转/分钟的转速离心；优选地，离心时间为15分钟以上。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:减压浓缩的条件为:浓缩温度80°C、真空度-0.08 ~-0.1Mpa0
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:喷雾干燥的条件为:进风温度为180~200°C、出风温度为90~100°C。
6.权利要求1-5任意一项所述制备方法得到的金刚藤提取物。
7.一种金刚藤软胶囊，其特征在于:它是由如下重量配比的原辅料制备而成的制剂: 权利要求6所述的金刚藤提取物0.5-3份、油相基质0.1-0.6份； 其中，油相基质选自植物油、有机酸或醇类溶剂。
8.根据权利要求7所述的金刚藤软胶囊，其特征在于:它是由如下重量配比的原辅料制备而成的制剂: 权利要求6所述的金刚藤提取物1份、油相基质0.2-0.3份。
9.根据权利要求7所述的金刚藤软胶囊，其特征在于:所述软胶囊中，每粒胶囊中含有薯蓣皂苷元1.2-1.4mg，含有总黄酮26-27mg。
10.权利要求7~9任意一项所述金刚藤软胶囊的制备方法，其特征在于:它包括如下操作步骤: (1)按重量配比称取原辅料； (2)取金刚藤提取物，加入油相基质，混匀后，研磨，制备软胶囊即可。
【文档编号】A61P29/00GK103877448SQ201310698541
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2013年12月18日 优先权日:2012年12月19日
【发明者】谭周菊 申请人:成都立力医药科技有限公司