专利名称：纤细薯蓣皂苷的用途以及含有纤细薯蓣皂苷的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及菝葜活性成分纤细薯蓣皂苷的用途，以及含有纤细薯蓣皂苷的药物组合物。
背景技术：
菝葜，是百合科植物菝葜Smilax chinaL.的根莖,在我国主要分布于长江以南地区，资源丰富。《中国药典》2005年版I部有收载，为较常用中药材，具有祛风利湿，解毒散瘀之功效，主要用于妇科多种炎症，疗效显著。中药制剂“金刚藤胶囊”，临床用于治疗妇科炎症疾患，疗效显著。但该中药制剂为传统生产工艺制备，其抗炎物质基础尚不清楚。有研究通过比较菝葜总皂苷和总黄酮的血液流变学结果和大鼠子宫炎症评价，证明菝葜中的皂苷类成分是菝葜治疗慢性盆腔炎的有效部位之一；而黄酮类成分的治疗效果并不显著。随着对菝葜研究的深入，越来越多的研究致力于将菝葜的有效活性部位或活性成分进行提取、 分离、纯化，减少无效杂质，以期达到提高生物利用度和药效的目的。但是，菝葜的确切有效部位或有效成分至今仍未有定论。
发明内容
本发明的目的是分离纯化菝葜的有效成分、验证其活性，并制备含有其有效成分的药物组合物。本发明还涉及其有效成分的分离纯化方法。本发明的一个方面涉及纤细薯蓣皂苷用于制备预防和/或治疗急性或慢性炎症或者镇痛的药物的用途。在本发明中，所述炎症可以为变质性炎、渗出性炎或增生性炎。在本发明的一个实施方案中，所述炎症为急性炎症。在本发明的一个实施方案中，所述炎症为慢性炎症。在本发明的一个实施方案中，所述炎症为妇科炎症，例如为盆腔炎、附件炎或附件炎性包块。在本发明的一个实施方案中，所述妇科炎症为盆腔炎，例如为慢性盆腔炎。本发明的第二方面涉及纤细薯蓣皂苷作为菝葜有效活性成分的用途。在本发明中，所述有效成分是指具有一定生物活性，具有治疗作用，可以用分子式和结构式表示，并具有一定物理常数(如熔点，沸点，旋光度，溶解度等)的单体化合物。本发明的第三方面涉及一种药物组合物，其包括治疗有效量的纤细薯蓣皂苷，任选地，以及一种或多种药用辅料。在本发明中，所述药用辅料包括但不限于粘附剂、分散剂或表面活性剂等。在本发明中，纤细薯蓣皂苷可以作为单一有效成分做成制剂，也可以与其他药用或非药用成分配合使用。将纤细薯蓣皂苷利用粘附剂、润湿剂和分散剂等合适的药剂学辅料使其在体液中可以高效的润湿、分散，从而得到纤细薯蓣皂苷的制剂等技术均在本发明申请保护的范围内。在实际应用中，还可以根据需要加入其他常规辅料及成型剂，比如淀粉、糊精、预胶化淀粉、微晶纤维素、羟丙基纤维素、壳聚糖、卡波姆、羧甲基纤维素钠、聚维酮、聚乙二醇、交联聚维酮、微粉硅胶、枸橼酸、甘露醇等。在本发明中，粘附剂优选淀粉浆、聚维酮和干淀粉，对于不溶于体液的药物不仅具有良好的粘附作用而且聚维酮不仅溶于水而且易溶于乙醇，易于纤细薯蓣皂苷的溶出。表面活性剂可以使用壳聚糖、泊洛沙姆和卵磷脂，因其对纤细薯蓣皂苷有表面润湿作用，降低表面张力，可以增加脂溶性成分纤细薯蓣皂苷的溶解度，促进其分散吸收，利于纤细薯蓣皂苷更好的发挥药效。微晶纤维素、微粉硅胶、聚乙二醇等作为分散剂，本身具有亲水性，利于纤细薯蓣皂苷的润湿、分散，可以增强药物的稳定性。将本发明的纤细薯蓣皂苷与上述辅料配合使用，充分混合均匀，制成的片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂，可以增强纤细薯蓣皂苷的分散性，润湿性，提高其生物利用度。在本发明的药物组合物中，纤细薯蓣皂苷的含量大于等于60% (重量百分比)。在本发明的实施方案中，所述的药物组合物的组成为(重量份)
纤细薯蓣皂苷 60-80重量份泊洛沙姆5-10重量份
聚维酮2.5-5重量份
卵鱗脂2.5-5重量份
微晶纤维素S-IO重量份
10%淀粉浆5-10重量份。本发明的第四方面涉及纤细薯蓣皂苷的制备方法，其包括以下步骤(I)菝葜生药以60% 80%乙醇提取I 3次，收集提取液；(2)步骤(I)得到的提取液合并后上聚酰胺柱，流速约3 8BVh，以水洗柱，并收集水洗液；(3)将步骤(2)的水洗液调pH值至4 5，加氯化钠至l_2mol/L，上非极性大孔吸附树脂柱(例如D101)，水洗至洗出液为中性；以60% 80%乙醇，流速约3 8BVh冲洗，收集洗脱液，回收后得总皂苷；(4)将步骤(3)得到的总皂苷进行硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇-水梯度洗脱，分份收集，得到纤细薯蓣皂苷。发明的有益效果本发明分离纯化得到菝葜的有效成分纤细薯蓣皂苷，并制得以纤细薯蓣皂苷为活性成分并包括其它药用辅料的组合物，用实验证明其治疗妇科炎症效果确切，是菝葜的有效成分之一。由于纤细薯蓣皂苷的脂溶性较强，难溶于水，因而将其制剂应用于人体后，主要药效成分纤细薯蓣皂苷不易被润湿和溶出，如果不能解决这一问题，会影响纤细薯蓣皂苷的吸收。根据纤细薯蓣皂苷的这一特点，本发明将药剂学辅料的应用考虑到其中。通过添加粘附剂、润湿剂、分散剂、表面活性剂等辅料，增强了纤细薯蓣皂苷的分散性，润湿性，提高了其生物利用度。菝葜具有软化组织，减轻粘连及包块，利尿，解毒等药理作用，临床上多用于治疗外科急性感染、妇科炎症、治疗风湿性关节炎等疾病，本发明证明纤细薯蓣皂苷是菝葜的有效活性部位，为纤细薯蓣皂苷用于治疗上述疾病提供了依据，具有良好的应用前景。
具体实施例方式下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例I纤细薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的制备菝葜生药Ikg以75%乙醇水浴回流2h，收集醇提液。经3次醇提后，合并醇提液。回收乙醇后上聚酰胺柱(30 60目)，流速约5BV(聚酰胺的体积)h。以蒸馏水洗柱，并收集水洗液。然后以95%乙醇，流速约2. 5BVh。冲洗聚酰胺柱，收集洗脱液。将上述收集的水洗液用NaHC03调pH值至4 5，加氯化钠至1.5mol / L，上大孔树脂柱(D101，天津农 药股份有限公司树脂分公司，批号20020407)，水洗至洗出液至中性。以75%乙醇，流速约2. 5BVh。冲洗，收集洗脱液，经旋转蒸发仪回收乙醇得总皂苷。取总皂苷进行硅胶柱(青岛海洋化工厂生产)色谱，氯仿一甲醇一水梯度(50:1:0. I —5:1:0. I —5:1:0. I —60:35:10 —5:5:2)洗脱，分份收集，每份100ml，共160份分别合并93-94，98-99流份，减压回收溶剂，无水乙醇重结晶，得到无色结晶薯蓣皂苷390mg (93-94流份)，和纤细薯蓣皂苷504mg(98_99流份)。其中薯蓣皂苷的结构为薯蓣皂苷元一3 — O— {〔α — L 一吡喃鼠李糖基(1 — 2)〕a -L 一吡喃鼠李糖基(I — 4)} 一 β — D —吡喃葡萄糖苷；纤细薯蓣皂苷的化学结构为薯菌阜苷兀-3 — O — {〔 α — L 一卩比喃鼠李糖基(I — 3)〕一 β — D 一卩比喃葡萄糖基(I — 3)} — β — D —吡喃葡萄糖苷。将122-125流分经制备高效液相色谱分离(50%乙腈水溶液作流动相)，得化合物原薯蓣皂苷98mg。以上化合物经过红外光谱/液质联用鉴定。实施例2含有纤细薯蓣皂苷制剂的制备(I)取按照实施例I方法制备的纤细薯蓣皂苷80g，加入泊洛沙姆5g，聚维酮2. 5g，卵磷脂2. 5g，微晶纤维素5g。将以上成分充分混匀，加入粘合剂10%淀粉浆5g，然后制粒，干燥，整粒，共制备200片，包衣。实施例3含有纤细薯蓣皂苷制剂的制备(2)取按照实施例I方法制备的纤细薯蓣皂苷60g，加入泊洛沙姆10g，聚维酮5g，卵磷脂5g，微晶纤维素10g。将以上成分充分混匀，加入粘合剂10%淀粉浆10g，然后制粒，干燥，整粒，压200片，包衣。实施例4含有纤细薯蓣皂苷制剂的制备(3)取按照实施例I方法制备的纤细薯蓣皂苷90g，加入壳聚糖lg，卡波姆lg，泊洛沙姆lg，卵磷脂lg，聚维酮lg，将以上药材充分混合均匀，加入10%淀粉浆5g，然后制粒，干燥，整粒，最后分装成200粒胶囊。实施例5纤细薯蓣皂苷的药效学实验本试验中纤细薯蓣皂苷组的药物为实施例2中的制剂，由南方医院药学部实验室制备。模型的建立按向海燕在《金刚藤分散片对大鼠慢性盆腔炎的药效学研究》(“中药材” 2007年第4期)中的方法。以液化苯酚5mL，西黄耆胶1L，甘油4mL，加蒸馏水至20mL，配成25%的苯酹胶衆。大鼠按45mg / kg腹腔注射4%水合氯醒(300mg/kg)进行麻醉,腹部常规消毒，在下腹正中切口 3cm，暴露子宫，用4号针头在大鼠子宫右侧进针，向卵巢方向注入苯酚胶浆O. 05mL，诱发慢性盆腔炎模型，最后分层缝合腹壁及皮肤。目前，建立慢性盆腔炎模型的方法一般分为两种化学性烧伤致炎和生物性因子致炎。化学性烧伤致炎一般采用苯酚胶浆，生物性因子致炎一般采用大肠杆菌。本实验选择化学性烧伤致炎的造模方法。其原因之一是盆腔炎患者无论急性还是慢性，其血液均处于高凝状态。我们从预实验结果来看，以苯酚胶浆致炎，大鼠在全血粘度各项指标的改变均较大肠杆菌致炎的大鼠显著。原因之二是治疗慢性盆腔炎目前一般采用中西医结合或者物理化学结合的方法。这是因为盆腔慢性炎症导致组织增厚，疤痕粘连，阻碍了抗生素的进入，不能彻底消灭残余的致病菌，令病情反复，难以根治。菝葜的作用应该在于软化组织，减轻粘连及包块。因此，选择化学性烧伤致炎所致的大鼠盆腔水肿、粘连更适合用于筛选菝葜的有效部位。在炎症时血液处于高凝状态，因此血液粘度的改变可以作为评价盆腔炎的指标之一 O 实验方法按前述的模型建立方法进行造模7天后将48只模型大鼠按体重随机分为生理盐水组(即模型组)、金刚藤胶囊组(湖北福人药业股份有限公司)、总皂苷组、纤细薯蓣皂苷组、薯蓣皂苷组、原薯蓣皂苷组(其中总皂苷、薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷按照实施例I方法制备)，每组8只。分别以生理盐水、金刚藤胶囊混悬液(O. 54g / kg)、总皂苷、纤细薯蓣皂苷、薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷溶液(以上四种成分的使用剂量均为O. 065g / kg)灌胃，每天I次，连续14天。正常对照组(8只正常大鼠)给予等量生理盐水，其他条件与前面六组一致。第15天，腹主静脉取血，送南方医院检验科检测血粘度，处死大鼠取其子宫，除去脂肪，左右两侧子宫分别用分析天平称重。统计方法采用SPSS 13. O的单因素方差分析(One-WayANOVA)，以及配对t检验。两者检验水准均为O. 05。实验结果I.血液流变学结果在对各组样本进行方差齐性检验(Levene检验)后，发现各方差齐性。随后进行方差分析，发现各样本均数差异有统计学意义(P〈0.000)，遂应用LSD检验进行多重比较。模型组与正常对照组比较，全血高切、中切、低切均有差异(P〈0.001);金刚藤胶囊组作为阳性对照药，其全血粘度的各项指标较模型组均有显著差异(P〈0. 05)。模型组、正常对照组和阳性对照组，三者在全血粘度指标上的改变，说明了全血粘度作为指标能够客观、明显的反映出血液在不同生理条件下的改变，同时也说明了模型建立的可靠性。总皂苷组、纤细薯蓣皂苷组、薯蓣皂苷组和原薯蓣皂苷组的大鼠经过治疗，与模型组比较，血瘀状态得到显著改善，各项指标存在统计学差异(P〈0. 05)。多重比较结果显示，在全血中切(lOOmps / s)时，纤细薯蓣皂苷组和金刚藤胶囊组同正常对照组均无统计学差异(P>0. 05)，在全血中切(30mps / s)时，纤细薯蓣皂苷组同正常对照组无统计学差异(P>0. 05)。可见,在全血中切(30mps / s)时,纤细薯菌阜苷组疗效最明显,而全血中切(lOOmps / s)时，纤细薯蓣皂苷组和金刚藤胶囊组的疗效相同。除在全血高切情况下，总皂苷组与薯蓣皂苷组无统计学差异(P>0. 05)外，金刚藤胶囊组、总皂苷组、纤细薯蓣皂苷组、薯蓣皂苷组和原薯蓣皂苷组两两比较均存在统计学差异。其中，金刚藤胶囊组和纤细薯蓣皂苷组相比，所有血液流变状态下均存在统计学差异(P〈0. 05)，且所有全血粘度指标后者均小于前者，由此推断在改善血瘀状态效果上，后者优于前者；纤细薯蓣皂苷组和总皂苷组相比，所有血液流变状态下均存在统计学差异(P〈0. 05)，说明两者在改善血瘀状态上有差异，从全血粘度指标来看，纤细薯蓣皂苷组的效果整体优于皂苷组。薯蓣皂苷组、原薯蓣皂苷组分别和纤细薯蓣皂苷组相比，所有血液流变状态下均存在统计学差异(P〈0. 05)，且所有全血粘度指标纤细薯蓣皂苷组均小于薯蓣皂苷组(或原薯蓣皂苷组)，由此推断，在改善血瘀状态效果上，纤细薯蓣皂苷组效果优于前两组(P〈0. 05)(结果见表I)。表I试验药物对大鼠血粘度的影响
权利要求
1.纤细薯蓣皂苷用于制备预防和/或治疗急性或慢性炎症或者镇痛的药物的用途。
2.权利要求I的用途，其中所述的炎症为妇科炎症。
3.权利要求2的用途，其中所述的妇科炎症为盆腔炎、附件炎或附件炎性包块。
4.纤细薯蓣皂苷作为菝葜有效活性成分的用途。
5.药物组合物，其包括治疗有效量的纤细薯蓣皂苷，任选地，以及一种或多种药用辅料。
6.权利要求5的药物组合物，其中所述药用辅料包括分散剂、润湿剂、粘附剂和表面活性剂。
7.权利要求5或6的药物组合物,其中纤细薯菌阜苷的含量大于等于60%(重量百分比)。
8.纤细薯蓣皂苷的制备方法，其包括以下步骤 (1)菝葜生药以60% 80%乙醇提取I 3次，收集提取液； (2)步骤(I)得到的提取液合并后上聚酰胺柱，流速约3 8BVh，以水洗柱，并收集水洗液； (3)将步骤(2)的水洗液调pH值至4 5，加氯化钠至l-2mol/L，上非极性大孔吸附树脂柱(例如D101)，水洗至洗出液为中性；以60% 80%乙醇，流速约3 8BVh冲洗，收集洗脱液，回收后得总皂苷； (4)将步骤(3)得到的总皂苷进行硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇-水梯度洗脱，分份收集，得到纤细薯蓣皂苷。
全文摘要
本发明涉及纤细薯蓣皂苷的用途以及含有纤细薯蓣皂苷的药物组合物。所述用途包括纤细薯蓣皂苷用于制备预防和/或治疗急性或慢性炎症的用途，例如可用于治疗妇科炎症。本发明还涉及纤细薯蓣皂苷作为菝葜有效活性成分的用途。本发明还涉及纤细薯蓣皂苷的制备方法。
文档编号A61K31/7048GK102784157SQ20121015720
公开日2012年11月21日 申请日期2012年5月18日 优先权日2011年5月18日
发明者侯连兵, 李晓, 杨西晓, 王春霞, 马云, 黄嗣航 申请人:南方医科大学南方医院