一种白首乌总皂苷的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种白首乌总皂苷的制备方法，其处理步骤包括：（1）以白首乌为原料，干燥、粉碎过筛，生物酶酶解；（2）超声提取；（3）提取液超滤浓缩；（4）浓缩液再经大孔吸附树脂进一步纯化，浓缩干燥，即得白首乌总皂苷。本发明所得白首乌总皂苷具有得率高、生产过程简化、生产周期短、产品纯度高等特点，易于实现产业化放大。
【专利说明】一种白首乌总皂苷的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种白首乌总皂苷的制备方法，属于中草药有效成分提取分离领域。【背景技术】
[0002]白首乌主要来源为萝蘑科鹅绒藤属植物耳叶牛皮消的块根，是祖国医学中传统的补益药，具有养肝益血、固肾益精、强筋健骨的功效，并兼有健脾益气的功能，用于治疗失眠健忘、须发早白、筋骨不健、胸闷心痛以及消化不良等症。其主要活性成分白首乌总皂苷，具有多方面的药理功能。体外实验证明，白首乌提取液具有清除氧自由基的功能，且进一步的实验表明，清除自由基的活性成分主要是针对C21甾甙中的各种甾甙元。动物实验也证明，白首乌总皂苷对N-乙酰苯肼所致的溶血性贫血具有一定的保健作用；能降低血清胆固醇和心肌耗氧量，抑制心肌和肝脏的脂质过氧化；对体外培养的小鼠肿瘤和小鼠体内的移植肿瘤具有抑制作用。
[0003]目前，对白首乌总皂苷的研究主要集中在药理作用上，对其总皂苷的提取方法研究较少。皂苷提取常用的方法有:常规加热回流提取法、索氏提取法、渗漉提取法等。对提取白首乌总皂苷来讲，都有其局限性，如索氏提取就很难控制提取液溶剂浓度的改变；渗漏提取又无法控制提取温度的改变；而加热回流提取法虽可控制提取溶剂浓度，但只有经过2次或3次提取才能较完全的提出皂苷，需要较多的提取溶剂，且提取时间较长。
[0004]大孔吸附树脂是一种有机高聚吸附剂，具有选择性吸附有机化合物的能力，有吸附容量大、解吸容易、再生简便等特点，现已被广泛应用于天然产物的分离和富集。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种白首乌总皂苷的制备方法，该方法具有工艺简单、能耗低、生产周期短、得率高等特点。
[0006]本发明包括以下步骤:
(1)将白首乌干燥、粉碎，过20目筛，取粉末，加入到原料重量f2倍的pH为4.0-5.0的含有生物酶的醋酸/醋酸钠缓冲溶液中，于4(T50°C酶解2~3h ；
(2)将酶解后的物料置于超声装置中，加入原料重量3飞倍的质量分数为60-80%的乙醇溶液，在频率为40ΚΗζ、功率为250W的超声波作用下进行提取，提取温度7(T80°C，提取时间为6(Tl20min，离心，得到提取液；
(3)将提取液通过分子截留量值为3000-5000的超滤膜进行超滤，直至浓缩液的体积降至原来的1/5~1/3 ；
(4)浓缩液通过大孔吸附树脂柱吸附，先用2~3倍柱体积的水洗脱杂质，再改用3飞倍柱体积的50-70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，于60°C -70°C的条件下采用旋转蒸发仪减压回收乙醇并浓缩，真空干燥得到白首乌总皂苷提取物。
[0007]步骤(1)中所述的生物酶为原料质量广3%的质量比为2:1的纤维素酶与半纤维素酶。[0008]步骤(4)中所述的大孔树脂的型号为AB-8、D-10U NKA-9、H-103、DS-401中的任
意一种。
[0009]本发明的有益效果在于:(I)采用生物酶处理原料，能破坏植物的细胞壁，有利于有效成分的溶出，大大缩短处理时间，提高生产效率；(2)采用超声提取，利用超声的空化作用，加速白首乌总皂苷的溶出；(3)本发明操作方便，工艺简单，得率高，且生产安全可
O
[0010]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0011]实施例1:
将白首乌干燥、粉碎，过20目筛，取粉末1kg，加入到Ikg的pH为4.0的含有生物酶(质量比为2:1的纤维素酶与半纤维素酶)的醋酸/醋酸钠缓冲溶液中，于40°C酶解2h ;将酶解后的物料置于超声装置中，加入3kg的质量分数为60%的乙醇溶液，在频率为40KHz、功率为250W的超声波作用下进行提取，提取温度70°C，提取时间为60min，离心，得到提取液；将提取液通过分子截留量值为3000的超滤膜进行超滤，直至浓缩液的体积降至原来的1/3 ；浓缩液通过AB-8大孔吸附树脂柱吸附，先用2倍柱体积的水洗脱杂质，再改用3倍柱体积的50%的乙醇洗脱，收 集洗脱液，于70°C的条件下采用旋转蒸发仪减压回收乙醇并浓缩，真空干燥得到白首乌总皂苷提取物23.8g，经紫外分光光度计(UV)检测，其总皂苷的含量为75.6%。
[0012]实施例2:
将白首乌干燥、粉碎，过20目筛，取粉末5kg，加入到IOkg的pH为4.5的含有生物酶(质量比为2:1的纤维素酶与半纤维素酶)的醋酸/醋酸钠缓冲溶液中，于50°C酶解3h ;将酶解后的物料置于超声装置中，加入25kg的质量分数为70%的乙醇溶液，在频率为40KHz、功率为250W的超声波作用下进行提取，提取温度75°C，提取时间为90min，离心，得到提取液；将提取液通过分子截留量值为4000的超滤膜进行超滤，直至浓缩液的体积降至原来的1/5 ;浓缩液通过D-101大孔吸附树脂柱吸附，先用3倍柱体积的水洗脱杂质，再改用5倍柱体积的60%的乙醇洗脱，收集洗脱液，于60°C的条件下采用旋转蒸发仪减压回收乙醇并浓缩，真空干燥得到白首乌总皂苷提取物125.5g，经紫外分光光度计(UV)检测，其总皂苷的含量为77.2%。
[0013]实施例3:
将白首乌干燥、粉碎，过20目筛，取粉末5kg，加入到5kg的pH为5.0的含有生物酶(质量比为2:1的纤维素酶与半纤维素酶)的醋酸/醋酸钠缓冲溶液中，于45°C酶解2.5h ;将酶解后的物料置于超声装置中，加入20kg的质量分数为80%的乙醇溶液，在频率为40KHz、功率为250W的超声波作用下进行提取，提取温度80°C，提取时间为120min，离心，得到提取液；将提取液通过分子截留量值为5000的超滤膜进行超滤，直至浓缩液的体积降至原来的1/3 ;浓缩液通过DS-401大孔吸附树脂柱吸附，先用2倍柱体积的水洗脱杂质，再改用6倍柱体积的70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，于60°C的条件下采用旋转蒸发仪减压回收乙醇并浓缩，真空干燥得到白首乌总皂苷提取物120.4g，经紫外分光光度计(UV)检测，其总皂苷的含量为 71.5%。
【权利要求】
1.一种白首乌总皂苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将白首乌干燥、粉碎，过20目筛，取粉末，加入到原料重量f2倍的pH为4.0-5.0的含有生物酶的醋酸/醋酸钠缓冲溶液中，于4(T50°C酶解2~3h ； (2)将酶解后的物料置于超声装置中，加入原料重量3飞倍的质量分数为60-80%的乙醇溶液，在频率为40ΚΗζ、功率为250W的超声波作用下进行提取，提取温度为7(T80°C，提取时间为6(Tl20min，离心，得到提取液； (3)将提取液通过分子截留量值为3000-5000的超滤膜进行超滤，直至浓缩液的体积降至原来的1/5~1/3 ； (4)浓缩液通过大孔吸附树脂柱吸附，先用2~3倍柱体积的水洗脱杂质，再改用3飞倍柱体积的50-70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，于60°C _70°C的条件下采用旋转蒸发仪减压回收乙醇并浓缩，真空干燥得到白首乌总皂苷提取物。
2.根据权利要求1所述的一种白首乌总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的生物酶为原料质量广3%的质量比为2:1的纤维素酶与半纤维素酶。
3.根据权利要求1所述的一种白首乌总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述的大孔树脂的型号为AB-8、D-101、NKA-9、H-103、DS-401中的任意一种。
【文档编号】A61K125/00GK103961388SQ201410218042
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2014年5月22日 优先权日:2014年5月22日
【发明者】范笑平, 陈洪生, 陈程, 程星源 申请人:江苏博益生物科技有限公司