一种绞股蓝皂苷a的检测方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种绞股蓝皂苷A的检测方法，该方法包括以下步骤：（1）待测品溶液的制备：将绞股蓝待测品粉碎，称取0.3~0.5g，加入20~30ml甲醇溶解，称定质量，超声处理20~40min，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀、滤过，取续滤液，即为待测品溶液；（2）对照品溶液的制备：称取绞股蓝皂苷A对照品适量，加甲醇溶液，制成每1ml含有0.1~0.3mg绞股蓝皂苷A的溶液，即为对照品溶液；（3）测定含量：量取同样体积的1~15μl的待测品溶液和对照品溶液，分别在相同的色谱条件下采用HPLC-ELSD联用技术测定峰面积，对比计算待测品溶液中绞股蓝皂苷A的含量，然后计算得到绞股蓝待测品中绞股蓝皂苷A的含量。
【专利说明】一种绞股蓝皂苷A的检测方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种绞股蓝化学成分的检测方法，具体涉及一种绞股蓝皂苷A的检测方法及其应用。
【背景技术】
[0002]绞股蓝为葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentaphyIIum (Thunb.) Makino及长梗绞股蓝G.Longipes的全草，又名七叶胆、小苦药等，具有清热解毒、止咳祛痰、益气养阴、降低血脂、延缓衰老等作用，是中国药典中未收藏的品种。
[0003]绞股蓝的化学成分较为复杂，主要含皂苷类、黄酮类、多糖类、维生素、氨基酸等多种生理活性物质,其中的皂苷类是主要活性成分。
[0004]然而，目前鲜见对绞股蓝中药材或药物组合物制剂中单一成分的检测方法。例如，绞股蓝总苷片是一种由绞股蓝加工制成的片剂，具有养心健脾、益气活血、除痰化瘀、降血脂的功效，常用于高血脂症，见有心悸气短，胸闷肢麻，眩晕头痛，健忘耳鸣，自汗乏力或脘腹胀满等心脾气虚，痰阻血瘀者，有研究认为绞股蓝总苷片治疗高脂血症的疗效及安全性优于西药，是一种安全有效耐受性良好的调脂药物。虽然使用广泛，但现有的检测绞股蓝总苷片的标准仍为1994年的卫生部部颁标准，其含量测定项下采用紫外分光光度法，专属性不强，线性差，准确度不高，并且还用到了高氯酸等有强腐蚀性的毒性试剂，不利于对绞股蓝中药材或药物组合物及其制剂进行快速、有效、安全的测定，也不利于进行质量标准控制。
[0005]因此，目前还需要寻找一种更加安全、准确的绞股蓝成分测定方法。
【发明内容】
[0006]因此，本发明的目的在于弥补现有技术中对绞股蓝中药材或药物组合物或其制剂的检测方法的欠缺，提供了一种专属性强、准确度高、操作安全的绞股蓝皂苷A的检测方法，以及该检测方法在检测绞股蓝中药材或含有绞股蓝的药物组合物或其制剂中的应用，特别是在用于控制绞股蓝总苷片的质量中的应用。
[0007]发明人发现，目前对绞股蓝进行单一成分的检测方法较为少见。因此，发明人针对现行的卫生部部颁标准中的有关检测方法加以大幅改进，通过采用HPLC-ELSD联用技术对绞股蓝皂苷A进行定性定量检测，从而可用于检测绞股蓝中药材或药物组合物或其制剂，以及可特别适用于控制绞股蓝总皂苷片的质量。
[0008]本发明提供了一种绞股蓝皂苷A的检测方法，该方法包括以下步骤:
[0009](I)待测品溶液的制备:将绞股蓝待测品粉碎，称取0.3^0.5g，可优选为0.4g，加入2(T30ml甲醇溶解 ，称定质量，超声处理2(T40min，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀、滤过，取续滤液，即为待测品溶液；
[0010](2)对照品溶液的制备:称取绞股蓝皂苷A对照品适量，加甲醇溶液，制成每1ml含有0.1~0.3mg绞股蓝皂苷A的溶液，即为对照品溶液；[0011](3)测定含量:量取同样体积的f 15μ 1，可优选为10μ I的待测品溶液和对照品溶液，分别在相同的色谱条件下采用HPLC-ELSD联用技术测定峰面积，对比计算待测品溶液中绞股蓝皂苷A的含量，然后计算得到绞股蓝待测品中绞股蓝皂苷A的含量。
[0012]由于绞股蓝皂苷A的紫外吸收性较差，如仍按照现有的卫生部部颁标准进行检测，则干扰较大，结果准确度可能难以满足当前的药物质量控制需求，效果不甚理想。通过采用HPLC-ELSD联用，不仅克服了 UV检测不准确的问题，还大大提高了定量检测的准确度，同时可避免使用高氯酸等腐蚀性试剂。
[0013]所述绞股蓝待测品可以为绞股蓝中药材，或者含有绞股蓝的药物组合物或其制剂。作为优选，所述绞股蓝待测品为绞股蓝总苷片。
[0014]根据本发明的检测方法，其中，在步骤(1)中，将所述绞股蓝待测品粉碎后过60-80目筛，可以优选为过80目筛。
[0015]根据本发明的检测方法，其中，步骤(1)中，加入25ml的甲醇溶液。作为优选，所述甲醇为10-?00νΟ1%的甲醇溶液，可以更优选为60vol%的甲醇溶液。发明人发现，如果体积分数小于10%，提取效果较差，且需要花费更多的超声处理时间，同时还发现，当甲醇的体积分数为60%时，在超声处理相同时间的情况下，提取效果最好。
[0016]根据本发明的检测方法，其中，步骤(1)中，超声处理的时间可以为30min。作为优选，超声功率为5(Tl500W，更优选为600W。发明人发现，如果超声处理时间短于30min，则提取效果较差，而如果长于30min，提取效果的增加量不明显，同时又浪费了处理时间和成本，因而发明人可优选超声处理时间为30min，提取效果即可达到最佳的水平。
[0017]根据发明人的 上述意外发现可知，本发明的检测方法可以优选较低浓度的甲醇(如60vol%)和较短的超声处理时间(如30min)对待测品进行提取处理，这样不仅可获得最佳的提取效果，还能减少或避免由于高浓度的甲醇试剂及长时间的超声处理而导致的甲醇挥发量过多的问题，从而降低了甲醇对试验操作人员的毒性危害，即从整体上还提升了测定方法的安全度。
[0018]根据本发明的检测方法，其中，步骤(2)中，甲醇溶液为l(T100vol%的甲醇溶液，可以优选为60vol%的甲醇溶液。作为更优选，所述对照品溶液中每1ml含有0.2mg绞股蓝皂苷A。
[0019]根据本发明的检测方法，其中，步骤(3)中的色谱条件为:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱C18，流动相:水-乙腈，流速:lml/min，柱温:1(T40°C，优选为25°C，检测器:ELSD。
[0020]根据本发明的检测方法，其中，色谱柱为Dikma C18色谱柱，梯度洗脱条件为:0~10min，乙腈:水=30:70,10~40min，乙腈:水=30:70~40:60。作为优选，ELSD的漂移管温度可以为50°C,雾化气体流速可以为1.5ml/min。
[0021]本发明还提供了本发明的上述检测方法在用于检测绞股蓝中药材或含有绞股蓝的药物组合物或其制剂中的应用。
[0022]本发明另外还提供了的本发明的上述检测方法在用于控制绞股蓝总苷片的质量中的应用。
[0023]本发明的检测方法可以具有但不限于以下有益效果:
[0024]1.有关绞股蓝皂苷A的检测方法中，如根据现行的卫生部部颁标准，则需要用到高氯酸等强腐蚀性试剂，且采用UV检测的结果不够准确。而本发明的检测方法可以克服现有技术中的以上缺陷，仅需使用甲醇、乙腈等常用试剂，并且HPLC-ELSD联用技术排除了紫外检测器对绞股蓝皂苷A的干扰，从而检测结果更为准确。
[0025]2.进一步地，发明人通过精密度实验、稳定性实验和重复性实验等对本发明的检测方法进行了验证和评价，结果表明，本发明的检测方法对绞股蓝皂苷A的检测精密度好，所制得的待测品溶液较为稳定，并且重复性和回收率良好，对绞股蓝皂苷A的专属性较强。
[0026]3.另外，由于本发明的检测方法具有上述优势，例如准确、安全、专属性强等，适合作为绞股蓝皂苷A的检测方法进行推广应用，从而有助于改善对绞股蓝中药材或药物组合物及其制剂的检测，进而可提高对诸如绞股蓝总苷片的质量控制水平。
【具体实施方式】
[0027]下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
[0028]本部分对本发明试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。 本领域技术人员清楚，在上下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。
[0029]实施例1
[0030]本实施例用于说明本发明的绞股蓝皂苷A的检测方法。
[0031]1.实验材料
[0032]( I)仪器:
[0033]Dionex Ultimate3000 高效液相色谱系统(Dionex 公司)，Alltech3300ELSD(Alltech公司)，XffK-无油空气泵(天津市华生分析仪器厂)，Dikma C18(4.6mmX 250mm, 5 μ m)色谱柱(Dikma 公司)，Sartorius BT214D 型电子天平(Sartorius 公司)、CP225D型电子天平(Sartorius公司)。
[0034](2)试剂
[0035]绞股蓝待测品:绞股蓝总苷片，购自广州白云山和记黄埔中药有限公司，批号分别为 B2D00U HlDOOU FlDOOl ο
[0036]绞股蓝皂苷A对照品:绞股蓝皂苷A，购自成都曼斯特生物科技有限公司，纯度≥ 98%ο
[0037]乙腈(色谱纯)，甲醇(分析纯)，蒸馏水。
[0038]2.方法
[0039](I)色谱条件:
[0040]色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱C18
[0041]检测器:ELSD (蒸发光散射检测器)，漂移管温度50°C，雾化气体流速1.5ml/min
[0042]流动相冰-乙腈
[0043]柱温:10~40V，优选 25 °C。
[0044]流动相:0~IOmin乙腈:水=30:70,10~40min乙腈:水=30:70~40:60 (均为体积比)[0045]流速:lml/min。
[0046]3.待测品溶液的制备:
[0047]取绞股蓝待测品每个批号10片，除去薄膜衣，研细，过80目筛，取粉末约0.4g，精密称定，置于100mL三角瓶中，精密加入60vol%的甲醇25ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再次称定质量，用60vol%的甲醇补足减失的质量，摇匀、滤过，取续滤液，作为待测品溶液。
[0048]4.对照品溶液的制备:
[0049]精密称取绞股蓝A对照品适量，加入60vol%的甲醇溶解，制成每1ml含有0.2mg绞股蓝皂苷A的溶液。
[0050]5.测定含量:
[0051]量取同样体积的待测品溶液和对照品溶液(均为10 μ 1)，分别在相同的色谱条件下采用HPLC-ELSD联用技术进样分析，测定峰面积，对比计算待测品溶液中绞股蓝皂苷A的含量，然后据此计算得到绞股蓝待测品中绞股蓝皂苷A的含量。对三批绞股蓝待测品的测定结果见下表1。
[0052]表1绞股蓝待测品中绞股蓝皂苷A的含量测定结果
[0053]
【权利要求】
1.一种绞股蓝皂苷A的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤: (1)待测品溶液的制备:将绞股蓝待测品粉碎，称取0.3^0.5g，加入20~30ml甲醇溶解，称定质量，超声处理2(T40min，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀、滤过，取续滤液，即为待测品溶液； (2)对照品溶液的制备:称取绞股蓝皂苷A对照品适量，加甲醇溶液，制成每1ml含有0.1~0.3mg绞股蓝皂苷A的溶液，即为对照品溶液； (3)测定含量:量取同样体积的1~15μ I的待测品溶液和对照品溶液，分别在相同的色谱条件下采用HPLC-ELSD联用技术测定峰面积，对比计算待测品溶液中绞股蓝皂苷A的含量，然后计算得到绞股蓝待测品中绞股蓝皂苷A的含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤(1)中，将所述绞股蓝待测品粉碎后过60-80目筛,优选为过80目筛。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，加入25ml的甲醇溶液；优选地，所述甲醇为l0~100VOl%的甲醇溶液，更优选为60vol%的甲醇溶液。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，超声处理的时间为30min ;优选地，超声功率为50~l500W，更优选为600W。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，甲醇溶液为10-?00νθ1%的甲 苷A。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中的色谱条件为:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱C18，流动相:水-乙腈，流速:lml/min，柱温:10~40°C，检测器:ELSD。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，色谱柱为DikmaC18色谱柱，梯度洗脱条件为:0~1Omin,乙腈:水=30:70,10~40min,乙腈:水=30:70~40:60 ;优选地,ELSD的漂移管温度为50°C，雾化气体流速为1.5ml/min。
8.权利要求1至7中任一项所述的检测方法在用于检测绞股蓝中药材或含有绞股蓝的药物组合物或其制剂中的应用。
9.权利要求1至7中任一项所述的检测方法在用于控制绞股蓝总苷片的质量中的应用。
【文档编号】G01N30/06GK103969351SQ201310039734
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2013年1月31日 优先权日:2013年1月31日
【发明者】匡艳辉, 张慧晔, 李银花, 王德勤, 李楚源 申请人:广州白云山和记黄埔中药有限公司