绞股蓝皂苷及其制备方法
【专利摘要】绞股蓝皂苷及其制备方法，涉及绞股蓝。所述绞股蓝皂苷LVII的名称为2-羟基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-20(S)-原人参二醇-20-O-β-D-木吡喃糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式为C47H80O18，分子量932。所述绞股蓝皂苷LVII的制备方法：先制备绞股蓝总皂苷，再用酶法转化绞股蓝总皂苷，最后制备绞股蓝皂苷LVII。利用酶生物转化法，以绞股蓝为原料，采用蜗牛酶、橙皮苷酶、果胶酶、β-葡萄糖苷酶、纤维素酶或橙皮苷酶中的一种或几种酶来水解绞股蓝总皂苷制备绞股蓝皂苷LVII。设备简单，工艺简单，容易控制和扩大规模，且制备的绞股蓝皂苷LVII纯度高，副产物少。
【专利说明】绞股蓝皂苷及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及绞股蓝，尤其是涉及一种绞股蓝皂苷LVII及其制备方法。
【背景技术】
[0002]绞股蓝[GynostemmaPentaphyllum(Thunb)Makin0.]为葫芦科绞股蓝属植物,其主要药效成分为绞股蓝皂苷(gypenoside，GYP)。绞股蓝皂苷具有与人参皂苷相同的达玛烷型四环三萜的骨架，显示抗肿瘤、防止衰老、降低血糖血脂、镇静止痛及抗溃疡等药理活性，且毒副作用小，是近年来国内外研究的热点。
[0003]对人参皂苷药理活性、构效关系及代谢动力学的研究表明，人参皂苷的药理活性与其糖链有密切的关系，低糖链皂苷及苷元的活性较多糖链皂苷有大幅度提高，因此目前国内外很多学者都致力于低糖链绞股蓝皂苷LVII的研究开发。由多糖链原生皂苷制备低糖链绞股蓝皂苷LVII的方法有化学方法的酸碱水解、乙酰解和生物方法的微生物转化、酶法转化等多种方法，化学水解条件剧烈易导致苷元结构发生变化，微生物转化所需步骤多不易控制，因此反应条件温和易控、副产物少的酶水解更容易进行。
[0004]人参皂苷的转化研究早期多选用人参和三七，提取总皂苷进行转化来获得RhpRh2和H901等稀有皂苷做进一步的研究，如中国专利CN101139562公开利用弗氏链霉菌菌株规模化发酵转化各种三七皂苷制备Conpound K(IH901)技术，中国专利CN101928671A公开利用链格孢属菌发酵人参茎叶制备人参皂苷Rg3的方法等。绞股蓝是五加科外唯一富含人参皂苷的植物，在我国长江流域以南有大面积分布和种植，相对于人参和三七来源更为丰富，且价廉易得，对大规模的研究和生产制备更为便利。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种绞股蓝皂苷LVII及其制备方法。
[0006]所述绞股蓝皂苷LVII的名称为2-羟基-3-0- β -D-吡喃葡萄糖_20 (S)-原人参二醇-20-0- β -D-木吡喃糖(I — 6) - β -D-吡喃葡萄糖苷，分子式为C47H8tlO18,分子量932，结构式为:
[0007]
【权利要求】
1.绞股蓝皂苷LVII，其特征在于其名称为2-羟基-3-0-β -D-吡喃葡萄糖-20 (S)-原人参二醇-20-0- β -D-木吡喃糖(1— 6) - β -D-吡喃葡萄糖苷，分子式为C47H8tlO18,分子量932，结构式为:
2.如权利要求1所述绞股蓝皂苷LVII的制备方法，其特征在于包括以下步骤: 1)制备绞股蓝总皂苷； 2)用酶法转化绞股蓝总皂苷； 3)制备绞股蓝皂苷LVII。
3.如权利要求2所述绞股蓝皂苷LVII的制备方法，其特征在于在步骤I)中，所述制备绞股蓝总皂苷的具体方法为:将绞股蓝粉末用乙醇溶液水浴提取，提取液减压浓缩至浸膏状得到绞股蓝提取物，将绞股蓝提取物用蒸馏水分散悬浮，石油醚萃取脱脂脱色后再用正丁醇萃取至正丁醇层无色，合并正丁醇层减压浓缩干，用水分散后上样到大孔树脂，先用低浓度乙醇溶液洗去杂质，再用高浓度乙醇溶液洗脱总皂苷，洗脱液浓缩干燥得到绞股蓝总皂苷。
4.如权利要求3所述绞股蓝皂苷LVII的制备方法，其特征在于所述将绞股蓝粉末用乙醇溶液水浴提取的方法为:将绞股蓝粉末用乙醇溶液在水浴锅中提取，乙醇溶液采用70%~95%乙醇溶液，乙醇溶液的用量按质量比为绞股蓝粉末的10~20倍；所述水浴锅的温度为45°C，所述提取是提取2~4次，每次提取时间为12~24h。
5.如权利要求2所述绞股蓝皂苷LVII的制备方法，其特征在于在步骤I)中，所述大孔树脂采用DM-130大孔树脂、AB-8大孔树脂、D-1Ol大孔树脂、HP-20大孔树脂中的一种；所述先用低浓度乙醇溶液洗去杂质可采用10%~30%乙醇溶液洗脱3~5个柱体积；所述高浓度乙醇溶液可采用40%~80%乙醇溶液。
6.如权利要求2所述绞股蓝皂苷LVII的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述用酶法转化绞股蓝总皂苷的具体方法为:取绞股蓝总皂苷置于三角瓶中，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液溶解后，加入转化酶，水浴反应后加入正丁醇，萃取，萃取液减压浓缩得到酶法转化产物。
7.如权利要求6所述绞股蓝皂苷LVII的制备方法，其特征在于所述绞股蓝总皂苷、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的配比为1.5g: 150mL，其中，绞股蓝总皂苷以质量计算，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液以体积计算；所述磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液pH可为3~7。
8.如权利要求6所述绞股蓝皂苷LVII的制备方法，其特征在于所述转化酶选自蜗牛酶、橙皮苷酶、果胶酶、葡萄糖苷酶、纤维素酶、柚皮苷酶中的至少一种；所述转化酶的用量可为转化底物 的3%~10% ;所述水浴反应的温度可为45°C，水浴反应的时间可为36~60h ;所述萃取可至少萃取2次。
9.如权利要求2所述绞股蓝皂苷LVII的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述制备绞股蓝皂苷LVII的具体方法为:将步骤2)得到的酶法转化产物用正相硅胶柱层析，以氯仿:甲醇:水梯度洗脱，收集洗脱的组分，再用凝胶柱层析，有机溶剂洗脱，所得组分用反相硅胶柱层析，甲醇-水进行梯度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到绞股蓝皂苷LVII。
10.如权利要求9所述绞股蓝皂苷LVII的制备方法，其特征在于所述氯仿:甲醇:水的体积比为(150~80): 35: 10 ;所述有机溶剂可选自乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的至少一种；所述甲醇-水进行梯度洗脱，收集洗脱液，可收集40%~80%甲醇洗脱的部分。
【文档编号】C07J17/00GK103923150SQ201410151087
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月15日 优先权日:2014年4月15日
【发明者】明艳林, 童庆宣, 郑志忠, 刘韶松, 陈良华, 郑国华 申请人:厦门华侨亚热带植物引种园