专利名称：：一种绞股蓝皂苷的制备方法一种绞股蓝皂苷的制备方法
技术领域：
：本发明涉及绞股蓝皂苷
技术领域：
，具体地说，是一种绞股蓝皂苷的制备方法。
背景技术：
：绞股蓝(C^"ostemma;e"tap/^〃i/m(Thunb)Makino.)为葫卢科多年生草质藤本植物，又名七叶胆，小苦药等。因与吉林人参有异物同功之效，故有"南方人参"、"第二人参"之美称，同时也被中外学术界誉为"绿色的金子"、"人参宝草"。其主要有效成分为绞股蓝皂苷，具有显著的降血糖、降血脂、平衡血压、抗癌、抗疲劳、抗缺氧、抗热、抗衰老、促进细胞新陈代谢、止咳祛痰、提高免疫力、美白等功能。由于绞股蓝皂苷生理活性的多样性和重要性，优化其提取分离方法一直是相关研究的核心和基础。绞股蓝皂苷的提取多采用醇浸泡、醇回流等水醇提取法，之后再进行进一步分离和纯化。由于绞股蓝皂苷极性大，且与色素不易分离，现多采用正丁醇萃取(张慧丽，宋有涛，辛如等.超声提取绞股蓝总皂苷及抗氧化作用的研究[J].辽宁大学学报，2006，33(4):346-348)、氧化铝柱层析(范文成，叶晓红，罗志宏等.中性氧化铝住对绞股蓝总皂苷含量测定结果的影响[J].药物分析，2005，27(2):125)、大孔吸附树脂柱层析(沈宏伟，消彦春，车仁国等.绞股蓝中总皂苷的提取及含量研究[J].提取物及应用，2008，4:158-160)等方法进行分离富集。萃取法使用有毒有机溶剂，如正丁醇，会造成环境污染；氧化铝柱层析法成本高且操作繁琐。而大孔吸附树脂分离技术是20世纪60年代末发展起来新技术，在天然产物的提纯等方面显示出独特的优势，近年来已广泛应用于天然产物中有效物质、尤其是水溶性物质的分离。将大孔吸附树脂技术用于绞股蓝皂苷的提纯可以避免有毒有机溶剂的使用，从而降低环境污染。但大孔吸附树脂吸附分离技术为固定床模式，最大缺点是不能直接处理含固体颗粒的进料，因此，在用于绞股蓝皂苷的提取时，不得不在上柱操作之前加上一系列的预处理过程，如提取、离心、过滤、浓縮和液固分离等过程，仍存在操作繁琐、提取时间长、提取效率低、设备及空间占用多、人力物力耗费量大，废物排放量多，生产成本高等弊端。扩张床吸附(ExpandedBedAdsorption,EBA)技术出现于上个世纪九十年代，最初用于蛋白质的分离纯化。在扩张床中，吸附剂的大小和密度有一定的分布，颗粒大的或密度大的颗粒会分布在底部，而颗粒小的或密度小的则分布在上部，这种分层现象限制了颗粒的运动。只要适当控制流速和填料的径高比就能形成稳定的分层的床层，这是扩张床操作的基础。较之于固定床，扩张床可直接处理含有固体颗粒的料液，省去了离心、过滤等操作。80年代以来，在生物化工领域，为高效简便地分离纯化生物活性物质，国内外一些学者提出了过程集成的概念，即将常规分离中的几个单元操作集成在一步操作中完成。英国剑桥大学的H.A.Chase等在研究流化床吸附的基础上，发展了能在床层膨松状态下实现平推流的扩张床吸附技术。应用该技术可直接从细胞破碎液中提取出较纯的目标产物，固液分离和吸附同时进行。目前还很少将该技术应用于中药的提取分离上。集成化扩张床技术就是要将过滤、浓縮和初步纯化等多个操作步骤集成于一步操作中完成，能大大縮短操作时间、提高收率、降低生产成本。
发明内容本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种绞股蓝皂苷的制备方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种绞股蓝皂苷的制备方法，具体步骤为，(1)将提取溶剂和绞股蓝药材置于超声提取器中进行提取，提取时间为0.51.5h;提取时间优选为lh;所述的溶剂为乙醇；所述的绞股蓝药材为未经粉碎的绞股蓝药材或者不同粒径的绞股蓝细粉；(2)提取的同时开启输液泵，将提取液自下而上输送至扩张床柱体内，被树脂吸附后，吸附余液流回至超声提取器中继续参与提取；在此动态提取过程中，绞股蓝中的有效成分由药材中不断转移至柱床内的树脂上；所述的树脂为非极性或弱极性大孔吸附树脂；所述的绞股蓝中的有效成分为绞股蓝皂苷；本发明采用超声波提取，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应等，加强了胞内物质的释放扩散及溶解，加速了药物有效成分进入溶剂，从而提高了提出率，縮短了提取时间，节约了溶剂使用量。并且超声波破碎过程是一个物理过程，提取过程中无化学反应，被浸提的生物活性物质在短时间内保持不变，生物活性不减弱，降低了高温对有效成分的影响。并辅助进行均匀搅拌，提高中药有效成分的溶出速度和溶出次数，从而增加有效成分的扩散，縮短提取时间，加速提取过程；在此集成化提取过程中，不需要冷凝装置和换热器等，简化了装置，操作简便；传统的方式为回流提取的缺点回流提取温度较高，不仅造成许多中药热敏性成分的破坏，而且还大量带出很多无效杂质，给后续分离纯化造成了困难和麻烦，从而降低了收率，增加了消耗和成本；由于杂质含量过多使得分离纯化难度大且效果不好，造成产品中(特别是中药注射剂)残留异物超标，这也是形成中药注射剂不良反应的重要原因之一；(3)提取完毕，关闭超声提取器，通过输液泵将冲洗液自上而下输入扩张床的柱体内，待冲洗液澄清后，通过输液泵将洗脱剂自上而下输入扩张床的柱体内，同时收集于自动收集器内；所述的冲洗液为去离子水或低浓度低级醇；所述的洗脱剂为50%95%低级醇，洗脱剂用量不少于树脂体积的35倍；(4)洗脱完毕，通过输液泵将另一洗脱剂从扩张床顶部自上而下输送至扩张床的柱体内，完成柱的再生过程。与现有技术相比，本发明的优点是(1)本发明集成化提取绞股蓝皂苷，省去了传统提取分离过程中的离心、过滤、浓縮等步骤，将提取、离心、过滤和纯化的操作集中于一个单元操作中，能直接从含固体颗粒的提取液中分离出有效成分，具有效率高，步骤简化，成本低的特点；(2)本发明将提取装置与扩张床集成，克服了固定床不能直接处理含有固体颗粒的进料的缺点，节省了人力物力，提高了提取率和提取效率，减少了环境污染；(3)传统方法为回流提取提取时间长(2.5h)，能耗大，对绞股蓝有效成分破坏较严重，考虑到工业应用，人力成本较高；本发明为超声波常温辅助提取法，提取时间短(0.51.0h)，能耗低(不需要冷凝水)，提取条件温和，对有效成分破坏小，浸提液杂质含量少，提取率高于传统方法，而提取率达到回流提取的95%。图l本发明的装置结构示意图。附图中的标号分别为1、提取装置，2、输液泵，3、扩张床的柱体，4、自动收集器。具体实施方式以下提供本发明一种绞股蓝皂苷的制备方法的具体实施方式。本发明所用的装置为至少含有提取装置1以及扩张床，提取装置1通过管路与输液泵2相连，提取装置1通过管路与扩张床的柱体3相连，输液泵2通过管路与扩张床的柱体3相连，自动收集器4分别与分离柱、收集容器相连。实施例l(1)将绞股蓝药材粉碎后过40目筛子，取绞股蓝细粉3g，置于500ml圆底烧瓶中，按料液比1:50加入40%乙醇提取液150ml，开启超声器进行提取；(2)提取的同时开启输液泵2，将提取液自下而上输送至己处理好的HZ-816大孔吸附树脂的扩张床柱内，柱床的扩张比为4:3;提取液被大孔吸附树脂吸附后，吸附余液流回至提取装置1中继续参与提取，形成对提取液的动态提取，使有效成分吸附在柱床上；(3)提取lh后，关闭超声器，通过输液泵2将1BV(120ml)去离子水自上而下输入至扩张床的柱体3内，同时收集于自动收集器4内，通过输液泵2将3BV(360ml)75%乙醇洗脱剂自上而下输入至扩张床的柱体3内，同时收集于自动收集器4内；(4)洗脱完毕，通过输液泵2将95%低级醇从扩张床顶部自上而下输送至扩张床的柱体3内，完成柱的再生过程，同时收集洗脱液于自动收集器4内。本发明对绞股蓝总皂苷进行提取分离的结果，与常规提取分离方法相比，其提取分离的指标对比情况如下(如表1所示)表i本发明与常规方法在提取分离3g绞股蓝总皂苷的指标对比<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>通量——药材量/时间mg/h过程效率——总皂苷量/时间mg/h环境因子——乙醇用量/总皂苷量ml/mg总过程评价——过程效率/环境因子mg21111—111—1通过对比可以看出，应用本发明提纯绞股蓝皂苷，具有提取时间短，溶剂用量少，过程效率高等优点，环境友好，有望工业化。实施例2本实施例是对15g绞股蓝药材，应用该装置对绞股蓝总皂苷进行集成化提取，具体操作步骤为(1)将绞股蓝药材粉碎后过40目筛子，取绞股蓝细粉15g，置于500ml圆底烧瓶中，按料液比l:30加入40。/。乙醇提取液450ml，开启超声器进行提取；(2)提取的同时开启输液泵2，将提取液自下而上输送至已处理好的HZ-816大孔吸附树脂的扩张床柱内，柱床的扩张比为3:2;提取液被大孔吸附树脂吸附后，吸附余液流回至提取装置1中继续参与提取，形成对提取液的动态提取，使有效成分吸附在柱床上；其余操作同实施例l。与常规提取分离方法相比，其提取分离的指标对比情况，如表2所示表2本发明与常规方法在提取分离15g绞股蓝总皂苷的指标对比<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>通过对比可以看出，应用本发明提纯绞股蓝皂苷，具有提取时间短，溶剂用量少，提取率高等优点，适合工业化。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
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的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围内。权利要求1.一种绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于，具体步骤为(1)将提取溶剂和绞股蓝药材置于超声提取器中进行提取，提取时间为0.5～1.5h；(2)提取的同时开启输液泵，将提取液自下而上输送至扩张床柱体内，被大孔吸附树脂吸附后，吸附余液流回至超声提取器中继续参与提取；在此动态提取过程中，绞股蓝中的有效成分由药材中不断转移至柱床内的树脂上；(3)提取完毕，关闭超声提取器，通过输液泵将冲洗液自上而下输入扩张床的柱体内，待冲洗液澄清后，通过输液泵将洗脱剂自上而下输入扩张床的柱体内，同时收集于自动收集器内；(4)洗脱完毕，通过输液泵将另一洗脱剂从扩张床顶部自上而下输送至扩张床的柱体内，完成柱的再生过程。2.如权利要求1所述的一种绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，提取时间为lh。3.如权利要求1所述的一种绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，所述的溶剂为乙醇。4.如权利要求1所述的一种绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，所述的绞股蓝药材为未经粉碎的绞股蓝药材或者不同粒径的绞股蓝细粉。5.如权利要求1所述的一种绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的树脂为非极性或弱极性大孔吸附树脂。6.如权利要求1所述的一种绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的绞股蓝中的有效成分为绞股蓝皂苷。7.如权利要求1所述的一种绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所述的冲洗液为去离子水或低浓度低级醇。8.如权利要求1所述的一种绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所述的洗脱剂为50%95%低级醇，洗脱剂用量为树脂体积的35倍。全文摘要本发明涉及一种绞股蓝皂苷的制备方法，将提取溶剂和绞股蓝药材置于超声提取器中进行提取；提取的同时开启输液泵，将提取液自下而上输送至扩张床柱体内，被树脂吸附后，吸附余液流回至超声提取器中继续参与提取；在此动态提取过程中，绞股蓝中的有效成分由药材中不断转移至柱床内的树脂上；提取完毕，关闭超声提取器，通过输液泵将冲洗液自上而下输入扩张床的柱体内；待冲洗液澄清后，通过输液泵将洗脱剂自上而下输入扩张床的柱体内，同时收集于自动收集器内；洗脱完毕，通过输液泵将另一洗脱剂从扩张床顶部自上而下输送至扩张床的柱体内，完成柱的再生过程。本发明的优点效率高，步骤简化，成本低的特点，能耗低。文档编号A61P37/00GK101524393SQ20091004880公开日2009年9月9日申请日期2009年4月3日优先权日2009年4月3日发明者敏张,祝付兰,罗国安,坪胡申请人:华东理工大学