治疗老年痴呆症的中药组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种治疗老年痴呆症的中药组合物及其制备方法，所述治疗老年痴呆症的中药组合物由以下原料按重量份配比组成：10～30份绞股蓝总皂苷，5～20份三七总皂苷，2～10份人参总皂苷，2～10份淫羊藿总黄酮和2～12份桑椹总黄酮。本发明物可明显改善老年痴呆模型小鼠痴呆症状学习与记忆障碍，同时可明显抑制与老年痴呆发生密切相关病理产物β-淀粉样蛋白的产生与沉积，且这种抑制作用明显优于阳性药石杉碱甲。由此可见本发明提供的治疗老年痴呆症的中药组合物具有明显的进步性，可用于制备更先进的防治老年痴呆症的药物。
【专利说明】治疗老年痴呆症的中药组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药【技术领域】，具体涉及一种治疗老年痴呆症的中药组合物及其制备 方法。
【背景技术】
[0002] 老年痴呆症系指发生在老年期的各种痴呆综合征，包括阿尔茨海默病（又称早 老性痴呆，Alzheimer' s disease, AD)、血管性痴呆（Vascular dementia, VD)、混合性痴呆 (AD+VD)及其他痴呆。前两种为老年性痴呆的主要类型，占所有痴呆的90%以上。AD是一种 以脑的退行性病变，脑细胞萎缩为其病理基础的痴呆症候群。而VD多由缺血性、出血性脑 血管病以及慢性缺氧性脑血管病引起。混合性痴呆（AD+VD)常见于老年痴呆患者，两者的 病理、症状及神经生物化学特点往往相互交错重叠，人们曾做了许多工作去鉴别AD及VD， 但随着研究的不断深入，两者间的相似性及两者可能在本质上的重叠性越来越受到人们重 视。它们在临床上均表现为因认知功能减退所致记忆力下降，行为迟缓、动作不协调。其主 要的病理特征是脑内出现大量老年斑、神经纤维缠结、β_淀粉样蛋白沉积以及神经元空泡 变性和大量丧失。
[0003] 由于老年性痴呆病理变化过程相当复杂，涉及到多系统、多靶点的异常，尽管世界 各国在寻找老年性痴呆有效治疗药物的研究中投入了大量的人力和物力，但成果却十分有 限。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本发明的目的在于提出一种治疗老年痴呆症的中药组合物及其制备方 法，以克服现有中药或西药治疗老年痴呆显效率普遍不高的缺陷。
[0005] 基于上述目的，本发明提供一种治疗老年痴呆症的中药组合物，所述中药组合物 由绞股蓝总皂苷、三七总皂苷、人参总皂苷、淫羊藿总黄酮和桑椹总黄酮组成。
[0006] 较佳地，所述中药组合物由以下原料按重量份配比组成：10?30份绞股蓝总皂 苷，5?20份三七总皂苷，2?10份人参总皂苷，2?10份淫羊藿总黄酮和2?12份桑椹 总黄酮。
[0007] 优选地，所述中药组合物由以下原料按重量份配比组成：18份绞股蓝总皂苷，10 份三七总皂苷，4份人参总皂苷，4份淫羊藿总黄酮和5份桑椹总黄酮。
[0008] 本发明还提供一种制备上述治疗老年痴呆症的中药组合物的方法，所述制备方法 包括：
[0009] 1)提取绞股蓝总皂苷：取绞股蓝，切断，加入乙醇，加热提取；将提取液抽滤，再将 滤液减压浓缩，将浓缩液离心；吸取上清液过大孔树脂，再用60?80%乙醇洗脱，收集洗脱 液；将洗脱液减压浓缩至相对密度为〇. 7?0. 9,然后真空干燥，获得绞股蓝总皂苷含量为 90%?99%的固体物；
[0010] 2)提取三七总皂苷：取三七并将其粉碎，加入乙醇，加热提取；将提取液抽滤，再 将滤液减压浓缩，将浓缩液离心；吸取上清液过大孔树脂，再用60?80%乙醇洗脱，收集洗 脱液；将洗脱液减压浓缩至相对密度为〇. 7?0. 9,然后真空干燥，获得三七总皂苷含量为 90%?99%的固体物；
[0011] 3)提取人参总皂苷：取人参，切片，加入乙醇，加热提取；将提取液抽滤，再将滤 液减压浓缩，将浓缩液离心；吸取上清液过大孔树脂，然后用60?80%乙醇洗脱，收集洗 脱液；将洗脱液减压浓缩至相对密度为〇. 7?0. 9,然后真空干燥，获得人参总皂苷含量为 90%?99%的固体物。
[0012] 4)提取淫羊藿总黄酮：取淫羊藿的茎叶，切段，加入乙醇，加热提取；将提取液抽 滤，再将滤液浓缩至无乙醇味；用乙酸乙酯萃取浓缩液，再将萃取液浓缩至无乙酸乙酯味； 最后，将无乙酸乙酯味的浓缩液过大孔树脂，先用8?15%乙醇洗脱杂质，再60?80%乙 醇洗脱有效成分，将洗脱液减压浓缩至相对密度为〇. 7?0. 9,然后真空干燥，获得淫羊藿 总黄酮含量为75 %?85%的固体物；
[0013] 5)提取桑椹总黄酮：取白桑椹，加入乙醇，加热提取；将提取液抽滤，再将滤液浓 缩至无乙醇味；用乙酸乙酯萃取浓缩液，再将萃取液浓缩至无乙酸乙酯味；最后，将无乙酸 乙酯味的浓缩液过大孔树脂，先用8?15 %乙醇洗脱杂质，再60?80 %乙醇洗脱有效成 分，将洗脱液减压浓缩至相对密度为〇. 7?0. 9,然后真空干燥，获得桑椹总黄酮含量为 80%?89%的固体物；
[0014] 6)将所述含有绞股蓝总皂苷的固体物、含有三七总皂苷的固体物、含有人参总皂 苷的固体物、含有淫羊藿总黄酮的固体物和含有桑椹总黄酮的固体物按照一定重量份配比 混合均匀，即得到所述治疗老年痴呆症的中药组合物。
[0015] 本发明还提供一种治疗老年痴呆症的药物，所述药物由上述治疗老年痴呆症的中 药组合物和余量的药用辅料制成。
[0016] 可选地，所述药物的制剂形式为液体制剂或固体制剂。
[0017] 从上面所述可以看出，本发明物可明显改善老年痴呆模型小鼠痴呆症状学习与记 忆障碍，同时可明显抑制与老年痴呆发生密切相关病理产物β-淀粉样蛋白的产生与沉 积，且这种抑制作用明显优于阳性药石杉碱甲。由此可见本发明提供的治疗老年痴呆症的 中药组合物具有明显的进步性，可用于制备更先进的防治老年痴呆症的药物。
【具体实施方式】
[0018] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发 明进一步详细说明。
[0019] 本发明提供的治疗老年痴呆症的中药组合物由绞股蓝总阜苷（Gypenosides, Gyp)、三七总阜苷（Panax notoginseng saponins, PNS)、人参总阜苷（Ginsenosides，Gin)， 淫羊藿总黄酮（Total flavonoids of epimedium, TFE)和桑堪总黄酮（Total flavonoids of Mulberry, TFM)组成。
[0020] 作为本发明的一个实施例，所述治疗老年痴呆症的中药组合物由以下原料按重量 份配比组成：18份绞股蓝总皂苷，10份三七总皂苷，4份人参总皂苷，4份淫羊藿总黄酮和5 份桑椹总黄酮。
[0021] 作为本发明的一个实施例，所述治疗老年痴呆症的中药组合物由以下原料按重量 份配比组成：1〇份绞股蓝总皂苷，16份三七总皂苷，7. 2份人参总皂苷，2. 2份淫羊藿总黄酮 和7. 5份桑椹总黄酮。
[0022] 作为本发明的一个实施例，所述治疗老年痴呆症的中药组合物由以下原料按重量 份配比组成：24绞股蓝总皂苷，8份三七总皂苷，4. 5份人参总皂苷，3份淫羊藿总黄酮和11 份桑椹总黄酮。
[0023] 作为本发明的一个实施例，所述治疗老年痴呆症的中药组合物由以下原料按重量 份配比组成：15份绞股蓝总皂苷，5份三七总皂苷，9. 5份人参总皂苷，6份淫羊藿总黄酮和 3. 8份桑椹总黄酮。
[0024] 需要说明的是，所述绞股蓝总皂苷为绞股蓝的活性有效成分，可以由绞股蓝提取 得到。所述三七总皂苷为三七提取的活性有效成份，可以由三七提取得到。所述人参总皂 苷为人参的活性有效成份，可以由人参提取得到。所述淫羊藿总黄酮为淫羊藿的活性有效 成份，可以由淫羊藿提取得到。所述桑椹总黄酮为桑椹的活性有效成分，可以由桑椹提取得 到。
[0025] 本发明还提供了所述治疗老年痴呆症的中药组合物的制备方法，作为本发明的一 个实施例，所述制备方法包括：
[0026] 1)提取绞股蓝总皂苷：取绞股蓝的茎叶，切成约2cm长的小段，加入70%乙醇， 90°C水浴回流提取3次，每次所加乙醇的质量为绞股蓝质量的8倍，每次提取1小时；合并 提取液后将提取液抽滤，再将滤液减压浓缩至〇. 5mg/mL，将浓缩液离心；吸取上清液过大 孔树脂（即0-700型），用水洗至流出液不显此1丨此反应，再用70%乙醇洗脱，控制流速为 3mL/min，收集洗脱液；将洗脱液减压浓缩至相对密度约为0. 80左右（60°C测定），然后真空 干燥，获得绞股蓝总皂苷含量为90 %?99%的固体物。
[0027] 2)提取三七总皂苷：取三七的地下块茎并将其粉碎，过8目筛；然后加入60%乙 醇，90°C水浴回流提取3次，每次所加乙醇的质量为三七质量的8倍，每次提取1. 5小时；合 并提取液后将提取液抽滤，再将滤液减压浓缩至〇. 5mg/mL，将浓缩液离心；吸取上清液过 大孔树脂（HPD-700型），用水洗至流出液不显Molish反应，然后用70%乙醇洗脱，流速为 4mL/min，收集洗脱液；将洗脱液减压浓缩至相对密度约为0. 80左右（60°C测定），然后真空 干燥，获得三七总皂苷含量为90 %?99%的固体物。
[0028] 3)提取人参总皂苷：取人参地下根茎，切成厚度为1mm的薄片，加入70 %乙醇， 90°C水浴回流提取3次，每次所加乙醇的质量为人参质量的10倍，每次提取1小时；合并 提取液后将提取液抽滤，再将滤液减压浓缩至〇. 45mg/mL，将浓缩液离心；吸取上清液过大 孔树脂（HPD-700型），用水洗至流出液不显Molish反应，然后用70%乙醇洗脱，流速为 3. 5mL/min，收集洗脱液；将洗脱液减压浓缩至相对密度约为0. 80左右（60°C测定），然后真 空干燥，获得人参总皂苷含量为90 %?99%的固体物。
[0029] 4)提取淫羊藿总黄酮：取淫羊藿的茎叶，切成约2cm长的小段，加入75%乙醇， 85°C水浴回流提取3次，每次所加乙醇的质量为淫羊藿质量的8倍，每次提取1小时；合并 提取液后将提取液抽滤，再将滤液浓缩至无乙醇味；用乙酸乙酯萃取浓缩液2次，再将萃取 液浓缩至无乙酸乙醋味。最后，将无乙酸乙醋味的浓缩液过DM130大孔树脂，先用10%乙 醇洗脱杂质，再70%乙醇洗脱有效成分（树脂吸附过程中，上样液质量浓度0. 5mg/mL，pH =4. 5,吸附流速2. 5mL/min，洗脱流速为2. 5mL/min)，将洗脱液减压浓缩至相对密度约为 0. 80左右（60°C测定），然后真空干燥，获得淫羊藿总黄酮含量为75%?85%的固体物。
[0030] 5)提取桑椹总黄酮：取白桑椹，加入95%乙醇，85°C水浴回流提取3次，每次所加 乙醇的质量为淫羊藿质量的9倍，每次提取1小时；合并提取液后将提取液抽滤，再将滤液 浓缩至无乙醇味；用乙酸乙酯萃取浓缩液2次，再将萃取液浓缩至无乙酸乙酯味。最后，将 无乙酸乙酯味的浓缩液过HZ-801大孔树脂，先用10%乙醇洗脱杂质，再75%乙醇洗脱有效 成分（树脂吸附过程中，上样液质量浓度〇. 42mg/mL, pH = 5,吸附流速3mL/min,洗脱流速 为3. 5mL/min)，将洗脱液减压浓缩至相对密度约为0. 80左右（60°C测定），然后真空干燥， 获得桑椹总黄酮含量为80 %?89%的固体物。
[0031] 6)将上述提取的含有90%?99%绞股蓝总皂苷的固体物、含有90%?99%三七 总皂苷的固体物、含有90 %?99 %人参总皂苷的固体物、含有75 %?85 %淫羊藿总黄酮的 固体物和含有80%?89%桑椹总黄酮的固体物按照一定重量份配比混合均匀，即得到所 述治疗老年痴呆症的中药组合物。
[0032] 本发明提供的治疗老年痴呆症的中药组合物对快速老化痴呆模型小鼠 SAMP8学 习记忆障碍及大脑Α β 1-40、Α β 1-42表达的影响
[0033] (1)实验动物及分组
[0034] SAMP8为快速老化痴呆模型小鼠，由日本竹田俊男教授经20年近代延交培育而 成，寿命为12个月左右，一般在4?6个月出现加速老化的特点，具备均一的遗传背景和稳 定老化病态特征，其快速老化自然产生，与临床痴呆的渐进性发生极为相似，尤其能在大脑 形成Αβ沉积，并随着年龄增加而表达量增加。SAMR1小鼠为生命过程正常的抗快速老化小 鼠。这两种小鼠常用于老年痴呆症的研究，其中SAMP8小鼠为模型动物，SAMR1为正常对照 动物。
[0035] 本研究取6月龄SAMP8小鼠50只，随机分为模型组、阳性对照组（石杉碱甲）、本 发明高剂量组、低剂量组，每组10只，另取SAMR1小鼠10只为正常对照组。（动物许可证号 SCXK (京）2011-0012)
[0036] (2)给药：动物适应性喂养3天后灌胃给药。本发明提供的治疗老年痴呆症的中 药组合物与石杉碱甲用蒸馏水调配后灌胃给药（剂量为：本发明高剂量250mg/kg，低剂量 125mg/kg，阳性对照药石杉碱甲0. 30mg/kg)。正常对照组与模型组给予等容积的双蒸水，均 灌胃给药（ig)。给药容量均为0. lmL/10g，每天给药1次，连续给药60d。随后进行Morris 水迷宫检测学习与记忆情况。
[0037] (3)小鼠学习与记忆行为测试：采用Morris水迷宫试验测试。水迷宫为一圆形水 池，直径120cm，高50cm，水深30cm，水温保持在26±1°C。将水池等分为4个象限，在象限 3中心放置一平台，平台为圆形，直径为11cm，平台高为29cm(即平台低于水面lcm，称隐藏 平台），迷宫正上方2m高处装有一个小型摄像机，并与另一房间的录像机和监视器连接，记 录小鼠的游泳轨迹和游泳时间。从训练的第2天至第6天测试成绩，共测试5天。每天分 上下午两个时间段，每一个时间段每鼠训练4次，小鼠入水点为各象限池壁中点，将小鼠面 向池壁由4个人水点放入水池中，测其60s内成功进驻平台（小鼠找到平台并滞留其上5s 为成功进驻）所需时间（即逃避潜伏期）。如在60s内小鼠不能成功进驻平台，则实验者将 其引上平台并令其停留l〇s，记录逃避潜伏期为60s。
[0038] (4)免疫组化检测小鼠大脑Α β 1-40、Α β 1-42表达情况
[0039] 水迷宫检测动物记忆与行为结束后，脱颈椎处死小鼠，除去颅盖，取出完整大脑 组织，用含4%多聚甲醛固定。病理切片，采用免疫组织化学方法染色，随机选取快速老化 小鼠大脑顶叶皮层、海马周围白质连续五个视野在高倍显微镜下观察，并计数五个视野下 Αβ 1-40、Αβ 1-42免疫阳性细胞的平均个数。
[0040] (5)实验结果
[0041] 从表1可看出，模型组SAMP8小鼠的逃避潜伏期与其他各组比较明显延长 (Ρ〈0. 01)，模型组SAMP8小鼠平均寻求次数均明显少于其他各给药组小鼠（Ρ〈0. 05)，这表 明SAMP8小鼠动物模型是成功的，经过药物治疗之后，本发明物对老年痴呆小鼠的学习记 忆行为能力有明显的改善作用。结果见表1。
[0042] 表1各组小说水迷宫行为学相关参数5天总体均值比较（i±.v, η=1〇)
[0043]
【权利要求】
1. 一种治疗老年痴呆症的中药组合物，其特征在于，所述中药由绞股蓝总皂苷、三七总 皂苷、人参总皂苷、淫羊藿总黄酮和桑椹总黄酮组成。
2. 根据权利要求1所述的治疗老年痴呆症的中药组合物，其特征在于，所述中药由以 下原料按重量份配比组成：10?30份绞股蓝总皂苷，5?20份三七总皂苷，2?10份人参 总皂苷，2?10份淫羊藿总黄酮和2?12份桑椹总黄酮。
3. 根据权利要求2所述的治疗老年痴呆症的中药组合物，其特征在于，所述中药由以 下原料按重量份配比组成：18份绞股蓝总皂苷，10份三七总皂苷，4份人参总皂苷，4份淫羊 藿总黄酮和5份桑椹总黄酮。
4. 根据权利要求1?3中任意一项所述的治疗老年痴呆症的中药组合物的制备方法， 其特征在于，所述制备方法是： 1) 提取绞股蓝总皂苷：取绞股蓝，切断，加入乙醇，加热提取；将提取液抽滤，再将滤 液减压浓缩，将浓缩液离心；吸取上清液过大孔树脂，再用60?80 %乙醇洗脱，收集洗脱 液；将洗脱液减压浓缩至相对密度为〇. 7?0. 9,然后真空干燥，获得绞股蓝总皂苷含量为 90%?99%的固体物； 2) 提取三七总皂苷：取三七并将其粉碎，加入乙醇，加热提取；将提取液抽滤，再将滤 液减压浓缩，将浓缩液离心；吸取上清液过大孔树脂，再用60?80%乙醇洗脱，收集洗脱 液；将洗脱液减压浓缩至相对密度为〇. 7?0. 9,然后真空干燥，获得三七总皂苷含量为 90%?99%的固体物； 3) 提取人参总皂苷：取人参，切片，加入乙醇，加热提取；将提取液抽滤，再将滤液减压 浓缩，将浓缩液离心；吸取上清液过大孔树脂，然后用60?80%乙醇洗脱，收集洗脱液；将 洗脱液减压浓缩至相对密度为〇. 7?0. 9,然后真空干燥，获得人参总皂苷含量为90 %? 99%的固体物。 4) 提取淫羊藿总黄酮：取淫羊藿的茎叶，切段，加入乙醇，加热提取；将提取液抽滤，再 将滤液浓缩至无乙醇味；用乙酸乙酯萃取浓缩液，再将萃取液浓缩至无乙酸乙酯味；最后， 将无乙酸乙酯味的浓缩液过大孔树脂，先用8?15%乙醇洗脱杂质，再60?80%乙醇洗脱 有效成分，将洗脱液减压浓缩至相对密度为0. 7?0. 9,然后真空干燥，获得淫羊藿总黄酮 含量为75%?85%的固体物； 5) 提取桑椹总黄酮：取白桑椹，加入乙醇，加热提取；将提取液抽滤，再将滤液浓缩至 无乙醇味；用乙酸乙酯萃取浓缩液，再将萃取液浓缩至无乙酸乙酯味；最后，将无乙酸乙酯 味的浓缩液过大孔树脂，先用8?15%乙醇洗脱杂质，再60?80%乙醇洗脱有效成分，将 洗脱液减压浓缩至相对密度为〇. 7?0. 9,然后真空干燥，获得桑椹总黄酮含量为80 %? 89%的固体物； 6) 将所述含有绞股蓝总皂苷的固体物、含有三七总皂苷的固体物、含有人参总皂苷的 固体物、含有淫羊藿总黄酮的固体物和含有桑椹总黄酮的固体物按照一定重量份配比混合 均匀，即得到所述治疗老年痴呆症的中药组合物。
5. -种治疗老年痴呆症的药物，其特征在于，所述药物由权利要求1?3中任意一项所 述的治疗老年痴呆症的中药组合物和余量的药用辅料制成。
6. 根据权利要求5所述的治疗老年痴呆症的药物，其特征在于，所述药物的制剂形式 为液体制剂或固体制剂。
【文档编号】A61P25/28GK104055852SQ201410307856
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年6月30日 优先权日:2014年6月30日
【发明者】杜正彩, 邓家刚, 郝二伟, 吴玉强 申请人:广西中医药大学