用于治疗痴呆症的药物组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明提供一种用于治疗痴呆症的药物组合物及其制备方法，所述药物组合物包括白果内酯与银杏内酯A、C中的任一种或两种的组合。本发明提供的含有白果内酯的药物组合物具有多方面的神经保护作用，包括促进神经生长、改善老年记忆功能、防止老年痴呆的发生等。实验表明，在治疗痴呆方面，本品对小鼠记忆障碍有一定改善作用。
【专利说明】用于治疗痴呆症的药物组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种药物组合物，具体地说，涉及一种用于治疗痴呆症的药物组合物 及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 痴呆包括阿尔茨海默氏症（AD)和脑血管性痴呆（VD)，其中阿尔茨海默氏症是最 常见的一种痴呆形式，这一神经退行性疾病可造成记忆丧失、认知功能受损，并最终导致死 亡。AD的临床治疗是一个尚未攻破的世界性难题，目前临床上使用的抗痴呆药物多为对症 治疗（以改善认知功能为主），如胆碱酯酶抑制剂、多肽类、促智药、抗氧化剂等。所显示的 效果也只能部分和暂时改善认知功能，但不能阻碍病程的进行性过程。由于西药在治疗AD 上表现出治疗范围狭窄、副作用明显等缺陷，许多研究者开始将目光投向了治疗AD的中药 上来。
[0003] 银杏内酯化合物属于萜类化合物，由倍半萜内酯和二萜内酯组成，即白果内酯和 银杏内酯A、B、C、J、M，是银杏叶中一类重要的活性成分。白果内酯（hilobalide ;BB)属 倍半萜内酯，是目前从银杏叶中发现的唯一的倍半萜内酯化合物。银杏内酯A(ginkg〇lide A ;GA)、银杏内酯 B(ginkgolide B ;GB)、银杏内酯 C(ginkgolide C ;GC)、银杏内月旨 M(ginkg〇lideM;GM)、银杏内脂J(ginkgolide J;GJ)为二萜类化合物，其差别在于含有的 羟基数目和羟基连接的位置不同。
[0004] 银杏内酯分子具有独特的十二碳骨架结构，嵌有一个叔丁基和六个五元环，包括 一个螺壬烷，一个四氢呋喃环和三个内酯环。
[0005] 据文献报道，含有白果内酯的银杏内酯组合物对脑血管疾病的治疗，具有一定的 作用。在银杏内酯中，银杏内酯B的活性生理活性最强，是迄今发现的最强的血小板活化因 子拮抗剂，对损伤神经元也有保护作用，然而随着研究的逐渐深入，对其安全性的研究也日 渐增多。例如，银杏内酯B注射液在Beagle犬的毒代动力学研究结果显示，连续给药后银 杏内酯B在Beagle犬体内出现蓄积，且较高剂量可能对Beagle犬产生毒性作用，影响其体 内药物代谢过程（参见宋浩静等，银杏内酯B注射液在Beagle犬药代及毒代动力学研究， 中国药理学与毒理学杂志，2011年9月第25卷增刊）。
[0006] 注射用银杏内酯B毒性试验研究表明，小鼠静脉注射银杏内酯B的LD50 (95 %置信 限）为424mg · kg-1(371-552mg · kg-1);对犬静脉滴注3个月，80mg · kg-1 · (Γ1弓丨起肺脏和 肾脏的可逆性毒性反应（参见余启枝等，注射用银杏内酯B毒性试验研究，中国药师，2011 年第14卷第11期）。
[0007] 白果内酯对血管性痴呆小鼠的保护研究表明，白果内酯具有一定的抗氧化、清除 自由基，扩张脑血管，并且能够改善血管痴呆小鼠的学习记忆能力，对血管性痴呆小鼠中枢 神经系统的损害有较明显的保护和治疗作用（参见黄欢等，白果内酯对血管性痴呆小鼠的 保护作用，安徽医药，2013年第17卷第3期）。
[0008] 银杏内酯组合物可降低急性不完全性脑缺血大鼠的脑水肿及脑毛细血管通透性， 降低全脑缺血大鼠的血液黏度，改善血液流变学指标；改善脑组织神经细胞缺血后病理改 变，具有明显的脑保护作用（参见陈西娟等，银杏叶化学成分及其应用研究进展，生物质化 学工程，2008年第42卷第4期）。
[0009] CN103494802A公开了白果内酯在制备促进银杏二萜类内酯抗血小板凝集活性的 药物中的用途。
【发明内容】
[0010] 本发明的目的是提供一种用于治疗痴呆症的药物组合物及其制备方法。
[0011] 为了实现本发明目的，本发明的一种用于治疗痴呆症的药物组合物，所述药物组 合物包括白果内酯与银杏内酯A、C中任一种或两种的组合。
[0012] 所述药物组合物中：
[0013] (1)白果内酯与银杏内酯A的重量比为6-9:1-4 ;或
[0014] ⑵白果内酯与银杏内酯C的重量比为6-9:1-4;或
[0015] (3)白果内酯与银杏内酯A、C的重量比为6-9:1-4:1-4。
[0016] 本发明中所述痴呆症为阿尔茨海默氏症（AD)或脑血管性痴呆（VD)。优选为阿尔 茨海默氏症。
[0017] 本发明还提供上述药物组合物的制备方法，包括以下步骤：
[0018] 1)取银杏叶提取物，用有机溶剂萃取，减压蒸干即得银杏总内酯；
[0019] 2)将上述银杏总内酯加水溶解后，加样于D101吸附树脂，吸附时间0.5_2h，然后 用10-20%乙醇洗脱1-4个柱体积，收集洗脱液减压回收至干，得白果内酯粗品；
[0020] 3)取上述白果内酯粗品，加入10-80%乙醇，加热溶解，过滤后，于2-KTC放置 12-48h，析出结晶；最后在60°C真空条件下烘干，即得。
[0021] 前述制备方法中，步骤1)中所述银杏叶提取物由黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 提供，其中银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为1-5:1-2:1-3:1-10。
[0022] 前述制备方法中，步骤1)中所述有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙 酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或异丁醇等中的一种或两种以上混合。有机溶剂的加入 量为银杏叶提取物重量的8-20倍。
[0023] 优选地，步骤1)中所述有机溶剂为乙酸乙酯或丙酮，萃取次数为1-6次。更优选 地，萃取次数为3次。
[0024] 前述制备方法中，步骤2)中将收集的洗脱液于55-65°C，_0. 09?-0. IMPa条件下 减压旋转蒸发至干。
[0025] 前述制备方法中，步骤3)中向白果内酯粗品中加入乙醇，加热至40°C _70°C溶解， 趁热过滤。
[0026] 本发明提供的药物组合物在使用过程中，其用量范围为每天0. 5_500mg/kg体重， 优选为l_200mg/kg体重。
[0027] 本发明的用于治疗痴呆症的药物组合物，还可用于改善记忆障碍。
[0028] 本发明进一步提供上述药物组合物在制备用于改善记忆障碍的药物中的应用。
[0029] 经药效研究，急性毒性研究及临床统计证明，与含有银杏内酯B组分的银杏内酯 组合物相比，本发明药物组合物的药效相当，但急性毒性、异常毒性大幅降低，不良反应发 生率亦随之大为下降。
[0030] 本发明提供的含有白果内酯的银杏内酯组合物具有多方面的神经保护作用，包括 促进神经生长、改善老年记忆功能、防止老年痴呆的发生等。实验表明，在治疗痴呆方面，本 品对小鼠记忆障碍有一定改善作用。
【具体实施方式】
[0031] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例 中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
[0032] 实施例1用于治疗痴呆症的药物组合物（白果内酯与银杏内酯A)及其制备方法
[0033] 取银杏叶提取物100g (银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比 为1:1:1:1)，加2000ml乙酸乙酯萃取3次，减压蒸干，即得银杏总内酯；将银杏总内酯用 200ml水溶解，通过D101吸附树脂，吸附时间lh，然后用200ml 10%的乙醇洗脱1-4个柱体 积，收集洗脱液，将收集的洗脱液于60°C，-0. 09MPa条件下减压旋转蒸发至干，得白果内酯 粗品；将白果内酯粗品用400ml80%乙醇加热至50°C，溶解后趁热过滤，4°C冷藏放置12h， 析出结晶，于60°C真空烘干，即得白果内酯组合物43g。
[0034] 经检测，总银杏酸：HPLC法测定总银杏酸含量小于5ppm。
[0035] 含量：HPLC法测定，按干燥品计算，含白果内酯（C15H180 8) 36. 96g、银杏内酯 八((：2(|!12409) 4.118，且白果内酯及银杏内酯六的总量大于95(%。
[0036] 实施例2用于治疗痴呆症的药物组合物（白果内酯与银杏内酯A、银杏内酯C)及 其制备方法
[0037] 取银杏叶提取物80g(银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为 5:2:3:10)，加1600ml正丁醇萃取6次，减压蒸干，即得银杏总内酯；将银杏总内酯用200ml 水溶解，通过D101吸附树脂，吸附时间2h，用300mll0%的乙醇洗脱1-4个柱体积，收集洗 脱液，将收集的洗脱液于55°C，-0. IMPa条件下减压旋转蒸发至干，减压回收溶剂至干，得 白果内酯粗品；将白果内酯粗品用300ml60%乙醇加热至70°C，溶解后趁热过滤，4°C冷藏 放置24h，析出结晶，于60°C真空烘干，即得白果内酯组合物35g。
[0038] 经检测，总银杏酸：HPLC法测定总银杏酸含量小于5ppm。
[0039] 含量：HPLC法测定，按干燥品计算，含白果内酯（C15H180 8) 19. 95g、银杏内酯 A (C2QH2409) 8. 3lg、银杏内酯C (C2QH240n) 4. 98g，且白果内酯、银杏内酯A及银杏内酯C总量大 于 95 %。
[0040] 实施例3用于治疗痴呆症的药物组合物（白果内酯与银杏内酯C)及其制备方法
[0041] 取银杏叶提取物l〇〇g (银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比 为1:2:3:10)，加800ml丙酮萃取3次，减压蒸干，即得银杏总内酯；将银杏总内酯用200ml 水溶解，通过D101吸附树脂，吸附时间0. 5h，用200ml20%的乙醇洗脱1-4个柱体积，收集 洗脱液，将收集的洗脱液于65°C，-0. 09MPa条件下减压旋转蒸发至干，减压回收溶剂至干， 得白果内酯粗品；将白果内酯粗品用400ml40%乙醇加热至60°C，溶解后趁热过滤，4°C冷 藏放置18h，析出结晶，于60°C真空烘干，即得白果内酯组合物37g。
[0042] 经检测，总银杏酸：HPLC法测定总银杏酸含量小于5ppm。
[0043] 含量：HPLC法测定，按干燥品计算，含白果内酯（C15H180 8) 31. 97g、银杏内酯 C (C2QH24On) 3. 55g，且白果内酯、银杏内酯C总量大于95 %。
[0044] 实施例4用于治疗痴呆症的药物组合物（白果内酯与银杏内酯A、银杏内酯C)及 其制备方法
[0045] 取银杏叶提取物100g (银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量 比为3:2:3:8)，加1200ml异丁醇萃取4次，减压蒸干，即得银杏总内酯；将银杏总内酯用 300ml水溶解，通过D101吸附树脂，吸附时间0. 5h，用300ml20%的乙醇洗脱1-4个柱体积， 收集洗脱液，将收集的洗脱液于65°C，-0. 09MPa条件下减压旋转蒸发至干，减压回收溶剂 至干，得白果内酯粗品；将白果内酯粗品用600ml60%乙醇加热至60°C，溶解后趁热过滤， 4°C冷藏放置12h，析出结晶，于60°C真空烘干，即得白果内酯组合物33g。
[0046] 经检测，总银杏酸：HPLC法测定总银杏酸含量小于5ppm。
[0047] 含量：HPLC法测定，按干燥品计算，含白果内酯（C15H180 8) 17. 24g、银杏内酯 A (C2QH2409) 9. 41g、银杏内酯C (C2QH240n) 4. 70g，且白果内酯、银杏内酯A及银杏内酯C总量大 于 95 %。
[0048] 实验例1白果内酯组合物急性毒性研究
[0049] 1.材料与方法
[0050] 1. 1 仪器
[0051] 称量毒麻药品天平：S型METTLER TOLEDO,感量：0. lmg ;编号：GLP146(TC)，瑞士梅 特勒公司。
[0052] 称量大鼠体重天平：型号TP-2101，感量：0. lg，编号：GLP342(A)，北京赛多利斯仪 器系统有限公司。
[0053] 1.2 药品
[0054] 实施例2中制备的白果内酯组合物。
[0055] 银杏叶提取物由黑龙江珍宝岛药业股份有限公司提供，其中银杏内酯A、银杏内酯 B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为5:2:3:10。
[0056] 对比例：参照CN103494802A中的试验例2,银杏内酯AC+白果内酯组[银杏内醋 A (含量：5. Omg/ml)，银杏内醋C (含量：5. Omg/ml)白果内醋（含量：5. Omg/ml)，银杏内酯 AC与白果内酯的重量比为52:48]。
[0057] 1. 3实验动物
[0058] SD大鼠 SPF级，雌雄各半。
[0059] 1. 4 方法
[0060] 1. 4. 1剂量的选择：
[0061] 按照预试验的Dm(最大致死量）和Dn (最小致死量）结果，白果内酯组合物Dm取 1000mg/kg，Dn 取 729mg/kg ;银杏叶提取物 Dm 取 800mg/kg，Dn 取 582mg/kg ;对比例组合 物1000mg/kg，Dn取729mg/kg，采用均衡设计（即剂量组之间相等剂量间距，每组动物数相 等）。
[0062] 在1000mg/kg与729mg/kg之间，按照剂量间距为1:0. 92分成5个组。如果白果 内酯组合物920mg/kg剂量组大鼠在给药后至1000mg/kg剂量组给药前全部死亡，lOOOrng/ kg剂量组大鼠则按照659mg/kg(716mg/kgX0. 92)剂量给药（表1)。
[0063] 在743mg/kg与508mg/kg之间，按照剂量间距为1:0. 92分成5个组。如果银杏叶 提取物680mg/kg剂量组大鼠在给药后至743mg/kg剂量组给药前全部死亡,743mg/kg剂量 组大鼠则按照467mg/kg(508mg/kgX0. 92)剂量给药（表2)。
[0064] 在900mg/kg与667mg/kg之间，按照剂量间距为1:0· 92分成5个组。如果对比例 组合物840mg/kg剂量组大鼠在给药后至900mg/kg剂量组给药前全部死亡，900mg/kg剂量 组大鼠则按照614mg/kg(667mg/kgX0. 92)剂量给药（表3)。
[0065] 表1白果内酯组合物对SD大鼠灌胃给药急性毒性试验剂量设计
[0066]
【权利要求】
1. 一种用于治疗痴呆症的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括白果内酯与 银杏内酯A、C中任一种或两种的组合。
2. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物中： (1) 白果内酯与银杏内酯A的重量比为6-9:1-4;或 (2) 白果内酯与银杏内酯C的重量比为6-9:1-4;或 (3) 白果内酯与银杏内酯A、C的重量比为6-9:1-4:1-4。
3. 根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，所述痴呆症为阿尔茨海默氏症 或脑血管性痴呆症。
4. 权利要求1-3任一项所述药物组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 取银杏叶提取物，用有机溶剂萃取，减压蒸干即得银杏总内酯； 2) 将上述银杏总内酯加水溶解后，加样于D101吸附树脂，吸附时间0.5-2h，然后用 10-20%乙醇洗脱1-4个柱体积，收集洗脱液减压回收至干，得白果内酯粗品； 3) 取上述白果内酯粗品，加入10-80%乙醇，加热溶解，过滤后，于2-10°C放置12-48h， 析出结晶；最后在60°C真空条件下烘干，即得。
5. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述的银杏叶提取物，其中 银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为1-5:1-2:1-3:1-10。
6. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述有机溶剂选自乙酸乙 酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或异丁醇中的一种或两种混 合；有机溶剂的加入量为银杏叶提取物重量的8-20倍。
7. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述有机溶剂为乙酸乙酯 或丙酮，萃取次数为1-6次。
8. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中将收集的洗脱液于 55-65°C，-0. 09?-0. IMPa条件下减压旋转蒸发至干。
9. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中向白果内酯粗品中加入乙 醇，加热至40°C -70°C溶解，趁热过滤。
10. 权利要求1-3任一项所述药物组合物在制备用于改善记忆障碍的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/365GK104042607SQ201410227687
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年5月27日 优先权日:2014年5月27日
【发明者】方同华, 马丽梅, 李振宇, 周广红, 范玉奇, 赵春丽 申请人:黑龙江珍宝岛药业股份有限公司