一种有抗菌及增效抗菌作用的药物组合及制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种中药药物物质组合，及其抗菌和增效抗菌作用。本发明中药药物物质组合由紫苏方经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到，富集了紫苏方中的酚类、生物碱类和二萜醌类成分，同时经过体外和体内抗菌实验验证，具有明显体外抑菌作用，与头孢类抗生素联合使用可提高病原菌对抗生素的敏感性，具有增效抗菌作用。预防性给药后可降低全身感染模型小鼠的死亡率，延长存活时间，提高生活质量。体内体外均显示出较强抗菌活性。
【专利说明】一种有抗菌及增效抗菌作用的药物组合及制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物研究开发领域，涉及一种中药药物物质组合，特别涉及一种具有 抗菌及增效抗菌作用的中药药物物质组合，与可同时制备该组合的方法。
【背景技术】
[0002] 细菌感染给人类健康造成巨大威胁，随着抗生素的长期、大量、不合理使用，细菌 耐药性问题日趋严重，不仅使患者出现不良反应、药源性疾病甚至死亡，以及二重感染的可 能性大大增加，而且加重了患者家庭的经济负担，对国家医疗卫生资源也造成了严重的浪 费。中药是我国独有的天然资源，许多单味中药已得到证实具有明确的体内和体外抗菌活 性，配伍组方后抗菌效果明显提高，同时可通过增强患者免疫力，退热，镇痛，抗炎，止咳，达 到综合全面的治疗效果。与抗生素相比，中药及中药复方在预防和治疗感染病方面有着毒 副作用小，不易产生耐药性等突出优势，故阐明抗感染中药及中药复方的药效物质基础，开 发创新药物具有重要意义和应用价值。
[0003] 本发明以王永炎院士的临床经验方紫苏方为方原，探索发现了一种具有抗菌及增 效抗菌作用的中药药物物质组合，并以药效关联的类型成分及指标性成分为综合考量，建 立了稳定可靠、适合实际生产的同时制备工艺和科学全面的质量控制方法，有利于进一步 创新药物的研发。目前，未见从紫苏方中纯化制备抗菌及增效抗菌药物物质组合的相关报 道，也未见有关该组合物在治疗感染疾病方面的相关研究报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种具有抗菌及增效抗菌作用的药物物质组合，其药物体 系主要由酚类、生物碱类及其萜类组成，
[0005] 本发明的另一个目的在于提供该药物物质组合的中药方原组合，由紫苏梗、紫苏 籽、丹参、黄苳、苦参等组成。
[0006] 本发明的另一个目的在于提供其制备方法及工艺，本发明的第三个目的在于提供 其质量检测及其控制方法。本发明的第四个目的在于提供其体外抗菌及增效抗菌活性，以 及对金黄色葡菌感染小鼠的保护作用。本发明的第五个目的在于提供该中药药物物质组合 物的制品及其在药品、食品领域的应用。
[0007] 本发明的目的是通过如下途径实现的：
[0008] 本发明中药药物物质组合主要由酚类、生物碱类及其萜类组成，可由化学合成、制 备，天然药物提取制备组合制成；本发明的方原可由如下4组药用植物及其代用品种，包括 其药用部位及非药用部位，药材及其饮片组合制成。
[0009] 组1 :紫苏，白苏，五彩苏，夏枯草，迷迭香，东陵草，连钱草，溪黄草，薄荷，泽兰，异 叶青兰，石见穿，山地香茶菜，香薷，肾茶，留兰香等唇形科、紫草科及伞形科植物.
[0010] 组2 :苦参，苦豆子，山豆根，皂荚，沙冬青，等豆科植物。
[0011] 组3 :黄芩，半枝莲，灯盏花，木蝴蝶，小飞蓬，昆仑雪菊，及其同属植物。
[0012] 组4 :丹参，黑骨藤，子宫草，轮叶婆婆纳，及鼠尾草等唇形科鼠尾草属植物。
[0013] 本发明中药药物物质组合，可经上述原料药组合后以乙醇、或其他醇类、稀醇、或 其他有机溶剂或水提取再通过大孔吸附树脂或其他色谱方法，如聚酰胺色谱法等，或溶剂 萃取法等纯化得到。
[0014] 本发明中药药物物质组合可由上述原料药的提取物经进一步富集纯化后或上述 原料药的大孔树脂制备物混合而成。
[0015] 本发明中药药物物质组合可经化学合成或结构修饰，生物合成或生物转等途径获 得。
[0016] 本发明中药药物组合优选由如下原料药制成：
[0017] 紫苏子100-300重量份紫苏梗100-300重量份苦参150-450重量份
[0018] 黄芩150-450重量份丹参250-750重量份。
[0019] 本发明中药药物物质组合的制备方法包括如下步骤：
[0020] 步骤1 :选取上述原料药；
[0021] 步骤2:乙醇提取；
[0022] 步骤3 :大孔吸附树脂纯化；
[0023] 该中药药物物质组合由两部分构成，第一部分为黄棕色至黄褐色粉末，气略清香， 味苦。其中总酚含量为10% -90%，总生物碱含量为2% -20%，黄芩苷含量为6% -50%， 丹酚酸B含量为4 % -50 %，迷迭香酸含量为0. 3 % -3 %，优选总酚含量为50 % -80 %，优选 总生物碱含量为8% -16%，优选黄芩苷含量为20% -50%，优选丹酚酸B含量为14-50%， 优选迷迭香酸含量为1% -3%。由于第一部分酚类占据主要组成故称其为酚类药物物质； 第二部分为暗红色膏状固体，具特殊香气，味淡，称为二萜醌类药物物质。其中丹参酮IIA 含量为0. 1% -10%，优选丹参酮IIA含量为5% -10%。
[0024] 上述步骤2中，将原料药用8-12倍量，0-70%乙醇回流提取1-3次，每次提取1-2 小时。合并两次提取液减压浓缩，至相对密度为I. 15-1. 20g/ml的清膏，加水分散，使上样 液浓度为 〇· 01-0. lg/mL。
[0025] 上述步骤3中，上样液通过大孔吸附树脂，树脂径高比为1 : 4-1 : 10,上样液浓 度为0. 01-0. lg/mL，上样量以全方生药材计为0. 2g/ml-0. 5g/ml，吸附流速为l-4BV/h，水 洗脱0-2倍树脂体积进行除杂，先以40-70%乙醇洗脱0-8倍树脂体积，洗脱流速为2-6BV/ h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得酚类药物物质；再以70-95%乙醇洗脱0-13 倍树脂体积，洗脱流速为2-6BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得二萜醌类药 物物质。
[0026] 上述步骤3中所用大孔吸附树脂优选为AB-8，D101，HPD_100型等弱极性或非极性 大孔树脂。
[0027] 本发明中药药物物质组合，由2部分组成。酚类药物物质中主要包括酚酸类成分 (如丹酚酸B，迷迭香酸等）、含有酚羟基的黄酮类成分（如黄芩苷，汉黄芩苷等）、不含酚羟 基的各种黄酮类成分。此外，酚类药物物质中含有部分生物碱类成分如苦参碱、氧化苦参碱 等,还含有少量其他类型成分。酚类物质百分含量的总和达到50% -80%，生物碱类百分含 量总和为2-16%。二萜醌类药物物质中含有丹参酮II A，隐丹参酮，丹参酮I等脂溶性二 萜醌类成分、小极性的黄酮类成分及其他类型成分，二萜醌类百分含量总和为5-10%。
[0028] 将以上所得两部分中药药物物质进行配伍组合，加入常规辅料，按常规的制剂工 艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液 等。
[0029] 本发明中药药物物质组合由紫苏方经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到，富集 了紫苏方中的酚类成分（生物碱类）和二萜醌类成分，同时经过体外和体内抗菌实验验证， 具有明显体外抑菌作用，与头孢类抗生素联合使用可提高病原菌对抗生素的敏感性，具有 增效抗菌作用。预防性给药后可降低全身感染模型小鼠的死亡率（P < 〇. 05)，延长存活时 间（P < 0. 05)，提高生活质量。体内体外均显示出较强抗菌活性。
[0030] 实验例1本发明体外对金黄色葡萄球菌的抗菌作用及与广谱抗生素头孢克洛联 用后的增效抗菌作用。
[0031] 1实验材料
[0032] I. 1 器材
[0033] 日本三洋高压蒸汽灭菌器型号：MLS_3780(北京得尔贝经贸有限公司），
[0034] HZQ-X100震荡培养箱（中国.哈尔滨市东联电子技术开发有限公司），
[0035] HD-1360洁净工作台（北京东联哈尔仪器制药有限公司）。
[0036] 1. 2实验菌种
[0037] 金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus)购自广东省微生物种质资源库（菌种 保藏编号：26112-10 ;规格：冻干管）。
[0038] 1. 3培养基
[0039] LB培养基：称取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，加 IOOOml去离子水溶 解，以I. Omol/L氢氧化钠溶液调PH约为7. 2,封瓶膜封口，置于高压蒸汽灭菌器内灭菌2h。
[0040] 1.4试剂与药品
[0041] 头孢克洛胶囊（昆明贝克诺顿制药有限公司批号：国药准字H53021942)
[0042] 中药药物物质组合物：由酚类药物物质与二萜醌类药物物质按出膏率比例组合而 成。
[0043] 2实验方法
[0044] 2. 1菌液的制备
[0045] 将金黄色葡萄球菌以（菌液V :培养基V = 1 : 10)的比例接种于LB液体培养 基内，细菌置于37°C培养箱内震荡培养12h。
[0046] 2. 2受试药样品溶液及载药纸片的制备
[0047] 受试药样品溶液：取中药药物物质组合物适量，以去离子水溶解配制成浓度相当 于Ig全方生药量/ml的受试药样品溶液，煮沸灭菌30min后备用，记作Fl。将Fl进行二倍 稀释，煮沸30min灭菌后备用，记作F2。
[0048] 抗生素样品溶液：准确称取头孢克洛胶囊内容物I. 96mg，置于IOml容量瓶中，以 去离子水定容至刻度混匀，过滤灭菌后备用，记作Kl。精密移取Kl溶液5ml于IOml容量瓶 中，以去离子水定容至刻度，过滤灭菌后备用，记作K2。对K2溶液进行二倍稀释，过滤灭菌 后备用，记为K3.
[0049] 载药纸片制备：用打孔器将滤纸打成直径为6mm的圆形纸片若干，于高压蒸汽灭 菌器内灭菌2h，超净工作台内，用移液枪按分组情况移取各药液加于无菌滤纸片上，每张纸 片载药液量为5 μ 1，晾干即得到载药纸片，纸片载药量如下表所示：
[0050] 表1各组别纸片载药量（受试药载药量以全方生药量计）
【权利要求】
1. 一种具有抗菌及增效抗菌作用的中药药物物质组合，其特征在于该中药药物物质组 合的制备方法包括如下步骤： 步骤1 :选取如下原料药： 紫苏子100-300重量份紫苏梗100-300重量份苦参150-450重量份 黄芩150-450重量份丹参250-750重量份。 步骤2 :乙醇回流提取； 步骤3 :弱极性或非极性大孔吸附树脂纯化； 该中药药物物质组合由两部分构成，第一部分为黄棕色至黄褐色粉末，气略清香，味 苦。其中总酚含量为18% -80%，总生物碱含量为2% -16%，黄芩苷含量为6% -50%，丹 酚酸B含量为4% -50%，迷迭香酸含量为0.3% -3%。第二部分为暗红色膏状固体，具特 殊香气，味淡。其中丹参酮IIA含量为0.1%-10%。
2. 如权利要求1所述的中药药物物质组合，其特征在于步骤1中原料药的组成为： 紫苏子 133. 3g 紫苏梗 133. 3g 丹参 333. 3g 苦参 200g 黄芩 200g
3. 如权利要求1或2所述的中药药物物质组合，其特征在于步骤2中，将原料药用8-12 倍量，0-70%乙醇回流提取1-3次，每次提取1-2小时。
4. 如权利要求1或2所述的中药药物物质组合，其特征在于步骤3中，将步骤2所得两 次提取液合并后，减压浓缩，至相对密度为1. 15-1. 20g/ml的清膏，加水分散，使上样液浓 度为 0. 01-0. lg/mL。
5. 如权利要求1或2所述的中药药物物质组合，其特征在于步骤3中，上样液通过弱极 性或非极性大孔吸附树脂，树脂径高比为1 : 4-1 : 10,上样液浓度为0.01-0. lg/mL，上样 量以全方生药材计为0. 2g/ml-0. 5g/ml，吸附流速为l-4BV/h，水洗脱0-2倍树脂体积进行 除杂，先以40-70 %乙醇洗脱0-8倍树脂体积，洗脱流速为2-6BV/h，收集乙醇洗脱液，回收 溶剂，减压干燥，即得酚类药物物质；再以70-95%乙醇洗脱0-13倍树脂体积，洗脱流速为 2-6BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得二萜醌类药物物质。
6. 如权利1-5所述中药药物物质组合其特征在于可由如下4组药用植物及其代用品 种，包括其药用部位及非药用部位，药材及其饮片组合制成. 组1 :紫苏，白苏，五彩苏，夏枯草，迷迭香，东陵草，连钱草，溪黄草，薄荷，泽兰，异叶青 兰，石见穿，山地香茶菜，香薷，肾茶，留兰香等唇形科、紫草科及伞形科植物. 组2 :苦豆子，山豆根，皂荚，沙冬青，苦参等豆科植物。 组3 :半枝莲，灯盏花，木蝴蝶，小飞蓬，昆仑雪菊，黄芩及其同属植物。 组4:黑骨藤，子宫草，轮叶婆婆纳，丹参及鼠尾草等唇形科鼠尾草属植物。
7. 如权利1-5所述中药药物物质组合其特征在于可经上述原料药组合后以乙醇、或其 他醇类、稀醇、或其他有机溶剂或水提取再通过大孔吸附树脂或其他色谱方法，如聚酰胺色 谱法等，或溶剂萃取法等纯化得到。
8. 如权利1-5所述中药药物物质组合其特征在于可由权利6中所述原料药的提取物经 进一步富集纯化后或上述原料药的大孔树脂制备物混合而成。
9. 如权利1-5所述中药药物物质组合其特征在于可经化学合成或结构修饰，生物合成 或生物转等途径获得。
10. 如权利要求1-9所述中药药物物质组合，其特征在于可加入本领域公知的各种药 用辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，也可制成长效和缓释制剂、 控释制剂、靶向制剂等其他传输系统给药制剂。所制得药剂可作为人药、兽药、植物用药使 用或施用。
11. 如权利要求1-9所述中药药物物质组合，其特征在于可加入公知的食品添加剂如 防腐剂、抗氧化剂剂、着色剂、增稠剂和稳定剂、膨松剂、甜味剂、酸度剂、增白剂、香料等制 成具有预防保健功能的保健食品或饮品。
12. 如权利要求1-9任一所述的中药药物物质组合在制备具有抗菌及增效抗菌、抗炎、 解热、镇痛、止咳、化痰药物中的应用。
【文档编号】A61K36/539GK104367633SQ201410229647
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年5月27日 优先权日:2014年5月27日
【发明者】石任兵, 王永炎, 安琪, 彭平, 姜艳艳, 唐雪阳, 卢广英, 温静, 朱乃亮, 王春梅, 张硕峰 申请人:石任兵, 王永炎