一种用于制备抗角膜真菌滴眼剂的组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种用于制备抗角膜真菌滴眼剂的组合物，其包括下述重量份的组分：桂皮醛1~10重量份，尼泊金乙酯0.2~20重量份，其中桂皮醛与尼泊金乙酯的重量比为1∶（0.2~5）。本发明提供的用于制备抗角膜真菌滴眼剂的组合物，可用于治疗镰刀菌属、曲霉菌属、青霉菌属、酵母属等所致的角膜炎及角膜溃疡，适用性强。本发明提供的用于制备抗角膜真菌滴眼剂的组合物，通过配伍实验，筛选出桂皮醛与尼泊金乙酯配伍使用，相较于二者分别使用可显著增强单体的抑菌活性，优于已有的尼泊金油剂，具有明显的协同增效的作用。
【专利说明】一种用于制备抗角膜真菌滴眼剂的组合物
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种药物的组合物，其可用于制备治疗角膜真菌感染的滴眼剂。
【背景技术】
[0002] 真菌性角膜炎是一种病情严重、治疗棘手、致盲率高的眼科感染性疾病。多数患者 因未能得到早期诊治或治疗不及时而导致角膜穿孔、失明，严重者要行眼球摘除。自20世 纪以来，随着发病率的逐年增高，危险性也越来越受重视。国外报道，44%中央角膜溃疡是由 真菌引起的，在我国，发病率近十多年来有明显的增高，植物外伤是导致真菌角膜炎的主要 原因，有一定的季节性和地区性，感染者多为农民。
[0003] 目前，已知真菌性角膜炎的病原菌有70多种，对我国部分地区如在我国广东、河 南、河北、等地进行的流行病学调查显示，致病菌以镰刀菌属、曲霉菌属为主，大部分地区镰 刀菌是首位致病菌，以串珠镰刀菌和茄病镰刀菌占强势地位，其次是曲霉、青霉、念珠菌、弯 孢霉等。
[0004] 由于目前对此病基础研究较少，临床早期诊断及药物治疗缺乏有效的手段，导致 此病预后差，而且治疗棘手。早期准确的诊断和有效的药物治疗是提高治愈率降低致盲率 的关键。
[0005] 尼泊金乙酯(化学名称：对羟基苯甲酸乙酯）：用于食品、化妆品的防腐，具有广谱 的抗菌作用，对G'G+、酵母菌、霉菌均有较好的抑菌作用。1999年发表于中国全科医学的 《尼泊金滴眼剂治疗真菌性角膜溃疡94例临床观察》一文公开了用1%尼泊金乙酯制备的尼 泊金滴眼剂，治疗真菌性角膜炎、溃疡临床取得较好的疗效。
[0006] 桂皮的主要化学成分是挥发油，即桂皮油，它是一种成份复杂的芳香精油。桂皮油 的成份比较复杂，以桂皮醛为主，含量在80%以上，其他还有桂皮酯、丁香酚、桂皮酸等。其 主要活性部分是桂皮醛。桂皮醛临床应用可镇痛解痉、解热，增强血液循环，降低血糖、抗 菌、抗肿瘤等作用。其活性对多种细菌、真菌有抑菌作用，但尚无其作用于角膜真菌的研究 报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种配方简单，具有协同增效作用，可有效预防和治疗角 膜真菌(镰刀菌属、曲霉属、青霉属、酵母属以及各种霉菌）感染所引起的真菌性角膜炎及角 膜溃疡，且安全性好，无毒副作用的用于制备抗角膜真菌滴眼剂的药物组合物。
[0008] 为了达到上述发明的目的，本发明所采用的技术方案为： 本发明的组合物包括下述重量份的组分：桂皮醛1~1〇重量份，尼泊金乙酯〇. 2~20重 量份，其中桂皮醛与尼泊金乙酯的重量比为1 : (0.2飞）。
[0009] 进一步的，本发明的组合物还包括0. f 10重量份的吐温80。
[0010] 进一步的，本发明的组合物通过下述方法制备：将〇. 1~1〇重量份的吐温80加入到 6(T80°C的90(Tl000重量份的生理盐水中，待完全溶解后再加入0. 2?20重量份的尼泊金乙 酯，然后再加入1~1〇重量份的桂皮醛，混合均匀后，静置至室温既得。
[0011] 进一步的，本发明所述的真菌包括镰刀菌属、曲霉属、青霉属或酵母属的真菌。
[0012] 本发明的有益效果为： 本发明提供的用于制备抗角膜真菌滴眼剂的组合物，可用于治疗镰刀菌属、曲霉菌属、 青霉菌属、酵母属等所致的角膜炎及角膜溃疡，适用性强。
[0013] 本发明提供的用于制备抗角膜真菌滴眼剂的组合物，通过配伍实验，筛选出桂皮 醛与尼泊金乙酯配伍使用，相较于二者分别使用可显著增强单体的抑菌活性，优于已有的 尼泊金油剂，具有明显的协同增效的作用。
[0014] 本发明提供的抗曲霉菌药物的中药组合物，其中的吐温80作为增溶剂使用，但是 吐温80的用量仅有0.019Γ1% (重量体积比)，远远低于中国药典中的1~10%的用量，辅料 用量的减少可以降低药物制备成本，增加药效并降低辅料引起的不适。组方中吐温80的用 量为0.01% ~1%，其药效学、安全性均优于1~10%的用量。
【具体实施方式】
[0015] 实施例1 : 桂皮醛： 1克， 尼泊金乙醋：1克。
[0016] 实施例2: 桂皮醛： 1克， 尼泊金乙醋：1克， 吐温80 : 1克。
[0017] 实验例1 检测桂皮醛、尼泊金乙酯及吐温80组合物抗角膜真菌的活性，分别对单体桂皮醛、尼 泊金乙酯的抗角膜真菌活性及组合体桂皮醛、尼泊金乙酯及吐温80抗角膜真菌协同作用 的测定，以氟康唑做对照。
[0018] 试验样品：桂皮醛> 98%，由湖北武汉远程科技有限公司提供，尼泊金乙酯由天津 天泰精细化学品有限公司提供，吐温80由天津红岩化学试剂厂提供，氟康唑由法国辉瑞公 司提供。
[0019] 药物单体：桂皮醛溶于95%乙醇内，配制成10% (重量体积比）药物母液，经0. 2um 过滤器过滤后，分别溶于培养基中制成含桂皮醒lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. 125mg/ ml、0. 0625mg/ml、0. 3125mg/ml、0. 0156mg/ml、0. 0078mg/ml、0. 0039mg/ml 的药物培养基，每 个试管分装5ml放置斜面，凝固后冷藏备用。其中培养基为高压灭菌后的葡萄糖蛋白胨琼 脂基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%琼脂)。
[0020] 尼泊金乙酯溶于95%乙醇内，配制成10% (重量体积比)药物母液，经0. 2um过滤器 过滤后，分别溶于培养基中制成含尼泊金乙酯lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. 125mg/ml、 0· 0625mg/ml、0. 3125mg/ml、0. 0156mg/ml、0. 0078mg/ml、0. 0039mg/ml 的药物培养基，每个 试管分装5ml放置斜面，凝固后冷藏备用。其中培养基为高压灭菌后的葡萄糖蛋白胨琼脂 基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%琼脂)。
[0021] 吐温80溶于95%乙醇内，配制成10% (重量体积比）药物母液，经0· 2um过滤 器过滤后，分别溶于培养基中制成含吐温80 lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. 125mg/ml、 0· 0625mg/ml、0. 3125mg/ml、0. 0156mg/ml、0. 0078mg/ml、0. 0039mg/ml 的药物培养基，每个 试管分装5ml放置斜面，凝固后冷藏备用。其中培养基为高压灭菌后的葡萄糖蛋白胨琼脂 基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%琼脂)。
[0022] 药物组合物：实施例1的药物组合物，分别溶于95%乙醇内，配制成10%药物母液， 经0. 2um过滤器过滤后，分别溶于培养基中制成A (桂皮醛lmg/ml、尼泊金乙酯lmg/ml)、B (桂皮醒〇· 5mg/ml、尼泊金乙酯0· 5mg/ml) 、C (桂皮醒0· 25mg/ml、尼泊金乙酯0· 25mg/ ml)、D(桂皮醒0. 125mg/ml、尼泊金乙酯0. 125mg/ml)、E(桂皮醒0. 0625mg/ml、尼泊金乙酯 0· 0625mg/ml)、F(桂皮醒 0· 03125mg/ml、尼泊金乙酯 0· 03125mg/ml)、G(桂皮醒 0· 0156mg/ ml、尼泊金乙酯 0.0156mg/ml)、Η (桂皮醒 0.0781mg/ml、尼泊金乙酯 0.0781mg/ml)、I (桂 皮醒0. 0039mg/ml、尼泊金乙酯0. 0039mg/ml)的药物培养基，每个试管分装5ml放置斜面， 凝固后冷藏备用。其中培养基为高压灭菌后的葡萄糖蛋白胨琼脂基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、 2%琼脂）。
[0023] 实施例2的药物组合物，分别溶于95%乙醇内，配制成10%药物母液，经0. 2um过滤 器过滤后，分别溶于培养基中制成A(桂皮醒lmg/ml、尼泊金乙酯lmg/ml、吐温801mg/ml)、B (桂皮醒〇· 5mg/ml、尼泊金乙酯0· 5mg/ml、吐温80 0· 5mg/ml)、C(桂皮醒0· 25mg/ml、尼泊金 乙酯 0.25mg/ml、吐温 80 0.25mg/ml)、D (桂皮醒 0.125mg/ml、尼泊金乙酯 0.125mg/ml 吐 温 80 0· 125mg/ml)、E (桂皮醛 0· 0625mg/ml、尼泊金乙酯 0· 0625mg/ml、吐温 80 0· 0625mg/ ml)、F (桂皮醛 0.03125mg/ml、尼泊金乙酯 0.03125mg/ml、吐温 80 0.03125mg/ml)、G (桂 皮醒 0· 0156mg/ml、尼泊金乙酯 0· 0156mg/ml、吐温 80 0· 0156mg/ml)、H(桂皮醒 0· 00781mg/ ml、尼泊金乙酯 0.00781mg/ml、吐温 80 0.0078mg/ml)、I (桂皮醒 0.0039mg/ml、尼泊金乙 酯0. 0039mg/ml、吐温80 0. 0039mg/ml)的药物培养基，每个试管分装5ml放置斜面，凝固 后冷藏备用。其中培养基为高压灭菌后的葡萄糖蛋白胨琼脂基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%琼 脂)。
[0024] 对照组：氟康唑溶于95%乙醇内，配制成10% (重量体积比)药物母液，经0. 2um过 滤器过滤后，分别溶于培养基中制成含桂皮醒lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. 125mg/ml、 0· 0625mg/ml、0. 3125mg/ml、0. 0156mg/ml、0. 0078mg/ml、0. 0039mg/ml 的药物培养基，每个 试管分装5ml放置斜面，凝固后冷藏备用。其中培养基为高压灭菌后的葡萄糖蛋白胨琼脂 基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%琼脂)。
[0025] 受试菌种： 均来自河北医科大学第二医院真菌室保存菌株，均为致病菌株(直接是从患者角膜溃 疡表面刮取分泌物，直接镜检可见分枝状菌丝，再经培养鉴定获取受试菌种)。
[0026] 菌种接种： 挑取已转接活化的菌株，加入〇. 85%氯化钠溶液中，用血细胞计数板将菌悬液浓度调 节为lX105~6CFU/ml。每个试管药基内接种100ul菌悬液，每个浓度接种2管，同时用葡萄 糖蛋白胨琼脂基作对照，置36°C恒温箱内，每日观察生长情况，并记录，7天判读结果。
[0027] MIC值的判读：将每管生长的情况与阳性及阴性对照管相比较，以最低药物浓度 无培养物生长的药基管为MIC终点。
[0028] MFC测定：取葡萄糖蛋白胨液基2ml，分别加入抑菌试验无菌生长的试管中2h，震 荡后取出lOOul接种于沙氏培养基内36°C孵育7天，以最低浓度无生长为MFC终点。
[0029] FIC(分数抑菌浓度)的确定：为联合用药时各药的MIC值分别除以单独用药时MIC 值的商的和。即：
【权利要求】
1. 一种用于制备抗角膜真菌滴眼剂的组合物，其特征在于其包括下述重量份的组分： 桂皮醛： 1~10重量份 尼泊金乙酯：0.2?20重量份 其中桂皮醛与尼泊金乙酯的重量比为1 : (0.2飞）。
2. 根据权利要求1所述的一种用于制备抗角膜真菌滴眼剂的组合物，其特征在于其还 包括〇.广10重量份的吐温80。
3. 根据权利要求2所述的一种用于制备抗角膜真菌滴眼剂的组合物，其特征在于其通 过下述方法制备：将〇. 1~1〇重量份的吐温80加入到6(T80°C的90(Tl000重量份的生理盐 水中，待完全溶解后再加入〇. 2~20重量份的尼泊金乙酯，然后再加入1~10重量份的桂皮 醛，混合均匀后，静置至室温既得。
4. 根据权利要求3所述的一种用于制备抗角膜真菌滴眼剂的组合物，其特征在于所述 的真菌包括镰刀菌属、曲霉属、青霉属或酵母属的真菌。
【文档编号】A61P31/10GK104083355SQ201410318881
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月7日 优先权日:2014年7月7日
【发明者】王刚生 申请人:王刚生