一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用，属于生物化学领域。所述方法通过将绣球菌子实体粉末先经稀碱提取粗多糖，再用蒸馏水配制成5％糖液，加入10％三氯乙酸调节其pH值后静置离心、醇析、洗涤后得到去蛋白碱溶多糖。本发明通过绣球菌碱溶多糖对果蝇寿命的影响的研究，表明不同浓度的绣球菌碱溶粗多糖与去蛋白碱溶多糖对果蝇的寿命均有延长作用，具有抗衰老的作用，而且对雄果蝇寿命延长的效果高于雌性。
【专利说明】-种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物化学领域，特别涉及一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老 活性的应用。
【背景技术】
[0002] 绣球菌（Sparassis crispa化.），属无隔担子菌亚纲、无權菌目、绣球菌科、绣球 菌属，其子实体肉质洁白细嫩，鲜美可口，营养丰富，是一种非常珍稀名贵的食、药用菌。多 糖是绣球菌重要的活性成分，具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂等药理活性，对于绣球 菌碱溶多糖抗衰老活性的研究却很少见。
【发明内容】
[0003] 为了解决现有技术的问题，本发明实施例提供了一种绣球菌碱溶多糖的提取方法 及其抗衰老活性的应用。所述技术方案如下：
[0004] -方面，提供了一种绣球菌碱溶多糖的提取方法，所述方法包括W下步骤：
[0005] (1)碱溶粗多糖提取
[0006] 将绣球菌子实体粉末经加水溶胀过夜、水浴提取3次每次化后离也，所得残渣经 细胞破碎仪破壁l〇min、0. Imol/mL氨氧化轴提取3次每次化后再次离也，合并上清液，用 0. Imol/mL盐酸中和后浓缩至lOmU将浓缩液用3倍体积无水己醇进行醇沉过夜离也，向沉 淀中添加无水己醇、己離进行洗涂，待离也后将沉淀进行干燥，即得碱溶粗多糖。
[0007] (2)碱溶粗多糖纯化
[0008] 精确称量碱溶粗多糖，用蒸觸水配制成5%糖液，加入10%H氯己酸调节其抑值 至3,静置过夜，W 50(K)r/min离也lOmin，在上清液中加入4倍体积的95%己醇再静置过 夜，离也，向沉淀中添加无水己醇、己離洗涂，洗涂过后于真空干燥器中干燥，即得去蛋白碱 溶多糖。
[0009] 另一方面，提供了一种绣球菌碱溶多糖抗衰老活性的应用，所述应用为绣球菌碱 溶多糖对果禍寿命的影响，具体方法包括；将成熟果禍装入含有基础培养基的50mLH角瓶 内交配产卵，形成蛹时除去亲本禍，收取lOh内羽化的果禍，用己離将其麻醉后，分出雌雄， 挑取体型大小相近的果禍进行分组；将选取好的雌雄果禍平均置入基本培养瓶和含有质量 浓度为0. 2?5. Og/L的绣球菌碱溶多糖的培养瓶中，每个培养瓶放入15只果禍，雌雄分瓶 培养，W基本培养瓶为空白对照组，W多糖组为试验组；多糖组的果禍在基础培养基中培养 到第14天后，转到含不同浓度多糖提取物的培养基中培养直至其全部死亡，其中每隔4d更 换新鲜的培养基。
[0010] 所述培养瓶中绣球菌碱溶多糖的质量浓度为0. 2g/L。
[0011] 有益效果：本发明不同浓度的绣球菌碱溶粗多糖与去蛋白碱溶多糖对果禍的寿命 均有延长作用，具有抗衰老的作用，而且对雄果禍寿命延长的效果高于雌性。
【具体实施方式】 [001引 实施例
[0013] 一、绣球菌碱溶多糖的提取方法
[0014] 所述方法包括W下步骤：
[0015] (1)碱溶粗多糖提取
[0016] 将绣球菌子实体粉末经加水溶胀过夜、水浴提取3次每次化后离也，所得残渣经 细胞破碎仪破壁l〇min、0. Imol/mL氨氧化轴提取3次每次化后再次离也，合并上清液，用 0. Imol/血盐酸中和后浓缩至lOmL，将浓缩液用3倍体积无水己醇进行醇沉过夜离也，继续 向沉淀中添加无水己醇、己離进行洗涂，待离也后将沉淀进行干燥，即得；
[0017] (2)碱溶粗多糖纯化
[0018] 精确称量碱溶粗多糖，用蒸觸水配制成5%糖液，加入10%H氯己酸调节其抑值 至3,静置过夜，W 500化/min离也lOmin，在上清液中加入4倍体积的95 %己醇再静置过 夜，离也，向沉淀中添加无水己醇、己離洗涂，洗涂过后于真空干燥器中干燥，即得去蛋白碱 溶多糖。
[0019] 二、多糖含量测定-苯酷-硫酸法
[0020] 多糖含量的测定方法；精确称量水溶、碱溶和酸溶多糖5 y g，分别定容至50mL容 量瓶中备用。各取ImL于相应的试管中，采用苯酷-硫酸法，在490nm波长处测定吸光度， 用回归方程计算出样品中多糖含量和得率，计算方法如下：
[0021] 多糖得率=粗多糖含量/原料重量X 100%
[0022] 本实施例中精确称取lOg绣球菌粉末，采用碱提法提取绣球菌碱溶多糖。通过H 氯己酸法脱蛋白后，得到去蛋白碱溶多糖。根据苯酷-硫酸法，得葡萄糖回归方程为：A = 0. 0094C+0. 019(R2 = 0. 9975)。计算多糖含量和得率见表1。由表1可W得知，绣球菌碱溶 多糖含量随着H氯己酸法脱蛋白后有所增加，而多糖得率却减少。
[0023] 表1绣球菌碱溶多糖含量与得率的测定
[0024]
【权利要求】
1. 一种绣球菌碱溶多糖的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1) 碱溶粗多糖提取 将绣球菌子实体粉末经加水溶胀过夜、水浴提取3次每次2h后离心，所得残渣经细 胞破碎仪破壁10min、0. Imol/mL氢氧化钠提取3次每次2h后再次离心，合并上清液，用 0. Imol/mL盐酸中和后浓缩至10mL，将浓缩液用3倍体积无水乙醇进行醇沉过夜离心，向沉 淀中添加无水乙醇、乙醚进行洗涤，离心后将沉淀进行干燥，即得碱溶粗多糖。 (2) 碱溶粗多糖纯化 精确称量碱溶粗多糖，用蒸馏水配制成5%糖液，加入10%三氯乙酸调节其pH值至3， 静置过夜，以500〇1'/1^11离心1〇1^11，在上清液中加入4倍体积的95(%乙醇再静置过夜，离 心，向沉淀中添加无水乙醇、乙醚洗涤，洗涤过后于真空干燥器中干燥，即得去蛋白碱溶多 糖。
2. -种绣球菌碱溶多糖的抗衰老活性的应用，其特征在于，所述应用为绣球菌碱溶多 糖对果蝇寿命的影响，具体方法包括：将成熟果蝇装入含有基础培养基的50mL三角瓶内交 配产卵，形成蛹时除去亲本蝇，收取l〇h内羽化的果蝇，用乙醚将其麻醉后，分出雌雄，挑取 体型大小相近的果蝇进行分组；将选取好的雌雄果蝇平均置入基本培养瓶和含有质量浓度 为0. 2?5. Og/L绣球菌碱溶多糖的培养瓶中，每个培养瓶放入15只果蝇，雌雄分瓶培养， 以基本培养瓶为空白对照组，以多糖组为试验组；多糖组的果蝇在基础培养基中培养到第 14天后，转到含不同浓度多糖提取物的培养基中培养直至其全部死亡，其中每隔4d更换新 鲜的培养基。
3. 根据权利要求2所述的绣球菌碱溶多糖的抗衰老活性的应用，其特征在于，所述培 养瓶中绣球菌碱溶多糖的质量浓度为〇. 2g/L。
【文档编号】A61P39/00GK104448014SQ201410659420
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月7日 优先权日:2014年11月7日
【发明者】张丽霞, 武燕, 卞立红, 张志国, 兰天丽 申请人:大庆师范学院