一种具有糖、脂代谢调节活性的滇黄精多糖提取物及其制备方法
【专利摘要】本发明滇黄精多糖的提取方法及用途，以滇黄精为原料，洗净切片，自然晒干后，打成粗粉。用蒸馏水提取三次后浓缩到一定浓度，用无水乙醇沉淀得黄精多糖粗品。用蒸馏水溶解，加入α-淀粉酶去淀粉，再用无水乙醇沉淀后分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤去脂溶性成分，得到黄色粉末。去离子水溶解后用Sevage法去蛋白，挥去有机溶剂后透析，最后冷冻干燥即得白色粉末的黄精多糖。得到的多糖用于制作片剂，具有降血压降血脂血糖的作用。
【专利说明】一种具有糖、脂代谢调节活性的滇黄精多糖提取物及其制 备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药提取领域，具体涉及一种滇黄精多糖的提取物及其制备方法。 [0002]
【背景技术】
[0003] 黄精是我国重要的药食两用资源，《中国药典》2010版收载黄精为百合科黄精属植 物漠黄精Polygonatum kingianum Coll. Et Hemsl.黄精P. sibiricum Red.或多花黄精 P. cyrtonema Hua的干燥根茎，分别习称"大黄精""鸡头黄精"或"姜形黄精"。
[0004] 滇黄精在云南蕴藏量大，《滇南本草》、《云南植物志》等中均有其药用记载，是重要 的"云药"品种，也是产量及市场份额最大的一个黄精品种，具有广泛的临床应用基础及良 好的深入开发前景。
[0005] 滇黄精多糖一直被认为是滇黄精中主要的化学成分类型，也是《中国药典》2010版 中规定对滇黄精进行质量控制的化学成分。现研究表明滇黄精多糖具有降血糖降血脂以及 增强人体免疫功能。
[0006] 常规的多糖提取方法主要为粉碎药材、脱脂、脱色后，用水提醇沉的方法得到黄精 多糖粗品，多糖的精制过程通常为离子交换、凝胶过滤及过层析柱后浓缩、冷冻干燥而得。 上述多糖制备方法存在以下不足：首先，药材脱脂过程中频繁受热，多糖损耗较多，影响多 糖的提取率；其次，脱脂、脱色过程复杂，时间长，成本高，难以规模化生产；此外，常规方法 制备所得的多糖含杂质较多，多含有大分子物质如蛋白质、淀粉及酚类物质等，小分子物质 葡萄糖及果糖等。
[0007]
【发明内容】
[0008] 本发明黄精多糖提取的原料为滇黄精，制片剂的原料是滇黄精多糖。
[0009] 本法特点： 1.所提粗多糖中常常含有大分子蛋白质、无机盐、木质素、色素及醇不溶的小分子有 机物等杂质。本方法采用一次水提加多次醇沉的方法结合冷冻干燥，过程中除去了大分子 物质淀粉、蛋白质及小分子物质等，最后一步透析除去无机小分子，挥去有机物质后冷冻干 燥得到较纯的白色的黄精多糖。
[0010] 2.本法初提精制过程中避免了多糖颜色的变化，粗提精制过后得率为13%，黄精 多糖为白色，紫外分光光度法检测精制多糖280nm处无吸收，即不含蛋白。用蒽酮-硫酸法 测定多糖含量为85%以上。
[0011] 3.本法适用于用80%乙醇提取皂苷后回收的滇黄精粗粉，将回收的滇黄精粉末 自然晾干以后，用本法继续提取多糖，提取率为9%。实现了资源回收再利用。
[0012] 4.本法得到的黄精多糖用于制备黄精多糖片剂，含糖量为10%，药理证明，黄精多 糖具有降低甘油三酯（TG)、胆固醇（TC)、血糖及提高糖耐量的作用。
[0013] 具体方法如下： 以滇黄精为原料，洗净切片，自然晒干后，打成粗粉；取500-1000g，用6-10倍量的蒸馏 水提取三次，过滤，合并滤液后浓缩到含I. 2g/ml的原生药，放置室温；在浓缩液中加入4倍 量的无水乙醇，静置24h后于4000r/min条件离心10-20min，分离沉淀物，得黄精多糖粗品； 用蒸馏水溶解，加入α -淀粉酶去淀粉；再用4倍量无水乙醇沉淀，加入4倍量的无水乙醇， 静置24h后于4000r/min条件离心10-20min，分离沉淀物，分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤 去脂溶性成分，室温挥掉有机溶剂，得到黄色粉末；再用去离子水溶解后用Sevage法去蛋 白，挥去有机溶剂后进行流水透析2天，去离子水透析1天，最后冷冻干燥即得白色粉末的 黄精多糖。
[0014] 所述的去淀粉步骤具体为：加入α -淀粉酶充分搅拌后于50°C水浴锅中水解淀粉 至碘化钾溶液不变蓝为止；之后直接用沸水浴灭活α -淀粉酶5min ;放至室温，离心弃杂。
[0015] 所述的Sevage法去蛋白的具体步骤为：用去离子水溶解配成5%的溶液后加入氯 仿-正丁醇=4:1，充分震荡萃取后于4000r/min条件下离心lOmin，分离取出上清液，除蛋 白。
[0016]
【专利附图】
【附图说明】
[0017] 图1标准曲线图 图2细胞TC含量图 图3细胞TG含量 图中，***表示模型组与正常组相比P〈〇. Ol ;###表示给药组与模型组相比P〈〇. 01。 CON :正常组MOD :模型组GL :多糖低剂量组GM :多糖中剂量组GH :多糖高剂量组LGLT : 罗格列酮中剂量组
【具体实施方式】
[0018] 实施例1 将生滇黄精洗净自然晒干，晒干后干品得率为20%，将滇黄精打成粗粉，取IOOg粉末， 分别用12倍量、10倍量、8倍量蒸馏水提取，提取时间分别为I. 5h、lh、0. 5h，提取温度设为 80°C。合并三次提取液，浓缩浓度为lg/ml(原生药)。用4倍量无水乙醇沉淀24h后过滤， 滤渣用蒸馏水溶解，加入α -淀粉酶去淀粉，再用4倍量无水乙醇沉淀，相同条件下离心取 沉淀物，分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤去脂溶性成分，室温通风干燥，挥掉有机溶剂，得 到黄色粉末湿重含量为67. 2g。粉末用蒸馏水溶解，后用Sevage法去蛋，挥去有机溶剂后进 行流水透析2天，去离子水透析1天，最后冷冻干燥即得白色粉末的黄精多糖含量为13. 7g。
[0019] 实施例2 将实验室用80%乙醇提取皂苷后回收的滇黄精粉末，自然烘干后，称取100g，用上述同 样的方法提取精制，粗提后得到的多糖湿重44g。精制过后冷冻干燥得9 g。
[0020] 实施例3 滇黄精多糖片剂的制备：以重量份计，以千克为单位，分别称取：滇黄精多糖100份、木 糖醇300份、糊精250份、微晶纤维素250份、甲壳素50份、柠檬酸25份、硬脂酸镁25份。
[0021] 将上述滇黄精多糖、木糖醇、糊精、微晶纤维素、甲壳素充分混合，用水润湿，制软 材，过筛、干燥后整粒，加入柠檬酸、硬脂酸镁，混合后压片，每片重250mg，活性成分滇黄精 多糖含25mg。
[0022] 本发明滇黄精总多糖具有降低脂甘油三酯和胆固醇的作用，具有一定的α糖苷 酶抑制率，结果表明，黄精多糖可用于预防和调节糖脂代谢紊乱。
[0023] 实施例4 1.蒽酮-硫酸法测定滇黄精多糖纯度 1. 1对照品及样品的制备 精密称定于105°c干燥至恒重的无水葡萄糖对照品50mg，置IOOmL容量瓶中，加水溶解 并稀释至刻度，摇匀，得〇. 5mg/mL的标准品溶液；精密称取滇黄精多糖粉末lOOmg，置IOOmL 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得lmg/mL的样品溶液。
[0024] 1.2标准曲线的制定 精密量取对照品溶液〇. lmL，0. 2mL，0. 3mL，0. 4mL，0. 5mL，0. 6mL分别置于IOmL试管中， 各加蒸馏水至2. OmL，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0. 2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，摇匀，放冷 后置水浴中保温10分钟，取出，以不加样品为空白，用紫外分光光度法于582nm处测定吸光 度。结果如表1，图1.
【权利要求】
1. 滇黄精多糖的提取方法，其特征在于： 以滇黄精为原料，洗净切片，自然晒干后，打成粗粉；取500-1000g，用6-10倍量的蒸馏 水提取三次，过滤，合并滤液后浓缩到含1. 2g/ml的原生药，放置室温；在浓缩液中加入4倍 量的无水乙醇，静置24h后于4000r/min条件离心10-20min，分离沉淀物，得黄精多糖粗品； 用蒸馏水溶解，加入a -淀粉酶去淀粉；再用4倍量无水乙醇沉淀，加入4倍量的无水乙醇， 静置24h后于4000r/min条件离心10-20min，分离沉淀物，分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤 去脂溶性成分，室温挥掉有机溶剂，得到黄色粉末；再用去离子水溶解后用Sevage法去蛋 白，挥去有机溶剂后进行流水透析2天，去离子水透析1天，最后冷冻干燥即得白色粉末的 滇黄精多糖。
2. 如权利要求1所述的滇黄精多糖的提取方法，其特征在于：所述的去淀粉步骤具体 为：加入a _淀粉酶充分搅拌后于50°C水浴锅中水解淀粉至碘化钾溶液不变蓝为止；之后 直接用沸水浴灭活a -淀粉酶5min ;放至室温，离心弃杂。
3. 如权利要求1所述的滇黄精多糖的提取方法，其特征在于：所述的Sevage法去蛋白 的具体步骤为：用去离子水溶解配成5%的溶液后加入4:1氯仿-正丁醇，充分震荡萃取后 于4000r/min条件下离心lOmin，分离取出上清液，除蛋白。
4. 权利要求1-3任意一项所述的滇黄精多糖的提取方法获得的滇黄精多糖。
5. -种滇黄精多糖药物制剂，其特征在于：将权利要求4所述的滇黄精多糖作为活性 成分制备得到药物制剂。
6. 如权利要求5所述的一种滇黄精多糖片剂，其特征在于：以重量份计，以千克为单 位，原料为滇黄精多糖100份、木糖醇300份、糊精250份、微晶纤维素250份、甲壳素50份、 柠檬酸25份、硬脂酸镁25份。
7. -种滇黄精多糖片剂，其特征在于：包含滇黄精多糖及药学上可接受的辅料。
【文档编号】A61P3/10GK104479035SQ201410677935
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年11月24日 优先权日:2014年11月24日
【发明者】俞捷, 赵荣华, 闫鸿丽 申请人:云南中医学院