免疫球蛋白的雾化的制作方法

本发明涉及一种产生用于治疗目的的气雾剂的方法。更具体地，本发明涉及一种雾化含有免疫球蛋白(Ig)的组合物的方法，所述免疫球蛋白特别是多克隆免疫球蛋白，如免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)或免疫球蛋白M(IgM)或其组合。

发明背景

免疫球蛋白(Ig)是人血浆的组分，其在免疫反应中起着重要作用。这些特定的免疫蛋白通过B-淋巴细胞合成并且可以在所有脊椎动物的血浆、淋巴和其他身体分泌物中找到。免疫球蛋白构成大约20％的人血浆蛋白。三种免疫球蛋白类别，IgG、IgA和IgM，比其他的更重要。人IgG代表血浆中最丰富的免疫球蛋白，而IgA表示外部分泌物(如唾液、泪液以及呼吸道和肠道的粘液)中的主要抗体类别。IgA形成对抗细菌和病毒病原体的第一道防线之一。迄今为止，IgM是人循环系统中外观上最大的抗体，早期出现在感染过程中，并且通常在进一步暴露后再出现，但程度较低。

在上一世纪，免疫球蛋白制剂成功用于传染病的治疗，作为原发性免疫缺陷疾病患者中的替代疗法，并且用于各种炎性和自身免疫病症以及某些神经障碍的预防和治疗。研发这些免疫球蛋白制剂用于全身给药，并且大部分由IgG组成。目前，这些制剂源自上千名健康供体(1,000至60,000名供体)的集合血浆，并且含有特异性和天然抗体，反映出供体群的累积抗原经历。这种大的特异性和天然抗体谱可以识别宽范围的抗原(例如，病原体、外源抗原和自体/自身抗原)。

通常，免疫球蛋白通过静脉内或皮下给药。一些商业制剂可用于这些给药途径。此外，已经提出了免疫球蛋白的局部给药，更具体地，给药于呼吸道(包括上呼吸道：鼻和鼻通道、鼻旁窦、喉咙、口咽、咽、喉、咽喉和气管；以及下呼吸道：呼吸气道、肺、分支、支气管和细支气管、呼吸细支气管、肺泡管、肺泡囊和肺泡)。

例如，US 4,994,269描述了一种用于局部给药铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)抗体的方法。所述抗体可以以气雾剂的形式给药，例如，通过施用于鼻，作为气雾剂施用于肺或通过气管内给药。

WO 92/01473描述了一种方法，其包括将针对主要保护性病毒表面抗原上存在的各种保护性抗原位点的特异性单克隆抗体的混合物的小颗粒(<2μm)气雾剂给药至易感宿主的下呼吸道中。

在Rimensberger和Roth(“Physical Properties of Aerosolized Immunoglobulin for Inhalation Therapy”,Journal of Aerosol Medicine,Vol.8(3),pp 255-262,1995)中，用四个压缩空气雾化器评价了免疫球蛋白溶液(IVIG)的雾化。

US 2002/0136695描述了通过计量吸入器或雾化器的免疫球蛋白A的气雾剂给药，用于预防或治疗包括免疫缺陷和感染的疾病。

WO 03/059424描述了一种控制器，其可以基于具有识别标志物/标记的雾化器的内含物的性质，控制气雾剂发生器。这种系统可以用于几种药物组的雾化。抗体作为药物组中的一种被提及。

WO 2004/004798描述了用于治疗剂全身给药的方法和组合物，通过将含有抗体或治疗剂与FcRn结合伴侣的缀合物的气雾剂给药于肺中央气道的上皮。所述方法和产品具有不需要为了实现全身递送而给药于深肺的优点。提出了具有不同工作原理的气雾剂发生器的使用。

WO 2006/122257描述了使用抑制补体系统的激活并且能够用于预防或治疗肺部疾病或病症的抗体的方法和组合物。提出了将不同的雾化器类型用于单克隆抗体的给药。

WO 2011/098552描述了用于制备免疫球蛋白单可变结构域的气雾剂的方法，其中使聚集物形成的量显著降低。

尽管这些文献提出了几种施用不同类型的抗体的方法，但仍然需要一种以特别快速和有效的方式雾化多克隆Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)的方法。

因此，本发明的目的是提供一种用于产生含有多克隆Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)的组合物的气雾剂的方法，以将多克隆Ig以有效方式递送至患者的呼吸道，例如，气雾剂发生器递送剂量(DD)可以为至少40％，或优选至少50％，可吸入颗粒(5μm以下MMD的颗粒大小)应当为至少70％或优选至少80％，以及气雾剂产生后贮液器中所含流体的起泡特征和残留体积可以降低，例如，低于1.0mL或优选低于0.5mL，或更优选低于0.3mL。

发明概述

本发明提供了一种产生气雾剂的方法，包括下列步骤：(a)提供包括多克隆Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)的液体含水组合物，其中Ig的浓度在20至200mg/mL的范围中；(b)提供具有存储器的膜雾化器，向所述存储器中装入所述组合物和(c)使用雾化器将所述组合物雾化，以获得气雾剂(气雾剂产生)。

在优选的实施方案中，Ig是多克隆的。优选地，Ig是多克隆IgG、多克隆IgA、多克隆二聚IgA、多克隆IgM或其组合。在一些实施方案中，组合物可以另外包含分泌组分，优选重组产生的人分泌组分。

在特定的实施方案中，所述液体含水组合物中的Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)的浓度在20至100mg/mL的范围中。此外，所述组合物可以包括稳定剂。所述稳定剂可以是脯氨酸。其他赋形剂，如表面活性剂，也可以包含在所述组合物中。

在特别的实施方案中，雾化器存储器与大气隔离，使得存储器内部的压力在步骤(c)之前或期间降低。在优选实施方案中，雾化器是振动膜雾化器。在某些实施方案中，雾化器特别适用于产生靶向下呼吸道和/或上呼吸道的气雾剂。

在一个方面中，本发明的方法产生含有至少40％，优选至少50％，更优选至少60％装在存储器中的Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)剂量的气雾剂。在另一个方面中，所述方法产生其中Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)的活性为装在存储器中的组合物中的活性的至少60％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少90％的气雾剂。

基于以下的详细描述、实施例和权利要求，本发明的更多实施方案将变得显而易见。

附图简述

图1显示了可以用于本发明中的已知膜雾化器的示意图。

图2显示了可以用于本发明中的已知膜的计算机断层摄影(CT)图。

图3显示了在还原(A)和非还原(B)条件下，通过SDS-PAGE的非雾化和雾化IgG组合物(Privigen^TM)的结构分析结果。

图4显示了在还原(A)和非还原(B)条件下，通过SDS-PAGE的非雾化和雾化IgG(在PBS或甘氨酸中)、IgA和IgAM组合物的结构分析结果。(C)显示了还原(左图)和非还原(右图)条件下更多IgA(p，q)、IgAM(r，s)、SIgAM(t，u)和IgG(v，w，x，y)的SDS-PAGE。

图5显示了雾化前(-)和雾化后(N)不同制剂与肺炎链球菌(S.pneumonia)的结合。

图6显示了雾化对不同制剂活性的影响，雾化前和雾化后对上皮细胞单层的福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)感染的各个方面的影响：(A)对上皮细胞应答单独的福氏志贺氏菌(C+)或与各种免疫球蛋白制剂的未雾化(-)或雾化(N)制剂的复合物的炎性细胞因子分泌的影响；(B)单独的福氏志贺氏菌感染(C+)或与各种免疫球蛋白制剂的未雾化(-)或雾化(N)制剂的复合物对细胞单层的经上皮膜抗性的影响；(C)单独的福氏志贺氏菌(C+)或与各种免疫球蛋白制剂的未雾化(-)或雾化(N)制剂的复合物感染后的感染面积(左图)和感染灶数量(右图)。

图7显示了雾化免疫球蛋白制剂的肺沉积，及其在动物模型的BAL中存在的时间过程。

图8显示了用抗γ链(a)、抗α链(b)和抗μ链(c)探测，在时间0、1小时、6小时、12小时和24小时时获取的BAL样品的Wes tern印迹。

发明详述

本发明的方法是一种通过雾化液体含水组合物产生气雾剂的方法。液体含水组合物是液体系统，其中液体载体或溶剂主要由或完全由水组成。在特定的情况下，液体载体可以含有小部分的一种或多种至少部分与水混溶的液体。

所述组合物包括多克隆免疫球蛋白，其通常从人供体的血浆获得。优选地，将来自多名供体的血浆集合，例如，来自超过100名供体，优选来自超过500名供体，甚至更优选来自超过1,000名供体。通常，使血浆集合接受乙醇分级，接着接受几个纯化步骤，如进一步的沉淀步骤和/或柱色谱步骤，以及灭活和除去病毒和其他病原体的步骤，如纳滤或溶剂/去污剂处理。

所述组合物包括多克隆免疫球蛋白，其也称为Ig。这样的多克隆Ig，例如IgG、IgA、IgM或其组合，可以从人血液供体的血浆获得。正常的人IgG可以获得至少95％IgG的纯度。因此，在一个实施方案中，用于根据本发明的方法中的组合物中含有的IgG具有至少95％IgG，优选至少96％IgG，更优选至少98％IgG，甚至更优选至少99％IgG的纯度。优选只含有少量IgA。例如，在一个实施方案中，所述组合物最大含有25μg IgA/mL。

在另一个特定的实施方案中，所述组合物包括具有至少90％，优选至少92％，更优选至少94％，甚至更优选至少96％，最优选至少98％纯度的IgA。优选地，从人血浆纯化IgA；然而，也可以使用其他来源，如奶、唾液或其他含有IgA的体液的IgA。在另一个特定的实施方案中，IgA是单体IgA。在再另一个特定的实施方案中，IgA富含二聚IgA；优选至少20％的IgA是二聚形式，更优选至少30％，甚至更优选至少40％，最优选至少50％。任选地，IgA组合物可以另外包括分泌组分，优选重组产生的分泌组分。例如，可以使用如WO2013/132052中公开的组合物，将其全部并入作为参考。

在再另一个特定的实施方案中，所述组合物包括IgM。在一个实施方案中，组合物包括IgM和IgA。在优选的实施方案中，组合物包括IgM和二聚IgA，其还包括J-链。任选地，组合物还可以包括分泌组分，优选重组产生的分泌组分。在再另一个实施方案中，所述组合物包括IgM、IgA和IgG。在特定的实施方案中，这样的组合物可以含有76％IgG、12％IgA和12％IgM。

在本发明的方法中，使用相对高浓度的Ig，例如IgG、IgA、IgM或其组合。更特别地，Ig(尤其是IgG、IgA、IgM或其组合)的浓度范围为20至200mg/mL。优选地，浓度范围为20至190mg/mL，20至180mg/mL，20至170mg/mL，20至160mg/mL，20至150mg/mL，30至200mg/mL，30至190mg/mL，30至180mg/mL，30至170mg/mL，30至160mg/mL，30至150mg/mL，40至200mg/mL，40至190mg/mL，40至180mg/mL，40至170mg/mL，40至160mg/mL，40至150mg/mL。更优选地，浓度范围为20至140mg/mL，20至130mg/mL，20至120mg/mL，30至140mg/mL，30至130mg/mL，30至120mg/mL，40至140mg/mL，40至130mg/mL，40至120mg/mL，50至140mg/mL，50至130mg/mL，50至120mg/mL，甚至更优选地，浓度为约50mg/mL，60mg/mL，70mg/mL，80mg/mL，90mg/mL，100mg/mL，110mg/mL或120mg/mL。相对高的浓度对于允许低填充体积和短雾化时间是重要的，并且因此确保所述方法的治疗效能。

根据本发明的方法，使用膜雾化器来产生气雾剂。雾化器在本文中定义为能够将液体材料雾化成分散液相的装置。气雾剂在本文中定义为包括连续气相和分散在其中的不连续或分散的液体颗粒相的体系。

气雾剂发生器可以具有配置成容纳初始体积流体(例如，含有Ig、IgG、IgA、IgM或其组合)的贮液器，具有开口的膜，所述贮液器与膜连通，以将液体(例如，通过重力)供应给膜的一侧，可振动的膜将液体通过开口转运，由此液体以气雾剂的形式在膜的另一侧上射出。

气雾剂发生器可以具有膜，其从一侧上存在的液体产生液滴，并且当流体存储器的一部分壁振动时，在另一侧上作为气雾剂释放它们，以及振动产生装置，例如，压电元件，其连接流体存储器的一部分壁，使得流体存储器的这部分壁振动(被动膜雾化器，I型)。

气雾剂发生器可以具有膜，其从一侧上存在的液体产生液滴，并且在流体供应器(例如，管)的一部分壁振动时，在另一侧上作为气雾剂释放它们，以及振动产生装置，例如，压电元件，其连接流体供应器，使得流体供应器振动(被动膜雾化器，I I型)。

气雾剂发生器可以具有膜，其从一侧上存在的液体产生液滴，并且当膜振动时，在另一侧上作为气雾剂释放它们，以及振动产生装置，例如，压电元件，其连接膜，使得膜振动(主动膜雾化器)。

分散相基本上由液滴组成。分散相的液滴在液体环境中包括多克隆Ig，例如，IgG、IgA、IgM或其组合。液体环境主要是水相，含有或不含更多以下进一步描述的赋形剂。本领域技术人员将理解，关于液体组合物的特征和优选地，如本文中公开的，也适用于从其产生的气雾剂的分散相，并且反之亦然。

气雾剂的连续气相可以选自任何药物学可接受的气体或气体混合物。例如，气体可以简单地是空气或压缩空气，其是使用雾化器作为气雾剂发生器的吸入治疗中最常见的。或者，可以使用其他气体和气体混合物，如富含氧的空气、二氧化碳或氮和氧的混合物。

可以通过实验测定两个值，并且可以用于描述所产生的气雾剂的颗粒大小或液滴大小：质量中值直径(MMD)和质量中值空气动力学直径(MMAD)。两个值之间的差异在于将MMAD标准化至水的密度(等效空气动力学)。

可以通过冲击器来测量MMAD，例如，Anderson级联冲击器(ACI)或下一代冲击器(NGI)。或者，可以使用激光衍射法，例如，Malvern MasterSizer X^TM，来测量MMD。

通过本发明的方法产生的气雾剂的分散相呈现以下颗粒大小，例如，优选小于10μm，优选约1至约6μm，更优选约1.5至约5μm，并且甚至更优选约2至约4.5μm的MMD。或者，颗粒大小可以具有小于10μm，优选约1至约6μm，更优选约1.5至约5μm，并且甚至更优选约2至约4.5μm的MMAD。描述气雾剂的分散相的另一个参数是雾化液体颗粒或液滴的颗粒大小分布。几何标准差(GSD)是常常使用的用于所产生的气雾剂颗粒或液滴的颗粒或液滴大小分布的宽度的测量。

上述范围内精确MMD的选择应当考虑用于气雾剂沉积的靶区域或组织。例如，最佳液滴直径将根据是否打算口、鼻或气管吸入以及是否聚焦于上和/或下呼吸道递送(例如，至口咽、咽喉、气管、支气管、肺泡、肺、鼻和/或鼻旁窦)而改变。此外，年龄依赖性解剖几何学(例如，鼻、口或呼吸气道几何学)以及患者的呼吸道疾病和病症及其呼吸模式属于决定用于将药物递送至下或上呼吸道的最佳颗粒大小(例如，MMD或GSD)的重要因素。

通常，通过小于2mm的内径限定的小气道代表了几乎99％的肺体积并且因此在肺功能中起着重要作用。肺泡是深肺中的部位，氧和二氧化碳在那与血液交换。由一些病毒或细菌诱发的肺泡中的炎症导致该部位的流体分泌并直接影响肺的氧吸收。气雾剂的深肺气道的治疗性靶向需要具有低于5.0μm，优选低于4.0μm，更优选低于3.5μm，并且甚至更优选低于3.0μm的MMD的气雾剂。

对于递送至呼吸道的气雾剂，该气雾剂具有低于10.0μm，优选低于5.0μm，更优选低于3.3μm，并且甚至更优选低于2.0μm的MMD。优选地，MMD(液滴大小)在约1.0至约5.0μm的范围中，并且大小分布具有小于2.2，优选小于2.0，更优选小于1.8，或甚至更优选小于1.6的GSD。这样的颗粒大小和颗粒大小分布参数对于在人的呼吸道(例如，肺)(包括支气管和细支气管)中获得相对于气雾化的药物的量高的局部药物浓度特别有用。在这点上，必须考虑深肺沉积需要比在成人和儿童的中央气道中的沉积更小的MMD，对于婴儿和幼儿，更优选约1.0至约3.3μm范围中的甚至更小的液滴大小(MMD)，并且甚至更优选低于2.0μm的范围。因此，在气雾剂治疗中，通常评价小于5μm(表示成人可呼吸的级分)和小于3.3μm(表示儿童可呼吸的级分或沉积在成人深肺中的级分)的液滴级分。此外，常常评价小于2μm的液滴级分，因为其表示最佳地到达成人和儿童的末端细支气管和肺泡并且可以渗透婴儿和幼儿肺的气雾剂级分。

在本发明的方法中，具有小于5μm的颗粒大小的液滴级分优选高于65％，更优选高于70％，并且甚至更优选高于80％。具有小于3.3μm的颗粒大小的液滴级分优选高于25％，更优选高于30％，甚至更优选高于35％，并且再更优选高于40％。具有小于2μm的颗粒大小的液滴级分优选高于4％，更优选高于6％，并且甚至更优选高于8％。

气雾剂还可以通过在呼吸模拟实验中测定的递送剂量(DD)来表征。递送剂量可以用于计算可呼吸剂量(RD)，例如，基于通过激光衍射(例如，Malvern MasterSizer X^TM)或使用冲击器(例如，Anderson级联冲击器-ACI，或下一代冲击器-NGI)测量的可呼吸级分(RF)。在使用成人呼吸模式(正弦流，500mL潮气量，15次呼吸/min)的呼吸模拟实验(例如，使用呼吸模拟机，如来自Copley的BRS3000或来自PARI的Compass II^TM)中施用本发明，并且将2mL组合物(例如，200mg Ig，200mg IgG，200mg IgA，200mg IgM或其组合)装入膜雾化器时，递送剂量(DD)优选高于40％(80mg Ig，例如，IgG、IgA、IgM或其组合)，更优选高于45％(90mg Ig，例如，IgG、IgA、IgM或其组合)和甚至更优选高于50％(100mg Ig，例如，IgG、IgA、IgM或其组合)。

对于上气道的治疗，特别是鼻、鼻粘膜和/或鼻窦粘膜、窦口鼻道复合体和鼻旁窦，低于约5.0μm，或低于约4.5μm，或低于约4.0μm，或低于约3.3或低于约3.0μm的MMD是特别合适的。

可以在鼻吸入模型，如WO 2009/027095中所述的人鼻铸模中，评价所产生的施用于上气道的气雾剂的适合性。对于递送至鼻的气雾剂，例如，存在来自PARI的Sinus^TM装置(喷射雾化器)以及膜雾化器(Vibrent^TM技术的原型)。

本发明的方法中使用的雾化器是膜雾化器。优选地，膜雾化器是振动膜雾化器。后一种类型的雾化器包括存储器，其中装满用于喷雾的液体。当操作雾化器时，将液体供应至(例如，通过压电元件)使其振荡(即振动)的膜。在振动膜一侧存在的液体由此通过振动膜中的开口(也称为“细孔”或“孔”)转运并在振动膜的另一侧上采取气雾剂的形式。(例如，来自PARI的eFlow rapid和eRapid，来自Health and Life的HL100以及来自Aerogen的AeronebGo和AeronebSolo)。这样的雾化器可以称为“主动膜雾化器”。

在其他有用的膜雾化器中，可以通过振动液体而不是膜来雾化组合物。这样的振动液体膜雾化器包括存储器，其中装满待雾化的液体。当操作雾化器时，将液体通过液体进料系统供应至使其振荡(即，振动，例如，通过压电元件)的膜。这种液体进料系统可以是存储器的振动后壁(例如，AerovectRx^TM Technology，Pfeifer Technology)或振动液体转运滑块(例如，来自Respironics的I-Neb^TM设备，或来自Omron的U22^TM设备)。这些雾化器可以称为“被动膜雾化器”。

不同的膜类型可用于使用膜雾化器的液体雾化。这些膜的特征在于不同的孔径大小，其产生具有不同液滴大小(MMD和GSD)的气雾剂。根据组合物的特征和所需的气雾剂特征，可以使用不同的膜类型(即，不同改进的膜雾化器或气雾剂发生器)。在本发明的方法中，优选使用产生具有2.0μm至5.0范围，优选3.0μm至4.9范围和更优选3.4μm至4.5μm范围的MMD的气雾剂的膜类型。在本发明的另一个实施方案中，优选使用在产生气雾剂的气雾剂产生设备中构建的膜类型，所述气雾剂例如为等渗盐水(NaCl 0.9％)，具有2.8μm至5.5μm范围，优选3.3μm至5.0μm和更优选3.3μm至4.4μm范围的MMD。在本发明的另一个实施方案中，优选使用在产生气雾剂的气雾剂产生设备中构建的膜类型，例如，等渗盐水(NaCl 0.9％)，所述气雾剂例如为等渗盐水(NaCl 0.9％)，具有2.8μm至5.5μm范围，优选2.9μm至5.0μm和更优选3.8μm至5.0μm范围的MMD。

发明人已经发现了当将存储器与大气隔离使得在雾化包括多克隆Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)的液体含水组合物的步骤(即，步骤(c))之前或期间存储器中的压力降低时，本发明的方法特别能够运行良好。换句话说，如果将液体含水组合物提供给压力略低于气雾剂液体射入区域的环境压力的膜，所述方法特别有效。在雾化液体步骤前，存储器中的初始压力，优选至少为50mbar，更优选至少75mbar，并且最优选至少100mbar。

此外，气雾剂发生器具有与贮液器协作的负压产生设备，因此在膜振动前(即，开始给药或使用前)，将贮液器的密封状态中的贮液器体积(V1)增加至体积(V2)。可以按照US 6,983,747 B2(将其全部按引用并入)中公开的来形成这样的负压产生设备。或者，也可以按照WO 2007/020073 A1(将其全部按引用并入)公开的来配置负压产生设备。

为了实现存储器中压力的降低，特别优选通过安放在存储器(10)中的开口上的密封元件(16)来将存储器与大气隔离，以提供用于开口的气密密封，且滑动元件(21)以这样的方式与密封元件(16)连接即滑动元件(21)的移动实现密封元件(16)的至少一个部分(18)的移动，由此在存储器(10)中产生负压，如图1中所示。这样的降低存储器内部压力的方法描述于WO 02/064265中，将其全部按引用并入。或者，还可以按照EP 1353759 B1(将其全部按引用并入)中公开的来配置负压产生设备。在其他有用的膜雾化器中，通过封闭元件或机械系统，例如，使用体积膨胀式风箱、移动、抽吸、泵等，在密封的贮液器中产生负压。

或者，存储器中的负压产生设备还可以配置成在从流体或液体完成气雾剂产生过程中在存储器中产生接近恒定的负压范围。在雾化液体步骤的过程中，存储器中的负压范围优选在50至400mbar的范围中，更优选在100至400mbar的范围中，甚至更优选在100至350mbar的范围中，并且最优选在100至200mbar的范围中。这样的负压范围设备可以按照WO 2012/069531A2中公开的来形成，将其全部按引用并入。

然而，也可以在单独的雾化过程中产生负压，或通过如上所述的封闭元件产生的负压可以维持在相当恒定的水平，同时进行雾化(即，步骤(c))。

如果所述方法打算用于靶向下呼吸道，如支气管或深肺，特别优选选择压电穿孔的膜类型雾化器用于产生气雾剂。合适的雾化器实例包括被动膜雾化器，如I-Neb^TM、U22^TM、U1^TM、Micro Air^TM，超声波雾化器，例如，Multisonic^TM，和/或主动膜雾化器，如HL100^TM、Respimate^TM、eFlow^TM Technology雾化器、AeroNeb^TM、AeroNeb Pro^TM、AeronebGo^TM和AeroDose^TM设备家族以及原型Pfeifer，Chrysalis(Philip Morris)或AerovectRx^TM设备。用于将药物靶向下呼吸道的特别优选的雾化器是振动穿孔膜雾化器或所谓的主动膜雾化器，如，例如，eFlow^TM雾化器(可从PARI，德国获得的电振动膜雾化器)。或者，可以使用被动膜雾化器，例如来自Omron的U22^TM或U1^TM，或基于Telemaq.fr技术或Ing.Erich Pfeiffer GmbH技术的雾化器。

用于靶向上呼吸道的优选膜雾化器是通过穿孔振动膜原理产生气雾剂的雾化器，如使用eFlow^TM技术的改进研究膜雾化器，但其也能够发射脉动气流，使得产生的气雾剂云状物在所需位置或在气雾剂云状物转运至所需位置(例如，鼻窦或鼻旁窦)过程中脉动(即，经历压力的波动)。这种类型的雾化器具有用于将转运气雾剂云状物的流指引至鼻中的喷嘴。通过这样的改进电雾化器递送的气雾剂可以比连续(非脉动)模式递送气雾剂时好得多地到达鼻窦或鼻旁窦。脉动压力波获得了更强烈的鼻窦振动，使得伴随施用的气雾剂更好地分布和沉积在这些腔中。

更特别地，用于靶向患者上呼吸道的优选雾化器是适用于以低于约5升/min的有效流速产生气雾剂并且同时适用于以约10至约90Hz范围的频率实现气雾剂压力脉动的操作方式的雾化器，其中有效流速是气雾剂进入患者呼吸系统的流速。这样的电喷雾设备的实例公开于WO 2009/027095中。

在本发明的优选实施方案中，用于靶向上呼吸道的雾化器是使用运输流的雾化器，所述运输流在气雾剂云状物到达所需位置并随后开始气雾剂云状物脉动时可以中断，例如，以交替模式。详细内容描述于WO 2010/097119 A1和WO 2011/134940A1中。

不管是适用于肺或鼻窦递送，雾化器应当优选选择或采用能够以优选的输出速率雾化单位剂量的。单位剂量在本文中定义为在单次给药过程中规定为待给药的包括有效量活性化合物(即，Ig、IgG、IgA、IgM或其组合)的液体含水组合物的体积。优选地，雾化器可以以至少0.1mL/min的速率，或，假定组合物的相对密度通常将大约为1，以至少100mg/min的速率，递送这样的单位剂量。更优选地，雾化器能够分别产生至少0.4mL/min或400mg/min的输出速率。在进一步的实施方案中，雾化器或气雾剂发生器的液体输出速率为至少0.50mL/min，优选至少0.55mL/min，更优选至少0.60mL/min，甚至更优选至少0.65mL/min，和最优选至少0.7mL/min，将这样的设备称为具有高输出或高输出速率的气雾剂发生器。优选地，液体输出速率范围为约0.35至约1.0mL/min或约350至约1000mg/min；优选液体输出速率范围为约0.5至约0.90mL/min或约500至约800mg/min。液体输出速率表示每时间单位雾化的液体组合物的量。液体可以包括活性化合物、药物、Ig、IgG、IgA、IgM或其组合和/或替代品，如0.9％氯化钠。

已经发现了对于本发明的方法，即，对于从20至200mg/mL浓度的多克隆Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)组合物产生气雾剂，特定的膜类型可以用于雾化器中，以提高输出速率。例如，已经发现了对于输出速率，使用具有接触流体的第一侧(124)和相对第二侧(125)的膜(122)特别有利，所述膜具有多个从第一侧至第二侧的延伸方向(E)穿透膜的通孔(126)，由此当为了在第二侧产生气雾剂振动膜时流体从第一侧至第二侧通过通孔，每个通孔(126)具有沿着其延伸方向(E)的最小直径(D_S)，大于最小直径并且通过最接近所述最小直径三倍(优选两倍)的直径来限定的较大直径(D_L)，每个通孔具有由延伸方向的通孔的连续部分限定的喷嘴部分(132)，包括通孔的最小直径并由通孔的较大直径限定边界，其特征在于，延伸方向的每个通孔(126)的总长与延伸方向的所述喷嘴部分(132)中相应一个的长度的比例为至少4。这样的膜描述于WO 2012/168181A1中并显示于图2中，其显示了计算机断层摄影(CT)图和包括的描述。

应当选择雾化器的输出速率来获得短的液体组合物的雾化时间。显然，雾化时间将取决于待雾化的组合物的体积和输出速率。优选地，应当选择或采用能够在不超过20分钟内雾化一定体积的包括有效剂量的多克隆Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)的液体组合物的雾化器。更优选地，用于单位剂量的雾化时间不超过15分钟。在更多的实施方案中，选择或采用能够每单位剂量不超过10分钟，并且更优选不超过6分钟和甚至更优选不超过3分钟的雾化时间的雾化器。本发明最优选的是0.5至5分钟范围中的雾化时间。

根据本发明方法的步骤(c)中雾化的组合物的体积优选低，以允许短的雾化时间。所述体积，也称为剂量体积，或剂量单位体积，或单位剂量体积，应当理解为打算用于一次单次给药或雾化器治疗期的体积。具体地，所述体积可以在0.3mL至6.0mL的范围中，优选0.5mL至4.0mL，或更优选1.0mL至约3.0mL，或甚至更优选约2mL。在残留体积是所需或有帮助的情况下，这种残留体积应当小于1.0mL，更优选小于0.5mL，并且最优选小于0.3mL。然后有效雾化体积优选在0.2至3.0mL或0.5至2.5mL范围中，或更优选在0.75至2.5mL或1.0至2.5mL范围中。

优选地，采用雾化器来产生其中负荷剂量的液体组合物的主要部分作为气雾剂递送的气雾剂，即，具有高输出。更具体地，采用雾化器来产生含有组合物中的至少50％剂量的Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)的气雾剂，或，换句话说，发射存储器中装入的至少50％的液体组合物。尤其与单克隆抗体(由于其特异性，其不需要如此高)相比，选择可以产生这么高的多克隆Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)输出的雾化器是重要的。发现了本发明方法中使用的膜雾化器能够产生具有特别高输出的多克隆Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)组合物的气雾剂。

此外，雾化器可以包括具有吸入和呼出阀的室，也称为气雾剂室或混合室。将膜雾化器存储器装满液体并且膜产生气雾剂进入混合室。优选地，呼出阀位于喷嘴附近，而吸入阀位于进入环境空气开口附近。这降低了患者呼气期过程中的气雾剂损耗，因为在该期间产生的气雾剂大部分保持在混合室中直至患者吸入。具有这样混合室的膜雾化器描述于WO 2001/34232和WO 2010/066714中。可以使用不同大小的混合室。在本发明的方法中，优选使用具有至少45mL，更优选至少50mL，和甚至更优选至少60mL体积的大混合室。或者，可以使用具有60至150mL范围体积的大混合室。具有这样大混合室的膜雾化器描述于EP 1927373中，将其全部按引用并入。

优选地，本发明的方法中使用的液体含水组合物含有一种或多种稳定剂。配制液体免疫球蛋白制剂通常遇到的问题是如果没有使用合适的添加剂充分稳定，免疫球蛋白易于聚集并形成沉淀物。几种氨基酸，如脯氨酸、甘氨酸和组氨酸，或糖类，或糖醇类，或蛋白质，如白蛋白，或其组合，已知能稳定液体制剂中的免疫球蛋白并且可以用于液体含水组合物中。

对于通过喷雾的Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)的肺部给药，优选使用高浓度的Ig，例如，IgG、IgA、IgM或其组合。通常，获取高剂量的多克隆Ig，但重要的是尽可能地最小化待雾化的体积，以保持尽可能短的雾化时间。后者与患者依从性相关。因此，具有高Ig浓度的Ig组合物在本发明的方法中是优选的。然而，发现了Ig浓度的提高导致粘度的非线性提高。

通常已知液体组合物的动态粘度对通过组合物的雾化形成的气雾剂的液滴大小分布和雾化效率具有影响。对于使用膜雾化器的液体组合物的雾化，通常优选本发明方法中使用的液体组合物在20℃+/-0.1℃的温度下呈现约0.8至约4.0mPa·s范围的动态粘度。更优选地，当根据欧洲药典版本6.0在2.2.49和DIN 53015的要求，根据使用落球粘度计(“Kugelfallviskosimeter”)测量时，20℃+/-0.1℃温度下的动态粘度在约1.0至约3.5mPa·s范围中。由此，测定限定尺寸并且具有限定斜度的管或毛细管中的球或小球的滚动时间。基于滚动时间，可以测定管或毛细管中的液体粘度。测量通常在20.0℃+/-0.1℃的温度下进行。

本发明的一个实施方案是用于产生免疫球蛋白溶液的气雾剂的方法，其中免疫球蛋白溶液具有1至17mPa·s，1至16mPa·s，1至15mPa·s，1至14mPa·s，1至13mPa·s，1至12mPa·s，1至11mPa·s，1至10mPa·s，2至17mPa·s，2至16mPa·s，2至15mPa·s，2至14mPa·s，2至13mPa·s，2至12mPa·s，2至11mPa·s，2至10mPa·s，3至17mPa·s，3至16mPa·s，3至15mPa·s，3至14mPa·s，3至13mPa·s，3至12mPa·s，3至11mPa·s，3至10mPa·s的粘度；优选免疫球蛋白溶液具有1至9mPa·s，1至8mPa·s，1至7mPa·s，1至6mPa·s，2至9mPa·s，2至8mPa·s，2至7mPa·s，2至6mPa·s，3至9mPa·s，3至8mPa·s，3至7mPa·s或3至6mPa·s的粘度；更优选免疫球蛋白溶液具有1至5mPa·s，1至4mPa·s，2至5mPa·s，2至4mPa·s，3至5mPa·s或3至4mPa·s的粘度。

为了避免由高粘度引起的雾化问题，已经发现了脯氨酸优选作为稳定剂，因为即使Ig浓度高，也可以获得相对低粘度的Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)制剂，如WO2011/095543中公开的。因此，已经发现了打算将这些组合物用于使用雾化器产生气雾剂的方法中，将脯氨酸加入多克隆Ig组合物中是特别有利的。一方面，脯氨酸提供了所需的液体组合物中的Ig的稳定性，而另一方面，其降低了组合物的粘度，因此允许具有高Ig浓度的小液体体积的雾化，其导致了通过雾化快速和有效的治疗。

当使用脯氨酸作为稳定剂时，特别优选使用L-脯氨酸。L-脯氨酸通常存在于人体中并且具有非常有利的毒性谱。在重复剂量的毒性研究、生殖毒性研究、诱变研究和安全性药理研究中研究了L-脯氨酸的安全性，并且注意到没有不良影响。

通常，加入组合物中的脯氨酸并且更优选L-脯氨酸的量使得免疫球蛋白组合物中的脯氨酸浓度范围为约10至约1000mmol/L，更优选约100至约500mmol/L，和最优选为约250mmol/L。

在本发明的一个实施方案中，包括多克隆IgG和稳定含量的脯氨酸的液体含水组合物的浓度范围为1mPa·s至17mPa·s(在20.0℃+/-0.1℃的温度下)。在20.0℃+/-0.1℃的温度下，包括100mg/mL多克隆IgG和250mM脯氨酸的组合物的粘度为约3mPa·s。

根据本发明使用的并且含有脯氨酸的IgG组合物具有4.2至5.4，优选4.6至5.0，最优选约4.8的pH，这进一步有助于制剂的高稳定性。

脯氨酸的使用允许通过使用一种单一试剂制备其中制剂的稳定性提高和组合物粘度降低的组合物。这形成了在使用膜雾化器产生气雾剂的方法中特别有用的组合物。

本发明方法中使用的液体组合物还可以进一步包括药物学上可接受的赋形剂，其用于优化组合物的特征和/或气雾剂的特征。这样的赋形剂实例是用于调节或缓冲pH的赋形剂、用于调节摩尔渗透压浓度的赋形剂、抗氧化剂、表面活性剂、用于持续释放或延长局部停留的赋形剂、味道遮掩剂、甜味剂和调味剂。这些赋形剂用于获得最佳pH、摩尔渗透压浓度、粘度、表面张力和味道，其支持制剂吸入时制剂的稳定性、雾化、耐受性和/或功效。

本发明中使用的免疫球蛋白溶液具有约60至75mN/m，优选约64至71mN/m的表面张力。

例如，可以将表面活性剂加入组合物中。这些可以帮助控制组合物中(即，存储过程中和在存储器中)和雾化过程中(即通过雾化器膜的过程中和之后)的免疫球蛋白聚集速率，由此对气雾剂中的Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)的活性具有影响。有用的表面活性剂的实例是聚山梨酸酯，如聚山梨酸酯80。

通常，发现了使用本发明的方法形成其中Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)的活性是装入雾化器存储器中的组合物中的Ig活性的至少80％的气雾剂。因此，本发明的方法既没有导致Ig的明显聚集，也没有导致Ig的明显变性。Ig的活性可以通过标准免疫学方法(例如，ELISA、流式细胞术和基于细胞的测试)来测定。

通过本发明的方法产生的气雾剂可以用于其中表示需要多克隆Ig(例如，IgG、IgA、IgM或其组合)用于治疗的几种病症的治疗和预防。

特别地，通过本发明的方法产生的气雾剂可以用于需要替代治疗的患者中，即，患有肺病、窦炎的患者，因为不具有足够的抗体处于复发感染风险中的患者，或，换句话说，患有免疫缺陷综合征的患者。更具体地，气雾剂可以用于治疗患有原发性免疫缺陷(PID)、继发性免疫缺陷(SID)，如由于慢性淋巴性白血病或多发性骨髓瘤引起的低丙球蛋白血症和复发细菌感染，同种异体血液干细胞移植(HSCT)后的低丙球蛋白血症，由于治疗恶性疾病的化疗引起的低丙球蛋白血症，由于治疗恶性疾病或自身免疫疾病的生物制剂(例如，利妥昔单抗)引起的低丙球蛋白血症，由于治疗自身免疫疾病或实体器官移植的免疫抑制性药物引起的气道感染易感性的患者，以及具有获得性免疫缺陷综合征(AIDS，HIV)的患者。此外，气雾剂可以用于治疗具有慢性气道感染的病症，如囊性纤维化和原发性纤毛运动异常、慢性梗阻性肺病(COPD)、慢性细菌性窦炎，具有慢性气道炎症的病症，如闭塞性细支气管炎、形成肺炎的闭塞性细支气管炎、非囊性纤维化细支气管扩张、慢性细菌性支气管炎、间质性肺病、支气管哮喘或通常型间质性肺炎，或过敏性病症，如外源性过敏性肺泡炎、过敏性哮喘或慢性窦炎。

此外，通过本发明的方法产生的气雾剂可以用于具有需要调节的异常免疫系统的患者的免疫调节。因此，气雾剂可以用于患有特发性(或原发性)血小板减少性紫癜(ITP)的处于出血的高风险中或需要在手术前校正血小板数量的患者，患有基兰-巴瑞德症候群、川崎病或慢性炎性脱髓鞘多发性神经病(CIDP)的患者。

下表中所列的商业上可购得的免疫球蛋白制剂可以作为包括多克隆免疫球蛋白G的液体含水组合物用于本发明的方法中。

^*PS80＝聚山梨醇酯80

^**NR＝未报道

实施例

以下非限制性实施例用于说明本发明。

实施例1：IgG的雾化

评价了在注射用水中含有100mg/mL正常人免疫球蛋白和0.25mol/L脯氨酸的组合物的雾化。免疫球蛋白级分含有至少98％的IgG，而组合物含有至多25μg IgA/mL；其从人血液供体的血浆制得。组合物具有4.82的pH，1.0336g/mL的密度，20℃下3.33mPa·s的粘度，20℃下71.1mN/m的表面张力和312mOsm/kg的摩尔渗透压浓度。

使用具有大混合室(具有大约90mL体积)、贮液器中100至400mbar范围的初始负压和具有不同孔大小和孔几何学的各种膜类型的电振动膜雾化器(使用PARI Pharma GmbH，德国的eFlow^TM技术的改进膜雾化器)进行雾化。设计不同的膜类型产生不同的液滴或颗粒大小(特征在于质量中值直径(MMD)和几何标准偏差(GSD))和/或不同的输出速率(例如，药物递送速率(DDR)或总输出速率(TOR或所谓的输出))。放置在气雾剂发生器设备中的膜的正常输出速率限定在低于0.55mL/min，而高输出速率由至少0.55mL/min的值来限定。或者，可以以mg/min来表征(或限定)输注速率；那么正常输注速率为例如低于550mg/min，而高输出速率为例如至少550mg/min。(或者，对于高输出速率的限制可以通过至少0.50mL/min，优选至少0.55mL/min，更优选至少0.60mL/min或最优选至少0.65mL/min来限定，并且因此以此以mg/min来限定输出速率)。所述限制取决于液体特征，例如，密度、粘度、表面张力等等，并且可以针对气雾剂发生器设备的质量保证的目的来限定，例如，可以针对替代Ig(例如，IgG、IgA和/或IgM)溶液的替代溶液(如0.9％氯化钠)来限定。然后，从气雾剂发生器设备中构建的膜产生的替代溶液(例如，0.9％氯化钠)的正常输出速率由至少0.55mL/min，更优选至少0.60mL/min和更优选至少0.65mL/min来限定。或者，高输出速率为至少550mg/min，优选至少600mg/min和更优选至少650mg/min。表1中鉴定和表征了用于雾化IgG组合物的膜类型。

表1：用于雾化IgG组合物的膜类型(使用eFlow^TM技术)

使用激光衍射仪器(Malvern MasterSizer X^TM)来测定所产生的气雾剂的液滴大小(根据质量中值直径(MMD)来表示)和液滴大小分布(根据几何标准偏差(GSD)来表示)。将2mL体积的IgG组合物装入雾化器存储器中并且通过指引气雾剂云状物通过MasterSizer X^TM仪器的激光束来分析操作雾化器时产生的气雾剂，使用20L/min的吸入流。测量过程中的温度和相对湿度分别为23℃(±2℃)和50％(±5％)。在相同的实验中，评价了总输出速率(TOR)。对于每个膜类型，测量进行两次(n＝2)。结果(平均值和标准偏差(SD))显示于表2中。

表2：激光衍射实验和总输出速率的结果

实施例2：IgG雾化的再现性

使用三种改进的膜雾化器重复了实施例1中所述的激光衍射实验，所述雾化器使用eFlow^TM技术并且具有大混合室(大约90mL)、贮液器中100至400mbar范围的初始负压，使用类型2和类型4的膜(如上指定的)。除了测定MMD、GSD和TOR，还测量了小于5μm、小于3.3μm和小于2μm的液滴百分比(即，不同可呼吸级分(RF)的百分比)。小于5μm的液滴级分获得了可吸入成人下呼吸道中的液滴百分比的良好表示，而小于3.3μm的液滴级分提供了估算的可吸入儿童下呼吸道中的液滴百分比。小于2μm的液滴级分表示能够到达末端细支气管和肺泡的液滴百分比。具有不同颗粒大小的气雾剂的肺沉积可以通过数学模型来计算，如例如ICRP模型(由ICRP Task Group Radiat Prot Dos imetry提出的呼吸道沉积模型(1991)38(1-3)：159-165，A.C.James等)，针对不同的年龄组，如成人、儿童、婴儿或幼儿。

对于每种测试的雾化器，实验进行两次(n＝2)。测量结果显示于表3中。

表3：使用不同雾化器的激光衍射实验和总输出速率的结果

实施例3：各种免疫球蛋白制剂的雾化

雾化各种血浆衍生的免疫球蛋白同种型和聚合物(IgA和IgM)以及IgG制剂，并且使用相同的雾化器和膜，以实施例1中所述的相似方式来表征所获得的气雾剂。

更具体地，通过激光衍射来比较通过以下制剂的雾化获得的气雾剂的特征。

使用2种不同膜类型(如实施例1中指定的)，使用具有大混合室和各自关闭时包括负压的存储器的研究eFlow^TM雾化器系统，通过每种制剂雾化时的激光衍射测量(Malvern Mas terSizer X^TM)，测定了颗粒大小分布。填充体积在每种情况下为2mL。测量的参数为MMD、GSD、总输出速率(TOR)和可吸入颗粒。TOR是通过在雾化前和完全雾化后称重填充的雾化剂来确定并通过将重量差异除以雾化时间来计算。

所有测定重复进行三次。结果(三次测定的平均值和标准偏差(SD))显示于表4中。

表4：各种免疫球蛋白制剂的激光衍射测量结果和总输出速率

ND：未测定

这些结果表明所有测试的制剂可以以良好的性能被雾化。

实施例4：呼吸模拟实验

还在呼吸模拟实验中使用三种改进的膜雾化器评价了实施例1和实施例3中所述组合物的雾化，所述雾化器使用eFlow^TM技术并具有大混合室，使用类型2和类型4(如上指定的)的膜。每种雾化器测试两次(n＝2)。

根据欧洲药典2.9.44使用成人呼吸模式(即，具有500mL潮气量的正弦流，每分钟15次呼吸和50:50的吸气:呼气(I:E)比)，进行了呼吸模拟实验。在每个测试中，将雾化器连接窦泵(PARI Compass II^TM呼吸模拟器)。在包括喷嘴的雾化器和泵之间安装吸气过滤器(聚丙烯；3M)并且用橡胶接头固定。给雾化器装入2mL实施例1中所述的组合物并且开始雾化并持续至气雾剂产生不再可见。在吸气过滤器上收集了含有药物的气雾剂液滴。

为了测定递送剂量，即，雾化过程中在滤器上收集的免疫球蛋白的含量，用手术钳从滤器外壳中取出吸气过滤器并放入具有螺旋帽的50mL塑料试管中。此后，用40mL纯水中含有0.9％盐水和0.5％SDS(十二烷基硫酸钠，98.5％)的缓冲液冲洗滤器外壳，并随后将冲洗流体加入含有滤器的试管中。将滤器在旋转器上振荡提取1小时。

此外，用40mL上述缓冲液冲洗雾化器几次并将冲洗溶液收集在烧杯中，用于测定存储器中剩余的药物含量(残留物)。

使用UV风光光度测定法分析了从滤器提取和雾化器冲洗获得的溶液。用缓冲液稀释每种溶液的样品，以获得大约0.5mg/mL免疫球蛋白的浓度。将大约0.8mL稀释样品溶液装入一次性微比色皿中并在280nm下相对缓冲液测量。使用ε(0.1％)＝1.38mL/(mg·cm)的质量吸收系数，根据Beer-Lambert法则(A＝ε·c·L)计算了溶液中的Ig含量。更具体地，计算Ig含量的公式为：

c(mg/mL)＝稀释倍数*A₂₈₀/ε*l

基于递送剂量和实施例2中通过激光衍射测定的平均可吸入颗粒计算了可吸入剂量。

在呼吸模拟实验过程中，还记录了雾化时间。呼吸模拟实验的结果概括于表5a和5b中。对于每个测试的参数，与标准偏差(SD)一起显示了每个膜类型的6次实验(即，3个不同雾化器的2次测试)的结果的平均。

表5a.呼吸模拟实验中针对IgG(10％)获得的结果

表5b：呼吸模拟实验中针对不同制剂获得的结果

实施例5：雾化后免疫球蛋白的生化特性(分子大小表征)

针对免疫球蛋白的结构完整性和多聚，表征了实施例1和实施例3中获得的雾化组合物。为此，对雾化组合物的样品进行了(i)SDS-PAGE，(ii)大小排阻色谱(SEC)和(iii)动态光散射(DLS)分析。

如下在雾化过程后直接收集雾化样品：用弹性接头将Falcon试管直接连接雾化器混合室的出口。在实验前，将雾化器、接头盒Falcon试管高压灭菌并且在层流状态下进行雾化。给雾化器的存储器装入4mL样品制剂。用螺旋帽关闭取样试管并且在完整性测试前在-18℃下冷冻。

总共，36个样品接受了SDS-PAGE和SEC分析：

·8个针对用脯氨酸配制的IgG(图3)：2个非雾化对照样品(a)、3个用膜类型2获得的雾化样品(b)和3个用膜类型4获得的雾化样品(c)。分别重复两份(非雾化样品)和重复三份(雾化样品)分析了样品。

·14个针对PBS(d，f，g)和甘氨酸(e，h，i)中的IgG(图4)：2个非雾化对照样品(d，e)、6个用膜类型2获得的雾化样品(f，h)和6个用膜类型4获得的雾化样品(g，i)。重复三份(雾化样品)分析了样品。

·14个针对IgA(j，l，m)和IgAM(k，n，o)(图4)：2个非雾化对照样品(j，k)、6个用膜类型2获得的雾化样品(l，n)和6个用膜类型4获得的雾化样品(m，o)。重复三份(雾化样品)分析了样品。

·10个针对IgA(p，q)、IgAM(r，s)、SIgAM(t，u)和IgG(v，w，x，y)(图4)：5个非雾化对照(p，r，t，v，x)和5个用膜类型4获得的雾化样品(q，s，u，w，y)。

所有免疫球蛋白溶液从人血液供体的血浆制备。IgG溶液具有100mg/mL的蛋白浓度并且含有至少98％的IgG。所有三个IgG制剂(250mM福安素；250mM甘氨酸；PBS)具有4.8的pH。IgA溶液和IgAM(聚合IgA+IgM)溶液具有50mg/mL的蛋白浓度并且在pH7.4的PBS中配制。IgA溶液的相对IgM含量为2％，IgAM溶液的为35％。还在脯氨酸(125mM)中配制了IgA和IgAM溶液。人重组分泌组分与PBS中的IgA和IgM结合，然后在脯氨酸(125mM)中配制。脯氨酸配制的IgA溶液中的IgM含量如下：IgA(<2％)、IgAM(33％)、SIgAM(32％)。

根据制造商的实验方案，使用Life Technologies的Mini-Cell系统进行了SDS-PAGE。简而言之，分别在还原和非还原条件下，将样品在样品缓冲液中变性，并且在预铸梯度凝胶上通过电泳分离，NuPAGE Novex^TMBis-Tris 4-12％1.0mm 15孔，使用NuPAGE^TM MES电泳缓冲液(Life Technologies)。电泳后，将凝胶中的蛋白固定并根据制造商的实验方案，用考马斯G-250(SimplyBlue Safestain^TM；Life Technologies)染色。使用ImageQuant^TMLAS 4000系统(GE Healthcare Lifesciences)数字化地记录蛋白染色模式。

通过SDS-PAGE分析获得的蛋白条件模式显示于图3(其中标记a，b和c是指上述的样品组)和图4(其中标记d，e，f，g，h，i，j，k，l，m，n，o，p，q，r，s，t，u，v，w，x和y是指上述的样品组)。图3A、4A、4C(左图)显示了在还原条件下获得的结果，而图3B、4B、4C(右图)显示了在非还原条件下获得的结果。

对于SEC分析，以200μg/2μL(IgG)或100μg/2μL(IgA，IgAM)将样品以0.7mL/min流速通过TSK凝胶G3000SWxl 7.8mm ID x30cm柱(Tosoh Bioscience)注入Agilent Technologies 1260Infinity^TM HPLC系统，用于大小排阻色谱。从所得到的色谱图，分别评价了(i)免疫球蛋白聚合物和聚集物；(ii)单体和二聚体以及(iii)片段的相对含量。结果显示于表6和7中。

对于DLS分析，用反向散射模式的Malvern Zetas izer Nano^TM测量了样品对于测量位置、检测器衰减、运行持续时间、运行数量和测量数量，使用相同的、固定的仪器设置，并且用专有的Zeta电位仪软件平均每个样品的测量结果。结果显示于表8中。

表6：雾化IgG的SEC分析

表7：雾化IgA和IgAM的SEC分析

表8：雾化IgA/M的DLS分析

比较非雾化和各自的雾化免疫球蛋白样品，通过SDS-PAGE获得的蛋白条件模式对于所有分析的相同免疫球蛋白制剂的样品是相同的(图3和图4)，还原和非还原条件下都是，表明保持了雾化样品中免疫球蛋白的结构完整性。

这种发现得到通过使用大小排阻高性能液相色谱(SE-HPLC)的分子大小分子的强烈支持。蛋白大小类别的相对含量(聚合物&聚集物，单体&二聚体，和片段)对于所有分析的样品是相当的(表6，表7)。值得注意的是，如使用IgG的脯氨酸或甘氨酸制剂观察的，≤1％的聚集物含量对于雾化的、高度浓缩的IgG是非常低的，并且甚至满足了静脉内给药的IgG的要求。此外，具有提高含量的高分子量蛋白物质的免疫球蛋白制剂，如酸化PBS中配制的10％(w/w)IgG(～3％聚集物含量)、PBS中的5％(w/w)IgA(～17％Ig聚合物&聚集物)、脯氨酸中的5％(w/w)IgA(～21％Ig聚合物&聚集物)、PBS中的5％(w/w)IgAM(～55％Ig聚合物&聚集物)、脯氨酸中的5％(w/w)IgAM(～54％Ig聚合物&聚集物)和脯氨酸中的5％(w/w)SIgAM(～56％Ig聚合物&聚集物)，也没有受到雾化过程的显著改变。

因为SEC分析没有区分Ig聚合物和聚集物，通过动态光散射(DLS)进一步分析了雾化前后的富含聚合物的IgAM样品，DLS是一种对较大颗粒具有提高的灵敏度的方法。通过DLS分析将揭示由于蛋白聚集物形成引起的Ig蛋白颗粒大小分布的改变。然而，针对Z-平均的DLS结果，多分散性和颗粒计数速率表明雾化没有引起颗粒大小分布的改变(表8)。

总之，以上生化分析显示出非雾化和雾化样品之间几乎没有差异。

实施例6：雾化后免疫球蛋白的活性

免疫球蛋白展示不同的功能，这直接取决于它们的Fab(抗原结合片段)和Fc(可结晶片段)片段。尽管Fab部分涉及抗原识别，但Fc部分可以结合专门的受体并激活下游分子途径。重要地，其还可以激活补体。

6a.雾化后免疫球蛋白的Fc活性

用改进的膜雾化器雾化实施例1和实施例3中所述的组合物，所述雾化器使用eFlow^TM技术并具有大的混合室，使用类型2和类型4的膜(如以上指定的)，并且收集所产生的气雾剂。将收集的溶液用于测定雾化后免疫球蛋白的活性，将其与雾化前组合物中的免疫球蛋白的活性进行比较，以评价雾化过程对免疫球蛋白活性的影响。

首先通过测试雾化免疫球蛋白的抗原识别能力和Fc功能来测定活性。在所有人Ig制剂中，存在异种活性(xenoreactive)抗体。将异种抗体(兔子红细胞)加入这样的组合物导致免疫复合物形成。将所得到的免疫复合物加入人多形核中性粒细胞(PMN)中，其随后被FcγRII和FcγRIIIγ上的IgG的Fc片段或CD89上的IgA的Fc片段(IgA受体)的识别和结合激活。然后产生游离氧自由基(呼吸爆发)，这通过化学发光来检测。细胞激活的程度取决于免疫球蛋白的Fc部分的完整性和结合红细胞的量。为了获得只取决于免疫球蛋白的Fc部分含量的数据，通过FACS测量结合兔子红细胞的抗体的量，并且将化学发光和结合数据计算机化。具有Fc活性≥50％的免疫球蛋白展示出正常的Fc功能。结果呈现于表9a和9b中。在表9b中，作为雾化前活性的百分比显示了Fc活性，其如下计算：Fc活性(样品)＝雾化前半最大化学发光下结合的Ig/雾化后半最大化学发光下结合的Ig*100％。所有雾化前免疫球蛋白具有Fc活性≥50％。

表9a：呼吸爆发实验中获得的平均数据(制剂6)

表9b：呼吸爆发实验中针对不同制剂获得的平均数据

正常IgG在嗜中性粒细胞上展示出97％的Fc活性。雾化的IgG显示出非常接近于IgG对照的Fc活性(Fc活性>90％)，不管使用哪种类型的雾化膜类型。因此，雾化的IgG能够与非雾化IgG同样地识别异种抗原并且结合和激活PMN。

雾化前后不同脯氨酸制剂(IgG、IgA、IgAM和SIgAM)的Fc活性的比较显示出雾化过程中没有功能损失(表9a和9b)。

在第二个测试中，通过测量补体激活来评价Fc功能。将雾化IgG和对照IgG吸附至聚苯乙烯微球体上，形成免疫复合物的模型。然后用人血清作为补体源孵育这些覆盖的微球体。通过FACS测量激活的C3片段在微球体上的沉积来定量所得到的补体激活。通过将这些数据与结合微球体的IgG的实际数量的数据进行比较，评价IgG的Fc部分的完整性。

因此发现了IgG的雾化没有影响IgG激活补体的能力。

6b.雾化后免疫球蛋白的抗原识别

雾化后免疫球蛋白的生物特性的进一步表征涉及抗原识别(EBV、CMV、FSME、HB、HAV、HSV、VZV、腮腺炎、风疹和麻疹)的ELISA分析，以及补体结合反应和受体结合测试。特别地，针对所有制剂(5-9)评价了呼吸道合胞病毒(RSV)和肺炎球菌多糖(PCP)抗原识别。根据制造商的实验方案进行ELISA。结果呈现于表10a和10b中。在每个多克隆免疫球蛋白制剂中检测了抗RSV和抗PCP抗原抗体。重要地，不同制剂的RSV和PCP抗原识别没有受到雾化的影响。

表10a：雾化前后免疫球蛋白的RSV抗原识别

表10b：雾化前后免疫球蛋白的PCP抗原识别

直接在细菌上测试抗原识别。将5×10⁷CFU/mL的肺炎链球菌A66.1菌株涂覆在ploysorb平板(NUNC)上，在4℃的碳酸盐缓冲液中过夜。用PBS-Tween(0.05％)洗涤后，用2.5％FCS(PBS中)在室温下将平板阻断1.5小时。用PBS-Tween(0.05％)洗涤后，加入333μg/mL(在阻断缓冲液中稀释的)的制剂，并在室温下孵育2小时。用PBS-Tween(0.05％)洗涤后，将二抗(山羊抗人IgG/A/M-HRP(Novex)；1mg/ml，阻断缓冲液中1:2’000)在室温下孵育2小时。一旦用PBS-Tween(0.05％)洗涤，将TMB底物加入孔中，并通过加入HCL停止催化。然后将平板在平板阅读器中阅读。结果呈现于图5中。

在每个制剂(5-9)中检测了抗肺炎链球菌抗体。IgAM和SIgAM显示出更好的抗肺炎链球菌抗体的滴定度，如通过较高O.D.所描绘的。重要地，雾化制剂与非雾化对照的比较显示出雾化制剂对细菌的识别没有差异。因此，雾化没有影响多克隆免疫球蛋白的细菌抗原识别。

6c.雾化免疫球蛋白在体外感染模型中的活性

聚合免疫球蛋白在粘膜表面起着重要作用。免疫球蛋白参与防止细菌进入身体，一种称为免疫排除的过程。其涉及免疫球蛋白对细菌表面上的抗原的识别以及聚合免疫球蛋白更好地聚集细菌的能力。

为了评价雾化是否可能损害聚合免疫球蛋白的功能，在极化粘膜上皮细胞感染的体外模型中测试了制剂(5-9)。将福氏志贺氏菌用作感染剂，因为已知其用于感染肠的粘膜上皮细胞，导致人的腹泻。将肠细胞单层用于这个目的。细胞单层是未处理的(C-)或暴露于单独的福氏志贺氏菌(C+)或与对照制剂(-)或雾化制剂(N)的复合物14h(图6)。福氏志贺氏菌的感染诱导了上皮细胞分泌炎性细胞因子，如TNF-α、CXCL8和CCL3(图6A)。此外，感染导致膜完整性和紧密连接的丢失，这可以通过测量跨膜电阻的相关损失来评价(图6B)。最后，通过计数感染灶的数量和测量受感染的面积来监控感染(图6C)。测量这些重点的详细实验方案公开于专利申请WO2013132052和Longet S.等，J Biol Chem.2014年8月1日；289(31):21617-26中。

在这样的感染体外模型中，单体免疫球蛋白是没有保护性的(Longet S.等，J Biol Chem.2014年8月1日；289(31):21617-26)。只有脯氨酸中的IgAM和SIgAM降低了感染、炎性细胞因子分泌并保护了膜完整性(图6A、B、C；制剂8和9)。重要地，福氏志贺氏菌与雾化IgAM和SIgAM的免疫复合物可以降低福氏志贺氏菌的感染性和细胞因子分泌，与福氏志贺氏菌和非雾化IgAM和SIgAM形成的免疫复合物一样多。

单体免疫球蛋白的雾化(图6，制剂5-7)在体外对其活性没有影响。实际上，在这种感染模型中观察到没有功能的增加或丧失。

总地，因此发现了多克隆免疫球蛋白的雾化没有改变免疫球蛋白抗原识别和Fc功能。

实施例7：动物模型中雾化免疫球蛋白的肺沉积

使用连接流通室(气雾剂在那分配至动物)的膜雾化器，将实施例1和实施例3中所述的组合物雾化并给药于大鼠。

在气雾剂施用后的不同时间(0、1小时、6小时、12小时和24小时)，将大鼠牺牲。将肺的左叶用于支气管肺泡灌洗(BAL)。为此，将气管插管并用无菌PBS(2×5mL)将肺灌洗两次。将来自每次单独BAL的产量集合并收集至无菌塑料试管中。将BAL样品离心(在大约4℃下，在1500×g下10min)，并且将BAL上清液等分至两个无菌试管中(每个大约5mL)。分离右叶，使用标准技术固定并制备用于组织学。然后使用免疫组织化学方法，在石蜡切片上使用特异性的二抗，来评价肺中的Ig分布。研究肺的特定部分(例如，呼吸性细支气管、肺泡管、肺泡囊和肺泡)。

通过ELISA测量BAL中的免疫球蛋白的存在。对于IgA检测，将平板(NUNC)在室温下用山羊抗人IgA(Bethyl Laboratories；覆盖缓冲液(1.59g Na₂CO₃，2.93g NaHCO₃，1ml H₂O，pH 9.6)中1/500)覆盖1小时。用PBS-Tween洗涤后，将阻断溶液(PBS，1％BSA)加入孔中并在室温下孵育1小时。用PBS-Tween洗涤阻断溶液，并将样品分配在平板中，并在37℃下孵育2小时。用PBS-Tween洗涤后，将山羊抗人IgA-HRP(Bethyl Laboratories；稀释缓冲液(低交叉缓冲液(Candor，1％酪蛋白)中1/8000)加入孔中，在室温下持续1小时。用PBS-Tween洗涤后，将TMB底物加入孔中，在室温下持续15分钟，并通过加入停止溶液来停止催化。

对于IgG检测，用山羊抗人IgG(Acris；覆盖缓冲液(1.59gNa₂CO₃，2.93g NaHCO₃，1ml H₂O，pH 9.6)中1.5μg/mL的终浓度)在室温下覆盖平板(NUNC)2小时。用PBS-Tween洗涤后，将阻断溶液(PBS，1.6％BSA)加入孔中并在室温下孵育1小时。用PBS-Tween洗涤阻断溶液，并将样品分配在平板中，并在室温下孵育2小时。用PBS-Tween洗涤后，将山羊抗人IgG-HRP(Acris；稀释缓冲液(低交叉缓冲液(Candor)，1％酪蛋白)中0.3μg/mL的终浓度)加入孔中，在室温下1小时。用PBS-Tween洗涤后，将TMB底物加入孔中，在室温下持续15分钟，并通过加入停止溶液来停止催化。结果呈现于图7中。

在通过气雾剂施用制剂5、7和8时(时间0小时)，检测到BAL中的免疫球蛋白的最高量。随着时间，雾化免疫球蛋白的含量逐渐降低，在动力学结束时(24小时)检测到较低量。重要地，在雾化后24小时，在BAL中仍然可检测到雾化的免疫球蛋白。

还分析了来自大鼠的血浆中的雾化免疫球蛋白的存在。在雾化后24小时时，血浆中没有检测到IgA制剂(IgA和IgAM)。然而，在接受气雾剂后24小时，在3只大鼠的血浆中可以检测到雾化的IgG(参见表11)。

表11：免疫球蛋白递送后24小时血浆中检测到的雾化IgG

我们在上面已经显示了雾化没有影响免疫球蛋白的结构。然而，已知肺的粘液层含有蛋白酶，其可能影响施用的免疫球蛋白的完整性。为了补充来自BAL的ELISA结果，我们通过SDS-PAGE分析了雾化免疫球蛋白的完整性。按照标准实验方案或按照专利申请WO2013132052中所述的，进行了SDS PAGE。对于免疫印迹，使用了多克隆兔抗体：a)兔抗人γ链(Dako，辣根过氧化物酶(HRP)-缀合的；1/10’000稀释)，b)兔抗人α链(Dako，辣根过氧化物酶(HRP)-缀合的；1/5’000稀释)，c)兔子抗人μ链(Dako，辣根过氧化物酶(HRP)-缀合的；1/3’000稀释)。所有孵育在含有5％奶粉和0.5％Tween的PBS中在环境温度下进行3小时。用PBS-Tween最终洗涤后，通过ImageQuant LAS 4000系统(GE Healthcare Lifesciences)中的化学发光和数字记录揭示了膜上的免疫检测。来自还原凝胶的Western印迹显示于图8上。

证实ELISA数据，在接受了雾化IgG的大鼠的每个BAL样品中检测到了IgG的γ链(图8；5，a)。条件是可检测的，直至雾化后24小时。在接受了雾化IgA的大鼠的BAL样品中，在递送后的早期时间点检测到了α链(7，b)，但6小时后微弱。在雾化后24小时，α链确实难以检测(图8；7，b)。在接受了雾化IgAM的大鼠中，每个BAL样品中的α链的检测都是阳性的，在24小时具有较低的信号。在相同的BAL样品中，在每个样品中检测到了μ链(c)直至24小时，虽然在这个最后的时间点是虚弱的。

还在非还原凝胶上运行了BAL样品。没有检测到γ、α和μ链的片段。检测的免疫球蛋白是完整的。

全部地，我们已经显示了雾化免疫球蛋白可以有效地到达动物的肺并且这些免疫球蛋白在这个环境中保持完整24小时，即使它们的含量随着时间趋于降低。

实施例8：雾化免疫球蛋白治疗和预防慢性鼻窦炎

慢性鼻窦炎(CS)是引起生活质量明显受损(Khalid AN，Quraishi SA，Kennedy DW.Long-term quality of life measures after functional endoscopic sinus surgery，Am J Rhinol 2004May；18(3):131-6)和实质性健康护理消费(Anand VK.Epidemiology and economic impact of rhinosinusitis，Ann Otol Rhinol Laryngol Suppl 2004May；193:3-5.)的最常见慢性传染病症之一(免疫缺陷患者和正常人群中13％的发病率)。

目前的治疗包括抗生素、长期类固醇和(重复的)外科手术。然而，这些干预具有有限的功效，在高风险组(例如，原发性抗体缺陷、囊性纤维化)具有高比例的失败，并且从重复使用可能潜在地产生抗生素抗性。

为了预防或治疗CS，使用具有大混合室并且能够发射脉动气流靶向鼻窦或鼻旁窦的膜雾化器，将实施例1中所述的组合物雾化并给药于靶向患者，所述组合物优选IgA或聚合IgA和IgM的混合物，任选补充重组分泌组分。靶向患者是已知属于高风险组(例如，原发性抗体缺陷、囊性纤维化)的或具有CS反复发作的患者。

在患有CS的患者中，在外科手术去除鼻息肉和/或抗生素或类固醇治疗后开始施用。患者喷2mL的包括与重组分泌组分结合的IgG(10％)或IgA(50mg/mL)或聚合IgA和IgM混合物(50mg/mL)的液体组合物，一天至少一次，持续8周时间。这对应于一个治疗周期。

在预防性的治疗中，患者喷2mL的包括IgG(10％)或IgA(50mg/mL)或聚合IgA和IgM混合物(50mg/mL)，优选与重组分泌组分结合的聚合IgA和IgM(50mg/mL)的液体组合物，每年2个治疗周期。

在预防性治疗的情况下，雾化的免疫球蛋白降低了鼻窦炎发作的慢性长期性。

当在CS患者中施用时，雾化的免疫球蛋白减轻了症状，如鼻塞和流涕，脸部压力或疼痛，眼睛、面颊和鼻子周围的肿胀。

实施例9：原发性免疫缺陷(PID)中的慢性下呼吸道感染治疗中的雾化免疫球蛋白

PID患者中的IgG替代治疗有效地降低了肺炎和严重感染的比例。然而，这些患者每年和每名患者仍然经历3-4次感染。这种高比例的感染结合炎症表明IgG治疗对感染的慢性副作用具有低影响，所述慢性副作用如支气管扩张、慢性腹泻、自身免疫性和淋巴组织增殖性疾病。

长期IgG替代治疗下的肺炎、支气管扩张和败血症与低IgM相关，同时存在与低IgA相关的显著提高的胃肠感染比例(Oksenhendler E，Gerard L，Fieschi C等，Infections in 252patients with common variable immunodeficiency，Clin Infect Dis 2008年5月15日；46(10):1547-54；Gregersen S，Aalokken TM，Mynarek G等，Development of pulmonary abnormalities in patients with common variable immunodeficiency:associations with clinical and immunologic factors，Ann Allergy Asthma Immunol 2010年6月；104(6):503-10；Quinti I，Soresina A，Guerra A等，Effectiveness of immunoglobulin replacement therapy on clinical outcome in patients with primary antibody deficiencies:Results from a multicenter prospective cohort study，J Clin Immunol 2011年5月2日)，再次表明IgA和/或IgM可能是关键的缺少因素。

支气管扩张患者对铜绿假单胞菌感染是易感的。X-连锁无丙种球蛋白血症(XLA)是一种影响PID患者子群的疾病。其特征在于成熟B淋巴细胞以及特定抗体产生的缺陷和血清中低浓度的免疫球蛋白。这些患者呈现出慢性感染，这可能导致支气管扩张的发展。

具有慢性下呼吸道感染的特定研究群是已经经历了第一次铜绿假单胞菌肺感染发作的XLA患者。然后治疗的目的将是预防感染复发和长期预防支气管扩张。对于这种特别的适应症，考虑了IgA或混合的IgM/IgA产品。患者喷2mL的包括与重组分泌组分结合的IgG(10％)或IgA(50mg/mL)或聚合IgA和IgM混合物(50mg/mL)的液体组合物，一天至少一次，持续8周时间(＝一个治疗周期)。患者应当每年接受2个治疗周期。

功效参数是充分限定的，包括感染复发率、支气管扩张发展速率、诱导痰液中的微生物负荷/炎性参数。

实施例10：各种免疫球蛋白制剂的雾化

如之前实施例中所示的，使用研究改进的eFlow技术的免疫球蛋白的雾化对免疫球蛋白结构或其功能都是无害的。为了将特定量的待递送的免疫球蛋白靶向气道(上和/或下)中时允许较短的雾化时间，优选较高浓度的免疫球蛋白。已知高分子量的免疫球蛋白(150kD至1040kD)以及高浓度的分子分开地或结合地影响制剂的粘度。粘度直接影响雾化的性能。

为了更好地理解粘度是怎样影响雾化性能的，在三种不同的设备上测试了几个制剂。使用了研究eFlow雾化器(改进的膜类型4)、Omron Micro Air U22和AerogenGo。

制剂描述于表12中。

表12：测试制剂的特征

按照实施例1、2和3中所述的进行了激光衍射实验。将3个研究改进的eFlow雾化器(主动振动膜和负压)、3个Omron Micro Air U22(被动振动膜)和1个AerogenGo(主动振动膜)用于这个研究，重复两份(Go)或重复三份(研究改进的eFlow、Micro Air U22)测试了样品。根据各自制造商的说明书手册来使用Omron和Aerogen雾化器。所有制剂以随机顺序来测试。结果呈现于表13和14中。

如表13和14中所绘，提高相同蛋白(例如，单体多克隆免疫球蛋白)的浓度与粘度的提高相关(对于从5％至20％范围的IgG，分别从1.75至14.52mPa*s)。对于更大和更复杂的蛋白，如聚合免疫球蛋白(IgA和IgM)，粘度比单体免疫球蛋白提高得更快。5％和9％IgG显示出分别为1.75和2.65mPa*s的粘度，而浓度为5％和9％的聚合IgA和IgM的制剂显示出粘度为3.88和15.87mPa*s。提高的粘度与总输出速率(TOR)的降低有关。液滴大小最低程度地降低，同时粘度提高。

用研究改进的eFlow雾化器(IM-eFlow)，递增浓度的多克隆IgG的雾化是可行的，直至13％的浓度。对于15％的IgG，3个雾化器中的1个可以雾化IgG。20％IgG也可以被3个雾化器中的1个雾化，但TOR非常低(6mg/min)。Omron Micro Air U22不能雾化IgG浓度高于7％的制剂，并且具有非常低的TOR(160mg/min)和较大的液滴大小(>6μm；IM-eFlow<4μm)。AerogenGo可以雾化7％和9％的制剂，但具有非常低的TOR(分别为117和20mg/min)。对于7％和9％的IgG，eFlow雾化器呈现出高性能(例如，TOR>550mg/min)。

使用eFlow雾化器，IgA和IgM制剂(例如，IgAM 5％和8％)的雾化是可行的，并且具有良好的性能。9％的IgAM只可以雾化一次，具有正常的性能。Omron Micro Air U22不能雾化这些含有聚合多克隆免疫球蛋白的制剂。Omron和Aerogen设备不能从粘度高于3mPa*s的免疫球蛋白制剂产生气雾剂。

总之，本发明通过雾化多克隆免疫球蛋白组合物产生气雾剂的方法显示出在雾化高度浓缩的单体和聚合免疫球蛋白中优于现有方法的性能。