炎性病况的预防和治疗的制作方法

文档序号：11281511阅读：271来源：国知局

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在西方世界，过度饮酒是肝脏疾病的主要原因。在每天消费四杯或更多酒精饮料(对于男性，四杯12盎司的啤酒，四杯葡萄酒或者四盎司烈酒；或者对于女性则数量减半)的个体中，观察到了肝脏损伤的证据。尽管未完全了解酒精如何损伤肝脏，但是慢性饮酒导致促炎性细胞因子(tnf-α、il6和il8)的分泌、氧化应激、脂质过氧化和乙醛毒性，进而导致炎症、细胞凋亡并最终导致肝细胞的纤维化。

酒精性肝病(ald)具有三个主要阶段：酒精性脂肪肝、酒精性肝炎和肝硬化。如果个体戒酒几周，则特征为在肝脏中积聚脂肪酸的酒精性脂肪肝通常无症状且可逆的。在一些情况下，可能经受虚弱、恶心、腹痛、食欲不振以及心神不安。尽管大多数酗酒者显示出一定程度的脂肪肝，在一些情况下，大量饮酒仅需在少于一周内的时段内每天发生，仅五分之一的酗酒者发展为酒精性肝炎，而四分之一发展为肝硬化。酒精性肝炎的特征为肝细胞的炎症，并且通常通过戒酒是可逆的。特征如下的肝硬化通常是不可逆的：炎症、纤维化(细胞硬化)和受损的细胞膜阻止了体内对化学物质的解毒作用，结果导致结疤和坏死。

对于酒精性肝病中肝脏组织损伤在不同阶段的细胞和分子机制知之甚少。尽管在一些领域取得了进展，但是仍缺乏阻止该疾病的有效治疗方法。这一点部分是由于肝脏在免疫学上以及解剖学上是独特的器官。例如，尽管肝实质细胞具有代谢功能，而非实质细胞发挥免疫功能。除了实质肝细胞，肝脏含有一些非实质细胞，如均可参与免疫的lsec、库普弗(kupffer)细胞、树突细胞、nk细胞和nkt细胞。如何精心安排免疫应答以给予针对酒精诱发的损伤的耐受或免疫是未知的。

发明概述

根据本文的一些实施方案，提供了缓解或预防对象中的至少一种炎性病况的方法。该方法可以包括向对象施用足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂。

根据本文的一些实施方案，提供了缓解或预防对象中的至少一种炎性病况的方法。该方法可以包括向对象施用一定量的nkt-2活化剂和一定量的硫苷脂，其中nkt-2活化剂的量和硫苷脂的量合在一起足以激活对象中的ii型nkt细胞。

根据本文的一些实施方案，提供抑制对象中i型nkt细胞介导的组织损伤的方法。该方法可以包括向对象施用有效量的nkt-2活化剂，其中i型nkt细胞的激活降低。

根据本文的一些实施方案，提供了用于缓解或预防对象中的至少一种炎性病况的组合物。该组合物可以包含足以激活对象中ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂。

根据本文的一些实施方案，提供了用于缓解或预防对象中的至少一种炎性病况的组合物。该组合物可以包含一定量的nkt-2活化剂和一定量的硫苷脂，其中nkt-2活化剂的量和硫苷脂的量合在一起足以激活对象中的ii型nkt细胞。

本文还提供了许多可选方案：

可选方案1包括缓解或预防对象中的至少一种炎性病况的方法。该方法可以包括向对象施用足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂。

可选方案2包括可选方案1的方法，其中炎性病况选自：脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化以及炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

可选方案3包括可选方案1-2中任一项的方法，其中该方法还包括向对象施用足以抑制i型nkt细胞激活的量的rar激动剂。

可选方案4包括可选方案3的方法，其中同时施用nkt-2活化剂和rar激动剂。

可选方案5包括可选方案3的方法，其中分开施用nkt-2活化剂和rar激动剂。

可选方案6包括可选方案3的方法，其中顺序施用nkt-2活化剂和rar激动剂。

可选方案7包括可选方案1-6中任一项的方法，其中口服施用nkt-2活化剂。

可选方案8包括可选方案1-7中任一项的方法，其中nkt-2活化剂包含米替福新、米替福新类似物或磷脂中的至少一种。

可选方案9包含可选方案8的方法，其中磷脂包含溶血磷脂酰胆碱(lpc)、lpc类似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)或lsm类似物。

可选方案10包括可选方案9的方法，其中lpc包含lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))或ligna(lpc)(c24:0)中的一种。

可选方案11包括可选方案1-7中任一项的方法，其中nkt-2活化剂包含米替福新或米替福新类似物中的至少一种。

可选方案12包括可选方案8-11中任一项的方法，其中米替福新类似物包含来自表2.1或表2.2的化合物。

可选方案13包括可选方案8-11中任一项的方法，其中米替福新类似物包含来自表2.1的化合物。

可选方案14包括可选方案1-7中任一项的方法，其中nkt-2活化剂包含米替福新。

可选方案15包括可选方案3-14中任一项的方法，其中rar激动剂包含atra或异维a酸。

可选方案16包括可选方案3-14中任一项的方法，其中rar激动剂包含他扎罗汀。

可选方案17包括可选方案3-14中任一项的方法，其中rar激动剂包含视黄醇或视黄醇的酯。

可选方案18包括可选方案1-17中任一项的方法，其中ii型nkt细胞的激活包括下述中的至少一项：由ii型nkt细胞产生il-2、ii型nkt细胞的增殖、在ii型nkt细胞表面表达cd69。

可选方案19包括可选方案3-18中任一项的方法，其中i型nkt细胞激活的抑制包括α-galcer/cd1d-四聚体⁺tcr-β⁺细胞积聚的抑制。

可选方案20包括缓解或预防对象中的至少一种炎性病况的方法，其包括向对象施用一定量的nkt-2活化剂和一定量的硫苷脂，其中nkt-2活化剂的量和硫苷脂的量合在一起足以激活对象中的ii型nkt细胞。

可选方案21包括可选方案20的方法，其中炎性病况选自：脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化以及炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

可选方案22包括可选方案20或可选方案21的方法，其中同时施用硫苷脂和nkt-2活化剂。

可选方案23包括可选方案20或可选方案21的方法，其中分开施用硫苷脂和nkt-2活化剂。

可选方案24包括可选方案20-23中任一项的方法，其中口服施用nkt-2活化剂。

可选方案25包括可选方案20-24中任一项的方法，其中nkt-2活化剂的量足以激活对象中的ii型nkt细胞，并且硫苷脂的量足以激活对象中的ii型nkt细胞。

可选方案26包括可选方案20-25中任一项的方法，其中该方法还包括向对象施用足以抑制i型nkt细胞激活的量的rar激动剂。

可选方案27包括可选方案26的方法，其中同时施用nkt-2活化剂和rar激动剂。

可选方案28包括可选方案26的方法，其中分开施用硫苷脂和nkt-2活化剂。

可选方案29包括可选方案26的方法，其中顺序施用nkt-2活化剂和rar激动剂。

可选方案30包括可选方案20-29中任一项的方法，其中nkt-2活化剂包含米替福新、米替福新类似物或磷脂中的至少一种。

可选方案31包括可选方案30的方法，其中磷脂包含溶血磷脂酰胆碱(lpc)、lpc类似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)或lsm类似物。

可选方案32包含可选方案31的方法，其中lpc包含lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))或ligna(lpc)(c24:0)中的一种。

可选方案33包括可选方案20-29中任一项的方法，其中nkt-2活化剂包含米替福新或米替福新类似物中的至少一种。

可选方案34包括可选方案30-32中任一项的方法，其中米替福新类似物包含来自表2.1或表2.2的化合物。

可选方案35包括可选方案30-32中任一项的方法，其中米替福新类似物包含来自表2.1的化合物。

可选方案36包括可选方案20-29中任一项的方法，其中nkt-2活化剂包含米替福新。

可选方案37包括可选方案20-36中任一项的方法，其中硫苷脂具有下述化学结构：

其中r1选自：键、氢、c1至c30烷基、c1至c30取代的烷基、c1至c30烯基、c1至c30取代的烯基和c5至c12糖；r2选自：氢、羟基、甲氧基和烃氧基；r3选自：氢、羟基、甲氧基、乙氧基和烃氧基；r4选自：氢、羟基和烃氧基；r5选自：氢、羟基、羰基、烃氧基和键；r6选自：c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基和c1至c40炔基；r7选自：c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基和c1至c40炔基；以及r8选自：氢、羟基、羰基、烃氧基和键。

可选方案38包括可选方案20-36中任一项的方法，其中硫苷脂具有下述化学结构：

可选方案39包括可选方案20-35中任一项的方法，其中rar激动剂包含atra或异维a酸。

可选方案40包括可选方案20-38中任一项的方法，其中rar激动剂包含他扎罗汀。

可选方案41包括可选方案20-38中任一项的方法，其中rar激动剂包含视黄醇或视黄醇的酯。

可选方案42包括抑制对象中i型nkt细胞介导的组织损伤的方法，该方法包括向对象施用有效量的磷脂，其中i型nkt细胞的激活降低。

可选方案43包括可选方案42的方法，其中炎性病况选自：脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化以及炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

可选方案44包括可选方案42-43中任一项的方法，其中磷脂包含米替福新、米替福新类似物或磷脂中的至少一种。

可选方案45包括可选方案44的方法，其中磷脂包含溶血磷脂酰胆碱(lpc)、lpc类似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)或lsm类似物。

可选方案46包括可选方案45的方法，其中lpc包含lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))或ligna(lpc)(c24:0)中的一种。

可选方案47包括可选方案42-43中任一项的方法，其中磷脂包含米替福新或米替福新类似物中的至少一种。

可选方案48包括可选方案44-47中任一项的方法，其中米替福新类似物包含来自表2.1或表2.2的化合物。

可选方案49包括可选方案44-47中任一项的方法，其中米替福新类似物包含来自表2.1的化合物。

可选方案50包括可选方案42-43中任一项的方法，其中nkt-2活化剂包含米替福新。

可选方案51包括用于缓解或预防对象中的至少一种炎性病况的组合物，该组合物包含足以激活对象中ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂。

可选方案52包括可选方案51的组合物，所述组合物还包含足以抑制对象中i型nkt细胞激活的量的rar激动剂。

可选方案53包括可选方案48-49中任一项的组合物，其中炎性病况选自：脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、肝硬化、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、自身免疫性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化以及炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

可选方案54包括可选方案51-53中任一项的组合物，其中nkt-2活化剂包含米替福新、米替福新类似物或磷脂中的至少一种。

可选方案55包括可选方案54的组合物，其中磷脂包含溶血磷脂酰胆碱(lpc)、lpc类似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)或lsm类似物。

可选方案56包括可选方案55的组合物，其中lpc包含lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))或ligna(lpc)(c24:0)中的一种。

可选方案57包括可选方案51-53中任一项的组合物，其中磷脂包含米替福新或米替福新类似物中的至少一种。

可选方案58包括可选方案54-57中任一项的组合物，其中米替福新类似物包含来自表2.1或表2.2的化合物。

可选方案59包括可选方案51-57中任一项的组合物，其中米替福新类似物包含来自表2.1的化合物。

可选方案60包括可选方案51-53中任一项的组合物，其中nkt-2活化剂包含米替福新。

可选方案61包括可选方案52-60中任一项的组合物，其中rar激动剂包含atra或异维a酸。

可选方案62包括可选方案52-60中任一项的组合物，其中rar激动剂包含他扎罗汀。

可选方案63包括可选方案52-60中任一项的组合物，其中rar激动剂包含视黄醇或视黄醇的酯。

可选方案64包括可选方案51-63中任一项的组合物，其中将该组合物配制为口服施用。

可选方案65包括用于缓解或预防对象中的至少一种炎性病况的组合物，该组合物包含一定量的nkt-2活化剂和一定量的硫苷脂，其中nkt-2活化剂的量和硫苷脂的量合在一起足以激活对象中的ii型nkt细胞。

可选方案66包括可选方案61的组合物，其中炎性病况选自：脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、自身免疫性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化以及炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

可选方案67包括可选方案65-66中任一项的组合物，其中nkt-2活化剂的量足以激活对象中的ii型nkt细胞，并且硫苷脂的量足以激活对象中的ii型nkt细胞。

可选方案68包括可选方案65-67中任一项的组合物，其中nkt-2活化剂包含米替福新、米替福新类似物或磷脂中的至少一种。

可选方案69包括可选方案68的组合物，其中磷脂包含溶血磷脂酰胆碱(lpc)、lpc类似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)或lsm类似物。

可选方案70包括可选方案69的组合物，其中lpc包含lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))或ligna(lpc)(c24:0)中的一种。

可选方案71包括可选方案65-67中任一项的组合物，其中nkt-2活化剂包含米替福新或米替福新类似物中的至少一种。

可选方案72包括可选方案68-71中任一项的组合物，其中米替福新类似物包含来自表2.1或表2.2的化合物。

可选方案73包括可选方案68-71中任一项的组合物，其中米替福新类似物包含来自表2.1的化合物。

可选方案74包括可选方案65-67中任一项的组合物，其中nkt-2活化剂包含米替福新。

可选方案75包括可选方案65-74中任一项的组合物，其中硫苷脂具有下述化学结构：

可选方案76包括可选方案65-74中任一项的组合物，其中硫苷脂具有下述化学结构：

可选方案77包括可选方案65-76中任一项的组合物，其中该组合物还包含足以抑制对象中i型nkt细胞激活的量的rar激动剂。

可选方案78包括可选方案77的组合物，其中rar激动剂包含atra或异维a酸。

可选方案79包括可选方案77的组合物，其中rar激动剂包含他扎罗汀。

可选方案80包括可选方案77的组合物，其中rar激动剂包含视黄醇或视黄醇的酯。

可选方案81包括可选方案1-50中任一项的方法，其中炎性病况选自：脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化以及炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

可选方案82包括可选方案1-50或81中任一项的方法，其中nkt-2活化剂的量足以激活对象肝脏中的cd8αα⁺t细胞。

可选方案83包括可选方案1-50或81-82中任一项的方法，其还包括向对象施用分离的cd8αα⁺、tcrαβ⁺t细胞。

可选方案84包括可选方案82-83之一的方法，其中在施用nkt-2活化剂之前，向对象施用分离的cd8αα⁺、tcrαβ⁺t细胞。

可选方案85包括可选方案82-83之一的方法，其中向对象同时施用分离的cd8αα⁺、tcrαβ⁺t细胞和nkt-2活化剂。

可选方案86包括可选方案82-83之一的方法，其中在施用nkt-2活化剂之后，向对象施用分离的cd8αα⁺、tcrαβ⁺t细胞。

可选方案87包括可选方案82-87中任一项的方法，并且还包括从哺乳动物获得细胞样品，从所述细胞样品分离cd8αα⁺、tcrαβ⁺t细胞，以及扩增所述分离的t细胞。

可选方案88包括可选方案87的方法，其中哺乳动物是所述对象。

可选方案89包括可选方案87的方法，其中哺乳动物是除所述对象之外的有机体。

可选方案90包括可选方案82-89中任一项的方法，其中分离的t细胞是cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺。

可选方案91包括可选方案82-89中任一项的方法，其中分离的t细胞是cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd122⁺。

可选方案92包括可选方案82-89中任一项的方法，其中分离的t细胞是cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺、cd122⁺。

可选方案93包括可选方案82-92中任一项的方法，其中分离的t细胞是下述中两种或更多种的混合物：cd8αα⁺tcrαβ⁺t细胞、cd8αα⁺tcrαβ⁺cd200⁺t细胞、cd8αα⁺tcrαβ⁺cd122⁺t细胞，以及cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺cd122⁺t细胞。

可选方案94包括缓解或预防对象中的至少一种炎性病况的方法，该方法包括向对象施用分离的cd8αα+、tcrαβ+t细胞，以及施用足以激活对象中ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂。

可选方案95包括可选方案94的方法，其中炎性病况选自：脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化以及炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

可选方案96包括可选方案94-95中任一项的方法，其中nkt-2活化剂包含米替福新或米替福新类似物中的至少一种。

可选方案97包括可选方案94-95中任一项的方法，其中nkt-2活化剂包含米替福新。

可选方案98包括可选方案94-97中任一项的方法，其中nkt-2活化剂的量足以激活对象肝脏中的cd8αα⁺t细胞。

可选方案99包括可选方案94-98中任一项的方法，其中在施用nkt-2活化剂之前，向对象施用分离的cd8αα⁺、tcrαβ⁺t细胞。

可选方案100包括可选方案94-98中任一项的方法，其中向对象同时施用分离的cd8αα⁺、tcrαβ⁺t细胞和nkt-2活化剂。

可选方案101包括可选方案94-98中任一项的方法，其中在施用nkt-2活化剂之后，向对象施用分离的cd8αα⁺、tcrαβ⁺t细胞。

可选方案102包括可选方案94-101中任一项的方法，并且还包括从哺乳动物获得细胞样品，分离来自所述细胞样品的cd8αα⁺、tcrαβ⁺t细胞，以及扩增所述分离的t细胞。

可选方案103包括可选方案102的方法，其中哺乳动物是所述对象。

可选方案104包括可选方案102的方法，其中哺乳动物是除所述对象之外的有机体。

可选方案105包括可选方案94-104中任一项的方法，其中分离的t细胞是cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺。

可选方案106包括可选方案94-104中任一项的方法，其中分离的t细胞是cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd122⁺。

可选方案107包括可选方案94-104中任一项的方法，其中分离的t细胞是cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺、cd122⁺。

可选方案108包括可选方案94-104中任一项的方法，其中分离的t细胞包括下述中两种或更多种的混合物：cd8αα⁺tcrαβ⁺t细胞、cd8αα⁺tcrαβ⁺cd200⁺t细胞、cd8αα⁺tcrαβ⁺cd122⁺t细胞，以及cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺cd122⁺t细胞。

可选方案109包括可选方案51-80中任一项的组合物，其中炎性病况选自：脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化以及炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

可选方案110包括可选方案51-80或109中任一项的组合物，其中nkt-2活化剂的量足以激活对象肝脏中的cd8αα+t细胞。

可选方案111包括可选方案51-80、或109、或110中任一项的组合物，其还包含用于向对象施用的分离的cd8αα+、tcrαβ+t细胞。

可选方案112包括可选方案111的组合物，其中分离的t细胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd200+。

可选方案113包括可选方案111的组合物，其中分离的t细胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd122+。可选方案114包括可选方案111的组合物，其中分离的t细胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd200+、cd122+。

可选方案115包括可选方案111的组合物，其中分离的t细胞包含下述中两种或更多种的混合物：cd8αα⁺tcrαβ⁺t细胞、cd8αα⁺tcrαβ⁺cd200⁺t细胞、cd8αα⁺tcrαβ⁺cd122⁺t细胞，以及cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺cd122⁺t细胞。

附图说明

图1为描述根据本文的一些实施方案，由米替福新刺激ii型nkt细胞的图。

图2a为描述根据本文的一些实施方案，在注射米替福新之后抑制i型nkt细胞扩增的图。

图2b为描述根据本文的一些实施方案，在注射米替福新之后显示抑制i型nkt细胞扩增的流式细胞术数据的一系列图。

图3a为描述根据本文的一些实施方案，在用米替福新处理之后抑制cona-诱导的肝炎的图。

图3b为描述根据本文的一些实施方案，在用米替福新处理之后抑制cona-诱导的肝炎的一系列显微镜图像。图3c为图3b的黑白复制品。

图4a为描述根据本文的一些实施方案，用米替福新治疗小鼠中的酒精性肝病(ald)期间抑制i型nkt细胞积聚的图。

图4b为描述根据本文的一些实施方案，用米替福新治疗小鼠中的酒精性肝病(ald)期间显示抑制i型nkt细胞积聚的流式细胞术数据的一系列图。

图4c为描述根据本文的一些实施方案，在用米替福新治疗小鼠中的酒精性肝病(ald)期间抑制激活的(cd69⁺)i型nkt细胞积聚的图。

图4d为描述根据本文的一些实施方案，在用米替福新治疗小鼠中酒精性肝病(ald)期间抑制中性粒细胞积聚的图。

图5为描述根据本文的一些实施方案，用米替福新治疗慢性和复发实验的自身免疫性脑脊髓炎(eae)，即多发性硬化的原型的图。

图6为描述用硫苷脂治疗慢性实验的自身免疫性脑脊髓炎(eae)，即多发性硬化原型的图。

图7为描述根据本文的一些实施方案，在用米替福新治疗之后抑制人pbmc中i型nkt细胞的体外扩增的图。

图8a和8b为描述根据本文的一些实施方案，按照用注射mbpac1-9(髓鞘碱性蛋白)诱导eae之后的天数，接受不同量的扩增的treg细胞群的小鼠的平均疾病评分的一对图。图8a描述注入有2d11细胞的小鼠的结果。图8b描述注入有p42-50-反应性t细胞系的小鼠的结果。

图9a-9c为根据本文的一些实施方案，显示用激动性抗-vβ6mab治疗小鼠在体内导致激活cd8αα⁺vβ6⁺t细胞和预防eae的一系列图。图9a描述通过流式细胞术表征细胞。图9b描述基于实时pcr数据的vβ6和vβ8.2的相对数量。图9c描述tl-四聚体/cd8+t细胞的百分数。

发明详述

根据本文的一些实施方案，包含足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂的组合物可用于缓解或预防许多炎性病况中的任一种。不受理论的限制，本文预期激活后，ii型nkt细胞可以抑制i型nkt细胞的激活，因此，可以缓解或预防i型nkt细胞介导的与炎症相关的损伤。因此，在一些实施方案中，缓解或预防炎性病况的方法包括施用包含足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂，例如米替福新或米替福新的类似物的组合物。任选地，组合物可以包含足以激活ii型nkt细胞的量的硫苷脂。任选地，组合物可以包含足以抑制i型nkt细胞激活的量的rar激动剂。

nkt细胞

肝脏含有先天性免疫系统的许多特化细胞，包括库普弗(kupffer)细胞、自然杀伤(nk)细胞、自然杀伤t(nkt)细胞和树突细胞。nkt细胞是独特的，因为它们共享nk细胞(例如，nk1.1)的细胞表面受体，此外，它们表达t细胞受体(tcr)，使得它们能够在cd1d分子的环境中识别脂质抗原并桥接先天性免疫应答与适应性免疫。nkt细胞能够调节其它细胞的活性，所述其它细胞有助于组织炎症和相关的细胞损伤。在激活后，nkt细胞迅速分泌大量的ifn-γ、il-4、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子，以及多种其它细胞因子和趋化因子。由于nkt细胞能够分泌th1和th2细胞因子，可能难以预测体内nkt细胞激活的后果。根据上下文，nkt细胞激活触发促进或抑制不同免疫应答的事件的级联。在一些环境中，nkt细胞的激活导致nk细胞、树突细胞(dc)和b细胞的激活。nkt细胞的方面讨论于kumar,“nkt-cellsubsets:promotersandprotectorsininflammatoryliverdisease”journalofhepatology,2013,59:618-620中，将其通过引用整体并入本文。

nkt细胞识别呈递在单型mhci类样分子cd1d的环境中的脂质抗原。cd1d限制性nkt细胞，被分类为i型(也被称为“i型nkt细胞”或“nkt-1”细胞)和ii型(也被称为“ii型nkt细胞”或“nkt-2”细胞)，其识别由cd1d分子呈递的不同脂质抗原。虽然两个nkt细胞亚群主要为nk1.1+(小鼠)或cd161+/cd56+(人)，但在小鼠和人中它们的相对数是不同的，因此，当i型nkt细胞在小鼠中占优势时，ii型nkt细胞亚群在人中占优势。

i型，也被称为不变nkt细胞，表达在小鼠中以vα14-jα18和vβ8.2、vβ7或vβ2为特征，或在人中以vα24-jαq和vβ11为特征的半不变t细胞受体(tcr)，与海绵来源的糖脂α-半乳糖基神经酰胺(“α-galcer”或“αgalcer”)为具有强反应性，以及在流式细胞术中通过α-galcer/cd1d-四聚体鉴定。i型nkt细胞也识别基于脂质的抗原，如细菌来源的脂质和自身糖脂、异球三己糖苷神经酰胺(isoglobotrihexosylceramide(igb3))。i型nkt细胞显示记忆标志物，并且在储存细胞因子的预先形成的mrna中是独特的。没有jα18基因的小鼠(jα18小鼠)仅缺乏i型nkt细胞。

与i型nkt细胞不同的ii型nkt细胞为调节细胞，其可以调控数种其它细胞亚群(包括i型nkt细胞)的活性。ii型nkt细胞识别小鼠和人中的自身糖脂、硫苷脂(3’-磺基半乳糖基神经酰胺)。可以在流式细胞术中使用硫苷脂/cd1d-四聚体鉴定的ii型nkt细胞的主要亚群，主要利用vβ8.1/vβ3.1-jβ2.7和vα1/vα3-jα7基因片段，并且可与硫苷脂反应。通过评估ii型nkt细胞对候选试剂的体外增殖反应，以及通过针对ifn-γ、il-4或il-13的细胞内细胞因子染色或实时pcr来评估cd69表达和细胞因子分泌概况，可以评价ii型nkt细胞的激活。另外，使用cf8e稀释分析和α-galcer/co1d四聚体细胞的细胞内细胞因子染色，通过评估i型nkt细胞对α-galcer(i型nkt细胞的有效活化剂)的增殖反应，可以评价激活的ii型nkt细胞使i型nkt细胞无反应性(anergize)的能力。根据本文的一些实施方案的nkt细胞(i型或ii型)的激活，可以基于胸苷掺入被量化为刺激指数(参见，例如图2a)。

如本文所用，“nkt-2活化剂”(包括该词根术语的变化)是指这样的化合物，其在与ii型nkt细胞接触后诱导以下至少一种：由ii型nkt细胞分泌il-2、ii型nkt细胞的增殖、或在ii型nkt细胞表面上升高的cd69表达。根据本文的方法、试剂盒和组合物，合适的示例性nkt-2活化剂包括但不限于：米替福新、米替福新类似物(例如表2.1和表2.2中列出的化合物)、磷脂，如溶血磷脂酰胆碱(lpc)(例如，lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))和/或ligna(lpc)(c24:0))、lpc的类似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)和/或lsm的类似物。不受任何理论的限制，预期根据本文的一些实施方案的nkt-2活化剂，因此可以激活ii型nkt细胞，其继而可以抑制i型nkt细胞的激活。

在一些实施方案中，ii型nkt细胞的激活包括：由ii型nkt细胞分泌il-2、ii型nkt细胞的增殖、在ii型nkt细胞表面上升高的cd69表达、这些中的任何两种、这些中的任何三种、或这些中的全部四种。

在一些实施方案中，i型nkt细胞激活的抑制包括：i型nkt细胞增殖的抑制、减少的i型nkt细胞积聚、在i型nkt细胞表面上降低的cd69表达、这些中的任何两种、或这些中的全部三种。

缺血再灌注损伤后的nkt-2活化剂及i型和ii型nkt细胞

当缺血一段时间之后，将血液供应恢复至器官或组织时，发生再灌注损伤。肝脏再灌注损伤的发生通常与手术或创伤有关，并且在肝移植之后移植组织的质量和功能中发挥主要作用。缺血再灌注损伤(iri)的发展，在至少两个阶段发生：初始阶段(再灌注之后约1小时至约6小时)，其由库普弗细胞激活、活性氧类的释放、cd4⁺细胞募集和促炎细胞因子的分泌主导；和后期阶段(再灌注的初始阶段之后约6小时至约48小时)，其特征在于中性粒细胞积聚和坏死的诱导。通常，i型nkt细胞也在缺血再灌注之后被激活并分泌ifn-γ。因为已经显示，nkt-2活化剂如米替福新的施用，可以刺激ii型nkt细胞(参见图1)和抑制i型nkt细胞扩增(参见图2a和图2b)，预期根据本文一些实施方案的nkt-2活化剂如米替福新和米替福新的类似物及磷脂，可以用于抑制与缺血再灌注相关的i型nkt激活。

因此，在一些实施方案中，提供包含足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂，例如米替福新或米替福新类似物、或磷脂的组合物，用于治疗、改善、预防或降低发展缺血再灌注损伤的风险。任选地，组合物还包含足以抑制i型nkt细胞的量的rar激动剂，例如他扎罗汀。任选地，组合物还包含足以激活ii型nkt细胞的量的硫苷脂。在一些实施方案中，将组合物施用于罹患缺血再灌注损伤或处于发展缺血再灌注损伤风险的对象。

在一些实施方案中，提供包含一定量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)和一定量的硫苷脂的组合物用于治疗、改善、预防或降低发展缺血再灌注损伤的风险，nkt-2活化剂的量和硫苷脂的量合在一起足以激活ii型nkt细胞。任选地，组合物还包含足以抑制i型nkt细胞的量的rar激动剂(例如，他扎罗汀)。在一些实施方案中，将组合物施用于罹患缺血再灌注损伤或处于发展缺血再灌注损伤风险的对象。任选地，口服施用该组合物。

在一些实施方案中，将足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)，施用于罹患iri或处于iri风险的对象。任选地，将足以抑制i型nkt细胞激活的量的rar激动剂(例如，他扎罗汀)施用于所述对象。任选地，所述施用为口服的。任选地，将足以激活ii型nkt细胞的量的硫苷脂进一步施用于所述对象。在一些实施方案中，同时施用nkt-2活化剂和rar激动剂。在一些实施方案中，分开施用nkt-2活化剂和rar激动剂。在一些实施方案中，首先施用nkt-2活化剂，随后施用rar激动剂。在一些实施方案中，首先施用rar激动剂，随后施用nkt-2活化剂。在一些实施方案中，进行rar激动剂和nkt-2活化剂的交替施用。

在肝病中的nkt-2活化剂和激活的i型和ii型nkt细胞

如美国专利第8,044,029号和美国公开第2011/0118197号和美国公开第2014/0187504号中所述(将其各自通过引用整体并入本文)，自身糖脂配体、硫苷脂以及合成硫苷脂类似物的施用，可以调控i型和ii型nkt细胞的活性。不受任何理论的限制，硫苷脂的cd1d-依赖性识别激活ii型nkt细胞，并且主要激活浆细胞样树突细胞(pdc)，而非常规的树突细胞(cdc)群(其通常被1型nkt细胞激活)，导致以il-12和mip2-依赖性方式将i型nkt细胞迅速募集至肝脏中。然而，募集的i型nkt细胞不被激活、不分泌细胞因子并且是无变应性的。已经显示，体内施用硫苷脂a)抑制响应于α-galcer的刺激的i型nkt细胞的体内增殖，和b)增加具有胞质内ifn-γ染色的硫苷脂/cd1d-四聚体+细胞的百分数。

已经观察到，与未处理的动物相比，在缺血和再灌注损伤的早期，由肝脏i型nkt细胞分泌的ifn-γ在接受硫苷脂的小鼠中显著降低。此外，由于jα18^-/-小鼠中没有i型nkt细胞，在用硫苷脂治疗的小鼠中缺血/再灌注之后的肝损伤显著降低。该观察结果表明，在介导肝脏缺血和再灌注损伤中i型nkt细胞的致病作用。不受任何理论的限制，i型nkt细胞的ifn-γ分泌的作用，可为缺血器官损伤的共同特征，因为肾缺血和再灌注损伤也在没有1型nkt的jα18^-/-小鼠中减弱。

类似于iri，硫苷脂或nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)的施用，可以免受伴刀豆球蛋白a(cona)-诱导的肝炎，如通过减少的肝细胞坏死及减少的丙氨酸氨基转移酶(alt)和天冬氨酸氨基转移酶(ast)(肝细胞损伤的标志物)的血浆水平所指示的。此外，在cona之前12小时施用米替福新，在随后24小时降低alt的血浆水平(图3a)，以及减少细胞坏死，如通过肝脏切片的h&e染色所确定的(图3b)。不受任何理论的限制，这些观察结果表明，i型nkt细胞在cona-诱导的肝炎中的致病作用，以及硫苷脂和/或磷脂(例如米替福新或米替福新类似物)的保护作用。

不受任何理论的限制，来自肝损伤、iri和cona-诱导的肝炎的模型的数据与免疫调节途径一致，其中在由多种原因引起的肝脏炎症中，i型nkt细胞起不利作用，而硫苷脂/nkt-2活化剂-反应性ii型nkt细胞起保护作用。此类保护与由i型nkt细胞引起的细胞因子分泌的抑制(抑制的表型)和不成熟髓样细胞(cd11b+gr-1+)cd11b+gr-1-和nk细胞的肝脏募集的显著减少有关。i型nkt细胞中的抑制也与常规树突细胞(cdc)的耐受或修饰有关，它们和受抑制的i型nkt细胞一起抑制适应性th1/th17cd4+/cd8+t细胞的激活/扩增。这产生了这样的模型，其中硫苷脂和/或nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新的类似物或磷脂)的施用刺激ii型nkt细胞的活性，这继而抑制i型nkt细胞活性和由i型nkt细胞介导的炎症引起的肝损伤。

因此，在一些实施方案中，提供包含足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)的组合物，用于治疗肝损伤或肝疾病。任选地，组合物还包含足以抑制i型nkt细胞激活的量的rar激动剂(例如，他扎罗汀)。任选地，组合物还包含足以激活ii型nkt细胞的量的硫苷脂。在一些实施方案中，将组合物施用于罹患肝损伤或处于发展肝损伤或肝疾病风险的对象，所述肝损伤或肝疾病例如，脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、肝硬化、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎。

在一些实施方案中，提供包含一定量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)和一定量的硫苷脂的组合物，用于治疗、改善、预防或降低发展肝损伤或肝疾病的风险，所述nkt-2活化剂的量和所述硫苷脂的量合在一起足以激活ii型nkt细胞。任选地，组合物还包含足以抑制i型nkt细胞激活的量的rar激动剂(例如，他扎罗汀)。在一些实施方案中，将组合物施用于罹患肝损伤或肝疾病或处于发展肝损伤或肝疾病风险的对象，所述肝损伤或肝疾病例如，脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、肝硬化、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎。

在一些实施方案中，将足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)，施用于罹患肝损伤或肝疾病或处于肝损伤或肝疾病风险的对象。任选地，将足以抑制i型nkt细胞激活的量的rar激动剂(例如，他扎罗汀)施用于所述对象。任选地，施用为口服的。任选地，将足以激活ii型nkt细胞的量的硫苷脂进一步施用于所述对象。在一些实施方案中，同时施用nkt-2活化剂和rar激动剂。在一些实施方案中，分开施用nkt-2活化剂和rar激动剂。在一些实施方案中，首先施用nkt-2活化剂，随后施用rar激动剂。在一些实施方案中，首先施用rar激动剂，随后施用nkt-2活化剂。在一些实施方案中，进行rar激动剂和nkt-2活化剂的交替施用。在一些实施方案中，对象罹患肝损伤或肝疾病或处于发展肝损伤或肝疾病的风险，所述肝损伤或肝疾病例如，脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、肝硬化、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎。

酒精性肝病中的nkt细胞

由于过量饮酒引起肝细胞损伤进而发展酒精性肝病(ald)。在观察到ald的临床表现之前，可能需要多种损害(insults)。然而，已经观察到，长期饮酒之后在肝脏中观察到显著增加数目的i型nkt细胞(α-galcer/cd1d-四聚体+细胞)、cd4+细胞和cd11b+gr-1+髓样细胞，而非ii型nkt细胞或cd11b+gr-1-细胞。增强的cd69标志物的表达进一步表明i型nkt细胞至少部分被激活。因此，过量饮酒之后，即使在没有疾病的任何临床症状(临床前期)下，介导炎症应答的细胞在肝脏中积聚。长期饮酒之后，在没有i型nkt细胞(jα18-/-小鼠)下，cd11b+gr-1+髓样细胞在肝脏中的积聚显著减少。不受任何理论的限制，这些数据表明，i型nkt细胞参与介导ald的临床前期。

与表明i型nkt细胞在ald的临床前期中的作用的数据一致，过量饮酒之后肝损伤的临床表现显著减少，如例如，通过在i型nkt细胞缺乏的(jα18-/-)小鼠中进行组织学和肝酶分析所测量的。不受任何理论的限制，这些数据表明，i型nkt细胞在肝脏的酒精性损伤中起重要作用。

nkt细胞表达t细胞受体，这使得它们能够在cd1d分子的环境中识别脂质抗原。不希望受特定理论的束缚，在饮酒后由表达cd1d的抗原呈递细胞(apc)局部呈递氧化的自身脂质，i型nkt细胞在肝脏中被激活。然后，激活的i型nkt细胞引发多级过程，导致库普弗细胞激活、粒细胞的募集/激活，随后是肝细胞的炎症损伤。

如图4a和图4b所示，在酒精性肝病的鼠模型中，与仅施用乙醇相比，将米替福新与乙醇结合施用抑制了i型nkt细胞的积聚。此外，如图4c中所示，与仅施用乙醇相比，将米替福新与乙醇结合施用也减少了激活的(cd69⁺)nkt细胞水平。此外，如图4d中所示，与仅施用乙醇相比，将米替福新与乙醇结合施用也减少了中性粒细胞水平。

饮酒之后nkt细胞亚型之间的相互作用设定肝损伤的阶段，在严重情况下，为酒精性肝病(ald)。本文所述的若干实施方案涉及用于操作i型nkt细胞和ii型nkt细胞的相反作用以及它们与其它肝细胞相互作用的方法和组合物，以治疗、缓解或预防饮酒之后对肝脏的损伤。

硫苷脂治疗导致过量饮酒之后几乎完全保护免于肝损伤。不希望受特定理论的束缚，硫苷脂的保护作用可以通过直接激活ii型nkt细胞来介导，其对i型nkt细胞和cdc发挥抑制作用。

因此，本文的一些实施方案涉及调控nkt细胞亚型的活性，以治疗、改善和/或预防酒精诱导的肝脏损伤。如本文所述，nkt-2活化剂(例如米替福新)、硫苷脂或视黄酸受体(rar)激动剂的施用，抑制酒精诱导的肝损伤。例如，米替福新的口服施用减少由乙醇诱导的i型nkt细胞积聚和激活，以及中性粒细胞积聚(参见图4a、4b、4c和4d)。

若干实施方案涉及与硫苷脂反应的ii型nkt细胞的主要亚群在酒精诱导的肝损伤中的保护作用。通过硫苷脂激活这种nkt细胞亚群抑制了过量饮酒之后i型nkt细胞介导的损伤。硫苷脂介导的保护与ii型nkt细胞的激活和由肝脏i型nkt细胞引起的ifn-γ分泌的抑制以及i型nkt细胞介导的髓样细胞(例如，cd11b⁺gr-1^int和gr-1^-亚群及nk细胞)募集至肝脏的抑制有关。

因此，在一些实施方案中，提供包含足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物)的组合物，用于治疗、改善或预防酒精性肝病。任选地，化合物还包含足以抑制i型nkt细胞激活的量的rar激动剂(例如，他扎罗汀)。任选地，口服施用该组合物。

在一些实施方案中，提供包含一定量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物)和一定量的硫苷脂的组合物用于治疗、改善、预防或降低酒精性肝病的风险，nkt-2活化剂的量和硫苷脂的量合在一起足以激活ii型nkt细胞。任选地，组合物还包含足以抑制i型nkt细胞激活的量的rar激动剂(例如，他扎罗汀)。任选地，口服施用该组合物。

在一些实施方案中，将足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物)，施用于罹患酒精性肝病或处于发展酒精性肝病风险的对象。任选地，将足以抑制i型nkt细胞激活的量的rar激动剂(例如，他扎罗汀)施用于所述对象。任选地，施用为口服的。任选地，将足以激活ii型nkt细胞的量的硫苷脂进一步施用于所述对象。在一些实施方案中，同时施用nkt-2活化剂和rar激动剂。在一些实施方案中，分开施用nkt-2活化剂和rar激动剂。在一些实施方案中，首先施用nkt-2活化剂，随后施用rar激动剂。在一些实施方案中，首先施用rar激动剂，随后施用nkt-2活化剂。在一些实施方案中，进行rar激动剂和nkt-2活化剂的交替施用。

硫苷脂

在一些实施方案中，硫苷脂包括，例如牛脑来源的硫苷脂，其为获自sigmainc.(chicago,il,usa)的约20种不同物质的混合物。在其它实施方案中，硫苷脂为半合成的，包括单种硫苷脂，例如，获自maitreyainc,(pleasantgap,pa,usa)的顺二十四碳烯酰硫苷脂或溶硫苷脂(lysosulfatide)。在其它实施方案中，硫苷脂可以为完全合成的硫苷脂。

来自牛脑髓磷脂的硫苷脂由饱和/不饱和的主要酰基链(c24)以2:1混合物组成，其中不饱和现象发生在c19。若干实施方案涉及合成硫苷脂类似物的用途，所述合成硫苷脂类似物如具有饱和酰基链(c24)和不饱和链(c24:1)的类似物，以及由在脂肪酸或鞘氨醇部分(较短的以及较长的，例如，c18、c32)中不同长度的酰基链组成的类似物并且在半乳糖部分上具有3'相对于4'-硫酸基的位置异构体(3'-803相对于4'-803)。

在一些实施方案中，硫苷脂具有下述化学式i：

式i

其中r1可以为键、氢、c1至c30烷基、c1至c30取代的烷基、c1至c30烯基、c1至c30取代的烯基、或c5至c12糖；r2可以为氢、羟基、甲氧基或烃氧基；r3可以为氢、羟基、甲氧基、乙氧基或烃氧基；r4可以为氢、羟基或烃氧基；r5可以为氢、羟基、羰基、烃氧基或键；r6可以为c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基、或c1至c40炔基；r7可以为c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基、或c1至c40炔基；以及r8可以为氢、羟基、羰基、烃氧基或键。

在其它实施方案中，硫苷脂具有下述化学式ii：

式ii

其中r1选自：c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基和c1至c40炔基；以及r2选自：氢、羟基、羰基、烃氧基和键。

在另外实施方案中，硫苷脂具有下述化学结构：

式iii

如本文所用，术语“烷基”意为任何无支链的或分支的饱和烃。术语“取代的烷基”意为任何无支链的或分支的取代的饱和烃。环状化合物(具有杂原子的环状烃和环状化合物)在“烷基”的含义内。

如本文所用，术语“取代的”意为用官能团任意取代氢原子。

如本文所用，术语“官能团”具有其常用定义，并且是指优选选自以下的化学部分：卤素原子、c1-c20烷基、取代的c1-c20烷基、全卤化烷基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、苄基、杂芳基、取代的杂芳基、氰基和硝基。

如本文所用，术语“卤素”和“卤素原子”是指元素周期表第17列的放射性稳定的原子中任一种，优选氟、氯、溴或碘，其中氟和氯为特别优选的。

如本文所用，术语“烯基”意为任何无支链的或分支的、取代或未取代的不饱和烃。术语“取代的烯基”意为被一个或多个官能团取代的任何无支链的或分支的、取代的不饱和烃，其中无支链的c2-c6烯基仲胺、取代的c2-c6烯基仲胺和无支链的c2-c6烯基叔胺在“取代的烷基”的定义内。环状化合物(具有杂原子的不饱和的环状烃和环状化合物)在“烯基”的含义内。

如本文所用，术语“烃氧基”是指任何无支链的或分支的、取代或未取代的、饱和或不饱和的醚。

如本文所用，术语“硫苷脂”保留其一般惯常的含义，并且是指在分子的糖部分含有一个或多个硫酸基团的脑苷脂硫酸酯。

如本文所用，术语“脑苷脂”是指含有糖的任何脂质化合物，并且通常为脑和神经组织中发现的类型。

式(i)、(ii)和(iii)的化合物可以呈其药学可接受的无毒盐形式。式(i)、(ii)和(iii)的盐包括：酸加成盐，如无机酸(例如，盐酸、硫酸、硝酸和磷酸)的盐或有机酸(例如，乙酸、丙酸、马来酸、油酸、棕榈酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、富马酸、谷氨酸、泛酸、月桂基磺酸、甲磺酸和邻苯二甲酸)的盐。

式(i)、(ii)和(iii)的化合物可以呈其溶剂合物(例如，水合物)的形式。

式(i)、(ii)和(iii)的化合物可以通过任何有目的的方法制备以合成硫苷脂。

式(i)、(ii)和(iii)的化合物也可以分离自天然产物(例如，生物有机体)，并且通过柱色谱法等进行纯化。

在一个实施方案中，硫苷脂具有化学式：(2s,3r,4e)-n-神经酸(nervonic)-1-[-d-(3-硫酸酯)-半乳吡喃糖基]-2-氨基-十八烯-3-醇。该化学式也被称为顺二十四碳烯酰硫苷脂。

在一些实施方案中，施用于患者的硫苷脂的特定量，将根据治疗的疾病或病况以及正治疗患者的年龄、体重和性别而变化。通常，为了在例如肠和血液中实现这样的最终浓度，在本申请实施方案的单一剂量组合物中，硫苷脂分子的量通常为：约0.1毫克至约100毫克，优选约2.0毫克至约60毫克，更优选约20毫克至约50毫克。同样地，在本申请实施方案的单一口服剂量组合物中，第二治疗化合物的量的范围通常为：约0.01毫克至约1000毫克，更优选约0.1毫克至约100毫克。明显地，确切的剂量将随着正治疗的疾病或病症而变化，优选的范围是容易确定的。在一些实施方案中，患者为人。

在一些实施方案中，向对象施用0.1-10mg/kg体重的硫苷脂，例如约0.1mg/kg体重、0.2mg/kg体重、0.3mg/kg体重、0.5mg/kg体重、1mg/kg体重、2mg/kg体重、3mg/kg体重、5mg/kg体重、9mg/kg体重，或诸如0.2-0.5mg/kg体重、0.2-1mg/kg体重、0.2-5mg/kg体重、0.2-10mg/kg体重、0.5-1mg/kg体重、0.5-5mg/kg体重、0.5-10mg/kg体重、1-5mg/kg体重、1-10mg/kg体重、2-5mg/kg体重、2-10mg/kg体重、或5-10mg/kg体重范围的硫苷脂。优选地，根据需要重复该剂量。任选地，可以重复该剂量。任选地，剂量可以每天重复五次、每天四次、每天三次、每天两次、每天一次、或频率更低，例如每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天一次，包括所列数值中的任何两个之间的范围，例如每1-2天、每1-3天、每1-5天、每1-10天、每1-20天、每2-3天、每3-5天、每3-10天、每3-20天、每5-10天、或每5-20天。

视黄酸受体(rar)激动剂

如本文所述，视黄酸受体(rar)激动剂(全反式视黄酸(atra))的施用，显著抑制由饮酒引起的肝损伤。乙醇摄取消耗肝脏视黄酯，并且改变全反式视黄酸(atra)的生理水平，全反式视黄酸是维生素a的生物活性形式，其支持许多生理功能，并且可以增强初始cd4+t细胞分化成foxp3+tregs的产生、稳定性和功能，甚至在il-6存在下亦如此。本文所述的若干实施方案涉及以下发现：atra抑制i型nkt细胞效应物功能，包括抑制这些细胞的细胞因子分泌。此外，atra对i型nkt细胞活性具有直接的抑制作用，在没有抗原呈递细胞的情况下发挥其抑制作用。另外，atra不直接抑制识别蛋白质抗原(如髓磷脂碱性蛋白或mbpac1-9)的常规mhc-限制性cd4+t细胞的活性。不希望受特定理论的束缚，这些数据表明，atra通过抑制i型nkt细胞来保护以免于由过量饮酒引起的肝损伤。

如本文所述，rar激动剂诱导i型nkt细胞的抑制。此外，通过施用rar激动剂，可以预防、减少或减轻由过量饮酒造成的i型nkt细胞介导的炎症引起的肝损伤。由于各种不同的原因，肝脏会发炎。例如，肝脏炎症可以由细菌或病毒感染、损伤、或自身免疫系统的攻击引起。虽然炎症通常为保护性反应和愈合过程的必需步骤，但长期或慢性炎症可引起损伤。本文所述的若干实施方案涉及rar激动剂介导的对导致炎症之后、与炎症相关或由其炎症引起的肝损伤的先天性免疫机制的调控。一些实施方案涉及rar激动剂介导的i型nkt细胞活性抑制的方法和组合物，其调控先天免疫系统组分之间的相互作用，以提供对肠来源的或代谢物来源的抗原的耐受性，而不影响或最低程度地影响对非自身鉴定的病原体的先天性免疫应答。

因为rar激动剂可以直接使i型nkt细胞无反应性，所以rar激动剂可以用于治疗i型nkt细胞起致病作用的任何适应症。可以通过本公开实施方案治疗的疾病的一些实例包括：酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化和炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

在一些实施方案中，通过rar激动剂介导的i型nkt细胞活性的抑制，来治疗、预防或减轻自身免疫或免疫相关的疾病或病症的多种适应症。具体地，本申请实施方案的一个方面涉及用有效量的rar激动剂治疗患有以下症状的患者的方法：自身免疫或免疫相关疾病或病症，如，例如，多发性硬化、全身性红斑狼疮、aids、阿尔茨海默病、类风湿性关节炎、胰岛素依赖性糖尿病、自身免疫性肝炎、哮喘、乳糜泻、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症。在一些实施方案中，rar激动剂介导的i型nkt细胞活性的抑制，治疗、预防或减轻哮喘症状。在一些实施方案中，患者为人。

一些实施方案涉及通过施用rar激动剂来抑制或预防缺血再灌注之后i型nkt细胞介导的炎症的方法。i型nkt细胞在诸如缺血和再灌注损伤的病况中起致病作用。当缺血一段时间之后恢复血液供应时，可以在多个组织中发生再灌注损伤。实例包括：挤压损伤后的骨骼肌组织，与心肌梗死或心脏手术、或缺血性心脏病相关的心肌，与中风或脑外伤相关的神经组织，以及与手术或创伤相关的肝组织和肾组织。缺血再灌注损伤也在器官移植中的移植组织的质量和功能中起主要作用。缺血和再灌注损伤是增加的住院治疗的长度和降低的长期移植存活率的主要原因。在一些实施方案中，rar激动剂介导的i型nkt细胞活性的抑制，抑制或预防了与手术或创伤相关的肝脏缺血再灌注损伤。

本文所述的实施方案涉及通过一种或多种视黄酸受体(rar)激动剂来抑制i型nkt细胞活性。视黄酸受体包括三种主要亚型：rarα、rarβ和rarγ。一些实施方案涉及通过一种或多种泛活性(pan-active)rar激动剂、此类泛活性rar激动剂的前体和它们的混合物，来抑制i型nkt细胞活性。如本文所用，术语“泛活性rar激动剂”是指这样的rar激动剂，其基本上同等地或非选择性地影响，例如，激活rarα、rarβ和rarγ。一些实施方案涉及通过对选择性地或甚至特异性地影响，例如，激活rarβ和rarγ(相对于rarα而言)中的至少一种，并且优选rarβ和rarγ两者有效的一种或多种有活性的rar激动剂、此类有活性的rar激动剂的前体和它们的混合物，来抑制i型nkt细胞活性。如本文中所用的，术语“选择性地”意为相对于rarα，rar激动剂、rar激动剂的前体和它们的混合物在影响rarβ和rarγ中的至少一种，并且优选rarβ和rarγ两者中更有效，优选有效至少约10倍或约100倍至约1000倍或更多。一些实施方案涉及通过一种或多种亚型-选择性rar激动剂、此类亚型-选择性rar激动剂的前体和它们的混合物，抑制i型nkt细胞活性。如本文所用，术语“亚型-选择性rar激动剂”是指这样的rar激动剂，其选择性地影响，例如，激活一种rar亚型。具有rarα、rarβ和rarγ-选择性的类视色素化合物为本领域已知的，并且公开于，例如，美国专利第6,534,544号和第6,025,388号中，将其通过引用整体并入本文。

一些实施方案涉及通过施用一种或多种视黄酸受体(rar)激动剂来抑制促炎i型nkt细胞活性的方法。rar激动剂的实例包括但不限于表1中列出的rar激动剂。

表1：rar激动剂

在一些实施方案中，促炎i型nkt细胞活性被一种或多种选自以下的rar激动剂抑制：atra、视黄醇、9-顺式-ra或13-顺式-ra、维a酸、am580、ac55649、cd1530或他扎罗汀。在一些实施方案中，促炎i型nkt细胞活性被一种或多种聚烯烃类视色素，如异维a酸和阿曲汀(acitretin)抑制。在一些实施方案中，促炎i型nkt细胞活性被一种或多种选自以下的rar激动剂抑制：依曲替酯、阿曲汀和异维a酸。

若干实施方案涉及通过他扎罗汀、他扎罗汀酸(tazarotenicacid)或它们的混合物来抑制促炎i型nkt细胞活性。他扎罗汀为一种乙酯前药，其被代谢成相应的游离酸，即他扎罗汀酸。他扎罗汀具有刚性环锁结构，与全反式视黄酸(视黄酸受体(rar)的天然配体)相比，其提供有限的构象柔性。该结构变化赋予他扎罗汀酸对rar的特异性和对rarβ和rarγ的选择性。

rar激动剂的实例还包括顺式-和反式-视黄酸的酯，例如，烷基酯，如伯、仲或叔醇，包括但不限于：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、己基、庚基、乙基己基、辛基、壬基、月桂基、油烯基、硬脂酰基、羟乙基、羟丙基、苄基、α-甲基苄基、α-丙基苯基、戊基、异戊基、茴香基、鲸蜡基、薄荷基、肉桂基、频哪醇、呋喃基或肉豆蔻基。

rar激动剂的药学可接受的盐也可以用于抑制i型nkt细胞活性。本文公开的化合物具有足够酸性、足够碱性或前述两种官能团，因此其能够与许多有机或无机碱、及无机和有机酸中的任一种反应以形成盐。

可以用于由具有碱性基团的rar激动剂形成酸加成盐的酸的实例包括：无机酸，如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸等；和有机酸，如对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对溴苯基-磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸等。此类盐的实例包括：硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、重亚硫酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐等。

可以用于由具有酸性基团的rar激动剂形成碱加成盐的碱的实例包括但不限于：碱金属，如钠、钾和锂的氢氧化物；碱土金属，如钙和镁的氢氧化物；其它金属，如铝和锌的氢氧化物；氨和有机胺，如未取代的或羟基取代的单-、二-或三烷基胺；二环己基胺；三丁基胺；吡啶；n-甲基、n-乙胺；二乙胺；三乙胺；单-、双-、或三-(2-羟基-低级烷基胺)，如单-、双-、或三-(2-羟乙基)胺、2-羟基-叔丁胺或三-(羟甲基)甲胺、n,n-二-低级烷基-n-(羟基低级烷基)-胺，如n,n-二甲基-n-(2-羟乙基)胺或三-(2-羟乙基)胺；n-甲基-d-葡糖胺；和氨基酸，如精氨酸、赖氨酸等。

如本文所用，术语“患者”或“对象”是指治疗性治疗的接受者，并且包括动物界内的所有生物体。在优选实施方案中，动物在哺乳动物家族内，如人、牛科动物、绵羊、猪、猫科动物、水牛、犬、山羊、马、驴、鹿和灵长类动物。在一些实施方案中，动物包括非人哺乳动物。最优选的动物为人。因此，在一些实施方案中，患者或对象为人。

如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”分别包括“预防(prevent)”、“预防(preventing)”和“预防(prevention)”。

如本文所用，术语药剂的“有效量”为足以治疗、抑制或预防由促炎1型nkt细胞活性造成的肝损伤的量。

一些实施方案涉及在临床表现ald之前，用硫苷脂和/或rar激动剂预处理患者。在若干实施方案中，在放纵饮酒之前，用有效量的硫苷脂和/或rar激动剂治疗患者。在一些其它实施方案中，在放纵饮酒之前约0.5小时至约18小时，用有效量的硫苷脂和/或rar激动剂治疗患者。在一些其它实施方案中，在长期饮酒期间用有效量的硫苷脂和/或rar激动剂治疗患者。在一些实施方案中，患者为人。

在一些实施方案中，施用于患者的rar激动剂的特定量将根据治疗的疾病或病况以及正治疗患者的年龄、体重和性别而变化。通常，为了在例如肠和血液中实现这样的最终浓度，本申请实施方案的单一剂量组合物中rar激动剂的量通常为约0.1毫克至约100毫克，优选约2.0毫克至约60毫克，更优选约20毫克至约50毫克。合适剂量的实例包括：约0.1至约10mg/天；约0.5至约2mg/天；约0.01-100mg/天；约1至约50mg/天；约0.1mg/天至约1.0mg/天；约1.0mg/天至约5.0mg/天；约5.0mg/天至约10.0mg/天；约10.0mg/天至约15mg/天；约15.0mg/天至约20.0mg/天；约20.0mg/天至约25.0mg/天；约30.0mg/天至约35.0mg/天；约35.0mg/天至约40.0mg/天；约40.0mg/天至约45.0mg/天；约45.0mg/天至约50.0mg/天；约50.0mg/天至约55.0mg/天；约55.0至约60.0mg/天；约60.0mg/天至约65.0mg/天；约65.0mg/天至约70.0mg/天；约70.0mg/天至约75.0mg/天；约75.0mg/天至约80.0mg/天；约80.0mg/天至约85.0mg/天；约85.0至约90.0mg/天；约85.0mg/天至约90.0mg/天；约90.0mg/天至约95.0mg/天；和约95.0mg/天至约100.0mg/天。明显地，确切的剂量将随着正治疗的疾病或病症而变化，优选的范围是容易确定的。在一些实施方案中，患者为人。

当口服施用他扎罗汀以实现i型nkt细胞活性降低时，他扎罗汀的每日剂量优选在约0.3mg/天至约7mg/天或约8mg/天的范围内，更优选在约0.6mg/天至约6.5mg/天或约7mg/天的范围内。在一些实施方案中，口服施用的他扎罗汀以下述每日剂量的他扎罗汀施用，包括0.4mg/天、0.75mg/天、1.5mg/天、2.8mg/天、3mg/天、4.5mg/天、6mg/天和6.3mg/天。

根据实施方案，可以施用rar激动剂以缓解患者的症状，或可以施用rar激动剂以抵抗病症本身的机制。在某些实施方案中，可以作为预防措施施用rar激动剂。在一些实施方案中，施用多剂量的rar激动剂。本领域技术人员应理解，这些治疗目的通常是相关的，并且可以基于多种因素调整特定患者的治疗。这些因素可以包括患者的年龄、性别或健康，以及自身免疫或免疫相关疾病或病症的进展。患者的治疗方法可以针对以下因素相应地调整：剂量、施用时间、施用途径和其它疗法的同时或顺序施用。在一些实施方案中，患者为人。

在一些实施方案中，一种或多种rar激动剂化合物可以单独施用或与另外的治疗化合物组合施用。例如，一种或多种rar激动剂化合物可以与硫苷脂组合施用。可以使用任何当前已知用于治疗酒精性肝病、炎性疾病、自身免疫疾病或再灌注损伤的治疗化合物。在一些实施方案中，rar激动剂可以与硫化氢(h2s)组合使用。在一些实施方案中，rar激动剂可以与抗氧化剂组合施用。在一些实施方案中，rar激动剂可以与以下物质组合施用：例如，皮质类固醇、生物制剂(例如抗-tnf-α和抗-il-6)、免疫调节剂(例如ru-486)、疾病修饰抗风湿病药物(dmards，如来氟米特)、cox-2抑制剂(塞来昔布)、非甾体抗炎药(nsaids，如萘普生)、口服抗糖尿病剂(oad，如二甲双胍或西格列汀(sitaglipten))、glp-1激动剂、胰岛素、ppar激动剂/拮抗剂、egf介质(抗癌剂)、其它有效治疗肝癌的药剂、基于细胞的肝癌疗法；用于丙型肝炎、多发性硬化或红斑狼疮的干扰素(ifn)；和lfa-1拮抗剂。

本文所述的rar激动剂化合物和硫苷脂化合物可以用作掺入药物组合物中的活性成分。在一些实施方案中，药物组合物可以包含单一活性成分。在一些实施方案中，药物组合物可以包含两种、三种、四种、五种或更多种活性成分。预期了所有的施用模式，例如，口服、直肠、肠胃外、局部、或通过静脉内、肌内、胸骨内或皮下注射或以适合吸入的形式。在适当的情况下，制剂可以方便地以离散剂量单位呈现，并且可以通过药学领域众所周知的任何方法制备。根据已知和建立的实践，通常将活性成分与一种或多种药学可接受的赋形剂一起配制。因此，药物组合物可以被配制成液体、粉末、酏剂、注射液、悬液、栓剂等。

在一些实施方案中，促炎i型nkt细胞活性被一种或多种选自以下的rar激动剂抑制：atra、视黄醇、9-顺式-ra或13-顺式-ra、维a酸、am580、ac55649、cd1530或他扎罗汀。在一些实施方案中，促炎i型nkt细胞活性被一种或多种聚烯烃类视色素，如异维a酸和阿曲汀抑制。在一些实施方案中，促炎i型nkt细胞活性被一种或多种选自以下的rar激动剂抑制：依曲替酯、阿曲汀和异维a酸。

若干实施方案涉及通过他扎罗汀、他扎罗汀酸或它们的混合物来抑制促炎i型nkt细胞活性。他扎罗汀为一种乙酯前药，其被代谢成相应的游离酸，即他扎罗汀酸。他扎罗汀具有刚性环锁结构，与全反式视黄酸(视黄酸受体(rar)的天然配体)相比，其提供有限的构象柔性。该结构变化赋予他扎罗汀酸对rar的特异性和对rarβ和rarγ的选择性。

当口服施用他扎罗汀以实现i型nkt细胞活性降低时，他扎罗汀的每日剂量优选在约0.3mg/天至约7mg/天或约8mg/天的范围内，更优选在约0.6mg/天至约6.5mg/天或约7mg/天的范围内。在一些实施方案中，口服施用的他扎罗汀以包括0.4mg/天、0.75mg/天、1.5mg/天、2.8mg/天、3mg/天、4.5mg/天、6mg/天和6.3mg/天在内的每日剂量的他扎罗汀施用。

在一些实施方案中，一种或多种rar激动剂化合物可以单独施用或与另外的治疗化合物组合施用。例如，一种或多种rar激动剂化合物可以与nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)、硫苷脂、或nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)和硫苷脂组合施用。

nkt-2活化剂

根据本文的一些实施方案，可以使用许多nkt-2活化剂。在一些实施方案中，nkt-2活化剂包括磷脂，例如溶血磷脂，例如溶血磷脂酰胆碱(lpc)、米替福新或米替福新类似物。一些lpc化合物对ii型nkt细胞的影响，已经描述于maricic等人,“recognitionoflysophosphatidylcholinebytypeiinktcellsandprotectionfromaninflammatoryliverdisease”j.immunology,publishedonlineseptember262014,1400699，将其通过引用整体并入本文。

在一些实施方案中，nkt-2活化剂包含具有式iv的lpc：

式iv

其中r选自：c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基和c1至c40炔基。实例lpc包括lpc(c18:0)，下文描述其结构：

lpc(c16:0)，下文描述其结构，

lpc(c18:1(9z))，下文描述其结构，

lpc(c18:1(1油烯基))，下文描述其结构，

和ligna(lpc(c24:0))，下文描述其结构，

预期作为合适的nkt-2活化剂的另外的示例性磷脂包括但不限于溶血血小板激活因子(lpaf)，如lpaf(c18:0)，下文描述其结构，

和溶血鞘磷脂(lsm)，下文描述其结构，

在一些实施方案中，nkt-2活化剂包括米替福新。下文显示米替福新的结构：

在一些实施方案中，nkt-2活化剂包括米替福新类似物。如本文所用，“米替福新类似物”在广义上指米替福新的结构类似物和米替福新的功能类似物。根据本文的一些实施方案，一些米替福新类似物包括式v的化合物：

式v

其中r选自：c1至c30烷基、c1至c30取代的烷基、c1至c30烯基、c1至c30取代的烯基和c1至c30炔基。

根据本文的一些实施方案可以使用的示例性米替福新类似物包括但不限于下文表2.1和2.2列出的化合物。

表2.1：米替福新类似物

表2.2:米替福新类似物

在一些实施方案中，米替福新类似物包含表2.1所示的任何化合物，由表2.1所示的任何化合物组成，或者基本由表2.1所示的任何化合物组成。在一些实施方案中，米替福新类似物包含选自表2.1的化合物，由选自表2.1的化合物组成，或者基本由选自表2.1的化合物组成。在一些实施方案中，米替福新类似物包含表2.1或表2.2所示的任何化合物，由表2.1或表2.2所示的任何化合物组成，或者基本由表2.1或表2.2所示的任何化合物组成。在一些实施方案中，米替福新类似物包含选自表2.1或表2.2的化合物，由选自表2.1或表2.2的化合物组成，或者基本由选自表2.1或表2.2的化合物组成。在一些实施方案中，米替福新类似物包含表2.2所示的任何化合物，由表2.2所示的任何化合物组成，或者基本由表2.2所示的任何化合物组成。在一些实施方案中，米替福新类似物包含选自表2.2的化合物，由选自表2.2的化合物组成，或者基本由选自表2.2的化合物组成。在一些实施方案中，米替福新类似物包含式v的化合物，由式v的化合物组成，或者基本由式v的化合物组成。

本文涵盖米替福新和米替福新类似物的所有施用模式，例如口服施用、直肠施用、肠胃外施用、局部施用，或者通过静脉注射、肌肉注射、胸骨内注射或皮下注射施用，或者以任何适于吸入的方式施用。在适当的情况下，可以便利地以离散的剂量单位呈现该制剂，并且可以通过制药领域众所周知的任何方法来制备。通常根据已知的以及已建立的实践，将活性成分与一种或多种药学可接受的赋形剂一起配制。因此，可将药物组合物配制为液体、粉末、酏剂、注射液、悬液、栓剂等。

米替福新可以适合于口服或局部施用。如此，在一些实施方案中，口服施用米替福新或米替福新类似物。在一些实施方案中，局部施用米替福新或米替福新类似物。在一些实施方案中，通过静脉注射、肌肉注射、胸骨内注射或皮下注射，或者以适于吸入的形式施用米替福新或米替福新类似物。

根据本文的一些实施方案，向对象施用的米替福新或米替福新类似物的具体量，将根据待治疗的疾病或病况以及待治疗的患者的年龄、体重和性别而改变。在一些实施方案中，以约0.1-10mg/kg体重的剂量施用米替福新或米替福新类似物。在一些实施方案中，以下述剂量施用米替福新或米替福新类似物：约0.1mg/kg体重、0.2mg/kg体重、0.3mg/kg体重、0.5mg/kg体重、1mg/kg体重、2mg/kg体重、3mg/kg体重、4mg/kg体重,5mg/kg体重、6mg/kg体重、7mg/kg体重、8mg/kg体重、9mg/kg体重，包括任何两个所列数值之间的范围，例如约0.2-0.5mg/kg体重、0.2-1mg/kg体重、0.2-5mg/kg体重、0.2-10mg/kg体重、0.5-1mg/kg体重、0.5-3mg/kg体重、0.5-5mg/kg体重、0.5-10mg/kg体重、1-3mg/kg体重、1-5mg/kg体重、1-10mg/kg体重、2-3mg/kg体重、2-5mg/kg体重、2-10mg/kg体重、或5-10mg/kg体重。优选地，视需要重复该剂量。任选地，可将该剂量每天重复五次，每天重复四次，每天重复三次，每天重复两次，每天重复一次或者频率更低，例如每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天重复一次，包括任何两个所列数值之间的范围，例如每1-2天、每1-3天、每1-5天、每1-10天、每1-20天、每2-3天、每3-5天、每3-10天、每3-20天、每5-10天、或每5-20天重复一次。在一些实施方案中，施用至少2个剂量，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90或100个剂量，包括任何两个所列数值之间的范围，例如2-10、2-20、2-50、2-100、5-10、5-50、5-100、10-20、10-50、10-100、20-50或20-100个剂量。在一些实施方案中，患者是人。

在一些实施方案中，施用米替福新或米替福新类似物的对象患有炎性病况，例如脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、自身免疫性肝炎、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化以及炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

药物组合物

可将本文所述的nkt-2活化剂(如米替福新或米替福新类似物或磷脂)、rar激动剂化合物以及硫苷脂化合物用作活性成分掺入药物组合物中。在一些实施方案中，药物组合物可以包含单一活性成分。在一些实施方案中，药物组合物可以包含两种、三种、四种、五种或更多种活性成分。可将任何下述nkt-2活化剂组合物用于治疗、缓解或预防炎性病况，例如脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化以及炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

在一些实施方案中，药物组合物包含足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)。任选地，药物组合物还包含足以抑制i型nkt细胞激活的量的诸如视黄酸的rar激动剂，例如他扎罗汀。

在一些实施方案中，药物组合物包含一定量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)和一定量的硫苷脂，所述量合在一起足以激活ii型nk细胞。

在一些实施方案中，药物组合物包含一定量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)和一定量的硫苷脂，所述量合在一起足以激活ii型nk细胞，并且药物组合物还包含足以抑制i型nkt细胞激活的量的rar激动剂，如视黄酸(例如他扎罗汀)。

在一些实施方案中，药物组合物包含足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)，以及足以激活ii型nkt细胞的量的硫苷脂。

在一些实施方案中，药物组合物包含足以激活ii型nkt细胞的量的nkt-2活化剂(例如米替福新或米替福新类似物或磷脂)、足以激活ii型nkt细胞的量的硫苷脂，以及足以抑制i型nkt细胞激活的量的诸如视黄酸的rar激动剂(例如他扎罗汀)。

在一些实施方案中，药物组合物包含足以激活ii型nkt细胞的量的米替福新或米替福新类似物，以及足以抑制i型nkt细胞激活的量的他扎罗汀。

本文涵盖所有施用模式，例如口服施用、直肠施用、肠胃外施用、局部施用，或者通过静脉注射、肌肉注射、胸骨内注射或皮下注射施用，或者以适于吸入的形式施用。在适当的情况下，可以便利地以离散的剂量单位呈现该制剂，并且可以通过制药领域众所周知的任何方法来制备。通常根据已知的以及已建立的实践，将活性成分与一种或多种药学可接受的赋形剂一起配制。因此，可将药物组合物配制为液体、粉末、酏剂、注射液、悬液、栓剂等。药物配制的方法详细描述于remington'spharmaceuticalsciences，第18版,a.r.gennaro,ed.,mackpublishingcompany(1995)中，在此将其通过引用整体并入本文。

根据一些实施方案的活性成分，可配制为用于口服施用的片剂、硬明胶胶囊、软明胶胶囊，其包含粉末、与赋形剂的混合物、液体或溶液、悬液、固溶体形式的活性成分。根据一些实施方案的活性成分，可配制为用于口内施用(舌下或口腔)的快速溶解的固体剂型或泡腾片、薄膜、口腔薄片(buccalwafer)，或者配制为液体或半固体形式，如凝胶、溶液、乳状液、悬液。根据一些实施方案的活性成分，可配制为用于注射施用的水性或非水性溶液、悬液或乳状液。基于油的溶液和悬液包含诸如下述天然或合成的油的混合物：大豆油、棉籽油、矿物油、芝麻油、蓖麻油、氢化植物油、蜂蜡。根据一些实施方案的活性成分，可配制为用于经皮施用的面霜、凝胶、乳状液、基于水的溶液、基于油的溶液、悬液、膜、贴剂、泡沫。根据一些实施方案的活性成分，可配制为用于鼻内施用的粉末、悬液、溶液、乳状液。根据一些实施方案的活性成分，可配制为用于肺部递送施用的微粒化的粉末。口服施用与首过代谢以及代谢酶的诱导相关。因此，为了最佳效果可调整口服施用的视黄酸的剂量强度和给药方案。相对于口服施用，可以优选可选的递送途径，例如舌下施用、颊部施用、注射施用、肺部施用和经皮施用。诸如所述的那些可选施用途径，避免了首过代谢和gi吸收，显示了较少的酶诱导并提供了稳定的重复剂量药代动力学。

根据本发明的药物制剂，可以立即释放或者改进释放(例如持续释放(sustainedrelease)、脉冲式释放、控释、延迟释放、缓慢释放(slowrelease))。由于其立即具有活性，药理学量的口服施用视黄酸异构体可能具有副作用。这些副作用已经成为疗法中使用口服视黄酸的严重限制。尽管局部应用的视黄酸具有极少致畸倾向，但是存在其他限制其用途的与该施用途径相关的毒性，包括皮肤刺激。口服和局部毒性的主要原因均为，视黄酸一经施用则完全且立即可用。凭借可将视黄酸制备为在体内更缓慢且更连续地可用的方法，可避免视黄酸可用性中的峰和谷，从而在更长的一段时间内提供有效的体内化合物水平，以及也避免或大幅降低通常由过量物质突然的可用性导致的毒性。可以以周为单位，肌肉内施用下述物质的基于油的可注射制剂：视黄醇,视黄醇的酯，以及特别是视黄醇的脂肪酸酯、视黄酸或视黄酸酯，并根据此类原则提供系统性缓释递送。

一些实施方案涉及如本文所述的一种或多种活性成分的口服剂型的制剂。在略微升高的温度下，将10g视黄酸溶于蜂蜡、叔丁基羟基茴香醚、乙二胺四乙酸二钠、氢化大豆油片、氢化植物油以及大豆油醇的混合物中，并且伴随着高剪切性混合。将化合物以2mg、5mg和10mg的剂量强度密封于软明胶胶囊中用于口服施用。

一些实施方案涉及含有本发明实施方案的一种或多种活性成分的生物粘附性口腔片的制剂。制备包含下述物质的赋形剂混合物：24％活性成分、21％hpmc、18％玉米淀粉、24％乳糖、1％二氧化硅、2.5％聚卡波非(noveon)、7.5％卡波姆974p、1.2％滑石以及0.7％硬脂酸镁。将混合物压入直径大约1cm的片剂。

一些实施方案涉及含有本发明的实施方案的一种或多种活性成分的舌下膜的制剂。将下述物质在50g水中混合：3g甲基纤维素e5、5g甲基纤维素e50、1g羟丙基纤维素、1g麦芽糊精、1g柠檬酸、3g三氯蔗糖、5g橙味香精、0.2g尼泊金、0.1乙二胺四乙酸钠以及5g山梨醇。添加1g视黄酸，并且将混合物脱气并搅拌。将组合物在聚酯膜支持物上薄薄地分散，并在无任何直射光的情况下允许其晾干以避免降解。然后将该膜切成一定的尺寸以产生2至10mg的剂量。

一些实施方案涉及试剂盒，其可以包含一种或多种硫苷脂、rar激动剂或其任何组合，优选作为药物组合物。在一些实施方案中，提供药学可接受的载体中的顺式-二十四碳烯酰基。在一些实施方案中，提供药学可接受的载体中的atra。在一些实施方案中，提供药学可接受的载体中的他扎罗汀。在数个实施方案中，可以任选地提供硫化氢(h2s)。在数个实施方案中，可以任选地提供一种或多种抗氧化剂。在数个实施方案中，试剂盒还可以包含合适的包装和/或使用说明。试剂盒还可以包含用于递送一种或多种硫苷脂、rar激动剂或其任何组合的装置，如吸入器、喷雾分配器(例如鼻用喷雾)、注射器、针、iv袋或用于胶囊、片剂、栓剂的压力包。一种或多种硫苷脂、rar激动剂或其任何组合，可以是干燥形式或冻干形式，或者是溶液特别是无菌溶液形式。当为干燥形式时，试剂盒可以包含用于制备液体制剂的药学可接受的稀释剂。试剂盒可以包含用于施用或者用于分配组合物的装置，其包括但不限于：注射器、移液器、经皮贴剂或吸入器。一些实施方案涉及这样的试剂盒，其包含足够剂量的化合物或组合物，以在延长的时段内为个体提供有效治疗，所述延长的时段如1周、2周、3周、4周、6周或8周或更多周。

cd8调节性t细胞

预期根据本文一些实施方案将施用cd8treg细胞与施用nkt-2活化剂进行组合，可以用于治疗或预防炎性病况，例如自身免疫性疾病。在一些实施方案中，向患有炎性病况或者处于发展炎性病况的风险的对象施用cd8treg细胞。也可以向对象施用nkt-2抑制剂。任选地，nkt-2抑制剂包含米替福新。任选地，炎性病况包括下述中的至少一种或者这些所列项目中的两种或更多种的组合：脂肪肝、酒精诱发的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纤维化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆道硬化症、爆发性肝硬化、特发性肝炎、病毒诱发的肝炎(a、b、c以及其它)、与肝-胆癌相关的炎性肝炎、多发性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注损伤、实体器官移植、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化以及炎性肠病(克罗恩氏病和结肠炎)。

免疫系统维持平衡状态，同时响应外来抗原以及自身抗原。用于在对外来抗原进行免疫应答之后维持平衡或者用于预防或终止针对自身抗原的有害应答的控制机制，包括ctla-4介导的t细胞抑制、激活诱导的细胞死亡(aicd)、il-2介导的调节以及调节性t细胞(treg)(¹abbas,a.k.,lohr,j.,knoechel,b.&nagabhushanam,v.tcelltoleranceandautoimmunity.autoimmunrev3,471-5(2004))。cd8treg细胞的诱导也描述于pct公开第wo2007/136518号以及美国公开第2007/0286849号中，将其各自通过引用整体并入本文。

利用消耗性抗体或者具有特定基因敲除的动物的实验，指示了cd8⁺淋巴细胞在自身免疫性疾病(koh,d.r.etal.lessmortalitybutmorerelapsesinexperimentalallergicencephalomyelitisincd8-/-mice.science256,1210-3(1992))、移植耐受(seydel,k.etal.anti-cd8abrogateseffectofanti-cd4-mediatedisletallograftsurvivalinratmodel.diabetes40,1430-4(1991))、新生耐受(field,a.c.,caccavelli,l.,bloch,m.f.&bellon,b.regulatorycd8⁺tcellscontrolneonataltolerancetoath2-mediatedautoimmunity.jimmunol170,2508-15(2003))以及正常细胞和体液免疫应答的稳态(nanda,n.k.&sercarz,e.atruncatedtcellreceptorrepertoirerevealsunderlyingimmunogenicityofanantigenicdeterminant.jexpmed184,1037-43(1996))中的重要调节作用。

例如，在多发性硬化中，免疫系统病理性地将一些来自髓鞘膜的自身抗原识别为外来物，并引发针对其的免疫应答。这导致脱髓鞘(髓鞘的破坏性移除)，髓鞘是保护神经细胞(神经元)的绝缘性及保护性脂肪蛋白。多发性硬化中的脱髓鞘由t细胞引导的免疫应答介导，所述免疫应答起始于cns中的抗原递呈事件，或者在全身性分子拟态应答的外围激活之后诱导。

在不受任何理论限制的情况下，cd8αα⁺、tcrαβ⁺treg细胞可以用于治疗和/或预防自身免疫以及免疫相关的疾病和病症的适应症。诸如米替福新的nkt-2抑制剂，可以诱导对象肝脏中的cd8treg细胞(参见，例如图8a-b)。如此，在一些实施方案中，向患有本文所述的炎性病况或者处于患如本文所述的炎性病况的风险的对象施用cd8treg细胞。任选地，进一步向对象施用nkt-2抑制剂。在一些实施方案中，nkt-2抑制剂包含米替福新。任选地，施用的cd8treg细胞来自所述对象(即“自体”cd8treg细胞)。任选地，施用的cd8treg细胞来自另一个体(即“同种异体”cd8treg细胞)。任选地，在向对象施用之前，扩增施用的cd8treg细胞，例如可以体外扩增细胞。预期可以治疗、或减弱、或消除源于炎性病况(如自身免疫性疾病或病症)的病理性自身反应性免疫应答。

通常，为了在例如肠或血液中达到有效终浓度，在根据本文实施方案的单剂量组合物中，扩增的treg细胞群的量一般为：约10,000至约1万亿个细胞，优选约100,000至约100百万个细胞，更优选约100万至约5000万个细胞，甚至更优选约1000万至约3000万个细胞，甚至更优选约1500万至约2500万个细胞，以及甚至更优选约2000万个细胞。同样地，在本发明实施方案的单一口服剂量组合物中，第二治疗化合物的量通常在下述范围内：约0.01毫克至约1000毫克，更优选约0.1毫克至约100毫克。显而易见地，准确的剂量将根据待治疗的疾病或病症而改变，优选剂量容易确定。

在一些实施方案中，可将扩增的treg细胞群与药学可接受的媒介物组合。合适的药学可接受的媒介物包括，例如磷酸盐缓冲盐水。在一个实施方案中，向患者施用约1,000至约3,000,000个细胞/kg体重的treg细胞。优选地，施用约100,000至约1百万个细胞/kg体重的treg细胞。可以视需要每小时、每天、每周、每月或者不定时地重复该剂量。以下讨论了示例性的剂量和给药安排。

在一些实施方案中，施用的treg细胞包含cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺细胞。在一些实施方案中，施用的treg细胞包含cd8αα⁺、tcrαβ⁺、il-2rβ⁺(cd122⁺)。在一些实施方案中，施用的treg细胞包含cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺、cd122⁺。在不受任何理论限制的情况下，预期cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺treg细胞，cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd122⁺treg细胞，以及cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺、cd122⁺treg细胞，各自也控制体内激活的vβ8.2⁺cd4t细胞群，并且可用与本文所述的cd8αα⁺、tcrαβ⁺treg细胞类似的方式使用。

在一些实施方案中，将调节性t细胞施用于其所获自的同一对象。在其它实施方案中，可以将调节性t细胞施用于除其所获自的对象之外的对象。在其它实施方案中，调节性t细胞可以获自不作为对象的哺乳动物。在一些实施方案中，施用的调节性t细胞包含获自下述对象中至少两个对象的细胞的混合物：施用调节性t细胞的对象、除施用调节性t细胞的对象之外的对象，以及不作为对象的哺乳动物。

在一些实施方案中，使用含有生长因子(如il-2、il-7和il-15)的抗cd3包被的板来扩增t细胞群。在一些实施方案中，使用重组的tcr蛋白或肽，例如来源于tcrvβ8.2链的p42-50，可以体外扩增treg。任选地，可以确定疾病特异性的病原性t细胞所利用的tcrvβ或vα链基因。然后可将对应于那些tcrvβ或vα链基因的蛋白引入体内，以激活合适的treg细胞群。

根据本文所述的实施方案，治疗性treg细胞群的许多不同的施用模式和方法是合适的。在一些实施方案中，递送途径包括，例如静脉内施用施用、腹膜内施用、吸入施用、肌肉内施用、皮下施用、鼻部和口服施用或者本领域可用的任何其它递送途径。根据具体的施用途径，剂型可以是，例如固体、半固体、液体、蒸汽或气雾剂制剂。剂型可以包含，例如药物配制领域可用的那些添加剂、润滑剂、稳定剂、缓冲剂、包衣以及赋形剂。

根据本文所述的实施方案，涵盖许多不同的药物制剂。在一些实施方案中，药物制剂包含cd8treg细胞和如本文所述的nkt-2活化剂。在一些实施方案中，药物制剂包含cd8treg细胞和米替福新。在一些实施方案中，药物制剂包含下述cd8treg细胞类型中的至少一种：cd8αα⁺tcrαβ⁺t细胞，cd8αα⁺tcrαβ⁺cd200⁺t细胞，cd8αα⁺tcrαβ⁺cd122⁺t细胞，以及cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺cd122⁺t细胞，并且还包含如本文所述的nkt-2活化剂。在一些实施方案中，药物制剂包含下述cd8treg细胞类型中的至少一种：cd8αα⁺tcrαβ⁺t细胞，cd8αα⁺tcrαβ⁺cd200⁺t细胞，cd8αα⁺tcrαβ⁺cd122⁺t细胞，以及cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺cd122⁺t细胞，并且还包含米替福新。在一些实施方案中，第一药物制剂包含cd8treg细胞，并且第二药物制剂包含如本文所述的nkt-2活化剂。

在一些实施方案中，第一药物制剂包含cd8treg细胞，并且第二药物制剂包含米替福新。在一些实施方案中，第一药物制剂包含下述cd8treg细胞类型中的至少一种：cd8αα⁺tcrαβ⁺t细胞，cd8αα⁺tcrαβ⁺cd200⁺t细胞，cd8αα⁺tcrαβ⁺cd122⁺t细胞，以及cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺cd122⁺t细胞，并且第二药物制剂包含nkt-2活化剂。在一些实施方案中，第一药物制剂包含下述cd8treg细胞类型中的至少一种：cd8αα⁺tcrαβ⁺t细胞，cd8αα⁺tcrαβ⁺cd200⁺t细胞，cd8αα⁺tcrαβ⁺cd122⁺t细胞，以及cd8αα⁺、tcrαβ⁺、cd200⁺cd122⁺t细胞，并且第二药物制剂包含米替福新。在一些实施方案中，同时施用第一和第二药物制剂。在一些实施方案中，在不同时间施用第一和第二药物制剂。在一些实施方案中，在第二药物制剂之前施用第一药物制剂。在一些实施方案中，在第一药物制剂之前施用第二药物制剂。任选地，可以通过常规方法利用下述药学可接受的媒介物等制备本文所述的任何药物制剂：赋形剂如溶剂(例如水、生理盐水)、膨胀剂和填充剂(例如乳糖、淀粉、结晶纤维素、甘露醇、麦芽糖、磷酸氢钙、软硅酸酸酐和碳酸钙)；助剂如增溶剂(例如乙醇和聚山梨醇酯)、结合剂(例如淀粉、聚乙烯吡咯烷、羟丙基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素和阿拉伯胶)、崩解剂(例如淀粉和羧甲基纤维素钙)、润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石和氢化油)、稳定剂(例如乳糖、甘露醇、麦芽糖、聚山梨醇酯、聚乙二醇和聚氧乙烯氢化蓖麻油)、等渗剂、润湿剂、润滑剂、分散剂、缓冲剂和增溶剂；以及添加剂，如抗氧化剂、防腐剂、调味剂和芳香剂、止痛剂、稳定剂、着色剂以及甜味剂。

仅出于说明性目的提供下述实施例，并且其不以任何方式意图限制本文所述的实施方案。

实施例1

在板结合的cd1d分析中，米替福新能够刺激ii型nkt细胞杂交瘤hy19.3。将cd1d蛋白包被的96孔板用指定的液体孵育6hr，洗涤并添加ii型nkt细胞hy19.3(50,000个细胞/孔)，并在16hr之后测量上清液中的il-2。lsf，溶血硫苷脂；lpc，溶血磷脂酰胆碱。

这些数据显示，溶血磷脂酰胆碱(lpc)的类似物米替福新可以结合cd1d分子并刺激ii型nkt细胞。

实施例2

利用口服强饲，每天用dmso(对照)或米替福新1mg(溶于dmso，并稀释至pbs中)处理初始b6小鼠，持续7天。在α-galcer存在或不存在的情况下，将脾细胞体外培养90hr。在10ng/ml的α-galcer浓度下i型nkt细胞的刺激(作为刺激指数)和扩增(使用α-galcer/cd1d^-四聚体⁺细胞，作为facs染色)，显示于图2a和图2b中。

图2a和图2b中的数据显示，在米替福新处理的动物中，在其认知配体α-galcer的存在下，存在i型nkt细胞增殖和扩增的显著抑制。

这些数据与其它脂质如硫苷脂(糖脂)或溶血磷脂酰胆碱(lpc，磷脂)激活ii型nkt细胞，导致i型nkt细胞的失活或抑制的现象一致。

实施例3

在cona施用前12hr，向bl/6小鼠组施用dmso/pbs或米替福新，并通过肝脏切片的h&e染色和24hr之后检测的肝脏酶(如血清中的alt)，确定肝脏损伤(图3a和图3b)。显示的数据表示2次独立的实验。

如图3b所示，在用cona处理的肝脏切片中，观察到指示坏死的染色(红色h&e染色)1，但是在用cona和米替福新处理的肝脏切片中，观察到指示减弱的坏死的染色(减弱的红色h&e染色)2。

因此，在用米替福新处理之后，观察到cona诱发的肝炎抑制。这些数据显示，与硫苷脂或lpc类似，用米替福新处理小鼠导致cona注射之后的肝脏损伤的显著抑制。

实施例4

用含有米替福新(～500微克/天)或dmso/pbs的液态醇(etoh)饮食或等热量对照(对照)饮食，饲养c57bl/6小鼠组10天。在第11天，在过度饲喂之后9hr(长期加过度饲喂)，在肝脏中检测到i型nkt细胞(α-galcer/cd1d^-四聚体⁺细胞)或中性粒细胞(ly^-6g⁺cd11b⁺)的积聚和激活，如图4a和图4b中所示，与对照饮食组相比，在饲喂液体长期加过度饲喂etoh饮食的小鼠中，i型nkt细胞在肝脏中积聚。也如图4c和图4d中所示，i型nkt细胞成为激活的(如通过α-galcer/cd1d-四聚体⁺细胞中cd69的细胞表面表达所检测的)，连同中性粒细胞(ly^-6g⁺cd11b⁺细胞)在肝脏中积聚。激活的i型nkt细胞和中性粒细胞的积聚导致炎症级联反应，在ald期间致使肝细胞损伤。显著地，在用米替福新处理的小鼠中，这两种细胞均不积聚，导致保护肝脏不受损伤。

这些数据显示了，在用米替福新处理的小鼠的酒精性肝病(ald)期间，激活的i型nkt细胞以及中性粒细胞的积聚的抑制。如此，预期米替福新可以用于治疗炎性肝脏疾病，包括ald、nash、pbc、psc、病毒性肝炎等。

实施例5

已经观察到，用硫苷脂处理导致sjl/j小鼠中慢性复发性eae的显著抑制。但是，如图6所示，当口服给予时，用硫苷脂进行的口服处理尽管在最初抑制了疾病，但是并非十分有效。在不受任何理论限制的情况下，预期硫苷脂在肠中并不十分稳定，这与观察到的低效力一致。参考图6，将b6小鼠组用硫苷脂(200微克溶于200微升pbs中)口服处理7天，开始于疾病诱发前一天。每天监测临床性麻痹，并且评分为1至5。尽管最初存在4-5天的保护，但是之后两组中的小鼠患有类似严重性的疾病。在不受任何理论限制的情况下，观察到的两组中的相似性与肠中硫苷脂的不稳定性一致。

如图5所示，对于用米替福新(其被认为是相对稳定的)进行的口服处理是否能够抑制慢性和复发性eae(多发性硬化的原型)进行检测。将sjl小鼠组用米替福新(1mg溶于200微升10％的dmso/pbs)或对照(dmso/pbs)进行口服强饲，如箭头所示每周两次。每天监测两组小鼠中作为麻痹的疾病的临床严重性，评分为1至5，并且如所示。

图5中的数据总结了用米替福新处理多发性硬化的原型慢性和复发性实验性自身免疫性脑脊髓炎(eae)的结果。这些实验显示，可用米替福新治疗t细胞介导的自身免疫性疾病，包括ms、t1dd、ra、系统性红斑狼疮和ibd等。

实施例6

将pbmc(1x10⁶/孔)用100ng/mlαgalcer、100ng/mlαgalcer+5μg/ml米替福新进行体外刺激或者不进行刺激。12天之后，收获细胞，并通过流式细胞术评估i型nkt细胞的百分数。利用bdfacscanto收集染色的细胞。利用flowjo软件分析数据。将人i型nkt细胞鉴定为cd3+/vα24jα18tcr+细胞(cd1d-限制性i型nkt细胞)，并且在图7中显示为门控区域内的％nkt细胞。各图内显示了来自新鲜pbmc(未培养)和体外扩增之后的pbmc的i型nkt细胞的百分数。图7中显示的数据表示超过5次独立实验。

因此，显示根据本文的一些实施方案，米替福新处理可以导致人i型nkt细胞的扩增。

在本申请中，使用的单数可以包括复数，除非另外特别指明，或者除非如本领域技术人员根据本公开所理解的，单数是唯一的功能性实施方案。因此，例如“一个/一种(a)”可以意为多个/多种，并且“一个实施方案”可以意为所述描述适合于多个实施方案。

前述描述和实施例详细描述了某些实施方案。但是应理解，不管文本中可能出现前述的如何详细描述，可以以多种方式实践本发明，并且应当根据所附权利要求及其任何等同物来解释本发明。

实施例7

在疾病进程前或期间，如图2所示，使雌性sjl/j小鼠组口服施用1mg米替福新。在第59天，杀死小鼠。用cd4、cd8α和cd8βmab染色的肝脏单核细胞的流式细胞术特征显示于图8a-8b中。有意思的是，尽管在肝脏中调节性cd8αα+t细胞显著增加，但是对照vs.治疗组中的其它cd4+和cd8αβ+t细胞没有区别。

因此，根据本文一些实施方案，施用nkt-2抑制剂如米替福新可以增加肝脏中cd8αα+t细胞的诱导。

实施例8

为了确定cd8treg的体内调节潜力，将2d11细胞静脉过继性转移至同基因小鼠中。24小时之后，用mbpac1-9/cfa/pt免疫接受者以诱发eae，每天监测临床症状并在1-5的范围内评分，持续35-45天：1，尾部麻痹；2，后肢麻痹；3，后侧身体麻痹；4，后肢及部分身体麻痹；以及5，全身麻痹或濒死。如图8a中所示，注射1百万个2d11细胞的小鼠比对照组中的那些更快地从温和性疾病中恢复。为了排除控制疾病的能力是特定克隆长期培养的人为现象的可能性，产生短期p42-50反应性t细胞系并将其用于类似的过继性转移实验。如图8b所示，接受500万个p42-50反应性t细胞系的小鼠完全不受mbp诱发的eae的损伤，并且仅转移100万个细胞就能够从温和性麻痹中更快速地恢复。针对两种不相关的tcr肽产生的短期t细胞系的适应性转移，对于eae无影响(数据未显示)。参见图8a-8b。

因此，根据本文一些实施方案的cd8treg系和克隆的过继性转移，导致eae的快速恢复和保护。因此，预期根据本文一些实施方案的cd8treg系和克隆的过继性转移，能够缓解和/或预防至少一种炎性病况。

实施例9

通过检测用抗vβ6mab处理的小鼠对于cd8treg全体功能和mbpac1-9诱发的eae进程是否具有任何影响，显示了cd8treg的tcrvβ6链的主要用法。单次静脉注射抗-tcrvβ6mab(rr4-7,300μg/小鼠)之后，在不同时间检测体内脾细胞中vβ6⁺细胞的存在。如所预期的，如通过早期激活标志物cd69的表达所确定的，抗-tcrvβ6mab注射导致体内tcrvβ6⁺t细胞的早期激活(图9a，第二列)，随后细胞表面vβ6的表达下调(图9a，第一列)。抗-tcrvβ6mab的影响是tcr特异性的，因为在相同的实验条件下，vβ8⁺t细胞不受影响(图9a，第三和第四列)。对来自抗tcrvβ6处理的小鼠的脾细胞中tcrvβ6mrna的表达进行实时rt-pcr分析揭示，在连续处理之后，大部分但并不是全部tcrvβ6⁺t细胞耗尽(图9b以及未显示的数据)。

主要存在于肠内的上皮内淋巴细胞(iel)中的cd8ααt细胞，对于自身-激动剂的消耗相对具有抗性，并且其可在针对通过t细胞受体引起的激活的应答方面区别于cd8αβt细胞。利用tl-四聚体染色，检测抗-tcrvβ6mab的施用是否导致外周中cd8ααt细胞的消耗或激活。图9c中的数据显示，在抗体施用之后tl-四聚体⁺cd8⁺细胞未被消耗。事实上，在抗体处理的小鼠中观察到，针对p42-50的体外回忆应答的略微增加(数据未显示)。为了进一步测试cd8αα⁺vβ6⁺t细胞激活之后的调节功能，用mbpac1-9/cfa/pt免疫小鼠组以诱发eae。一天以及一周之后，静脉注射低剂量的抗-tcrvβ6mab(100μg/小鼠)、同种型对照mab(100μg/小鼠)或pbs。第二次注射之后每天监测临床症状。图9d和表4中的数据显示，在b10.pl小鼠中，用抗tcrvβ6mab体内激活vβ6⁺t细胞导致不受eae损伤。相比之下，注射有同种型对照mab或不相关的mab的组内的动物，未被保护不受疾病损伤(数据未显示)。

单次静脉注射抗-tcrvβ6mab(300μg/小鼠)之后，激活(cd69表达)，随后vβ6⁺而非vβ8⁺t细胞下调/消耗。在第0、1和3天，用tcrvβ6-fitc/cd8α-pe/cd69-percp(第一和第二列)或tcrvβ8-fitc/cd8α-pe/cd69-percp(第三和第四列)对脾细胞进行染色。对于tcrvβ6/cd8α⁺t细胞(第二列)或tcrvβ8/cd8α⁺t细胞(第四列)进行细胞门控，以分析早期激活标志物cd69的表达。数据表示两次独立的实验。(b)如通过实时pcr所测定的，抗-vβ6注射之后vβ6⁺t细胞消耗显著。将mrna的表达表示为针对两个内参对照基因(l32和亲环素)标准化之后的相对量。数据表示两次独立的实验。(c)在抗-tcrvβ6注射之后，tl-四聚体⁺cd8t细胞未消耗。在抗体注射后的指定天数，用cd8α-fitc/tl-四聚体-pe对脾细胞进行染色。数据表示两次独立的实验。(d)注射有抗-tcrvβ6mab抗体的小鼠被保护不受eae损伤。在用mbpac1-9/cfa/pt诱发eae之后一天以及七天，用抗-tcrvβ6mab(100μg/小鼠)或igg同种型对照或pbs注射小鼠组。如方法中所述监测麻痹疾病。数据组合自三次独立的实验。

表3：cd8αα+t细胞克隆¹的应答特征

1.在来源于不同的h-2单体型的抗原递呈细胞(apc)的存在下，检测在针对p42-50的应答中cd8ααtreg克隆2d11的增殖或细胞因子分泌。显示了h-2k、d、l、qa-1和qa-2单体型。

2.h-2单体型。

3.最后一列中的“+”和“-”分别指针对p42-50的阳性应答或无应答。阳性应答被定义为刺激指数(si)高于3(7.25+/-1.93至58.06+/-18.69)。

表4：tcrvβ6⁺t细胞的激活导致保护不受eae损伤

1.在mbpac1-9免疫(第0天)之后第1天和第8天i.v.注射抗体(100μg)。

因此，根据本文一些实施方案，tcrvβ6+t细胞的体内激活导致保护不受eae损伤。

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技术研发人员：维平·库马·查图维迪
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