本发明涉及一种组合物及其应用，具体涉及一种具有抗疲劳功效的组合物及其应用，属于食品药品领域。
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：南非红茶(rooibos)，学名为aspalathuslinears，是豆科植物aspalathuslinearis(barm.f.)r.dahlgren的干燥叶与小枝，为南非西开普敦所特有植物，其发现与应用在国外已有300多年的历史。因其口感清甜可口，不含咖啡因，少鞣质以及含有丰富的抗氧化剂，在当地被用作保健饮品“茶”，深受喜爱。近些年，rooibos以茶类饮品进入欧洲市场，深受欧洲特别是德国消费者喜爱。由于在发酵过程中叶呈现艳丽的红色或橙色，其发酵制成的茶也称为红茶。南非与日本的科学研究证实，其含丰富的抗氧化剂，还具有对抗基因突变、抗癌、抗炎及抗病毒的特殊作用。进一步研究发现，rooibos具有比绿茶含量更高的总多酚及自由基清除能力。藏红花(saffron)是鸢尾科植物番红花crocussativusl.的干燥柱头。其具有活血痛红、散瘀止痛、安神养血、滋阴壮阳、抗凝血等作用。特别适用于妇女月经不调、痛经闭经、产后恶露不尽、润泽肌肤、能防治冠心病、血管栓塞、高血压、跌打损伤、内外出血、肺炎、急慢性肝炎等病症。藏红花被誉为“能治百病的神草”，是妇女和中老年人饮用佳品。同时，本品还可以作食品、化妆品的色素的芳香剂。技术实现要素：本发明提供了一种具有抗疲劳功效的组合物，所述组合物包括南非红茶和藏红花。在一些实施方式中，所述南非红茶和藏红花的重量比为(5～28)∶1；优选的，所述南非红茶和藏红花的重量比为(6～26)∶1；进一步优选的，所述南非红茶和藏红花的重量比为(8～25)∶1；更进一步优选的，所述南非红茶和藏红花的重量比为(10～24)∶1；更进一步优选的，所述南非红茶和藏红花的重量比为(12～23.5)∶1；更进一步优选的，所述南非红茶和藏红花的重量比为12.4∶1或23.3∶1。在一些实施方式中，所述组合物为南非红茶和藏红花合并或分别以任何常规方法提取得到的提取物，所述提取方法包括浸泡提取、煎煮提取、渗漉提取、回流提取、超声提取等；所述提取溶剂包括水和20％～95％乙醇溶液。在一些实施方式中，所述组合物为南非红茶和藏红花的提取物按常规方法加入辅料制成保健饮品或口服液、胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂等常规口服剂型。在一些实施方式中，所述组合物为南非红茶提取物和藏红花提取物按上述比例混合而成，所述提取物为南非红茶和藏红花以任何常规方法提取得到的提取物，所述提取方法包括浸泡提取、煎煮提取、渗漉提取、回流提取、超声提取等；所述提取溶剂包括水和20％～95％乙醇溶液。本申请还提供所述组合物在制备具有抗疲劳功效的药物或保健品中的应用。本发明所述″辅料″是药物制剂在制备或调配过程中所必需的、除主药以外的物质，一般无生理活性，不影响药物制剂中药物疗效、含量测定和稳定性。包括填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等。本发明研究表明，由南非红茶与藏红花组成的配方(rs方)能明显延长小鼠负重游泳时间，并且动物血清中乳酸含量明显降低，肝脏糖原、骨骼肌糖原明显增加，具有明显抗疲劳作用。而单独应用南非红茶或藏红花均不能延长小鼠负重游泳时间。具体实施方式实施例1南非红茶9.82g，藏红花1.47g；加50倍量水(100℃)浸泡1小时，过滤，收集浸泡上清液，药渣再加入50倍量水(100℃)浸泡1小时，收集浸泡上清液，混合两次浸泡液，浓缩，即得。实施例2南非红茶19.58g，藏红花1.575g；加40倍量水煎煮1.5小时，过滤，收集滤液，药渣继续加40倍量水煎煮1小时，收集滤液，混合两次滤液，浓缩，即得。实施例3南非红茶39.22g，藏红花1.68g；加30倍量水回流提取1.5小时，过滤，收集滤液，药渣继续加30倍量水回流提取1小时，收集滤液，混合两次滤液，浓缩，即得。实施例4南非红茶18.0g，藏红花3.6g；加10倍量75％乙醇回流提取1.5小时，过滤，收集滤液，药渣继续加10倍量75％乙醇回流提取1小时，收集滤液，混合两次滤液，回收乙醇至干，即得。实施例5南非红茶18.8g，藏红花2.6g；加10倍量95％乙醇超声提取1小时，过滤，收集滤液，药渣继续加10倍量95％乙醇回流提取40分钟，收集滤液，混合两次滤液，回收乙醇至干，即得。实施例6取实施例1～5任一制备的提取物，加入片剂辅料制成片剂。实施例7取实施例1～5任一制备的提取物，加入胶囊剂辅料制成胶囊剂。实施例8取实施例1～5任一制备的提取物，加入食品领域常规辅料制成茶饮。实施例9取实施例1～5任一制备的提取物，加入口服液体制剂辅料制成口服液。实施例10南非红茶18.7g，藏红花2.8g；南非红茶和藏红花分别加50倍量水(100℃)浸泡提取两次，每次1小时，将两原料的提取物混合，即得。实施例11南非红茶19.58g，藏红花1.575g；南非红茶和藏红花分别加40倍量水煎煮两次，每次1小时，将两原料的提取物混合，即得。实施例12南非红茶39.22g，藏红花1.68g；南非红茶和藏红花分别加30倍量水回流提取两次，每次1.5小时，将两原料的提取物混合，即得。实施例13南非红茶18.0g，藏红花3.6g；南非红茶和藏红花分别加10倍量75％乙醇回流提取两次，每次1.5小时，将两原料的提取物混合，即得。实施例14南非红茶18.8g，藏红花2.6g；南非红茶和藏红花分别加10倍量95％乙醇超声提取两次，每次1小时，将两原料的提取物混合，即得。本发明组合物抗疲劳效果研究一、小鼠负重游泳及乳酸含量1、实验材料1.1动物雄性km小鼠，体重20-22g，购自于北京斯贝福实验动物科技有限公司，许可证号：scxk(京)2011-0004。1.2仪器精密天平(ja1103n)、uv-2000紫外可见分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司)、电热恒温水浴锅(北京长安科学仪器厂产品)。1.3药物藏红花saffron(购自北京市同仁堂药店)、南非红茶roobios(购自南非)。1.4试剂乳酸(ld)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20150718)2实验方法2.1动物分组抗疲劳研究分两批完成，第一批，小样本观察单个植物的作用，第二批大样本观察组方的作用。动物适应7天，依据组别，分别灌胃给予蒸馏水、roobios提取液、saffron提取液、roobios和saffron混合提取液(即rs提取液)，每天一次，连续给予两周以后开始实验。2.2提取液的制备rs提取液：取roobios9.82g，saffron1.47g，加药物重量50倍的蒸馏水(100℃)，浸泡1h，收集浸泡上清液；药物渣再加入50倍的蒸馏水(100℃)浸泡1h，收集浸泡上清液，混合两次浸泡液，80℃水浴浓缩至roobios浓度为0.187g/ml，saffron浓度为0.028g/ml。roobios提取液：取roobios9.82g，加药物重量50倍的蒸馏水(100℃)，浸泡1h，收集浸泡上清液；药物渣再加入50倍的蒸馏水(100℃)浸泡1h，收集浸泡上清液，混合两次浸泡液，80℃水浴浓缩至roobios浓度为0.187g/ml。saffron提取液：取saffron1.47g，加药物重量50倍的蒸馏水(100℃)，浸泡1h，收集浸泡上清液；药物渣再加入50倍的蒸馏水(100℃)浸泡1h，收集浸泡上清液，混合两次浸泡液，80℃水浴浓缩至saffron浓度为0.028g/ml。2.3灌胃给药正常对照组灌胃时给予蒸馏水，给药组按照每20g体重0.3ml给予相应的提取液，每天一次，持续2周。其中给药量分别是，roobios提取液2.8g/kg，saffron提取液0.42g/kg，rs提取液(roobios2.8g/kg，saffron0.42g/kg)。2.4负重游泳于末次给药后30min后进行实验。将小鼠尾根部负体重7％的钓鱼用铅皮，放入30cm×25cm×25cm的水箱中，水温为25℃，水深25cm。每个水桶一次放入1只小鼠。小鼠放入即可开始计时，直到小鼠游泳劳累，其头部没入水中持续3秒不能浮出水面，此时停止计时，此时间段计为小鼠负重游泳时间。2.5血清分离各组动物禁食12h，次日于末次给药后30min后进行实验。将小鼠尾根部负体重7％的钓鱼用铅皮，放入30cm×25cm×25cm的水箱中，水温为25℃，水深25cm。每个水桶一次放入1只小鼠。小鼠放入即可开始计时，共游泳5min。迅速摘眼球取血，分离血清并分装。2.6乳酸检测按试剂盒说明书建议的步骤，用紫外分光光度计测吸光值，计算其最终浓度。2.7数据统计数据分析用sas统计软件包进行，实验数据均以均值±标准差表示。多组比较采用单因素方差分析，p＜0.1表示差异有统计学意义。3实验结果3.1小鼠负重游泳时间如表1显示，给小鼠给予rooibos提取液(r组)，或者给予saffron提取液(s组)两周，对小鼠负重游泳时间没有显著影响，提示单独给予rooibos或者saffron，均不能产生抗疲劳效果。表1单独植物提取液对负重游泳时间的影响组别数目(只)游泳时间(min)p值对照组1010.478±3.56r组119.939±3.410.73s组119.72±4.080.42如表2显示，给小鼠给予rs配方两周，可以使小鼠的负重游泳时间明显延长，且具有显著性差异(p＜0.05)，提示rs配方具有明显的抗疲劳作用。表2rs配方对小鼠负重游泳时间的影响组别数目(只)游泳时间(min)p值对照组2310.787±6.714rs组2314.619±9.977*0.0288注：*表示与对照组相比有显著性差异*p＜0.053.2血清乳酸含量如表3所示，小鼠灌胃给予rs两周，可以使血清中乳酸含量明显降低，且具有显著性差异(p＜0.05)。表3rs配方对小鼠负重游泳小鼠血清乳酸含量的影响组别数量(只)乳酸值mmol/lp值对照组1014.68±1.91rs组812.50±1.24*0.013注：*表示与对照组相比有显著性差异*p＜0.054实验结论负重游泳时间反应了机体的运动耐受力，负重游泳时间越长，说明机体运动耐受力越好。负重游泳时间可以直观反应机体的疲劳状况。机体长时间剧烈运动血乳酸会随之增加，从而导致机体ph降低。ph值下降会阻碍神经-肌肉接头的兴奋传递，损害内质网功能，抑制血红蛋白与氧的结合，抑制激素敏感酯酶活性，进而对多种生化过程产生影响，使机体发生疲劳。因此，血乳酸含量的增加是导致机体疲劳的重要原因，通过减少机体血乳酸的生成或者是加速血乳酸的清除速率均可以降低血乳酸的含量，延缓疲劳的产生。上述实验结果表明，rs配方能够明显延长小鼠负重游泳时间，减少血清乳酸含量，说明其具有明显的抗疲劳作用。二、小鼠肝脏及骨骼肌糖原1实验材料1.1动物雄性km小鼠，体重20-22g，购自于北京斯贝福实验动物科技有限公司，许可证号：scxk(京)2011-0004。1.2仪器精密天平(ja1103n)、uv-2000型紫外可见分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司)、电热恒温水浴锅(北京长安科学仪器厂产品)。1.3药物藏红花(购自北京市同仁堂药店)；roobios茶(购自南非)。1.4试剂糖原测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20151210)。2实验方法2.1动物分组动物适应7天，依据组别，分别灌胃给予蒸馏水或rs提取液，每天一次，连续给予两周以后开始实验。2.2提取制备rs提取液低剂量：取roobios9.82g，saffron1.47g，加药物重量50倍的蒸馏水(100℃)，浸泡1h，收集浸泡上清液；药物渣再加入50倍的蒸馏水(100℃)浸泡1h，收集浸泡上清液，混合两次浸泡液，80℃水浴浓缩至roobios浓度为0.187g/ml，saffron浓度为0.028g/ml。rs提取液中剂量：取roobios19.58g，saffron1.575g，加药物重量25倍的蒸馏水(100℃)，浸泡1h，收集浸泡上清液；药物渣再加入25倍的蒸馏水(100℃)浸泡1h，收集浸泡上清液，混合两次浸泡液，80℃水浴浓缩至roobios浓度为0.373g/ml，saffron浓度为0.030g/ml。rs提取液高剂量：取roobios39.22g，saffron1.68g，加药物重量12.5倍的蒸馏水(100℃)，浸泡1h，收集浸泡上清液；药物渣再加入12.5倍的蒸馏水(100℃)浸泡1h，收集浸泡上清液，混合两次浸泡液，80℃水浴浓缩至roobios浓度为0.747g/ml，saffron浓度为0.032g/ml。2.3灌胃给药正常对照组灌胃时给予蒸馏水，给药组按照按每20g体重0.3ml给予相应的提取液，每天一次，持续2周。其中给药量分别是，rs提取液低剂量(roobios2.8g/kg，saffron0.42g/kg)，rs提取液中剂量(roobios5.6g/kg，saffron0.45g/kg)，rs提取液高剂量(roobios11.2g/kg，saffron0.48g/kg)。2.4负重游泳于末次给药后30min后进行实验。将小鼠尾根部负体重7％的钓鱼用铅皮，放入30cm×25cm×25cm的水箱中，水温为25℃，水深25cm。每个水桶一次放入1只小鼠。小鼠放入即可开始计时，直到小鼠游泳劳累，其头部没入水中持续3秒不能浮出水面，此时停止计时，此时间段计为小鼠负重游泳时间。2.5组织取材各组动物禁食12h，次日于末次给药后30min后进行实验。对每只小鼠称重后，将鼠尾根部负小鼠体重7％的钓鱼用铅皮，固定松紧度应适宜，放入30cm×25cm×25cm的水箱中，水温为25℃、水深25em。每个水桶一次放入1只小鼠，游泳10min为时限。然后迅速取肝脏及后腿肌肉，置于冰冻生理盐水中，剔除结缔组织，用滤纸吸干，用于糖原测定。2.6糖原测定糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前先将组织放入浓碱中加热以破坏其它成分而保留糖原。糖原在浓硫酸的作用下可脱水生成糖醛衍生物，后者再与蒽酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标准葡萄糖溶液比色定量。2.7数据统计数据分析用sas统计软件包进行，实验数据均以均值±标准差表示。多组比较采用单因素方差分析，p＜0.05表示差异有统计学意义。3实验结果3.1肝糖原含量如表4显示，rs低、中、高剂量组动物肝脏糖原含量均较对照组明显增加，且具有显著性(p＜0.05)。表4各组肝糖原含量的比较组别数目(只)肝糖原含量p值对照组241.968±0.554rs低剂量组252.143±0.360*0.03rs中剂量组212.647±0.584**＜0.01rs高剂量组232.634±0.536**＜0.01注：*表示与对照组相比有显著性差异*p＜0.05，**表示与对照组相比有极显著性差异**p＜0.013.2肌糖原含量如表5显示，rs低、中、高剂量组动物肌糖原含量均较对照组明显增加，且具有显著性(p＜0.05)。表5各组肌糖原含量比较组别数目(只)肝糖原含量p值对照组211.400±0.221rs低组251.7±0.205**＜0.01rs中组251.661±0.170**＜0.01rs高组221.873±0.132**＜0.01注：*表示与对照组相比有显著性差异*p＜0.05，**表示与对照组相比有极显著性差异**p＜0.014实验结论体内肝糖原水平与耐力密切相关。肝脏中的糖原分解为葡萄糖进入血循环，提供机体对能量的需要，维持运动时血糖水平，从而为机体提供更多能量以达到抗疲劳的目的。肌糖原是肌肉中糖的储存形式，是肌肉活动时的主要供能物质。提高体内肌糖原储量，对肌肉耐力运动的提高非常重要。上述结果表明，rs配方能够明显增加小鼠肝脏糖原和肌肉糖原含量，此作用有力地支撑rs配方的抗疲劳效果。当前第1页12