一种BMP‑9基因结合Aln对骨质疏松内固定的模型的制作方法

文档序号:11115698阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种BMP-9基因结合Aln对骨质疏松内固定的模型,其特征在于,所述BMP-9基因结合Aln对骨质疏松内固定的模型为:6月龄Sprague-Dawley雌性大鼠64只,体重275±25g,SPF级;管理饲养,12h更替黑夜和白昼,环境温度22℃,自由摄食饮水,喂养啮齿类动物标准饲料,每笼4只,适应性喂养7d后进行动物实验;大鼠按完全随机区组设计分为:单纯螺钉固定组、阿伦磷酸钠组、BMP-9转染组、BMP-9转染+阿伦磷酸钠组,每组16只;在螺钉植入后4w、8w每组各处死8只大鼠,进行实验指标检测。

2.一种如权利要求1所述BMP-9基因结合Aln对骨质疏松内固定的模型的建立方法,其特征在于,所述建立方法包括以下步骤:

大鼠称重后,用3.5%水合氯醛按1ml/100g体重腹腔内注射麻醉,待麻醉显效后,手术区备皮,取俯卧位,将大鼠四肢固定在手术台上,以碘伏消毒手术区,铺无菌单;

以大鼠背侧骶前横突最长处近端1cm为中心,延正中线作长约1.0cm—1.5cm的纵向皮肤切口,先将皮肤切口向右侧牵拉,显露腹肌在背侧止点,延其止点用眼科剪剪开,于骶脊肌外侧缘可见腹膜内一乳白色发亮脂肪团,用血管钳将脂肪团轻轻夹出切口,在脂肪团内可见一绿豆大小棕黄色卵巢及相连输卵管,有时可见卵巢表面黄色卵泡,用止血钳夹住卵巢,用0号丝线距卵巢约0.5cm处结扎输卵管,切除卵巢,将余下部分回纳入腹腔,缝合肌肉附着点,将皮肤切口牵向左侧,用同样方法切除左侧卵巢;

缝合皮肤,碘伏再次消毒切口,将所切除的卵巢组织用4%的多聚甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色,行显微镜观察,确定所切组织为卵巢,术后放入笼中,常规喂养三个月,制作骨质疏松大鼠模型。

3.如权利要求2所述的建立方法,其特征在于,所述建立方法还包括螺钉植入模型建立方法,具体包括:

3.5%水合氯醛麻醉,显效后,双侧膝内外侧区备皮,将大鼠取仰卧位,四肢固定于自制操作台上,术区碘伏消毒铺巾;

于右侧膝下内侧切开皮肤,长1cm,显露胫骨平台内侧,用尖刀剥离表面骨膜,辨清平台上缘及胫骨前后缘,于距平台上缘3mm,前后缘中点处以Φ1.2mm空针头开口,以Φ1.2mm钻头钻深约4mm,放入明胶海绵,植入Φ1.5mm*4mm钛螺钉,缝合皮肤。

4.一种如权利要求1所述BMP-9基因结合Aln对骨质疏松内固定的模型的应用,其特征在于,所述应用包括:

利用HEK293细胞扩增获取高滴度的重组腺病毒BMP-9,不同滴度转染大鼠BMSCs,当MOI值为100时,Ad-BMP-9腺病毒转染BMSCs,BMP-9稳定表达,Ad-BMP-9腺病毒转染大鼠BMSCs的转染效率为80%~90%,细胞的增殖不受转染影响;

64只6月龄SD大鼠随机分成4组,每组16只:单纯螺钉固定组、阿伦磷酸钠组、BMP-9转染组、BMP-9转染+阿伦磷酸钠组;双侧卵巢切除后3月制作骨质疏松模型,分别于双侧胫骨近心端植入螺钉,BMP-9组和BMP-9+Aln组同时植入转染有BMP-9的BMSCs;

在螺钉植入后即刻,Aln组和BMP-9+Aln组分别以1ml/kg皮下注射Aln,每周2次;其余组分别皮下注射等量生理盐水,在螺钉植入后4w、8w每组各处死8只大鼠取双侧胫骨标本,进行生物力学测定、Micro-CT扫描、硬组织切片V-G染色、脱钙骨BMP-9免疫组化染色。

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