本发明涉及动物中药领域，尤其涉及一种芪贞增免颗粒及制备工艺。
背景技术：
传统方法中制备长效芪贞增免颗粒成本太高，主要在于芪贞增免颗粒本身的特性。
并且，传统中药提取工艺一般采用直接加水煎煮醇沉方法，中药的有效成分被纤维素包裹，煎煮过程中有效成分不易被提取，提取效率低，提取时一般温度是100℃，有效成分容易被破坏一部分。
传统煎煮黄芪甲苷含量检测结果6.41％，提取率偏低。
技术实现要素：
为了解决以上技术问题，本发明提供一种芪贞增免颗粒及制备工艺，有效成分更容易煎煮浸出，主要成分提取有效率比传统提高48％，提高生物利用率，提高产品质量和临床使用效果；工艺简单，成本低，易操作。
解决以上技术问题的一种芪贞增免颗粒，其特征在于：所述颗粒配方由以下重量份的原料组成：黄芪175-185份，淫羊藿85-95份，女贞子85-95份，纤维素酶5000万iu-15000万iu，蔗糖2-4份、糊精0.7-1.4份，其余为水。
所述颗粒配方由以下重量份的原料组成：黄芪180份，淫羊藿90份，女贞子90份，纤维素酶适量12000万iu，蔗糖3份、糊精1份，其余为水。
所述芪贞增免颗粒的水份含量<＝2％。
本发明中的一种芪贞增免颗粒的制备工艺，包括以下步骤：
(1)多功能提取罐中加水，加入纤维素酶搅拌均匀，将中药组份粗粉后加入水刚好浸渍为准，加热到35-40℃保温11-13h，中药组份软化后煎煮三次，合并煎液；这里的中药为黄芪、淫羊藿和女贞子的混合物。其中，煎煮为负压煎煮1小时。
(2)用负压过滤，浓缩至中药组份与水质量浓度比1:1浓度，加入2.5-3.5倍乙醇静置23-25h，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.3-1.35的浸膏，加蔗糖和糊精，混匀；
(3)低温干燥，制成中药组份与成品的质量浓度比为1:1的颗粒，成品即为最终产品。
所述中药组份粗粉后颗粒大小为10-13目。
所述负压为-10pa。
所述水为纯化水。
所述步骤(1)中第一次往提取罐中加入的水为中药组份重量的30％。
所述回收乙醇过程中为蒸馏收回乙醇，温度为75-85℃；优化温度为80℃.
所述步骤(3)中低温干燥为温度55-65℃条件下，蒸汽烘箱烘干11-13h；优化低温干燥为温度60℃条件下，蒸汽烘箱烘干12h。
本发明中的中药组份的有效成分往往包裹在细胞壁里，传统工艺直接煎煮，细胞壁未破坏，中药组份有效成分提取收得率较低；采用加入纤维素酶的工艺后，能对中药材细胞壁有分解作用，有效成分更容易煎煮浸出，主要成分提取有效率比传统提高48％，这能很大提高产品质量和临床使用效果。
本发明中的芪贞增免颗粒主要用于猪、鸡滋补肝肾、益气固表。主治猪、鸡免疫力低下，每升水鸡1g，猪0.5g。
附图说明
图1为本发明中的免疫后猪瘟抗体水平图
具体实施方式
以下用具体实施例来对本发明作进一步的说明：
以下实施例中所用实验器材：多功能提取罐(提取罐、负压过滤器、药液暂贮罐、酒精暂贮罐)、试管、滤纸、中性氧化铝柱(100-120目)、层析缸、电子天平、容量瓶、紫外光灯、电吹风、硅胶gf254薄层板；
实验试剂：甲醇、正丁醇、三氯甲烷、硫酸乙醇、乙醇、黄芪甲苷对照品、淫羊藿苷对照品、乙酸乙酯、丁酮、甲酸、三氯化铝。
实施例1
一种芪贞增免颗粒，颗粒配方由以下重量份的原料组成：黄芪175份，淫羊藿85份，女贞子85份，纤维素酶5000万单位，蔗糖2份、糊精0.7份，含水量为2％。
具体制备方法如以下步骤：
(1)多功能提取罐中加为中药重量的30％的纯化水，加入纤维素酶搅拌均匀，再将中药粗粉为10目后加入多功能提取罐中，又加入纯化水以刚好浸渍为准，加热到35℃保温12小时，中药材软化后煎煮三次，合并煎液；
(2)用负压-10pa过滤煎液，浓缩至中药与水质量浓度比为1:1，加入2.5倍乙醇静置24小时，过虑，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.3的浸膏，加蔗糖3份、糊精1份、混匀；回收乙醇过程中为蒸馏收回乙醇，温度为75℃。
(3)低温干燥，制成中药与成品的质量浓度比1:1的颗粒，即可。低温干燥为温度55℃条件下，蒸汽烘箱烘干13h。
煎煮黄芪甲苷含量9.38％。提取效率提高约46％。
实施例2
配方由以下重量份的原料组成：黄芪185份，淫羊藿95份，女贞子95份，纤维素酶15000万iu，蔗糖4份、糊精1.4份，含水量为1.5％。
具体制备方法包括以下步骤：
(1)多功能提取罐中加30％的纯化水，加入适量纤维素酶搅拌均匀，将中药粗粉为13目后加入纯化水刚好浸渍为准，加热到40℃保温11小时，中药材软化后煎煮三次，合并煎液；
(2)用负压-10pa过滤，浓缩至中药与水质量浓度1:1浓度，加入3.5倍乙醇静置23小时，过虑，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.35的浸膏，加蔗糖和糊精、混匀；回收乙醇过程中为蒸馏收回乙醇，温度为85℃。
(3)低温干燥，制成中药与成品的质量浓度比1:1的颗粒，即可。低温干燥为温度65℃条件下，蒸汽烘箱烘干11h。
煎煮黄芪甲苷含量9.41％。提取效率提高约47％。
实施例3
配方由以下重量份的原料组成：
黄芪180份，淫羊藿90份，女贞子90份，纤维素酶12000万iu，蔗糖3份、糊精1份，含水量为1.8％。
具体制备方法包括以下步骤：
(1)多功能提取罐中加30％的纯化水，加入适量纤维素酶搅拌均匀，将中药粗粉为13目后加入纯化水刚好浸渍为准，加热到38℃保温12小时，中药材软化后煎煮三次，合并煎液；
(2)用负压-10pa过滤，浓缩至中药与水质量浓度1:1浓度，加入3倍乙醇静置24小时，过虑，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.32的浸膏，加蔗糖和糊精、混匀；回收乙醇过程中为蒸馏收回乙醇，温度为80℃。
(3)低温干燥，制成中药与成品的质量浓度比1:1的颗粒，即可。低温干燥为温度60℃条件下，蒸汽烘箱烘干12h。
煎煮黄芪甲苷含量9.43％，提取效率提高48％。
实施例4
制备方法如实施例3中的内容，其配方由以下重量份的原料组成：
黄芪178份，淫羊藿88份，女贞子88份，纤维素酶8000万iu，蔗糖2.5份、糊精0.9份，含水量为2％。
煎煮黄芪甲苷含量9.4％。提取效率提高约47％。
实施例5
制备方法如实施例1中的内容，其配方由以下重量份的原料组成：
黄芪182份，淫羊藿92份，女贞子92份，纤维素酶10000万iu，蔗糖3.5份、糊精1.2份，含水量为2％。
煎煮黄芪甲苷含量9.41％。提取效率提高约47％。
实施例6
制备方法如实施例1中的内容，其配方由以下重量份的原料组成：
黄芪181份，淫羊藿93份，女贞子89份，纤维素酶13000万iu，蔗糖3.2份、糊精1.3份，含水量为1.9％。
煎煮黄芪甲苷含量9.36％。提取效率提高约46％。
本发明中的中药的有效成分往往包裹在植物细胞壁里，传统工艺直接煎煮，细胞壁未破坏，中药有效成分提取收得率较低；采用加入纤维素酶的工艺后，能对中药材细胞壁有分解作用，有效成分更容易煎煮浸出，在负压煎煮情况下，温度更低，有效成分不易受到破坏。有效提取效率更高，提高了生物利用度。
试验一
芪贞增免颗粒对猪瘟抗体水平影响
试验用药物与试验用仪器设备
试验用中药：黄芪、淫羊藿、女贞子为饮片(安徽中药饮片厂生产，批号2011120807)。黄芪、淫羊藿、女贞子采用生物发酵提取工艺提取为i号。
具体步骤如以下：(1)多功能提取罐中加30％的纯化水，加入适量纤维素酶搅拌均匀，将中药粗粉为13目后加入纯化水刚好浸渍为准，加热到38℃保温12小时，中药材软化后煎煮三次，合并煎液；
(2)用负压-10pa过滤，浓缩至中药与水质量浓度1:1浓度，加入3倍乙醇静置24小时，过虑，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.32的浸膏，加蔗糖和糊精、混匀；回收乙醇过程中为蒸馏收回乙醇，温度为80℃。
水煮工艺提取为ii号。水煮工艺用常见的水煮工艺即可。
试验用疫苗：猪瘟细胞苗为成都中牧股份有限公司生产(批号：20120103)。
试验用仪器设备：
冷冻高速离心机(beckman)，medol550型酶标仪(美国bio-rad公司)，rt-3000全自动洗板机(雷杜公司)
试验动物：
四川犍为荣兴猪场三元杂交(d×l×y)同品种、同日龄断奶仔猪50头，随机平均分成五组，每组10头。
试验用日粮：四川巨星饲料有限公司提供，饲料营养水平详见表1。
表1营养水平
试验试剂
冷冻高速离心机(beckman)，medol550型酶标仪(美国bio-rad公司)，rt-3000全自动洗板机(雷杜公司)
试验设计
试验采用单因素完全随机试验设计，分为5个组，将分好组的试验用猪分别用猪瘟细胞疫苗按5头份/头进行肌肉注射免疫，同时按以下试验：i组在饲料中添加0.1％i号；ii组在饲料中添加0.2％i号；iii组在饲料中添加0.3％i号，iv组在饲料中直接添加0.2％ii号，v组为对照组ii号。试验共30天。具体如下表2：
表2试验设计
试验时间及饲养环境
试验时间从2014年3月-2014年4月在四川犍为荣兴猪场。试验在同一条件下进行，全部饲养在同一栋同一朝向猪舍内。环境温度、环境湿度等按常规饲养管理方式进行，试验前对猪舍进行统一清洗、消毒，严格按照“全进全出”的原则。自由采食和饮水，专人饲养管理。
样品的制备
试验后的7天、14天、21天、28天每组随机抽取5头猪从前腔静脉采血1-2ml,置37℃恒温箱中1-5h后,在4℃冰箱中放置2h，经1500r/min离心5min，取出血清置-20℃保存备用。检测指标
猪瘟抗体检测
稀释
待检血清将100μl稀释液(1倍pbs)加入反应孔中，然后向相应的孔中加入待检测血清、标准阳性血清和标准阴性血清各2μl，标准阳性血清和阴性血清各加2孔，37℃湿盒作用2h。
洗涤
将孔中的液体用力甩净，每孔加入300μl洗液(pbst),室温震荡洗涤3min,如此洗涤3次,最后一次拍打干净。
加入猪igg酶标抗体
将试剂盒配备的辣根过氧化氢酶标记的兔抗猪igg用稀释液(1倍pbs)以1:5000稀释,充分混合均匀。用多道移液器加入到各反应孔中,100μl/孔。37℃湿盒作用45min。
洗涤
重复操作上一次洗涤步骤，洗涤3次,最后一次拍干。
加入tmb底物和0.75％过氧化氢尿素
临用前将底物作用液a:b以1:50稀释,混匀后加入0.75％过氧化氢尿素(按1.8μl/mlab混合液),用多道移液器加入到各反应孔中,100μl/孔。避光作用5min。
4.3.6加入终止液
用多道移液器将终止液(2mol/lh2so4)加入到各反应孔中,50μl/孔。注意要按加酶标二抗的顺序加终止液。应用酶标仪，在490nm波长处测定样本的od值。
统计分析
本试验数据采用spss13.0统计软件进行单因素方差分析，试验结果用平均数±标准误差表示，采用duncan多重比较进行显著性分析。
试验结果如表3和图1：
表3免疫后不同时期csf抗体值
注：表中数据为每组5个样品的平均值±标准差，同一列是同一时间不同组别间抗体水平的比较，肩标字母相同者表示差异不显著(p＞0.05)，字母不相同者表示差异显著(p＜0.05)。
结果分析
从图1可知，在免疫后7d，猪瘟抗体水平开始逐渐上升，在免疫后21d达到最高水平，然后缓慢下降，且添加0.1％i号、添加0.2％i号、添加0.3％i号以及添加0.2％ii号组猪瘟抗体水平均显著高于对照组(p＜0.05)；添加0.1％i号组、添加0.2％i号组、添加0.3％i号组猪瘟抗体水平显著高于添加0.2％水ii号组(p＜0.05)；添加0.1％、0.2％、0.3％i号组抗体水平高于添加0.2％ii号组，但差异不显著(p＞0.05)。
不同剂量的芪贞增免颗粒均可显著提高猪瘟抗体水平，但添加0.1％i号组效果好于添加0.2％ii号组。
本发明中的生物发酵提取芪贞增免颗粒和水煮法提取芪贞增免颗粒均可显著增强猪群免疫功能，提高猪群免疫水平。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。