本发明涉及一种银杏酮酯药用原料，属于医药领域。
背景技术：
银杏叶提取物具有广泛的药理作用,其所富含的银杏总黄酮和银杏总内酯是其发挥此类药理作用最主要的物质基础。而清除氧自由基抗氧化和拮抗血小板活化因子（PAF）抗血小板凝聚又是其众多生物活性中最为突出的两个药理作用。华东师范大学生命科学学院陈季武等曾采用高灵敏度的化学发光法实验研究了“11种高纯度的天然黄酮类化合物清除超氧阴离子 (O-·2 )的构效关系”，并对其活性的强弱进行了排序，其清除O-·2 能力大小顺序依次为：黄芩苷＞ 泽漆新苷 ＞槲皮素＞ 芸香苷 ＞金丝桃苷 ＞山奈素＞ 甘草查尔酮 ＞橙皮苷 ＞石吊兰素 ,而川陈和补甲 Ac无效。银杏内酯类物质可以竞争性拮抗血小板活化因子（PAF）从而发挥强大的抗血小板凝聚作用。其中以银杏二萜内酯中的银杏内酯B活性最强。而大量研究资料也表明黄酮类物质也具有抗血小板凝聚的活性，银杏内酯类物质也具有清除氧自由基的活性，即两类物质之间存在着相互交叉、相辅相成等极其复杂的关系。德国科学家曾对银杏叶提取物进行过比较系统、深入的研究（从银杏树的种植、底肥营养的供给、矮化、采集时机把握、活性成分富集量的测定等）并制定了银杏提取物国际药用标准（总黄酮≥24%、总内酯≥6%、银杏酸＜5ppm）。但这个标准是比较粗略的，是根据当时的提取制备工艺而确立，而不是根据药物活性的优劣评估产生的。为了更好的发挥两类有效成分的药理活性，减少临床给药剂量，进一步降低杂质带来的不安全性及干扰，探究寻找出两类有效成分更好的比例关系就显得很有必要！目前此类研究尚无被发现。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供一种银杏酮酯药用原料，确立黄酮和内酯的最佳比例。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
一种银杏酮酯药用原料，包括从银杏中提取的黄酮和内酯，所述黄酮包括槲皮素、山奈酚和异鼠李素；所述内酯包括白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C；其中黄酮和内酯的比例为1：1。
本发明的进一步改进在于：黄酮的成分及重量份数比为，槲皮素3~4份，山奈酚5~6份，异鼠李素6~8份。
本发明的进一步改进在于：内酯的成分及重量份数比为，
白果内酯，11~13份；银杏内酯A，8~9份；银杏内酯B，5~6份；银杏内酯C，12~13份。
本发明的进一步改进在于：黄酮的提取方法包括以下步骤，
步骤A1，取一定量的银杏叶提取物溶于水中，在55℃温度下进行超声波振荡溶解，之后进行离心分离，过滤后收集清液，将滤渣溶于水中重复进行超声波振荡溶解，离心过滤后收集清液，将两次收集的清液合并，得到提取液；
步骤B1，用稀磷酸或氢氧化钠溶液调节提取液的PH值至4.5~5.0，再向提取液中加入等体积的有乙酸乙酯和正丁醇混合液进行萃取，萃取次数为3次；所述乙酸乙酯和正丁醇混合液中乙酸乙酯：正丁醇的体积比为4：1；
步骤C1，将萃取液蒸发浓缩，将浓缩后的萃取液进行冷冻干燥，得到精制黄酮。
本发明的进一步改进在于：内酯的提取方法包括以下步骤，
步骤A2，取一定量的银杏叶提取物溶于水中，在55℃温度下进行超声波振荡溶解，之后进行离心分离，过滤后收集清液，将滤渣溶于水中重复进行超声波振荡溶解，离心过滤后收集清液，将两次收集的清液合并，得到提取液；
步骤B2，用稀磷酸或氢氧化钠溶液调节提取液的PH值至4.5~5.0，用等体积的乙酸乙酯和石油醚萃取2~6次，酯相蒸发后得到固体物质；
步骤C2，将固体物质溶解到其20倍体积的水中，将溶液进行离心、过滤后取上层清液加入等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取的溶液，蒸发浓缩回收容积，冷冻干燥后得到内酯粗提取物；
步骤D2，通过水浴加热将内酯粗提取物溶于乙醇溶液中，温度自然冷却到室温，再重复加热、放冷使晶体生长，然后放置在4℃环境下12小时进行陈化，将母液分离，冷冻干燥得到精致后的银杏内酯。
本发明的进一步改进在于：步骤D中的乙醇溶液浓度为60%。
由于采用上述技术方案，本发明所产生的有益效果在于：
本发明的银杏酮酯药用原料改变了原有银杏提取物中黄酮和内酯比例的标准，确定了药物兼备清除自由基和抗血小板凝聚最佳的比例，本发明除了具有对缺血、缺氧状态下神经元细胞的保护作用和修复受损神经元细胞功能外，总内酯中占据较大比例的白果内酯所具有的独特治疗早老性痴呆的药理作用也会得以凸显。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细说明：
一种银杏酮酯药用原料，包括从银杏中提取的黄酮和内酯，黄酮包括槲皮素，山奈酚，异鼠李素；所述内酯包括白果内酯，银杏内酯A，银杏内酯B，银杏内酯C；其中黄酮和内酯的比例为1：1。
黄酮的成分及重量份数比为，槲皮素3~4份，山奈酚5~6份，异鼠李素6~8份。
内酯的成分及重量份数比为，白果内酯，11~13份；银杏内酯A，8~9份；银杏内酯B，5~6份；银杏内酯C，12~13份。
黄酮的提取方法包括以下步骤，
步骤A1，取一定量的银杏叶提取物溶于水中，在55℃温度下进行超声波振荡溶解2分钟，之后进行离心分离，过滤后收集清液，将滤渣溶于水中重复进行超声波振荡溶解，在55℃提取15分钟，离心过滤后收集清液，将两次收集的清液合并，得到提取液。
步骤B1，用稀磷酸或氢氧化钠溶液调节提取液的PH值至4.5~5.0，再向提取液中加入等体积的有乙酸乙酯和正丁醇混合液进行萃取，萃取次数为3次；乙酸乙酯和正丁醇混合液中乙酸乙酯：正丁醇的体积比为4：1。
步骤C1，将萃取液蒸发浓缩，将浓缩后的萃取液进行冷冻干燥，得到精制黄酮。
内酯的提取方法包括以下步骤，
步骤A2，取一定量的银杏叶提取物溶于水中，在55℃温度下进行超声波振荡溶解2分钟，之后进行离心分离，过滤后收集清液，将滤渣溶于水中重复进行超声波振荡溶解，在55℃提取15分钟，离心过滤后收集清液，将两次收集的清液合并，得到提取液。
步骤B2，用稀磷酸或氢氧化钠溶液调节提取液的PH值至4.5~5.0，用等体积的乙酸乙酯和石油醚萃取2~6次，萃取的酯相经过蒸发后得到固体物质。
步骤C2，将固体物质溶解到其20倍体积的水中，将溶液进行离心、过滤后取上层清液加入等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取的溶液，蒸发浓缩回收容积，冷冻干燥后得到内酯粗提取物。
步骤D2，通过水浴加热将内酯粗提取物溶于60%的乙醇溶液中，温度自然冷却到室温，再重复加热、放冷使晶体生长，然后放置在4℃环境下12小时进行陈化，将母液分离，冷冻干燥得到精致后的银杏内酯。
下面通过对比实验进行验证。
本实验采用的银杏提取物为浙江康恩贝公司生产的银杏提取物，其中的黄酮和内酯的比例为银杏中黄酮和内酯的自然比例。通过上述黄酮和内酯的提取方法进行提取。
通过上述黄酮的提取方法的到的物品中黄酮质量占51%-58%，不含内酯；通过内酯的提取方法的到的物品中内酯质量占37%-50%，含有少了黄酮，黄酮质量的占比为8.0~16.3%。
将提取的黄酮和内酯按照实际的含量进行混合调配出七组，各组中黄酮和内酯的比例分别为，
第一组：实施例，黄酮和内酯比例为1：1。第二组：对比例1，黄酮和内酯比例为4：1。第三组：对比例1，黄酮和内酯比例为3：1。第四组：对比例1，黄酮和内酯比例为2：1。第五组：对比例1，黄酮和内酯比例为1：2。第六组：对比例1，黄酮和内酯比例为1：3。第七组：对比例1，黄酮和内酯比例为1：4。
分别以清除氧自由基和抗血小板凝聚两个药效指标逐个进行实验，并设阴性和阳性对照组。
实验一，清除氧自由基实验。
采用已知强还原剂维生素C（抗坏血酸钠）作为阳性对照。试验设三个参比对照组，依达拉奉注射液、银杏叶提取物注射液（金纳多）和银杏内酯注射液（百裕），实验方法同供试品，比较供试品与参比对照品的清除DPPH自由基能力。采用EXCEL和ORIGIN 8.0进行数据处理和分析，并进行曲线拟合，求得EC50浓度。
实验结果如下，以总黄酮苷浓度为基准并换算出该比例所对应的总提取物供试品浓度，标记为：总黄酮苷浓度／总提取物供试品浓度。七组清除DPPH自由基的EC50浓度依次为89.64μg.mL-1／337.58μg.mL-1、186.75μg.mL-1／443.63μg.mL-1、167.11μg.mL-1／425.45μg.mL-1 、138.99μg.mL-1／396.23μg.mL-1、67.11μg.mL-1／377.27μg.mL-1、50.02μg.mL-1／410.74μg.mL-1、42.53μg.mL-1／376.87μg.mL-1。
参比对照组中依达拉奉组EC50浓度为86.88μg.mL-1；银杏叶提取物注射液（以银杏黄酮苷浓度／总提取物浓度计）的EC50浓度为86.88μg.mL-1和157.10μg.mL-1／654.58μg.mL-1；
参比对照品银杏内酯注射液原液（总内酯浓度为5000μg.mL-1）对DPPH的清除能力仅为30.08%，未得到EC50浓度。
由实验结果得到如下结论。在本试验条件下，实验组1~7对DPPH自由基的清除的有效性成立。实验组1~7对DPPH自由基清除能力均明显强于银杏内酯注射液（百裕），供试品1~7对DPPH自由基清除EC50总提取物供试品浓度都低于银杏叶提取物注射液（金纳多），供试品1~7的DPPH自由基清除EC50总提取物供试品浓度都高于依达拉奉。
从上述实验可以看出：随着总黄酮：总内酯比例的改变，提取物清除自由基能力也随之改变，即所需要的总提取物供试品浓度值不同。其中尤以实施例第一组（黄酮：内酯=1:1）对DPPH自由基清除EC50总提取物供试品浓度值在供试品1~7组中是最低的（是金纳多总提取物浓度的337.58／654.58≈1／1.94、是银杏内酯注射液（百裕）总浓度的337.58／5000≈1／14.8），即该组清除自由基能力是最强的。
实验二，抗血小板凝聚活性筛选实验。
以肝素钠作为阳性对照组，以银杏叶提取物注射液（金纳多）和银杏内酯注射液（百裕）作为参比对照品，与总提取物供试品进行比较。
实验方法如下，取检疫合格的KM小鼠66只，4~6周龄，雄雌各半，按性别随机分为11组（即阴性对照组、阳性对照组、供试品1组、供试品2组、供试品3组、供试品4组、供试品5组、供试品6组、供试品7组、参比对照品1组、参比对照品2组），每组6只。采用单次尾静脉注射方式给药，供试品1~7组依次给予供试品1~7，参比对照品1组给予金纳多注射液，参比对照品2组给予银杏内酯注射液，给药剂量均为2.45mg/kg，给药容积均为0.07 mL/10g，阴性对照组给予同体积的生理盐水，阳性对照组给予同体积肝素钠注射液（给药浓度为1250单位/mL）。给药后10分钟，用折断的毛细管（约1.5cm长）对小鼠进行眼內眦取血，去掉第1滴血后，在载玻片上滴1滴血，立即用秒表计时，每隔30s用大头针自血滴边缘向中间轻挑1次，当有血丝挑起时停止计时，并记录时间，即为体外凝血时间。
试验结果以均数±标准差（x±s）表示，采用EXCEL软件进行统计学处理，各组与阴性对照组间的凝血时间差异采用配对T检验比较，检验水准P值为0.05。
预试验及两次正式试验中，阳性对照品（肝素钠）组所有小鼠凝血时间均＞600s，统计学显著长于阴性对照组，认为本试验方法可靠。结果汇总如下：
备注：1：供试品1~7及金纳多组给药剂量以银杏叶提取物计，银杏内酯注射液组给药剂量以萜烯内酯计；2：肝素钠预试验给药剂量为12500单位/kg，正式试验剂量为8750单位/kg；
*：P＜0.05；**：P＜0.01。
实验结论：在本试验条件下，实验组1~7及参比对照品延长小鼠凝血时间的有效性成立。与阴性对照品相比，各供试品及参比对照品在近似金纳多临床剂量下均可延长小鼠凝血时间，且供试品1、5~7及银杏内酯注射液效果强于金纳多。供试品1~7组中，综合考虑认为供试品1组（即总黄酮：总内酯=1：1）效果最优。
从两次实验的实验结果可以看出。对于自由基清除能力：在达到同样的对清除DPPH自由基的EC50浓度前提下，供试品1~7所需要的总提取物供试品浓度是不同的，浓度越小则清除能力越强。第一次清除自由基实验结果显示1:1组所需要的总提取物供试品浓度是最小的。第二次清除自由基实验结果显示4：1组所需要的总提取物供试品浓度最小（不排除试验存在误差）。
对于抗血小板凝聚活性：在相同的给药浓度条件下，供试品1~7及金纳多、银杏内酯注射液谁的体外凝血时间越长则抗凝活性越强。从预试验结果、第一次试验结果、第二次实验结果都显示出1:1的抗凝聚活性最强。综合两项药效试验结果分析认定：黄酮：内酯=1:1组是兼备清除自由基和抗血小板凝聚最佳的比例配比。同时优于金纳多和银杏内酯注射液。