一种中药复方试剂及其制备方法与流程

本发明属于医药学技术领域，尤其涉及一种中药复方试剂及其制备方法。

背景技术：

我国传统医学治疗性功能障碍历来以补肾壮阳法为主。^[1]补肾是指应用补肾的药物，治疗肾虚症的一种方法；壮阳主要是指壮肾阳，兴阳事，恢复或亢奋性功能。现代药理学研究证实，众多的补肾壮阳中成药及方剂是通过性激素及促性腺素、附性器官、“阳痿”动物模型和免疫等方面的影响，而显示出其壮阳的药理学效应。且人体的生长发育和衰老与肾气的关系极为密切。衰老的迟早、老化的速度及寿命的长短，很大程度上决定于肾气的强弱。因此，补肾也是中医药学中延缓衰老的主要方法。此傣药补肾壮阳方是国家十二五傣药学科重点资助项目，云南少数民族傣族民间医生长期运用此方治疗肾虚证，取得了较好的疗效。采用中药治疗肾虚证不仅作用温和且疗效持久，还能改善病人整体症状，提高生活质量，避免并发症，减少副反应延长寿命。因此，研究此中药复方制剂补肾壮阳的药效及作用机制，既可以为民族药广泛运用于临床提供部分实验依据，也是研发补肾壮阳药的有效途径之一。

综上所述，在过去中药复方制剂补肾壮阳的药方中，大都是以补气补阳的药物为主，而缺乏滋阴的药物调节，其结果阳盛而阴不足。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种中药复方试剂及其制备方法，旨在解决背景技术的问题。

本发明是这样实现的，一种中药复方试剂，该中药复方试剂由傣药补肾壮阳方DRB药物和水组成，所述傣药补肾壮阳方DRB药物按质量比由3味中药组成，即铁皮石斛8；肉苁蓉15：西洋参8，目标浓度—药物和水的质量比为1:1。

本发明另一目的在于提供一种中药复方制剂的制备方法，该中药复方制剂的制备方法包括：

取傣药补肾壮阳方DRB原药材2公斤，加入傣药补肾壮阳方DRB原药材8倍质量的纯净水浸泡30min，煎煮35min，滤过，得第一滤液；

取药渣，加入傣药补肾壮阳方DRB原药材的6倍质量的纯净水煎煮30min，滤过，得第二滤液；

取药渣，加入傣药补肾壮阳方DRB原药材的4倍质量的纯净水煎煮25min，滤过，得第三滤液；

合并第一滤液、第二滤液、第三滤液；静置12h后，取上清液浓缩，得到中药复方制剂。

本发明另一目的在于提供一种验证权上述的中药复方制剂药效的雄性大鼠模型。

本发明另一目的在于提供一种雄性大鼠模型的构建方法，该雄性大鼠模型的构建方法为：

取SD雄性大鼠40只，SD雌性大鼠40只自主饮食，适应性饲养1周，1周后将雄性大鼠编号，随机分为4组：空白组﹑中成药龟鹿补肾片组﹑万艾可组、傣药DRB补肾壮阳方组；

空白组给予等体积蒸馏水，灌胃体积5ml·kg^-1，每天2次；中成药龟鹿补肾片组以0.93g/kg、傣药DRB补肾壮阳方组以3.24g/kg提取物灌胃，每天2次，共3周；

万艾可组0.09g/kg于最后一天实验前1h灌胃给药，灌胃体积均为1ml/100g；

每天称量雄性SD大鼠的食量，每周测量雄性SD大鼠大鼠的体重。

进一步，中成药龟鹿补肾片的制备为：

龟鹿补肾片用研钵研磨成细粉，加入超纯水溶解，调配至浓度为0.81g/ml。

本发明提供的中药复方试剂及其制备方法，(4结果就是提供支持积极效果的试验数据，)与空白组比较，阳性对照药万艾可能明显缩短雄性大鼠捕捉潜伏期、明显增加捕捉次数、显著缩短交配潜伏期、明显增加20min内交配次数；中成药龟鹿补肾片能缩短雄性大鼠捕捉潜伏期、增加捕捉次数、缩短交配潜伏、明显增加20min内交配次数；傣药补肾壮阳方DRB能缩短雄性大鼠捕捉潜伏期，增加捕捉次数，能明显缩短交配潜伏期，增加20min内交配次数。可见本发明中药复方制剂具有提高雄性大鼠性行为的作用。

与空白组比较，阳性对照药龟鹿补肾片可升高雄性大鼠血清睾丸酮含量，降低雌二醇含量；傣药补肾壮阳方DRB可升高雄性大鼠血清睾丸酮含量，降低雌二醇含量。可见本发明傣药补肾壮阳方DRB与性激素调节有关。

本发明剂量的设置为按人用日剂量折算的大鼠等效量的3倍。本发明中有铁皮石斛这一强有力的滋阴药，阴阳互补；发挥其补肾壮阳的药效。同时，铁皮石斛又是目前国内力推的药材，全国十多个省都在大力发展，属于九大仙草之一的药物。

附图说明

图1是本发明实施例提供的中药复方试剂的制备方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

下面结合附图对本发明的应用原理作进一步描述。

本发明实施例提供的中药复方试剂，该中药复方试剂由傣药补肾壮阳方DRB药物和水组成，所述傣药补肾壮阳方DRB药物按质量比由3味中药组成，即铁皮石斛8；肉苁蓉15：西洋参8，目标浓度—药物和水的质量比为1:1。

如图1所示：本发明实施例提供的中药复方制剂的制备方法，方法包括：

S101：取傣药补肾壮阳方DRB原药材2公斤，加入傣药补肾壮阳方DRB原药材8倍质量的纯净水浸泡30min，煎煮35min，滤过，得第一滤液；

S102：取药渣，加入傣药补肾壮阳方DRB原药材的6倍质量的纯净水煎煮30min，滤过，得第二滤液；

S103：取药渣，加入傣药补肾壮阳方DRB原药材的4倍质量的纯净水煎煮25min，滤过，得第三滤液；

S104：合并第一滤液、第二滤液、第三滤液；静置12h后，取上清液浓缩，得到中药复方制剂。

本发明实施例提供一种验证权上述的中药复方制剂药效的雄性大鼠模型。

本发明实施例提供一种雄性大鼠模型的构建方法，该雄性大鼠模型的构建方法为：

取SD雄性大鼠40只，SD雌性大鼠40只自主饮食，适应性饲养1周，1周后将雄性大鼠编号，随机分为4组：空白组﹑中成药龟鹿补肾片组﹑万艾可组、傣药DRB补肾壮阳方组；

空白组给予等体积蒸馏水，灌胃体积5ml·kg^-1，每天2次；中成药龟鹿补肾片组以0.93g/kg、傣药DRB补肾壮阳方组以3.24g/kg提取物灌胃，每天2次，共3周；

万艾可组0.09g/kg于最后一天实验前1h灌胃给药，灌胃体积均为1ml/100g；

每天称量雄性SD大鼠的食量，每周测量雄性SD大鼠大鼠的体重。

下面结合实施例对本发明的应用原理进一步说明。

1.试验简介

1.1观察和检测指标的选择

本发明选择的观察指标为大鼠性行为参数，检测指标为血清中睾酮和雌二醇含量。

大鼠性行为参数：扑捉潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠第一次扑捉雌鼠的时间，)；20分钟内雄鼠扑捉雌鼠的次数；交配潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次与雌鼠交配的时间)；20分钟内交配次数。以上参数用以评价大鼠性欲、性唤醒的启动速度、勃起功能的高低。

雄鼠性行为是按一定次序进行的连续过程，通过现场观察可发现，大鼠交配有以下特点：首先，雄鼠在骑跨雌鼠之前，一般会去主动嗅雌鼠的肛门生殖器区，然后开始骑跨雌鼠。如果雌鼠的发情状态良好，就有一个“弓背”动作，所谓的弓背，就是雌鼠的脊柱向下弯曲成弓形，尾巴偏向一侧，阴部暴露于正后方，可能这种姿势更有利于交配。接下来就是骑跨和插入，当雄鼠阴茎插入到雌鼠阴道时，伴随雄鼠后腿及骨盆向前推动，此时雄鼠的背常常弯曲成弓形，前爪紧抱着雌鼠的背部。经过多次的插入达到射精，射精时雄鼠会出现剧烈的颤动，在此过程中，雄鼠前肢紧抱着雌鼠持续数秒。射精后，雄鼠有长达数分钟的不应期。雄鼠每次插入以后，常常会有一个舔自己阴部的动作，而且，雄鼠的每一次骑跨并不一定伴有插入。

1.2.选择龟鹿补肾片作为阳性对照药

本发明的试验使用的龟鹿补肾片这种中成药作为阳性药。龟鹿补肾胶囊收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第十七册，龟鹿补肾片由龟鹿补肾胶囊改剂型而成，由菟丝子(炒)、淫羊藿(蒸)、续断(蒸)、锁阳(蒸)、狗脊(蒸)、酸枣仁(炒)、制何首乌、炙甘草、陈皮(蒸)等17味药材组成。本方枸杞子、肉苁蓉、巴戟天均入肾经，能温肾助阳、补命门之火兼益精气；炙黄芪补益中气，以消除阳明之气衰；阴阳互损，肾阳虚损日久，必然导致肾阴之不足，故又以熟地滋补肾阴兼补肝血；龟鹿二味均为骨肉有情之品，既可滋肾壮阳，填精补髓，又可防止补阳药物燥热伤阴之弊，使阴阳保持相对平衡。诸药合用，具有补肾壮阳，填精补髓，益气补中之功，故临床应用每可取得满意效果。

且药效学实验证实本药具有提高小鼠网状内皮系统对炭粒的廓清能力，能促进雄性幼鼠及去势小鼠生殖系统的生长发育，包皮腺指数、精囊腺指数、睾丸指数，提高肾阳虚雄性大鼠血清中皮质醇、睾丸酮、肾上腺素、去甲肾上腺素的含量，说明龟鹿补肾片能增强非特异性免疫功能，具有雄激素样作用。

1.3选择万艾可作为阳性对照药

目前，临床治疗性功能障碍的一线口服药物主要是万艾可。万艾可药物于1998年美国上市，由于其独特的效果，尤其是能全面地治疗各种原因引起的性功能障碍，一经问世，便受到世人的瞩目。为评价枸橼酸西地那非的疗效。Ochiai A等进行了一项研究。在1999年3月和2003年3月之间，281个ED患者接受了枸橼酸西地那非(50mg)治疗。在281个病人中，有206个可供评估。其中，服用枸橼酸西地那非后完成性交的总成功率为77.2％。功能性和器质性ED男性的成功率分别为91.4％和65.5％。16名患者发生了轻微短暂的副作用(8％)，仅2人(1％)发生了严重的副作用(水肿和眩晕)。西地那非治疗ED成功率高、耐受性好，可被推荐为ED首选用药。

通过本发明实验，得出结论：傣药补肾壮阳方DRB可缩短雄性大鼠捕捉潜伏期、明显增加大鼠捕捉次数、显著缩短交配潜伏期、明显增加20min内交配次数，体内血清睾酮含量明显升高，体内雌二醇含量明显降低，为临床治疗和进一步研究提供基础依据。

2.材料

2.1动物

SD大鼠共80只，分别为雄性大鼠40只，雌性大鼠40只，体重200+20g,由成都达硕生物科技有限公司提供。SPF级，合格证号：0018412。动物分笼饲养，食固体饲料、垫料由苏州双狮实验动物饲料科技有限公司提供。

2.2药物与试剂

傣药补肾壮阳方DRB，由云南省高校民族医药现代研究重点实验室提供；龟鹿补肾片，广东心宝制药有限公司，产品批号：20150808；睾酮(T)酶联免疫吸附测定试剂盒，伊莱瑞特生物科技有限公司，产品货号：E-EL-0072c；雌二醇(E2)酶联免疫吸附测定试剂盒，伊莱瑞特生物科技有限公司，产品货号：E-EL-0065c。

2.3仪器

VariceKna全波长扫描式多功能酶标分析仪(北京普朗新技术有限公司)、Primo R台式高速冷冻离心机(Thermofisher公司)、REVCO UxF300双门立式超低温冰箱(Thermofisher公司)、Smart 2Pure Uv/VF超纯水机(Thermofisher公司)、海尔BCD-226TX冰箱(海尔公司)、BS224电子天平(北京赛尔利斯仪器系统有限公司)、HW-1000超级恒温水浴槽(成都泰盟科技有限公司)、101型电热鼓风干燥箱(北京市永光明医疗仪器厂)、微量移液器等。

3方法

3.1制备

3.1.1中药复方制剂制备方法的确定

傣药补肾壮阳方DRB由3味中药组成，根据临床使用经验和相关文献研究，临床用药为水煎剂，故采用水提法。

3.1.2中药复方制剂的制备

傣药补肾壮阳方DRB药材由云南省高校民族医药现代研究重点实验室提供。取傣药补肾壮阳方DRB原药材2公斤，加入8倍量的纯净水浸泡30min，煎煮35min，滤过；继续以6倍纯净水煎煮30min，滤过；继续以4倍纯净水煎煮25min，滤过。合并滤液，静置12h后，取上清液浓缩至目标浓度。

3.1.3阳性药溶液的制备

龟鹿补肾片用研钵研磨成细粉，加入超纯水溶解，调配至浓度为0.81g/ml。

3.2分组、给药

取SD雄性大鼠40只，SD雌性大鼠40只自主饮食，适应性饲养1周，1周后将雄性大鼠编号，随机分为4组：空白组﹑中成药组(龟鹿补肾片0.93g/kg)﹑万艾可组、傣药补肾壮阳方DRB组(3.24g/kg)。空白组给予等体积蒸馏水，灌胃体积5ml·kg^-1，每天2次，阳性对照组以0.93g/kg(按人给药剂量换算)、傣药DRB组以3.24g/kg(按人给药剂量换算)提取物灌胃，每天2次，共3周。万艾可组(0.09g/kg)于最后一天实验前1h灌胃给药，灌胃体积均为1ml/100g。每天称量雄性SD大鼠的食量，每周测量雄性SD大鼠大鼠的体重。

3.3交配实验

3.3.1发情雌鼠的准备

为消除雌性大鼠在进行交配实验时动情期的不同，进行双侧卵巢切除术，并同时注射雌激素，方法为：雌性大鼠在10％水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉下，背部朝上固定于鼠板上，在大鼠最末肋骨下，腋中线和距脊柱外侧约2cm交叉处剪除长毛，切开皮肤和背肌，有乳白色发亮的脂肪团，其中便包埋着卵巢。用小镊子轻夹脂肪团，拉出切口外，分离脂肪，即见粉红色卵巢。取一丝线将卵巢下输卵管及脂肪一并结扎，剪下卵巢，将子宫角送回腹腔，然后摘取对侧卵巢，术后肌注青霉素20万U/kg抗感染治疗3天，常规饲养，3周后进行交配试验，试验前48小时皮下注射苯甲酸雌二醇0.2mg/只，4小时前再次经皮下注射黄体酮0.4mg/只。

3.4检测指标

3.4.1性行为学指标检查

于末次给药后1h晚上7-11时进行，将雄性大鼠单独放入笼中(55cm×35cm×20cm)5min，使其适应环境。^[11]保持安静，使用微弱的灯光照明，将光线调暗至能够观察即可。10分钟后将发情雌鼠轻放入雄鼠笼内，观察记录扑捉潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠第一次扑捉雌鼠的时间，)；20分钟内雄鼠扑捉雌鼠的次数；交配潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次与雌鼠交配的时间)；20分钟内交配次数。以上参数用以评价大鼠性欲、性唤醒的启动速度、勃起功能的高低。

3.4.2血清标本采集

测定时间为实验第29天，将上述已测完性行为学的大鼠用10％水合氯醛0.3mL/100g腹腔注射麻醉后，腹主动脉取血6mL，分2份各3mL，存于真空采血管中，4℃混匀，3000r/min离心15分钟，取上置血清，放置于-20℃冰箱保存，待测血清睾酮和雌二醇的含量。采用酶标仪试剂盒测定，操作依照试剂盒说明书。

3.4.3大鼠血清睾酮、雌二醇含量的测定

采用酶联免疫法测定血清睾酮、雌二醇的含量。

3.5统计学方法

实验数据均以均数±标准差表示，先进行方差齐性检验，计量资料符合正态分布、方差齐者用t检验；方差不齐者用校正t检验；多组比较用单因素方差分析，两两比较采用最小差异法(LSD)；不符合正态分布者用秩和检验，计数资料用x²检验，以α＝0.05为检验标准。

4结果

4.1傣药补肾壮阳方DRB对大鼠性行为的影响

傣药补肾壮阳方DRB对大鼠性行为的影响结果见表1。各数值使用单因素方差分析法。

表1傣药补肾壮阳方DRB对大鼠性行为的影响

注：与空白组比较*P<0.05，ΔP<0.01.

由表1可以看出：与空白组比较，阳性对照药万艾可能明显缩短雄性大鼠捕捉潜伏期、明显增加捕捉次数、显著缩短交配潜伏期、明显增加20min内交配次数，经统计学处理，p<0.01，差异有非常显著性意义；中成药龟鹿补肾片也能缩短雄性大鼠捕捉潜伏期(p<0.05)，增加捕捉次数(p<0.05)，缩短交配潜伏期(p<0.05)、明显增加20min内交配次数(p<0.01)；傣药补肾壮阳方DRB能缩短雄性大鼠捕捉潜伏期(p<0.05)，增加捕捉次数(p<0.05)，能明显缩短交配潜伏期(p<0.01)，增加20min内交配次数(p<0.05)。

4.2傣药补肾壮阳方DRB对大鼠血清睾酮、雌二醇含量的影响

傣药补肾壮阳方DRB对大鼠血清睾酮、雌二醇含量的影响结果见表2。各数值使用单因素方差分析法。

表2傣药补肾壮阳方DRB对雄性大鼠血清睾酮、雌二醇含量的影响(n＝10,x±s)

注：与空白组比较*P<0.05,ΔP<0.01.

试验结果表明，龟鹿补肾片、傣药补肾壮阳方DRB均可升高雄性大鼠血清睾丸酮含量，降低雌二醇含量(p<0.05)，说明对性激素有一定影响。

5讨论：

本发明实验结果显示，与空白组比较，阳性对照药万艾可能明显缩短雄性大鼠捕捉潜伏期、明显增加捕捉次数、显著缩短交配潜伏期、明显增加20min内交配次数；中成药龟鹿补肾片能缩短雄性大鼠捕捉潜伏期、增加捕捉次数、缩短交配潜伏、明显增加20min内交配次数；傣药补肾壮阳方DRB能缩短雄性大鼠捕捉潜伏期，增加捕捉次数，能明显缩短交配潜伏期，增加20min内交配次数。可见中药复方制剂具有提高雄性大鼠性行为的作用。

与空白组比较，阳性对照药龟鹿补肾片可升高雄性大鼠血清睾丸酮含量，降低雌二醇含量；傣药补肾壮阳方DRB可升高雄性大鼠血清睾丸酮含量，降低雌二醇含量。可见傣药补肾壮阳方DRB与性激素调节有关。

剂量的设置为按人用日剂量折算的大鼠等效量的3倍。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。