鱼藤酮在制备肥胖以及脂肪肝疾病药物中的应用的制作方法

本发明涉及鱼藤酮在制备药物中的应用，具体是鱼藤酮在制备肥胖以及脂肪肝疾病药物中的一种新应用，属于生物医药技术领域。

背景技术：

随着社会经济的快速发展，国人的生活水平大幅度提高，生活方式也发生了巨大的改变，与之相对应的是代谢性疾病的发生率大大增高，这不但严重影响了患者的寿命及生活质量，也给国家和患者家庭带来极大的经济负担。有效防治代谢性疾病已经成为中国乃至世界性的一个难题。肥胖是一种由多种因素引起的慢性代谢性疾病，表现为脂肪细胞的体积和细胞数均增加致体脂占体重的百分比异常增高，并且在局部过多沉积脂肪。脂肪肝是由于多种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变。脂肪性肝病正严重威胁国人的健康，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病。脂肪肝的程度与体重成正比，30％～50％的肥胖合并脂肪肝，重度肥胖者脂肪肝病变率高达61％～94％。因此，开发新型治疗肥胖以及脂肪肝药物依然是治疗代谢性疾病的关键。

鱼藤酮(又称毒鱼藤，英文名tubatoxin)，存在于豆科鱼藤属植物的种子、茎部和根部，不溶于水，溶于醇、丙酮、氯仿、四氯化碳、乙醚等。主要用作农用杀虫剂，也可防治人畜体外寄生虫和生化研究。防治对象有：蚜虫、飞虱、黄条跳甲、蓟马、黄守瓜、猿叶虫、菜青虫、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、小菜蛾等。在毒理学上是一种专属性很强的物质，对昆虫尤其是菜粉蝶幼虫、小菜蛾和蚜虫具有强烈的触杀和胃毒两种作用。早期的研究表明鱼藤酮主要是与NADH脱氢酶与辅酶Q之间的某一成分发生作用，使害虫细胞的电子传递链受到抑制，从而降低生物体内的ATP水平最终使害虫得不到能量供应，然后行动迟滞、麻痹而缓慢死亡。

目前，尚无关于鱼藤酮用于治疗肥胖以及脂肪肝的任何报道。

技术实现要素：

为了克服现有技术的不足，本发明目的在于提供鱼藤酮在制备肥胖以及脂肪肝疾病药物中的应用，提供了一种新的治疗候选药物。补充了现有治疗药物的不足。

本发明采用的技术方案如下：

鱼藤酮在制备肥胖以及脂肪肝疾病药物中的应用。

进一步地，所述鱼藤酮的剂量是低剂量。

更进一步地，所述鱼藤酮的剂量是100ppm。

本发明在小鼠高脂喂养动物模型中使用了鱼藤酮，其为一种特异性线粒体复合体-1抑制剂，具有很强的脂溶性，可以直接通过细胞膜进入胞质，特异性地抑制线粒体呼吸链复合物I，从而降低生物体内ATP的水平，减少能量的供应，减轻脂肪细胞的形成以及脂质的转运，进而减轻肥胖以及脂肪肝的形成和进展。

本发明的技术效果：

1、本发明在ApoE缺陷小鼠喂养高脂高胆固醇饲料诱发肥胖以及脂肪肝小鼠模型，应用小剂量(100ppm)鱼藤酮治疗后，发现小鼠体重得到显著减轻，体内皮下脂肪，肾周脂肪，生殖腺脂肪以及肝脏脂肪得到显著减少，显示鱼藤酮是一种治疗脂肪肝及肥胖的有效手段，从而为后期研发相关制备脂肪肝及肥胖疾病药物提供可能。

2、鱼藤酮是一种线粒体活性抑制剂，该研究结果提示，通过适当抑制线粒体活性，从而降低生物体内ATP的水平，减少能量的供应，具有一定的临床应用前景。

3、鱼藤酮,目前主要用作农用杀虫剂，对昆虫有强烈的毒杀作用，高剂量的鱼藤酮对于细胞以及生命个体具有毒副作用，因此我们选择的是一个相对安全的低剂量(100ppm)。

附图说明

图1:对照组/鱼藤酮给药组0～8周内喂养小鼠体重变化曲线图；

图2：对照组/鱼藤酮给药组喂养小鼠皮下脂肪占体重的比例；

图3：对照组/鱼藤酮给药组喂养小鼠肾周脂肪占体重的比例；

图4：对照组/鱼藤酮给药组喂养小鼠生殖腺脂肪占体重的比例；

图5：油红O染色下对照组/鱼藤酮给药组喂养小鼠脂肪肝程度(镜下图)；

图6：HE染色下对照组/鱼藤酮给药组喂养小鼠脂肪肝程度(镜下图)；

图7：对照组/鱼藤酮给药组喂养小鼠肝脏内总甘油三脂的比例。

具体实施方式

以下将结合具体实施例和附图对本发明的技术方案作进一步详细说明。

本发明以下实施例中使用的鱼藤酮购置于Sigma；ApoE敲除小鼠购置于北京大学医学部实验动物中心。

实施例1鱼藤酮可以降低高脂喂养小鼠体重

将高脂高胆固醇饲料喂养的ApoE缺陷小鼠分为对照组和鱼藤酮治疗组，每组7只，治疗组小鼠饲料中添加100ppm的鱼藤酮，连续喂养8周。实验过程中检测小鼠体重，如图1所示鱼藤酮治疗组小鼠的体重从喂养一周时就小于对照组，具有统计学差异。

实施例2鱼藤酮可以降低高脂喂养小鼠皮下脂肪比列

将高脂高胆固醇饲料喂养的ApoE缺陷小鼠分为对照组和鱼藤酮治疗组，每组7只，治疗组小鼠饲料中添加100ppm的鱼藤酮，连续喂养8周。实验结束后取小鼠皮下脂肪，称重，计算出皮下脂肪占体重的比例，统计对照组和鱼藤酮治疗组，如图2结果表明鱼藤酮可以降低高脂喂养小鼠皮下脂肪比列，具有统计学学差异(p<0.0001)。

实施例3鱼藤酮可以降低高脂喂养小鼠肾周脂肪比列

将高脂高胆固醇饲料喂养的ApoE缺陷小鼠分为对照组和鱼藤酮治疗组，每组7只，治疗组小鼠饲料中添加100ppm的鱼藤酮，连续喂养8周。实验结束后取小鼠肾周脂肪，称重，计算出肾周脂肪占体重的比例，统计对照组和鱼藤酮治疗组，如图3结果表明鱼藤酮可以降低高脂喂养小鼠肾周脂肪比列，具有统计学学差异(p＝0.0006)。

实施例4鱼藤酮可以降低高脂喂养小鼠生殖腺脂肪比列

将高脂高胆固醇饲料喂养的ApoE缺陷小鼠分为对照组和鱼藤酮治疗组，每组7只，治疗组小鼠饲料中添加100ppm的鱼藤酮，连续喂养8周。实验结束后取小鼠生殖腺脂肪，称重，计算出生殖腺脂肪占体重的比例，统计对照组和鱼藤酮治疗组，如图4结果表明鱼藤酮可以降低高脂喂养小鼠生殖腺脂肪比列，具有统计学学差异(p<0.0001)。

实施例5鱼藤酮可以降低高脂喂养小鼠脂肪肝程度

将高脂高胆固醇饲料喂养的ApoE缺陷小鼠分为对照组和鱼藤酮治疗组，每组7只，治疗组小鼠饲料中添加100ppm的鱼藤酮，连续喂养8周。实验结束后取小鼠肝脏，冰冻包埋，切片，油红O染色，肝脏中的脂滴会染成红色，如图5结果显示鱼藤酮可以减少小鼠肝脏中脂肪的堆积。

实施例6鱼藤酮可以降低高脂喂养小鼠脂肪肝程度

将高脂高胆固醇饲料喂养的ApoE缺陷小鼠分为对照组和鱼藤酮治疗组，每组7只，治疗组小鼠饲料中添加100ppm的鱼藤酮，连续喂养8周。实验结束后取小鼠肝脏，小鼠肝脏经过多聚甲醛固定后，脱水，石蜡包埋，切片，然后HE染色，肝脏中的脂滴会显示为空泡。，如图6结果显示鱼藤酮可以减少小鼠肝脏中脂肪的堆积。

实施例7鱼藤酮可以降低高脂喂养小鼠肝脏内总甘油三脂

将高脂高胆固醇饲料喂养的ApoE缺陷小鼠分为对照组和鱼藤酮治疗组，每组7只，治疗组小鼠饲料中添加100ppm的鱼藤酮，连续喂养8周。实验结束后取小鼠肝脏，使用试剂盒提取小鼠肝脏中的总甘油三脂，测出浓度，计算出小鼠肝脏中总甘油三脂的含量。如图7结果显示鱼藤酮可以减少高脂喂养小鼠肝脏内总甘油三脂的含量。