本发明涉及一种高孔隙率神经导管材料的制备方法，属于医用材料制备领域。
背景技术：
周围神经损伤是临床常见的致残性疾病，与中枢神经系统相比，周围神经结构较简单，也比较容易再生，随着显微外科设备和技术的发展，周围神经损伤的临床治疗效果不断提高。对缺损间隙较短者，可直接精细缝合或小间隙套管修复；缺损距离较长时，则需采用神经组织移植或神经导管桥接，用导管修复神经缺损的优点：①管径可调节，适应不同直径的神经；②长度可调节，吻合口无张力缝合；③防止周围纤维瘢痕组织侵入，引导轴突定向生长；④利于内源性神经活性分子聚集，同时隔离周围的神经生长抑制分子；⑤避免自体神经、脉管等移植带来的新痛苦和风险；⑥手术操作简化省时。
设计外周神经修复导管，要达到最佳的促进再生效果，需要考虑许多重要因素：首先，管道必须与自然神经的尺寸和机械刚性相匹配，具有良好的生物相容性，异物反应轻微，以及可以被吸收；其次，使用合成材料作为神经导管往往导致种植体周围慢性异物反应，而有天然存在的细胞外基质的生物导管，提供重要的再生信号，利于细胞迁移和神经修复；最后，该材料必须允许足够的营养物运输，提供神经营养因子，内部构造能促进轴突再生。但是现有的神经导管孔隙率较差，且降解速率较慢，无法满足现有治疗中高效快速的治疗目的，所以制备一种孔隙连通率较高，降解速率较快的神经导管很有必要。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题：针对现有神经导管孔隙率较差，且降解速率较慢的问题，提供了一种高孔隙率神经导管材料的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：
（1）按质量比1:50，将干燥银耳与几丁质酶溶液搅拌混合，调节ph至5.0，油浴加热后升温灭酶处理，静置冷却至室温，离心分离收集上层清液，按体积比1:8，将上层清液与正丁醇搅拌混合，冰水浴处理并过滤得滤饼，干燥并碾磨过筛，得银耳提取粉末；
（2）按重量份数计，分别称量5～8份银耳提取粉末、45～50份质量分数10％乙酸溶液、5～10份壳聚糖和45～50份去离子水搅拌混合得混合液，将混合液过滤得滤液并置于喷雾干燥器中，喷雾干燥制备得包覆改性粉末；
（3）按质量比1:15，将脱胶蚕丝与10mol/l溴化锂溶液搅拌混合，水浴加热得蚕丝混合液，透析处理收集截留液得丝素蛋白溶液，按质量比1:8，将明胶添加至丝素蛋白溶液中，搅拌混合并水浴加热得凝胶混合液；
（4）按质量比1:10，将包覆改性粉末与凝胶混合液混合，超声分得分散液，将分散液浇注至模具中，冷冻干燥并紫外灭菌辐照处理，即可制备得一种高孔隙率神经导管材料。
步骤（1）所述的几丁质酶溶液酶活性为25u/ml。
步骤（2）所述的过滤采用的是孔径为0.35μm的微孔滤膜。
步骤（2）所述的喷雾干燥进口温度为110～115℃，出口温度为55～65℃，进料速度为2ml/min，空气流量为350l/h。
步骤（4）所述的冷冻干燥温度为-80～-75℃。
步骤（4）所述的紫外灭菌辐照量为500μw/m2。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明以银耳为原料，通过提取银耳多糖并负载至壳聚糖内部形成微球，再经包覆改性后分散制备神经导管，在包覆外壳壳聚糖材料自我降解被人体吸收后，内部银耳多糖进行释放清除神经导管中游离的自由基，提高抗脂质过氧化作用，同时负载固定至材料表面，修复损伤的神经因子，促进神经细胞再生活性引导神经再生，有效提高神经导管对神经细胞的促再生功能，缩短神经细胞修复时间。
（2）本发明制备的银耳改性微球，表面包覆的壳聚糖经分解后将内部材料释放，使神经导管内部形成均匀连通的孔隙结构，构造与神经组织内部环境相似的结构，有效提高神经细胞的富集和再生，提高材料移至后活性和恢复性能。
具体实施方式
取银耳并置于75～80℃下干燥2～3h得干燥银耳，将干燥银耳碾磨过100目筛，按质量比1:50，将干燥银耳与酶活性为25u/ml的几丁质酶溶液搅拌混合，用冰醋酸调节ph至5.0后，再在40～45℃下油浴加热1～2h，随后升温加热至95～105℃，保温灭酶处理45～60min，待保温灭酶完成后，静置冷却至室温，在6500～7000r/min下离心分离10～15min，收集上层清液，按体积比1:8，将上层清液与正丁醇搅拌混合，在0～5℃下冰水浴处理2～3h，过滤得滤饼，真空冷冻干燥并碾磨过100目筛，得银耳提取粉末；按重量份数计，分别称量5～8份银耳提取粉末、45～50份质量分数10％乙酸溶液、5～10份壳聚糖和45～50份去离子水置于烧杯中，搅拌混合得混合液，将混合液经孔径为0.35μm的微孔滤膜进行过滤处理，得滤液并置于喷雾干燥器中，控制喷雾干燥进口温度为110～115℃，出口温度为55～65℃，进料速度为2ml/min，空气流量为350l/h，经喷雾干燥制备得包覆改性粉末；按质量比1:15，将脱胶蚕丝与10mol/l溴化锂溶液搅拌混合，在45～50℃下水浴加热45～60min后，得蚕丝混合液，随后将蚕丝混合液置于截留分子量为14000的透析袋中透析处理48h，随后收集截留液制备得丝素蛋白溶液；按质量比1:8，将明胶添加至丝素蛋白溶液中，搅拌混合并置于55～60℃下水浴加热1～2h，得凝胶混合液，再按质量比1:10，将包覆改性粉末与凝胶混合液混合，在200～300w下超声分散10～15min，得分散液，随后将分散液浇注至模具中，在-80～-75℃下冷冻干燥20～24h，待冷冻干燥完成后，再在500μw/m2下辐照灭菌处理6～8h后，即可制备得一种高孔隙率神经导管材料。
实例1
取银耳并置于75℃下干燥2h得干燥银耳，将干燥银耳碾磨过100目筛，按质量比1:50，将干燥银耳与酶活性为25u/ml的几丁质酶溶液搅拌混合，用冰醋酸调节ph至5.0后，再在40℃下油浴加热1h，随后升温加热至95℃，保温灭酶处理45min，待保温灭酶完成后，静置冷却至室温，在6500r/min下离心分离10min，收集上层清液，按体积比1:8，将上层清液与正丁醇搅拌混合，在0℃下冰水浴处理2h，过滤得滤饼，真空冷冻干燥并碾磨过100目筛，得银耳提取粉末；按重量份数计，分别称量5份银耳提取粉末、45份质量分数10％乙酸溶液、5份壳聚糖和45份去离子水置于烧杯中，搅拌混合得混合液，将混合液经孔径为0.35μm的微孔滤膜进行过滤处理，得滤液并置于喷雾干燥器中，控制喷雾干燥进口温度为110℃，出口温度为55℃，进料速度为2ml/min，空气流量为350l/h，经喷雾干燥制备得包覆改性粉末；按质量比1:15，将脱胶蚕丝与10mol/l溴化锂溶液搅拌混合，在45℃下水浴加热45min后，得蚕丝混合液，随后将蚕丝混合液置于截留分子量为14000的透析袋中透析处理48h，随后收集截留液制备得丝素蛋白溶液；按质量比1:8，将明胶添加至丝素蛋白溶液中，搅拌混合并置于55℃下水浴加热1h，得凝胶混合液，再按质量比1:10，将包覆改性粉末与凝胶混合液混合，在200w下超声分散10min，得分散液，随后将分散液浇注至模具中，在-80℃下冷冻干燥20h，待冷冻干燥完成后，再在500μw/m2下辐照灭菌处理6h后，即可制备得一种高孔隙率神经导管材料。
实例2
取银耳并置于77℃下干燥3h得干燥银耳，将干燥银耳碾磨过100目筛，按质量比1:50，将干燥银耳与酶活性为25u/ml的几丁质酶溶液搅拌混合，用冰醋酸调节ph至5.0后，再在42℃下油浴加热1h，随后升温加热至97℃，保温灭酶处理52min，待保温灭酶完成后，静置冷却至室温，在6750r/min下离心分离12min，收集上层清液，按体积比1:8，将上层清液与正丁醇搅拌混合，在4℃下冰水浴处理3h，过滤得滤饼，真空冷冻干燥并碾磨过100目筛，得银耳提取粉末；按重量份数计，分别称量6份银耳提取粉末、47份质量分数10％乙酸溶液、8份壳聚糖和47份去离子水置于烧杯中，搅拌混合得混合液，将混合液经孔径为0.35μm的微孔滤膜进行过滤处理，得滤液并置于喷雾干燥器中，控制喷雾干燥进口温度为112℃，出口温度为57℃，进料速度为2ml/min，空气流量为350l/h，经喷雾干燥制备得包覆改性粉末；按质量比1:15，将脱胶蚕丝与10mol/l溴化锂溶液搅拌混合，在47℃下水浴加热47min后，得蚕丝混合液，随后将蚕丝混合液置于截留分子量为14000的透析袋中透析处理48h，随后收集截留液制备得丝素蛋白溶液；按质量比1:8，将明胶添加至丝素蛋白溶液中，搅拌混合并置于57℃下水浴加热2h，得凝胶混合液，再按质量比1:10，将包覆改性粉末与凝胶混合液混合，在250w下超声分散12min，得分散液，随后将分散液浇注至模具中，在-77℃下冷冻干燥22h，待冷冻干燥完成后，再在500μw/m2下辐照灭菌处理7h后，即可制备得一种高孔隙率神经导管材料。
实例3
取银耳并置于80℃下干燥3h得干燥银耳，将干燥银耳碾磨过100目筛，按质量比1:50，将干燥银耳与酶活性为25u/ml的几丁质酶溶液搅拌混合，用冰醋酸调节ph至5.0后，再在45℃下油浴加热2h，随后升温加热至105℃，保温灭酶处理60min，待保温灭酶完成后，静置冷却至室温，在7000r/min下离心分离15min，收集上层清液，按体积比1:8，将上层清液与正丁醇搅拌混合，在5℃下冰水浴处理3h，过滤得滤饼，真空冷冻干燥并碾磨过100目筛，得银耳提取粉末；按重量份数计，分别称量8份银耳提取粉末、50份质量分数10％乙酸溶液、10份壳聚糖和50份去离子水置于烧杯中，搅拌混合得混合液，将混合液经孔径为0.35μm的微孔滤膜进行过滤处理，得滤液并置于喷雾干燥器中，控制喷雾干燥进口温度为115℃，出口温度为65℃，进料速度为2ml/min，空气流量为350l/h，经喷雾干燥制备得包覆改性粉末；按质量比1:15，将脱胶蚕丝与10mol/l溴化锂溶液搅拌混合，在50℃下水浴加热60min后，得蚕丝混合液，随后将蚕丝混合液置于截留分子量为14000的透析袋中透析处理48h，随后收集截留液制备得丝素蛋白溶液；按质量比1:8，将明胶添加至丝素蛋白溶液中，搅拌混合并置于60℃下水浴加热2h，得凝胶混合液，再按质量比1:10，将包覆改性粉末与凝胶混合液混合，在300w下超声分散15min，得分散液，随后将分散液浇注至模具中，在-75℃下冷冻干燥24h，待冷冻干燥完成后，再在500μw/m2下辐照灭菌处理8h后，即可制备得一种高孔隙率神经导管材料。