本发明涉及生物医疗技术领域，具体涉及一种生长激素控释包衣及其制备方法。
背景技术：
人生长激素(hgh)是由人脑下垂体前叶分泌的一种肽类激素，相对分子质量约为22kda。作为一种具有广泛生理功能的生长调节素，hgh能影响几乎所有类型的组织和细胞，主要功能是刺激骨和软骨细胞的生长和分化；促进蛋白质合成，同时减少蛋白的消耗，调理脂和糖的代谢。最初获得的用于临床治疗的生长激素主要从牛垂体中提取。目前广泛用于临床治疗的重组hgh是由生物工程获取，其分子结构与人体内源性hgh完全一致，与天然hgh具有相同的药效学和药代动力学。临床上，hgh有广泛的医学功能，hgh可作为替代疗法用于治疗儿童hgh缺乏性侏儒症，它还具有明显的节氮效应，因而能够广泛用于烧伤、感染及严重创伤，取得良好疗效。hgh也涉及调节骨的生长和新陈代谢，可直接刺激成骨细胞的增殖和分化，激活碱性磷酸酶，增加基质中钙离子浓度，hgh还能促进胰岛素样生长因子的形成进而促进骨折愈合。
虽然人生长激素临床应用广泛，但由于它是蛋白质多肽类药物，瘦体重酶的降解和肾脏的排泄，导致在人体内的半衰期短，在治疗上一般需要长期用药。目前，国内市场能够成熟使用的仅有hgh的针剂，只能采用注射给药的方式。频繁的注射给药容易导致患者的顺应性降低，另外也加重了其经济负担。由于人生长激素剂型和半衰期的局限，影响了它在临床的广泛应用，如何提高生长激素药物和研发方便有效的剂型成为生长激素给药方式研究的重要课题。目前已有不少稳定给药的生长激素制剂相关的中国专利申请，如中国专利《含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂及其制备方法》(专利申请号：cn201310240170.2)、中国专利《一种包载重组人生长激素缓释药物微囊的制法》(专利申请号：cn201410238697.6)、中国专利《含生长激素的缓释组合物及其制备方法》(专利申请号：cn93101680.0)、中国专利《重组人生长激素rhgh长效缓释微囊及其制备方法》(专利申请号：cn201010251521.6)、中国专利《人体生长激素的缓释性微粒制剂及其制造方法》(专利申请号：cn200480013106.x)，这些发明所制备的生长激素制剂都有一定的稳定缓释效果。目前现有的生长激素缓释微囊技术制作微囊采用的原材料组合相对较单一，且结构简单，虽具有一定普适性以及缓释效果，但因缺乏对人体结构以及生化反应规律的针对性，并不能达到显著长效的缓释效果。
技术实现要素：
为了解决上述问题，本发明提供了一种生长激素控释包衣及其制备方法，包括三层结构，分别为最外层超疏水涂层、中间层丝素肽涂层以及最内层生长激素控释微球。本发明旨在提供一种口服给药剂型的制备方法，按照人体消化道的结构以及反应规律有针对性地设置了三层组成成分不同的结构作为生长激素的包衣，科学系统地甄选各结构的组成成分，并采用先进的静电喷涂技术制作包衣，显著提高了生长激素控释包衣的药效稳定性与长效性，有效避免药物突释现象的发生，减少患者的给药次数，增加了生长激素药物临床应用范围，具有广阔的市场前景。
本发明可以通过以下技术方案来实现：
一种生长激素控释包衣，由三层结构组成；分别为最外层超疏水涂层、中间层丝素肽涂层以及最内层生长激素控释微球。
优选地，所述的超疏水涂层结构为颗粒结构，颗粒粒径为50nm-5μm；疏水涂层的厚度为2μm-1mm，涂层表面初始水接触角为150°-175°；超疏水涂层由下述重量份的原材料组成：γ-聚谷氨酸6-9份、聚乳酸-乙醇酸共聚物6-9份、乙醇至100份。
优选地，所述的γ-聚谷氨酸的制备方法为：a.枯草芽孢杆菌的培养：取斜面培养的枯草芽孢杆菌至装有种子培养基的一级种子罐中，接种量为10％，37℃下，200r/min震荡培养8h，取出一级种子罐中种子液体积的1/10接入装有一级种子罐中2倍量种子培养基的二级种子罐中，37℃下，200r/min震荡培养8h；b.枯草芽孢杆菌的发酵培养：取出二级种子罐中种子液体积的1/20接入到装有与二级种子罐中种子培养基等量的发酵培养基，37℃下，200r/min震荡培养72h，得发酵液；c.γ-聚谷氨酸的提取：取发酵液500ml，加入2-5倍体积的乙醇，4℃下静置24h，过滤，取沉淀，用300ml蒸馏水溶解后，对水透析24h，得透析液，调节透析液ph至8.0，加入5-8倍体积的乙醇，4℃下静置24h，过滤，取沉淀，用100ml蒸馏水溶解后，对水透析24h，得透析液2，4℃下冷冻干燥后，得γ-聚谷氨酸。
优选地，所述的种子培养基的配方如下：葡萄糖20g/l、酵母粉5g/l、谷氨酸钠10g/l、，k2hpo4·3h2o2g/l、mgso4·7h2o0.25g/l，使用前将ph调至7.0；所述的发酵培养基的配方如下：蔗糖50g/l、酵母粉27.2g/l、谷氨酸钠76.9g/l、k2hpo4·3h202g/l、mgso4·7h2o0.26g/l、nac15g/l，使用前将ph调至7.5。
优选地，所述的丝素肽涂层厚度为1-2μm，由下述组成成分含量如下：交联剂4-8％、醋酸1-2％、改良丝素肽12-18％、其余为水。
优选地，所述的改良丝素肽的制备方法为：a.丝素肽的提取：①脱胶：取家蚕蚕丝，按料液比1:50添加0.5％na2co3溶液，沸水煮30min，重复2次，得脱胶蚕丝；②溶解：采用三元溶剂体系(氯化钙、水、乙醇)对脱胶蚕丝进行溶解，三者摩尔比为1:8:2，脱胶蚕丝与三元溶剂体系的质量比为1:10，溶解温度为76-80℃，完全溶解后得蚕丝三元溶剂溶解液；③透析：将蚕丝三元溶剂溶解液转移到透析袋中，4℃条件下用蒸馏水透析2-4d，透析结束后，离心分离取上清液，得丝素蛋白水溶液；④酶解：采用alcalase碱性蛋白酶水解丝素蛋白水溶液，水解工艺参数包括：丝素蛋白浓度为4％、水解温度55℃、酶用量为2％、ph值为8.0，水解6h后，得丝素蛋白酶解液；⑤灭酶：将丝素蛋白酶解液加热至90-95℃，保持15分钟，冷却至室温，离心8min，取上清液，得丝素肽溶液；⑥冻干：将丝素肽溶液进行真空冷冻干燥处理，冷冻温度为-25～-30℃，15-20h后冻干结束，得丝素肽粉；b.丝素肽的改良：取聚乙烯醇，加入蒸馏水，85℃下磁力搅拌4h使聚乙烯醇全部溶解得聚乙烯醇饱和溶液；取丝素肽粉，加入蒸馏水，得丝素肽饱和溶液；将聚乙烯醇溶液与丝素肽溶液按溶质质量比85:15共混后，60℃下磁力搅拌1h，加入硅烷偶联剂使其含量为10％，继续搅拌1h，使用恒温鼓风干燥箱，于60℃下烘干6h，得改良丝素肽。
优选地，所述的生长激素控释微球的制备方法为：精密量取生长激素注射液，生长激素注射液与海藻酸钠饱和溶液按体积比1:4混合均匀后装入注射器中，将脉冲电场制备仪的正极与注射器金属锐孔连接，负极与置于ph为5.3凝胶浴20mg/mlcacl2溶液中的金属导电圈连接，脉冲电场装置指示电压380v、脉冲频率120hz、脉宽2ms，脉冲电场下处理min后，得生长激素海藻酸钙微球，将微球滤出，并与0.8％壳聚糖混合，170r/min下震荡15min后，微球表面形成均匀的半透性薄膜，得生长激素-海藻酸钙-壳聚糖微球，将生长激素-海藻酸钙-壳聚糖微球在-75℃超低温冰箱中预冻2h，在真空度为30kpa、温度-45℃下冷冻干燥24h，得生长激素控释微球。
本发明还提供一种生长激素控释包衣的制备方法，包括如下步骤：
(1)固定最内层：将生长激素控释微球固定在静电喷涂收集器接地端前方或者直接作为收集器；
(2)制备超疏水涂层喷涂液：将超疏水涂层的组成原材料共同溶于乙醇溶液中，形成10-20％的超疏水涂层喷涂液；
(3)制备丝素肽涂层喷涂液：将水升温至60-90℃，加入交联剂、醋酸，恒温搅拌2-3h，再加入改良丝素肽恒温搅拌均匀，得蚕丝蛋白涂层液；
(4)将步骤(1)中的生长激素控释微球作为收集板，调节静电喷涂参数，依次喷涂丝素肽涂层喷涂液和超疏水涂层喷涂液，收集具有微结构的均匀高分子颗粒涂层，进行真空干燥，得成品生长激素控制包衣；其中静电喷涂参数设置为：电压5-50kv、喷雾口到收集板距离为5-40cm、流速为0.01-5ml/min，空气湿度为25-45％、温度为15-35℃。
本发明所述各主要功效成分作用机理如下：
超疏水结构具有控制蛋白质吸附、提高血液相容性以及强大的自清洁性的功能特点，能使药物以准确的剂量、方便的给药方式服务患者，有利于提高药物疗效和降低毒副作用。超疏水结构能够辅助实现药物的缓慢释放，它可形成独特的超疏水性网格，其具有的高表面接触角能够有效阻止水的渗透，阻碍药物融入水中，从而达到减缓药物的释放速率的效果。
丝素蛋白是蚕丝的重要组成部分，是一种天然蛋白质聚合物大分子，具有分子链柔顺，生物相容性好，容易成膜，可加工性强，以及易于分子改性的特点，可制备成膜、凝胶、微胶囊等多种形态的材料，同时，丝素蛋白还具有独特的分子结构以及优异的机械机能、良好的吸湿和保温性能和抗微生物性能。丝素肽是丝素蛋白经酶降解或酸水解后得到的低聚肽，不仅能更好地被人体吸收利用，而且水解后得到的丝素肽的其他功效特性也得到提升，如抗氧化性、降血糖活性和抑菌活性以及免疫调节、激素调节、降血压、降血脂等生理调节功能。
聚乙烯醇是一种合成聚合物，具有很好的成膜性，且聚乙烯醇膜具有良好的弹性和强力，除此之外，聚乙烯醇还具有良好的生物相容性、亲水性和可降解性。将丝素肽与聚乙烯醇共混后能够提高聚乙烯醇的形态稳定性，达到良好的尺寸稳定状态。
海藻酸钠与多价阳离子(如钙离子)接触时瞬间凝胶化，从而能够在温和条件下实现对蛋白质药物的包埋，有助于保持蛋白质的生物活性。
壳聚糖具有独特的阳离子特性，可以与海藻酸钠(聚阴离子)通过正、负电荷吸引作用，在海藻酸钠微囊表面复合一层聚电解质半透膜，从而提高微囊的稳定性和载药量，并可调节药物释放速度。
本发明具备以下有益效果：
本发明提供了一种生长激素控释包衣及其制备方法，包括三层结构，分别为最外层超疏水涂层、中间层丝素肽涂层以及最内层生长激素控释微球。本发明旨在提供一种口服给药剂型的制备方法，按照人体消化道的结构以及反应规律有针对性地设置了三层组成成分不同的结构作为生长激素的包衣。其中，最外层超疏水涂层针对口腔至食管部分消化系统的生化环境而设置，利用优越的疏水性能，大大减少自身与环境中液体的接触溶解率，达到维持进入胃部前包衣完整性的目的；中间层丝素肽涂层主要成分为经过聚乙烯醇共混改性的丝素肽，针对胃部至进入小肠前部分消化系统的生化环境而设置，具有较高的拉伸断裂强力与断裂延展率，能够有效阻止消化酶对内层生长激素的消耗作用，提高生长激素进入小肠段的含量，同时具有独特的抗氧化能力，能够通过提高胃功能而达到药物推动效果；最内层生长激素控释微球采用壳聚糖和海藻酸钠复配制作控释微球包裹生长激素，系统调节壳聚糖和海藻酸钠的浓度比，使生长激素控释微球在小肠段达到其最佳吸收利用率，能够长时间稳定血液中生长激素的含量与活性。本发明科学系统地甄选各结构的组成成分，并采用先进的静电喷涂技术制作包衣，显著提高了生长激素控释包衣的药效稳定性与长效性，有效避免药物突释现象的发生，减少患者的给药次数，增加了生长激素药物临床应用范围，具有广阔的市场前景。
附图说明
附图1模拟胃液中生长激素控释包衣体外缓释结果
附图2模拟肠液中生长激素控释包衣体外缓释结果
附图3生长激素控释包衣体内缓释结果
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
一种生长激素控释包衣，由三层结构组成；分别为最外层超疏水涂层、中间层丝素肽涂层以及最内层生长激素控释微球。
所述的超疏水涂层结构为颗粒结构，颗粒粒径为50nm；疏水涂层的厚度为1mm，涂层表面初始水接触角为150°；超疏水涂层由下述重量份的原材料组成：γ-聚谷氨酸6份、聚乳酸-乙醇酸共聚物9份、乙醇至100份。
所述的γ-聚谷氨酸的制备方法为：a.枯草芽孢杆菌的培养：取斜面培养的枯草芽孢杆菌至装有种子培养基的一级种子罐中，接种量为10％，37℃下，200r/min震荡培养8h，取出一级种子罐中种子液体积的1/10接入装有一级种子罐中2倍量种子培养基的二级种子罐中，37℃下，200r/min震荡培养8h；b.枯草芽孢杆菌的发酵培养：取出二级种子罐中种子液体积的1/20接入到装有与二级种子罐中种子培养基等量的发酵培养基，37℃下，200r/min震荡培养72h，得发酵液；c.γ-聚谷氨酸的提取：取发酵液500ml，加入2倍体积的乙醇，4℃下静置24h，过滤，取沉淀，用300ml蒸馏水溶解后，对水透析24h，得透析液，调节透析液ph至8.0，加入8倍体积的乙醇，4℃下静置24h，过滤，取沉淀，用100ml蒸馏水溶解后，对水透析24h，得透析液2，4℃下冷冻干燥后，得γ-聚谷氨酸。
所述的种子培养基的配方如下：葡萄糖20g/l、酵母粉5g/l、谷氨酸钠10g/l、，k2hpo4·3h2o2g/l、mgso4·7h2o0.25g/l，使用前将ph调至7.0；所述的发酵培养基的配方如下：蔗糖50g/l、酵母粉27.2g/l、谷氨酸钠76.9g/l、k2hpo4·3h202g/l、mgso4·7h2o0.26g/l、nac15g/l，使用前将ph调至7.5。
所述的丝素肽涂层厚度为1μm，由下述组成成分含量如下：交联剂8％、醋酸1％、改良丝素肽18％、其余为水。
所述的改良丝素肽的制备方法为：a.丝素肽的提取：①脱胶：取家蚕蚕丝，按料液比1:50添加0.5％na2co3溶液，沸水煮30min，重复2次，得脱胶蚕丝；②溶解：采用三元溶剂体系(氯化钙、水、乙醇)对脱胶蚕丝进行溶解，三者摩尔比为1:8:2，脱胶蚕丝与三元溶剂体系的质量比为1:10，溶解温度为76℃，完全溶解后得蚕丝三元溶剂溶解液；③透析：将蚕丝三元溶剂溶解液转移到透析袋中，4℃条件下用蒸馏水透析4d，透析结束后，离心分离取上清液，得丝素蛋白水溶液；④酶解：采用alcalase碱性蛋白酶水解丝素蛋白水溶液，水解工艺参数包括：丝素蛋白浓度为4％、水解温度55℃、酶用量为2％、ph值为8.0，水解6h后，得丝素蛋白酶解液；⑤灭酶：将丝素蛋白酶解液加热至90℃，保持15分钟，冷却至室温，离心8min，取上清液，得丝素肽溶液；⑥冻干：将丝素肽溶液进行真空冷冻干燥处理，冷冻温度为-30℃，15h后冻干结束，得丝素肽粉；b.丝素肽的改良：取聚乙烯醇，加入蒸馏水，85℃下磁力搅拌4h使聚乙烯醇全部溶解得聚乙烯醇饱和溶液；取丝素肽粉，加入蒸馏水，得丝素肽饱和溶液；将聚乙烯醇溶液与丝素肽溶液按溶质质量比85:15共混后，60℃下磁力搅拌1h，加入硅烷偶联剂使其含量为10％，继续搅拌1h，使用恒温鼓风干燥箱，于60℃下烘干6h，得改良丝素肽。
所述的生长激素控释微球的制备方法为：精密量取生长激素注射液，生长激素注射液与海藻酸钠饱和溶液按体积比1:4混合均匀后装入注射器中，将脉冲电场制备仪的正极与注射器金属锐孔连接，负极与置于ph为5.3凝胶浴20mg/mlcacl2溶液中的金属导电圈连接，脉冲电场装置指示电压380v、脉冲频率120hz、脉宽2ms，脉冲电场下处理min后，得生长激素海藻酸钙微球，将微球滤出，并与0.8％壳聚糖混合，170r/min下震荡15min后，微球表面形成均匀的半透性薄膜，得生长激素-海藻酸钙-壳聚糖微球，将生长激素-海藻酸钙-壳聚糖微球在-75℃超低温冰箱中预冻2h，在真空度为30kpa、温度-45℃下冷冻干燥24h，得生长激素控释微球。
上述一种生长激素控释包衣的制备方法，包括以下步骤：
(1)固定最内层：将生长激素控释微球固定在静电喷涂收集器接地端前方或者直接作为收集器；
(2)制备超疏水涂层喷涂液：将超疏水涂层的组成原材料共同溶于乙醇溶液中，形成10-20％的超疏水涂层喷涂液；
(3)制备丝素肽涂层喷涂液：将水升温至60-90℃，加入交联剂、醋酸，恒温搅拌2-3h，再加入改良丝素肽恒温搅拌均匀，得蚕丝蛋白涂层液；
(4)将步骤(1)中的生长激素控释微球作为收集板，调节静电喷涂参数，依次喷涂丝素肽涂层喷涂液和超疏水涂层喷涂液，收集具有微结构的均匀高分子颗粒涂层，进行真空干燥，得成品生长激素控制包衣；其中静电喷涂参数设置为：电压5-50kv、喷雾口到收集板距离为5-40cm、流速为0.01-5ml/min，空气湿度为25-45％、温度为15-35℃。
实施例2
一种生长激素控释包衣，由三层结构组成；分别为最外层超疏水涂层、中间层丝素肽涂层以及最内层生长激素控释微球。
所述的超疏水涂层结构为颗粒结构，颗粒粒径为5μm；疏水涂层的厚度为2μm，涂层表面初始水接触角为175°；超疏水涂层由下述重量份的原材料组成：γ-聚谷氨酸9份、聚乳酸-乙醇酸共聚物6份、乙醇至100份。
所述的γ-聚谷氨酸的制备方法为：a.枯草芽孢杆菌的培养：取斜面培养的枯草芽孢杆菌至装有种子培养基的一级种子罐中，接种量为10％，37℃下，200r/min震荡培养8h，取出一级种子罐中种子液体积的1/10接入装有一级种子罐中2倍量种子培养基的二级种子罐中，37℃下，200r/min震荡培养8h；b.枯草芽孢杆菌的发酵培养：取出二级种子罐中种子液体积的1/20接入到装有与二级种子罐中种子培养基等量的发酵培养基，37℃下，200r/min震荡培养72h，得发酵液；c.γ-聚谷氨酸的提取：取发酵液500ml，加入5倍体积的乙醇，4℃下静置24h，过滤，取沉淀，用300ml蒸馏水溶解后，对水透析24h，得透析液，调节透析液ph至8.0，加入5倍体积的乙醇，4℃下静置24h，过滤，取沉淀，用100ml蒸馏水溶解后，对水透析24h，得透析液2，4℃下冷冻干燥后，得γ-聚谷氨酸。
所述的种子培养基的配方如下：葡萄糖20g/l、酵母粉5g/l、谷氨酸钠10g/l、，k2hpo4·3h2o2g/l、mgso4·7h2o0.25g/l，使用前将ph调至7.0；所述的发酵培养基的配方如下：蔗糖50g/l、酵母粉27.2g/l、谷氨酸钠76.9g/l、k2hpo4·3h202g/l、mgso4·7h2o0.26g/l、nac15g/l，使用前将ph调至7.5。
所述的丝素肽涂层厚度为2μm，由下述组成成分含量如下：交联剂4％、醋酸2％、改良丝素肽12％、其余为水。
所述的改良丝素肽的制备方法为：a.丝素肽的提取：①脱胶：取家蚕蚕丝，按料液比1:50添加0.5％na2co3溶液，沸水煮30min，重复2次，得脱胶蚕丝；②溶解：采用三元溶剂体系(氯化钙、水、乙醇)对脱胶蚕丝进行溶解，三者摩尔比为1:8:2，脱胶蚕丝与三元溶剂体系的质量比为1:10，溶解温度为80℃，完全溶解后得蚕丝三元溶剂溶解液；③透析：将蚕丝三元溶剂溶解液转移到透析袋中，4℃条件下用蒸馏水透析2d，透析结束后，离心分离取上清液，得丝素蛋白水溶液；④酶解：采用alcalase碱性蛋白酶水解丝素蛋白水溶液，水解工艺参数包括：丝素蛋白浓度为4％、水解温度55℃、酶用量为2％、ph值为8.0，水解6h后，得丝素蛋白酶解液；⑤灭酶：将丝素蛋白酶解液加热至95℃，保持15分钟，冷却至室温，离心8min，取上清液，得丝素肽溶液；⑥冻干：将丝素肽溶液进行真空冷冻干燥处理，冷冻温度为-25℃，20h后冻干结束，得丝素肽粉；b.丝素肽的改良：取聚乙烯醇，加入蒸馏水，85℃下磁力搅拌4h使聚乙烯醇全部溶解得聚乙烯醇饱和溶液；取丝素肽粉，加入蒸馏水，得丝素肽饱和溶液；将聚乙烯醇溶液与丝素肽溶液按溶质质量比85:15共混后，60℃下磁力搅拌1h，加入硅烷偶联剂使其含量为10％，继续搅拌1h，使用恒温鼓风干燥箱，于60℃下烘干6h，得改良丝素肽。
所述的生长激素控释微球的制备方法为：精密量取生长激素注射液，生长激素注射液与海藻酸钠饱和溶液按体积比1:4混合均匀后装入注射器中，将脉冲电场制备仪的正极与注射器金属锐孔连接，负极与置于ph为5.3凝胶浴20mg/mlcacl2溶液中的金属导电圈连接，脉冲电场装置指示电压380v、脉冲频率120hz、脉宽2ms，脉冲电场下处理min后，得生长激素海藻酸钙微球，将微球滤出，并与0.8％壳聚糖混合，170r/min下震荡15min后，微球表面形成均匀的半透性薄膜，得生长激素-海藻酸钙-壳聚糖微球，将生长激素-海藻酸钙-壳聚糖微球在-75℃超低温冰箱中预冻2h，在真空度为30kpa、温度-45℃下冷冻干燥24h，得生长激素控释微球。
实施例3
一种生长激素控释包衣，由三层结构组成；分别为最外层超疏水涂层、中间层丝素肽涂层以及最内层生长激素控释微球。
所述的超疏水涂层结构为颗粒结构，颗粒粒径为2.5μm；疏水涂层的厚度为0.5mm，涂层表面初始水接触角为160°；超疏水涂层由下述重量份的原材料组成：γ-聚谷氨酸7.5份、聚乳酸-乙醇酸共聚物7.5份、乙醇至100份。
所述的γ-聚谷氨酸的制备方法为：a.枯草芽孢杆菌的培养：取斜面培养的枯草芽孢杆菌至装有种子培养基的一级种子罐中，接种量为10％，37℃下，200r/min震荡培养8h，取出一级种子罐中种子液体积的1/10接入装有一级种子罐中2倍量种子培养基的二级种子罐中，37℃下，200r/min震荡培养8h；b.枯草芽孢杆菌的发酵培养：取出二级种子罐中种子液体积的1/20接入到装有与二级种子罐中种子培养基等量的发酵培养基，37℃下，200r/min震荡培养72h，得发酵液；c.γ-聚谷氨酸的提取：取发酵液500ml，加入3.5倍体积的乙醇，4℃下静置24h，过滤，取沉淀，用300ml蒸馏水溶解后，对水透析24h，得透析液，调节透析液ph至8.0，加入6.5倍体积的乙醇，4℃下静置24h，过滤，取沉淀，用100ml蒸馏水溶解后，对水透析24h，得透析液2，4℃下冷冻干燥后，得γ-聚谷氨酸。
所述的种子培养基的配方如下：葡萄糖20g/l、酵母粉5g/l、谷氨酸钠10g/l、，k2hpo4·3h2o2g/l、mgso4·7h2o0.25g/l，使用前将ph调至7.0；所述的发酵培养基的配方如下：蔗糖50g/l、酵母粉27.2g/l、谷氨酸钠76.9g/l、k2hpo4·3h202g/l、mgso4·7h2o0.26g/l、nac15g/l，使用前将ph调至7.5。
所述的丝素肽涂层厚度为1-2μm，由下述组成成分含量如下：交联剂6％、醋酸1.5％、改良丝素肽15％、其余为水。
所述的改良丝素肽的制备方法为：a.丝素肽的提取：①脱胶：取家蚕蚕丝，按料液比1:50添加0.5％na2co3溶液，沸水煮30min，重复2次，得脱胶蚕丝；②溶解：采用三元溶剂体系(氯化钙、水、乙醇)对脱胶蚕丝进行溶解，三者摩尔比为1:8:2，脱胶蚕丝与三元溶剂体系的质量比为1:10，溶解温度为78℃，完全溶解后得蚕丝三元溶剂溶解液；③透析：将蚕丝三元溶剂溶解液转移到透析袋中，4℃条件下用蒸馏水透析3d，透析结束后，离心分离取上清液，得丝素蛋白水溶液；④酶解：采用alcalase碱性蛋白酶水解丝素蛋白水溶液，水解工艺参数包括：丝素蛋白浓度为4％、水解温度55℃、酶用量为2％、ph值为8.0，水解6h后，得丝素蛋白酶解液；⑤灭酶：将丝素蛋白酶解液加热至92.5℃，保持15分钟，冷却至室温，离心8min，取上清液，得丝素肽溶液；⑥冻干：将丝素肽溶液进行真空冷冻干燥处理，冷冻温度为-27.5℃，17.5h后冻干结束，得丝素肽粉；b.丝素肽的改良：取聚乙烯醇，加入蒸馏水，85℃下磁力搅拌4h使聚乙烯醇全部溶解得聚乙烯醇饱和溶液；取丝素肽粉，加入蒸馏水，得丝素肽饱和溶液；将聚乙烯醇溶液与丝素肽溶液按溶质质量比85:15共混后，60℃下磁力搅拌1h，加入硅烷偶联剂使其含量为10％，继续搅拌1h，使用恒温鼓风干燥箱，于60℃下烘干6h，得改良丝素肽。
所述的生长激素控释微球的制备方法为：精密量取生长激素注射液，生长激素注射液与海藻酸钠饱和溶液按体积比1:4混合均匀后装入注射器中，将脉冲电场制备仪的正极与注射器金属锐孔连接，负极与置于ph为5.3凝胶浴20mg/mlcacl2溶液中的金属导电圈连接，脉冲电场装置指示电压380v、脉冲频率120hz、脉宽2ms，脉冲电场下处理min后，得生长激素海藻酸钙微球，将微球滤出，并与0.8％壳聚糖混合，170r/min下震荡15min后，微球表面形成均匀的半透性薄膜，得生长激素-海藻酸钙-壳聚糖微球，将生长激素-海藻酸钙-壳聚糖微球在-75℃超低温冰箱中预冻2h，在真空度为30kpa、温度-45℃下冷冻干燥24h，得生长激素控释微球。
对比例1
与实施例1的区别在于，生长激素控释包衣的结构只有两层，具体为外层丝素肽涂层和内层生长激素控释微球。
对比例2
与实施例1的区别在于，生长激素控释包衣的结构只有两层，具体为外层超疏水涂层和内层生长激素控释微球。
对比例3
与实施例1的区别在于，生长激素控释包衣结构中的生长激素控释微球由生长激素替代。
功效验证
试验例
试验1生长激素体外释放试验
人工模拟胃液的配置：取9ml的浓盐酸，加800ml蒸馏水，10g胃蛋白酶，ph值为1.2，混匀后备用；人工模拟肠液的配置：用磷酸盐配置ph值6.8的缓冲液。利用药物溶出度测定仪对按照实施例1-3、对比例1-3技术方案制得的生长激素控释包衣进行人工模拟胃、肠液中的释放试验。控制转速为100r/min，温度为36.5-37.5℃，将各组生长激素控释包衣等量放入250ml圆底烧瓶中，加入人工模拟胃、肠液，定时取样5ml，测定生长激素累积释放百分率。测定结果如附图1、附图2所示。
如附图1所示，本发明所制备具有三层结构的生长激素缓释包衣在人工模拟胃液中12h内生长激素几乎不被释放，大大减少生长激素在首关效应下被消耗的量，显著提高生长激素在小肠段中的利用率。如附图2所示，本发明所制备的具有三层结构的生长激素缓释包衣在人工模拟肠液中生长激素的释放能够维持长达12h以上，具有显著的缓释效果，提高了生长激素口服剂型应用的广泛性。
试验2生长激素体内缓释试验
取体重为1.2-1.6kg的新西兰大白兔60只进行试验，分成6组，每组白兔分别灌喂实施例1-3、对比例1-3技术方案制得的生长激素缓释包衣，给药量为1.5u/kg。给药前及给药后不同时间从白兔耳缘静脉取血0.5ml，在4℃下放置1h后5000r/min离心2min收集血清，检测生长激素含量。检测结果如附图3所示。
如附图3所示，本发明所制备具有三层结构的生长激素缓释包衣能够有效控制生长激素的释放水平，达到显著的缓释效果，缓释时间长达12h以上。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。