脂肪性肝病及其相关疾病的预防和治疗性药物的制作方法

本发明涉及脂肪性肝病及其相关疾病的预防和治疗性药物。特别的，本发明涉及化合物ys000002以及与其结构相似度在80%以上化合物在制备预防和治疗脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纤维化或肝硬化中的用途。

背景技术：

脂肪肝是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变，是一种常见的肝脏病理改变，即肝脏的脂肪性改变。脂肪性肝病正严重威胁国人的健康，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，发病率在不断升高，且发病年龄日趋年轻化，是二十一世纪肝病领域面临的新挑战。

目前美国fda未批准任何一款非酒精性脂肪性肝病的药物，已有的三期临床的药物奥贝胆酸毒副作用很大，已造成严重的肝损伤，fda对此采取更为审慎的态度。而中国病人用上该药则更遥遥无期。因此，在我国开发安全、有效的脂肪性肝病相关疾病的药物迫在眉睫。

正常人肝组织中含有少量的脂肪，如磷脂、甘油三酯、糖脂和胆固醇等，其重量约为肝重量的3%～5%，如果肝内脂肪蓄积太多，超过肝重量的5%或在组织学上肝细胞30%以上有脂肪变性时，就可称为脂肪肝。一般而言，脂肪肝属可逆性疾病。因此，抗脂肪肝治疗可以及早阻止脂肪肝的进一步恶化甚至改善脂肪肝的病理特征，进而能防止脂肪肝的发生，故一直受到高度重视。

肝纤维化是一个病理生理过程，是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生。任何肝脏损伤在肝脏修复愈合的过程中都有肝纤维化的过程，如果损伤因素长期不能去除，纤维化的过程长期持续就会发展成肝硬化。肝纤维化的病因有很多，在临床上多见有病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝、自身免疫性疾病等。抗肝纤维化的治疗主要包括：针对原发病去除致病因素，如抗乙型肝炎、丙型肝炎病毒治疗，抗血吸虫治疗，戒酒等。针对肝纤维化本身的治疗，如通过抑制炎症或脂质过氧化，或者抑制肝星状细胞的增生活化，以及促进胶原降解等。

肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。引起肝硬化的病因分为病毒性肝炎肝硬化、酒精性肝硬化、代谢性肝硬化、胆汁淤积性肝硬化、肝静脉回流受阻性肝硬化、自身免疫性肝硬化、毒物和药物性肝硬化、营养不良性肝硬化、隐源性肝硬化等。病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔形成，导致肝小叶结构破坏和假小叶形成，肝脏逐渐变形、变硬而发展为肝硬化。早期由于肝脏代偿功能较强可无明显症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症。肝硬化除了进行肝移植之外，目前尚无根治药物，主要在于早期发现和阻止病程进展。

ys000002为凝血酶受体par-1拮抗剂，已上市用于心血管疾病的治疗。但是尚未发现该分子或其结构类似物对脂肪性肝脏疾病有预防或逆转作用。且par-1在脂肪性肝病中的作用并不明确，也没有证据表明抑制par-1的活性或功能，一定能够缓解或逆转脂肪性肝病。

技术实现要素：

本发明的ys000002的分子式为c29h33fn2o4。

本发明要解决的技术问题是提供一种预防和治疗脂肪性肝病，例如脂肪肝、肝纤维化或肝硬化的药物。发明人出人意料地发现化合物ys000002或者与其结构相似性在80%以上的化合物能够明显地缓解脂肪性肝病、脂肪性肝炎、肝纤维化的症状，进而预防肝硬化的发生。因此，将ys000002或其结构类似物作为主要活性成分的药物或药物组合是预防和治疗脂肪性肝病、肝纤维化或肝硬化的理想药物。本化合物具有以下分子结构：

需要强调的是，本发明中化合物结构相似性的衡量方法包括，但不限于如下：采用二维结构分子指纹的tanimoto相似性指数来计算化合物的相似性。

本发明的一个目的是提供ys000002或与其结构相似度在80%以上分子，例如喜巴辛（himbacine）类似物)、其可药用的异构体、盐、溶剂合物、多晶型物、或其中间体化合物在制备预防或治疗脂肪性肝病其相关的疾病的药物中的用途。其中所述脂肪性肝病选自脂肪肝、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化或肝硬化等。

本发明的化合物具有不对称性碳原子。本发明的化合物的碳碳键可使用实线（）、实心楔（）或点楔（)表示。使用实线表示与不对称性碳原子成键相连的包括该碳原子的所有可能的立体异构物（即特定的镜像异构物、消旋混合物等）。使用实心楔或点楔表示与不对称性碳原子成键相连的仅包括所显示的立体异构物。ys000002含有超过1个不对称性碳原子。对于这些化合物中，使用实线表示与不对称性碳原子成键相连的包括所有可能的立体异构物。例如，除非另有指明，ys000002化合物可以镜像异构物和非镜像异构物或消旋物及其他的混合物存在。在ys000002化合物中使用实线表示与1或多个不对称性碳原子连结且在相同化合物中使用实心楔或点楔表示与其他不对称性碳原子成键相连的存在非镜像异构物的混合物。

本文使用的“ys000002”随后可被称为“本发明的化合物”、“本发明”及“ys000002化合物”。定义这些化合物包括该ys000002化合物的所有型式，其包括它的水合物、溶剂化物、异构物、结晶和非结晶型式、类质同形体、多形体、互变异构物及代谢物。例如，本发明的化合物或它的可药用的盐可以非溶剂化和溶剂化的形式存在。当与溶剂或水紧密连结时，复合物将具有与湿度无关的充分界定的化学计量。然而，当与溶剂或水以弱键连结时，如通道溶剂化物和吸湿性化合物，该水/溶剂含量将取决于湿度和干燥条件。在此等情况下，非化学计量将成为基准。

ys000002的立体异构物包括本发明的化合物的顺式和反式异构物、光学异构物（诸如r和s镜像异构物）、非镜像异构物、几何异构物、旋转异构物、构形异构物及互变异构物，包括存有超过1种异构型态的化合物及其他的混合物（诸如消旋物和非镜像异构物对）。亦包括酸加成盐或碱加成盐，其中抗衡离子具光学活性，例如d-乳酸盐或l-离胺酸、或消旋体，例如dl-酒石酸盐或dl-精胺酸。

本发明药物中所包含的化合物ys000002可以是化合物本身，也可以是其药用衍生物，例如药物上可接受的盐或酯等形式。

用于治疗用途的本发明的化合物的可药用盐包括本发明的化合物的常规的无毒性盐，如由有机或无机酸形成的那些。作为示例，可以提及来源于无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸的盐，和来源于有机酸如乙酸、三氟乙酸、丙酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、甲苯磺酸、甲磺酸、硬脂酸、乳酸的盐。

本发明提供了化合物ys000002或与其结构相似度在80%以上分子在制备预防或治疗脂肪性肝病、肝纤维化或肝硬化的药物中的应用。特别的，本发明所述药物中作为有效成分的化合物ys000002或其结构相似度在80%以上的化合物的质量体积比为0.1%到99%，药物中包含的药学上可接受的载体的质量体积比为0.1%到99%。

本发明的化合物ys000002或与其结构相似度在80%以上分子还可与一种或多种糖尿病或脂肪性肝病治疗药物联合以制备预防或治疗脂肪性肝脏疾病的药物组合物。无论是固定剂量还是非固定剂量均可。所述的糖尿病或脂肪性肝病治疗药物，包括但不限于pioglitazone,维生素e,obeticholicacid,elafibranor,aramchol,emricasan,或simtuzumab中的一种或多种。各种活性成分之间的配比可调。

本发明所制备的药物或药物组合物的剂型是药剂学上可接受的任何剂型。包括但不限于片剂（包括分散片、肠溶片、咀嚼片、口腔崩解片、泡腾片等）、硬胶囊剂（包括肠溶胶囊）、软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸剂、滴丸剂、干混悬剂、口服溶液剂、干糖浆剂、散剂、口服混悬液、以及口服的速释或缓释或控释等剂型，注射剂（包括注射用粉针剂（包括注射用无菌灌装粉末、冻干粉针剂）、水溶液注射剂）、软膏剂、凝胶剂、乳液剂、乳胶剂、贴剂、栓剂等等。

在本发明中，术语“可药用的”（或“药学上可接受的”）是指分子实体和组合物，当施用至人时，其不产生任何不利的、过敏的作用或其他不良反应。

本发明的药物或药物组合物可以经口服途径施用，也可以经静脉、肌肉、皮肉或皮下注射，静脉滴注，腹腔给药，胸腔给药，吸入，滴眼，滴鼻途径给药。

本发明提供了化合物ys000002或与其结构相似性在80%以上的化合物以治疗有效量施用于对象，以预防或治疗脂肪性肝脏疾病的用途。

本发明的“对象”、“患者”或“个体”指温血动物，可以是啮齿动物（例如豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠）、哺乳动物，例如兔类动物（例如兔）、犬科动物（例如狗）、猫科动物（例如猫）、马科动物（例如马）、猪类（例如猪）、羊类（例如羊）、牛类（例如奶牛）、灵长类动物、猿猴（例如猴子或者猿）、猴类（例如狨猴、狒狒）、猿类（例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿）或者人类。

“治疗有效量”表示本发明的化合物的用量，该用量（1)治疗或预防特定的疾病、症状或失调、（2)减轻、缓和或除去该特定的疾病、症状或失调的一或多个征候、或（3）预防或迟延该特定的疾病、症状或失调的一或多个征候的开始。

除非另有指明，本文使用的“治疗”表示逆转、缓和、抑制施予该治疗的疾病或症状或它的一或多个征候的进展、迟延该疾病或症状或它的一或多个征候的进展、迟延该疾病或症状或它的一或多个征候的开始或预防该疾病或症状或它的一或多个征候。除非另有指明，本文使用的“治疗”系指上述治疗的处置作用。该“治疗”亦包括对个体的前置和非前置处理。为避免疑义，本文使用的“治疗”包括治疗性、舒缓性及预防治疗性处置及投予药物以进行该治疗。进一步，本发明所述的“治疗”，主要指减轻脂肪肝、肝纤维化或肝硬化的程度；或者治愈脂肪肝、肝纤维化或肝硬化使之正常化；或者减缓脂肪肝、肝纤维化或肝硬化的进程。

本发明所述的“预防”，主要指在可能的脂肪肝、肝纤维化或肝硬化风险因素的存在下，使用后防止或降低脂肪肝、肝纤维化或肝硬化的产生。

可以根据多种参数，例如体重、病状等调整治疗剂量，所述施用剂量例如约1mg到10mg每天，一天两次到一天一次到数天一次。

“约”是相对用语，其表示近似名义值的±10%(于一实施范例中±5%且于另一实施例中±2%)。对本揭露而言，除非特别记载该值需要较严格范围，近似程度为大约的。

本发明所述的脂肪性肝病指的是：脂肪肝、肝细胞脂肪变性、脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、非酒精性脂肪性肝炎导致的肝纤维化、肝硬化等。疾病改善的指标主要通过组织切片来考察并分析，具体包括、但不限于以下主要方面：抗脂肪变性、细胞肥大、细胞凋亡、炎症水平和纤维化水平。脂肪性肝病严重程度打分体系（简称nas）包含三部分：脂肪变性（steatosis），小叶炎症程度（lobularinflammation）和肝细胞肥大（hepatocyteballooning）。

本发明的优点和有益效果：

目前美国fda未批准任何一款非酒精性脂肪性肝病的药物，已有的三期临床的药物奥贝胆酸毒副作用很大，已造成严重的肝损伤，fda对此采取更为审慎的态度。而中国病人用上该药则更遥遥无期。因此，在我国开发安全、有效的脂肪性肝病相关疾病的药物迫在眉睫。

本发明提供了一种新的治疗或预防脂肪性肝病的药物——化合物ys000002（已上市心血管药物的原药分子、商品名zontivity）或与其结构相似性在80%以上的化合物。该药物治疗脂肪性肝病，疗效好，起效快，病症改善显著，毒副作用低。由于是老药，可以以较快速度上市，迅速帮助中国广大脂肪性肝病的病人摆脱病痛，具有广泛的应用前景和良好的社会、经济效益。

除非本文另有特别说明，本发明使用的科学和技术用语具有熟悉此技术的一般人士所能普遍了解的意义。除非本文另有明确说明，本说明书和附件中所使用的单一词“一”和“该/此”包括复数意义。

【附图说明】

图1.脂肪性肝病严重程度的分值在三组动物中的差异（ys000002实验）

图2.三组之间纤维化面积百分率差异（ys000002实验）

图3.三组之间相对纤维化面积变化（ys000002实验）

图4.三组实验之间纤维化面积百分率差异（ys000005实验）

【具体实施方式】

通过参阅下述实施例可以更容易地了解本发明的内容，这些实施例只是为进一步说明本发明，并不意味着限定本发明的范围。

实施例1：化合物ys000002对脂肪肝、肝纤维化或肝硬化小鼠的治疗或预防作用

1.实验材料

mcd模型鼠。健康成年小鼠雌雄各半；ys000002分子溶解于水；对照组为水。

2.实验方法

2.1脂肪肝严重程度打分体系的建立

国际上人和动物通用的脂肪性肝病严重程度打分体系（简称nas）包含三部分：脂肪变性（steatosis），小叶炎症程度（lobularinflammation）和肝细胞肥大（hepatocyteballooning）。而本实施例则通过对比用药组和对照组之间在肝脏组织切片成像后所统计出的脂肪性肝病严重程度分值，来确定治疗效果的显著性（kleinerde.etal.,2005）。

2.2mcd模型的建立

根据参考文献（rinellam.etal.,2008）采用甲硫氨酸和胆碱缺乏性饮食（methionineandcholinedeficientdiet,mcd）饲喂小鼠，从饲喂开始，肝细胞发生脂肪变性、肥大、并出现凋亡；第6周开始纤维化、产生炎症；第12周开始发生严重的纤维化，并出现肝硬化；实验进行至第18周结束。需要声明的是，mcd模型被国际主流学术杂志公认为可以模拟人类脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纤维化和肝硬化的疾病进程。

本发明用以下动物实验来表明ys000002对脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纤维化的治疗或预防作用：

i抗脂肪变性、细胞肥大和细胞凋亡的实验，用以代表分子对于脂肪肝和脂肪性肝炎的治疗效果：从mcd饮食饲喂第三周开始口服给药，持续五周；分两个剂量组(5mg/kg,口服和10mg/kg,口服)以及一个对照组，各20只鼠。五周结束后，将动物处死，迅速采取肝脏切片进行nas打分分析。

ii对纤维化和炎症的阻断实验：从mcd饮食饲喂第八周开始给药，持续五周；分两个剂量组(5mg/kg,po和10mg/kg,po)以及一个对照组。每组20只鼠。五周结束后将动物处死，迅速采取肝脏切片进行纤维化面积百分比分析；

3.实验结果

3.1动物实验i--ys000002对脂肪肝、脂肪性肝炎的治疗或预防效果

经过ys000002处理的两个剂量组均显示出相比于对照组显著降低的nas分值（图1，p<0.0001,统计方法one-wayanova,tuckeys多重比较事后分析）。如前所述，nas反映脂肪性肝病严重程度，在纤维化发生前服用ys000002可以显著缓解脂肪肝、脂肪性肝病的严重程度。

3.2动物实验ii--ys000002对肝纤维化的治疗或预防效果

经过ys000002处理的两个剂量组均显示出相比于对照组显著降低的肝纤维化面积百分比（图2，p<0.01，统计方法one-wayanova,tuckeys多重比较事后分析）。如果将对照组的纤维化面积作为100，计算两个处理组的相对纤维化面积，可以发现，5mg/kg组和10mg/kg组的纤维化面积百分率分别得到了约22%，38%的缓解（图3）。表明纤维化发生后服用ys000002可以显著缓解纤维化的严重程度进而阻止病程向肝硬化发展。

进一步，该治疗效应呈现剂量-疗效相关性——高剂量组的效果要好于低剂量组，这更加证明该药效不太可能来自于其他干扰因素，而是来自于ys000002。

实施例2：喜巴辛衍生化合物ys000005对脂肪肝、肝纤维化或肝硬化小鼠的治疗或预防作用

1.实验材料

选取二维结构分子指纹和ys000002的tanimoto相似性在80%以上的分子（ys000005）为研究对象。该分子为喜巴辛衍生物，pubchem登录号cid9804049。同样采用mcd模型鼠。健康成年小鼠雌雄各半；ys000005分子溶解于水；对照组为水。

2.实验方法

mcd模型的建立方法参见实施例1。

本发明用以下对纤维化和炎症的阻断动物实验来表明ys000005对肝纤维化的治疗或预防作用：

从mcd饮食饲喂第二周开始给药，持续五周；分两个剂量组(5mg/kg,po和10mg/kg,po)以及一个对照组。每组20只鼠。五周结束后将动物处死，迅速采取肝脏切片进行纤维化面积百分比分析；

3.实验结果

ys000005对肝纤维化的治疗或预防效果。

经过ys000005处理的两个剂量组均显示出相比于对照组显著降低的肝纤维化面积百分比（图4，p<0.01，统计方法one-wayanova,tuckeys多重比较事后分析）。表明纤维化发生后服用ys000005可以显著缓解纤维化的严重程度进而阻止病程向肝硬化发展。

进一步，该治疗效应呈现剂量-疗效相关性——高剂量组的效果要好于低剂量组，这更加证明该药效不太可能来自于其他干扰因素，而是来自于ys000005。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求限定。

【参考文献】

kleinerde.etal.,designandvalidationofahistologicalscoringsystemfornonalcoholicfattyliverdisease.hepatology,2005;41:1313

rinellame.etal.,mechanismsofhepaticsteatosisinmicefedalipogenicmethioninecholine-deficientdiet.journaloflipidresearch,2008;49:1068。