本发明涉及脂质体领域，特别地涉及一种光刺激-响应脂质体，一种包含所述光刺激-响应脂质体的药物组合物，以及所述光刺激-响应脂质体和药物组合物用于制备抗肿瘤药物的用途。
背景技术：
恶性肿瘤的治疗一直是世界性的难题，随着对肿瘤认识的深入和诊疗技术的不断提高，人类在肿瘤诊疗方面取得了极大的进步。就目前而言，化疗仍然是肿瘤治疗的主要手段，但化疗存在物理化学稳定性差、体内半衰期短以及对健康组织的毒副作用大等问题。
人们研究发现，应用各种纳米药物递释系统，如脂质体、聚合物胶束、聚合物纳米粒、药物-聚合物共轭物等包载药物，可以改变药物在体内的动力学特性，提高药物在肿瘤部位的聚集浓度，延长其滞留时间，从而提高药物疗效，降低毒副作用。
脂质体是一种由排列有序的脂质双分子层(脂质膜)组成的微小膜状结构，大小可为几十到几百纳米。药物既可包裹在磷脂膜中亦可填包在所成的囊泡内。脂质体包载抗肿瘤药物的药物递送系统，虽可以在一定程度上弥补化疗的不足，但目前传统脂质体治疗肿瘤面临的主要问题是脂质体在体内对肿瘤的靶向性差，药物释放控制不够精准。
针对这一现象，研究者利用肿瘤部位特定环境(如ph、酶、离子等)，或利用对肿瘤部位施加的物理信号(如光照、超声、加热等)来设计对肿瘤部位靶向药物递释系统。对于依赖体内因素刺激响应的控释方式而言，基于肿瘤部位特定环境触发递释系统释放药物的方式很大程度上依赖于体内因素，而这些因素存在的个体差异较大，导致触发的可靠性不高。对于依赖体外刺激响应的控释方式而言，物理信号触发的方式对体内环境因素依赖少，而且还可以监控物理刺激信号的强度和部位，可控性更高，在临床上的实用性更高。
在众多物理信号中，激光是一种理想的体外触发手段，它可以非常精确地定位在靶区，使用方便，激发迅速且受干扰较少。近年来，基于激光照射和光敏剂的光动力治疗技术(pdt)已经在临床上得到广泛应用(1976年美国首例，1981年中国首例)。它的原理是通过特定波长的激光激活光敏剂(如二氢卟吩e6等)，启动光化学反应，产生单态氧(1o2)。1o2是强有力的氧化剂，但其寿命非常短暂(小于0.1μs)，扩散范围极短，只有非常接近光敏剂所在的物质才能受到1o2的作用。当光敏剂聚集在肿瘤部位后，通过对肿瘤部位光照，激发光敏剂产生1o2，1o2破坏肿瘤细胞膜结构的完整性，从而对肿瘤细胞产生杀伤作用。大量pdt临床实践表明诸如二氢卟吩e6等光敏剂对非光照区的光毒性极小，可以在人体安全使用。在临床上，pdt除了可以对浅表处的病灶进行治疗外，医生还可以通过穿刺针、内窥镜、超声或ct等影像和介入设备引入光纤，对患者体内深处病灶进行激光照射。pdt技术的日渐成熟为开展光触发纳米药物递释系统的研究提供了基础。
参考文献1中公开了一种光响应脂质体及其制备方法和应用，其使用能够对紫外光进行响应的含季铵盐基团的偶氮苯衍生物来实现该光响应脂质体内部药物的可控释放。但是参考文献1中的制备方法中含季铵盐基团的偶氮苯衍生物的制备过程繁复，生产成本较大。另外，参考文献1中由于含季铵盐基团的偶氮苯衍生物在光照时发生反式-顺式异构，对磷脂膜造成扰动，并在磷脂双分子层中形成可释放药物的通道，虽然对药物释放的可控取得了良好的效果，但是对其释放量仍有需要改进的余地。
基于以上背景，本发明提出基于光动力原理，以光敏剂作为光动力触发基团，构建光刺激-响应脂质体设计思路。本发明通过对肿瘤部位施加光刺激，触发了光刺激-响应脂质体中的光动力控制基团——光敏剂发生光动力反应，产生1o2，进而导致脂质体的脂质膜解体，将包裹在脂质体中的药物在肿瘤部位快速释放出来，提高了肿瘤部位药物浓度，进而增强药物的抗肿瘤效果。
参考文献1：cn106822895a
技术实现要素：
发明要解决的问题
本发明的主要目的是针对提高药物的靶向性和有效性，降低药物的毒副作用这一临床需求，提供一种制备方法简便、易于工业化生产的光刺激-响应脂质体，以及包含所述光刺激-响应脂质体的药物组合物，以及所述光刺激-响应脂质体和药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
用于解决问题的方案
本发明人在长时间的研究中发现，当在脂质体的脂质膜中加入一定量的光敏剂，再通过一定条件的光刺激后，脂质膜中的光敏剂会发生光动力反应，产生1o2，导致脂质膜解体，进而将包裹在脂质体中的药物快速释放出来。本发明基于上述发现而得以完成。
本发明的一个方面涉及一种光刺激-响应脂质体，其包含至少一种脂质和至少一种光敏剂，其特征在于其对光波具有敏感性，能够在光波的作用下解体并释放所包载的内容物。具体地，所述光敏剂能够在光波如激光触发下发生光动力反应产生1o2，进而导致该光刺激-响应脂质体解体，释放所包载的内容物。
根据以上所述的光刺激-响应脂质体，所述光敏剂选自亚甲基蓝及类似物、核黄素及其衍生物、叶绿素a和b、视黄素、卟啉类化合物、血卟啉类化合物、镓卟啉类化合物和各种嘌呤化合物，或它们的混合物；优选地，所述光敏剂为亚甲基蓝及类似物。
根据以上所述的光刺激-响应脂质体，所述亚甲基蓝类化合物为下式的化合物：
其中，r1为h、或者c1～c6饱和或不饱和烃基，优选地，r1为h、ch3、ch2-ch3或ch＝ch2；
r2为h、或者c1～c6饱和或不饱和烃基，优选地，r2为h、ch3、ch2-ch3或ch＝ch2；
r3为h、或者c1～c6烷基，优选地，r3为h、ch3、ch2-ch3；
r4为h、或者c1～c6烷基，优选地，r4为h、ch3、ch2-ch3；
r5为h、或者c1～c6烷基，优选地，r5为h、ch3、ch2-ch3或ch2-ch2-ch3；
r6为h、或者c1～c6烷基，优选地，r6为h、ch3、ch2-ch3或ch2-ch2-ch3；
优选地，所述亚甲基蓝类化合物为7-(乙基(甲基)氨基)-3-(乙基氨基)-2-甲苯胺蓝，如下式所示：
根据以上所述的光刺激-响应脂质体，所述脂质选自磷脂、糖脂、脂肪酸、二烷基二甲基铵两性分子、聚甘油烷基醚、聚氧乙烯烷基醚或其组合；优选地，所述脂质选自二棕榈酰磷脂酰胆碱、联乙炔基甘油磷脂酰胆碱、蛋黄卵磷脂、胆固醇或其组合。
根据以上所述的光刺激-响应脂质体，所述光波选自各种可以导致光敏剂产生单态氧1o2的光波，优选600-1100nm光波。
根据以上所述的光刺激-响应脂质体，所述光刺激-响应脂质体进一步包含至少一种具有长循环特性的材料，优选聚乙二醇化的磷脂、神经节苷脂、非离子型表面活性剂或聚合物，更优选不同分子量聚乙二醇修饰的磷脂酰乙醇胺类磷脂、神经节苷脂、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、吐温、泊洛沙姆，特别优选二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000。
根据以上所述的光刺激-响应脂质体，所述光刺激-响应脂质体进一步包含至少一种脂溶性活性剂和/或水溶性活性剂，优选脂溶性和/或水溶性抗癌剂，更优选顺铂、卡铂、奈达铂、阿霉素或紫杉醇。
根据以上所述的光刺激-响应脂质体，所述的脂质、光敏剂、具有长循环特性的材料的重量比为50-90:0.5-12:3-18。
根据以上所述的光刺激-响应脂质体，所述的脂质、光敏剂和具有长循环特性的材料的总重量与脂溶性活性剂和/或水溶性活性剂的重量比为10-135:1-15。
根据以上所述的光刺激-响应脂质体，所述光刺激-响应脂质体为颗粒状，其粒径为60～300nm；优选地，其粒径为60～250nm；优选地，其粒径为80～200nm；优选地，其粒径为100～200nm；优选地，其粒径为100～150nm。
此外，本发明还提供了一种药物组合物，其包含根据以上所述的光刺激-响应脂质体和药学上可接受的载体。
进一步，本发明还提供了根据以上所述的光刺激-响应脂质体或根据以上所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
发明的效果
本发明的光刺激-响应脂质体能够提高药物的靶向性和有效性，降低药物的毒副作用这一临床需求，提供一种制备方法简便、易于工业化生产的光刺激-响应脂质体。
本发明中的光刺激-响应脂质体能够提高药物的包封率，能够给肿瘤部位提供适宜的药物浓度，促进了对肿瘤细胞的杀伤作用。
相对于现有技术中，当在脂质体的脂质膜中加入一定量的光敏剂，再通过一定条件的光刺激后，脂质膜中的光敏剂会发生光动力反应，产生1o2，导致脂质膜解体，进而将包裹在脂质体中的药物在肿瘤部位快速释放出来，提高了肿瘤部位药物浓度，进而增强药物的抗肿瘤效果，使得抗肿瘤药物的靶向性和有效性得以大幅提高。
具体实施方式
本发明的主要目的是针对提高药物的靶向性和有效性，降低药物的毒副作用这一临床需求，提供一种制备方法简便、易于工业化生产的光刺激-响应脂质体，以及包含所述光刺激-响应脂质体的药物组合物，以及所述光刺激-响应脂质体和药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
本发明人在长时间的研究中发现，当在脂质体的脂质膜中加入一定量的光敏剂，再通过一定条件的光刺激后，脂质膜中的光敏剂会发生光动力反应，产生1o2，导致脂质膜解体，进而将包裹在脂质体中的药物快速释放出来。本发明基于上述发现而得以完成。
本发明的一个方面涉及一种光刺激-响应脂质体，其特征在于其包含至少一种脂质和至少一种光敏剂，其特征在于其对光波具有敏感性，能够在光波的作用下解体并释放所包载的内容物。具体地，所述脂质和光敏剂形成了可携带药物的脂质膜。所述光敏剂能够在光波如激光触发下发生光动力反应产生1o2，进而导致该光刺激-响应脂质体解体，释放所包载的内容物。
所述光刺激-响应脂质体进一步包含至少一种具有长循环特性的材料。
所述光刺激-响应脂质体进一步包含至少一种脂溶性活性剂和/或水溶性活性剂。具体地，所述脂溶性活性剂和/或水溶性活性剂被包裹在脂质膜中，或者被包覆在脂质膜形成的囊泡内。当脂质膜解体时，所述脂溶性活性剂和/或水溶性活性剂被释放。
其中所述的脂质、光敏剂、具有长循环特性的材料的重量比为50-90:0.5-12:3-18，优选为60-90:1-10:5-15，更优选为70-90:5-10:8-15，进一步优选为80-90:8-10:10-15。
所述的脂质、光敏剂和具有长循环特性的材料的总重量与脂溶性活性剂和/或水溶性活性剂的重量比为10-135:1-15，优选为20-120:5-15，更优选为50-100:8-15，进一步优选为80-100:10-15。
在本发明中，所述的脂质没有特殊限制，它可以为任一种已知的脂质，比如磷脂、糖脂、脂肪酸、二烷基二甲基铵两性分子、聚甘油烷基醚或聚氧乙烯烷基醚等。
上述磷脂的实例包括天然或合成的磷脂，例如卵磷脂(大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二月桂酰卵磷脂、二肉豆蔻酰卵磷脂、二棕榈酰卵磷脂或二硬脂酰卵磷脂等)、磷脂酰乙醇胺(二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺等)、磷脂酰丝氨酸(二月桂酰磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸或二硬脂酰磷脂酰丝氨酸等)、磷脂酸、磷脂酰甘油(二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油或二硬脂酰磷脂酰甘油等)、磷脂酰肌醇(二月桂酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇或二硬脂酰磷脂酰肌醇等)、溶血卵磷脂、鞘磷脂、氢化磷脂等。
上述糖脂的实例包括甘油糖脂、鞘糖脂和甾醇等。
上述甘油糖脂的实例包括双半乳糖甘油二酯(双半乳糖二月桂酰甘油二酯、双半乳糖二肉豆蔻酰甘油酯、双半乳糖二棕榈酰甘油酯或双半乳糖二硬脂酰甘油酯等)或半乳糖甘油二酯(半乳糖二月桂酰甘油酯、半乳糖二肉豆蔻酰甘油酯、半乳糖二棕榈酰甘油酯或半乳糖二硬脂酰甘油酯等)等。
上述鞘糖脂的实例包括半乳糖苷脑苷脂、乳糖脑苷脂或神经节苷脂等。
上述甾醇的实例包括胆固醇、氨甲酰基胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯、麦角固醇或羊毛甾醇等。
在本发明中，所述脂质可以单独使用或通过组合其中两种或更多种联合使用。
特别地，所述脂质选自二棕榈酰磷脂酰胆碱、联乙炔基甘油磷脂酰胆碱、蛋黄卵磷脂、胆固醇。
在本发明中，所述的具有长循环特性的材料是指能够赋予脂质体在生物体内逃避网状内皮系统清除特性的材料，主要指分子量较大且具有亲水性或亲水基团的材料。该类材料可以在载体材料表面交错覆盖成致密的构象云，形成较厚的立体位阻层，阻碍了网状内皮系统的作用，或由于其亲水性而增强载体的溶剂化作用，有效阻止其表面的调理作用，从而降低与单核吞噬细胞系统巨噬细胞的亲和力，使得脂质体可在循环系统中稳定存在并使其半衰期延长。所述具有长循环特性的材料比如可以为聚乙二醇化的磷脂、神经节苷脂、非离子型表面活性剂或聚合物等。
在本发明中，所述具有长循环特性的材料包括但不限于平均分子量为2000的聚乙二醇-氢化大豆磷脂酰乙醇胺(hspe-peg2000)、平均分子量为5000的聚乙二醇-氢化大豆磷脂酰乙醇胺(hspe-peg5000)、平均分子量为2000的聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)、平均分子量为2000的聚乙二醇-二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(dppe-peg2000)等不同分子量聚乙二醇修饰的磷脂酰乙醇胺类磷脂，神经节苷脂，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，吐温，泊洛沙姆等。
特别地，所述具有长循环特性的材料选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000。
在本发明中，术语“光敏剂”是指能在光波刺激下产生单态氧等能引起脂质结构发生改变的物质。所述的光敏剂选自亚甲基蓝及类似物、核黄素及其衍生物、叶绿素a和b、视黄素、卟啉类化合物、血卟啉类化合物、镓卟啉类化合物和各种嘌呤化合物，或它们的混合物。上述的光敏剂优选地选自亚甲基蓝类化合物。
所述亚甲基蓝类化合物为下式的化合物：
其中，r1为h、或者c1～c6饱和或不饱和烃基，优选地，r1为h、ch3、ch2-ch3或ch＝ch2；
r2为h、或者c1～c6饱和或不饱和烃基，优选地，r2为h、ch3、ch2-ch3或ch＝ch2；
r3为h、或者c1～c6烷基，优选地，r3为h、ch3、ch2-ch3；
r4为h、或者c1～c6烷基，优选地，r4为h、ch3、ch2-ch3；
r5为h、或者c1～c6烷基，优选地，r5为h、ch3、ch2-ch3或ch2-ch2-ch3；
r6为h、或者c1～c6烷基，优选地，r6为h、ch3、ch2-ch3或ch2-ch2-ch3；
特别地，所述亚甲基蓝类化合物为7-(乙基(甲基)氨基)-3-(乙基氨基)-2-甲苯胺蓝，如下式所示：
本发明所使用光波可以为各种可以导致光敏剂产生单态氧(1o2)的光波，优选为近红外光。
上述的近红外光波波长范围600-1100nm，照射功率密度一般为100～300mw/cm2，能量密度为100～600j/cm2，作用时间为0.25～90分钟。所述红外光的发生源通常分为热辐射红外光源、气体放电红外光源和激光红外光源3种。具体而言，所述红外光的发生源可以是黑体；通电碳化硅棒；氙灯；半导体激光器；二氧化碳气体激光器；等等。
在本发明的实施方案中，所述脂溶性活性剂和/或水溶性活性剂为抗癌剂。其它脂溶性活性剂和/或水溶性活性剂包括但不限于抗生素、抗真菌剂、免疫抑制剂、抗病毒剂等。
在本发明中，所述抗癌剂选自烷化剂、抗代谢剂、纺锤体毒素植物生物碱、细胞毒性抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、单克隆抗体或其片段、激酶抑制剂、抗肿瘤酶和酶的抑制剂、细胞凋亡诱导剂、抗激素、类视黄醇、含铂化合物、蛋白、多肽类及核酸类药物。
特别地，所述脂溶性活性剂和/或水溶性活性剂选自顺铂、卡铂、奈达铂、阿霉素或紫杉醇。
在本发明中，所述光刺激-响应脂质体的粒径为60～300nm；进一步，其粒径为60～250nm；进一步，其粒径为70～250nm；进一步，其粒径为80～200nm；进一步，其粒径为100～200nm；进一步，其粒径为100～150nm。
本发明的另一方面涉及一种药物组合物，其包含根据本发明的光刺激-响应脂质体和药学上可接受的载体。所述载体选自二棕榈酰磷脂酰胆碱、联乙炔基甘油磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000等制备的脂质体。
本发明的再一方面涉及根据本发明的光刺激-响应脂质体或药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
本发明的光刺激-响应脂质体可以使用任何合适的途径向受试者给药，例如，静脉内给药、动脉内给药、肌肉给药、腹膜内给药、皮下给药、关节内给药、鞘内给药、侧脑室内给药、鼻腔喷雾、肺吸入、口服给药以及本领域技术人员已知的其它适合的给药途径。可以利用本发明的方法治疗的组织包括但不限于鼻、肺、肝、肾、软组织、肌肉、肾上腺组织和乳房。光波可以到达的任何组织或体液都可以用本发明的光刺激-响应脂质体治疗。
本领域技术人员很容易确定利用本发明的光刺激-响应脂质体向受试者给予活性剂的剂量。如本领域所知的，活性剂的剂量可以依据包含在载体中的活性剂来调整。
在给予本发明的光刺激-响应脂质体期间和/或之后，可以对受试者的靶部位进行光照射。在本发明的一个实施方案中，将本发明的光刺激-响应脂质体递送给受试者，在给药后尽可能快地光照射靶部位。
本发明的有益效果在于本发明基于光动力原理，在现有脂质体处方中加入了光敏剂作为光动力触发基团，使脂质体具有良好的光刺激响应特性。通过光辐射触发，可以将包裹在脂质体中的药物在靶部位快速释放出来，提高了靶部位的药物浓度，进而增强药物的治疗效果，减少了药物的全身毒性，具有良好的应用前景。
实施例
通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述,然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解,在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。
本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。
以下实施例中所使用的缩写如下：
dppc：二棕榈酰磷脂酰胆碱
dc8,9pc：联乙炔基甘油磷脂酰胆碱
dspe-peg2000：二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000
eemi：7-(乙基(甲基)氨基)-3-(乙基氨基)-2-甲苯胺蓝
hepes：羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液
epc：蛋黄卵磷脂
chol：胆固醇
实施例1：阿霉素光刺激-响应脂质体的制备
(1)材料及用量：(100ml脂质体的用量，下表1)
表1
(2)制备方法
按表1中的用量称取各种脂质材料、具有长循环特性的材料和光敏剂，溶于200ml氯仿:甲醇(4:1)的溶液中，50～60℃下旋转蒸发除去有机溶剂，得到干燥、均匀附着在玻璃瓶底的薄膜。所得薄膜采用ph＝4.0的柠檬酸溶液250ml于50～60℃水化20min形成一个均匀的脂质体溶液。然后，挤压过聚碳酸酯膜，孔径为100nm，反复挤压5次。得到的脂质体采用碳酸钠水液(500mm)适量调节外水相ph值至7.0-7.4。所得到的脂质体与阿霉素(深圳万乐药业，批号20160905)水溶液270ml(阿霉素1mg/ml)于37℃共培养1h，得到载有阿霉素的光刺激-响应脂质体。之后，4～7℃条件下保存备用。
实施例2：阿霉素光刺激-响应脂质体的包封率测定
取实施例1制备的阿霉素光刺激-响应脂质体1ml于1.5mlep管中，10000r/min，离心10min。取上清0.2ml于10ml容量瓶中，用甲醇溶液破膜定容后，高效液相色谱(hplc)进样分析(c18柱，安捷伦sb-c18，4.6×150mm，1.8μm)，甲醇-乙腈-磷酸缓冲液(25mmnh4h2po4-30mmh3po4，ph5.0)(5:2:3)为流动相，流速1.0ml·min-1，检测波长233nm)，得载入脂质体中的阿霉素药物含量(c1)0.202mg；另取未离心的阿霉素光刺激-响应脂质体样品0.2ml于10ml容量瓶中，用甲醇溶液破膜稀释定容至刻度线，高效液相色谱(hplc)进样分析，得阿霉素光刺激-响应脂质体混悬液中阿霉素的总药物含量(c2)0.208mg。包封率(e)＝c1/c2×100％。结果表明阿霉素光刺激-响应脂质体的包封率为97.1％。
实施例3：阿霉素光刺激-响应脂质体的体外光刺激-响应试验
分别取0.5ml的实施例1制备的阿霉素光刺激-响应脂质体放入醋酸纤维素透析袋(celluloseacetatedialysisbag，mwco8-14kda)(biovision,inc.，批号c413103001)中，并浸入20ml的hepes溶液中于60r/min磁力搅拌。通过激光(660nm、200mw/cm2)辐照，照射10分钟之后，取出0.5ml的释放液并过0.22μm滤膜后采用hplc进行释放液中的药物含量测定(c18柱，安捷伦sb-c18，4.6×150mm，1.8μm)，甲醇-乙腈-磷酸缓冲液(25mmnh4h2po4-30mmh3po4，ph5.0)(5:2:3)为流动相，流速1.0ml·min-1，检测波长233nm)。未采用光辐照的样品作为对照，按相同方法采用hplc进行药物含量测定。释放量％＝释放药物总量/包载药物总量×100％。
阿霉素光刺激-响应脂质体经过光照处理后，药物释放量(81.2±9.4％)明显高于未光照的对照组(6.4±1.6％)。因此，本发明的阿霉素光刺激-响应脂质体在体外具有明显的光刺激-响应释药特性。
实施例4：阿霉素光刺激-响应脂质体的体内光刺激-响应试验
将15只昆明小鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司，km)随机分为三组(每组5只)。
第一组尾静脉注射(0.5ml，1mg)阿霉素注射液(意法玛西亚，10mg/瓶，批号132550013)(注射液组)。第二组尾静脉注射(0.5ml，0.5mg)阿霉素普通脂质体(石药欧意药业，10ml:20mg，批号691160402)(普通脂质体组)。第三组尾静脉注射(0.5ml，0.5mg)本发明中实施例1的阿霉素光刺激-响应脂质体(光刺激-响应脂质体组)。
给药后立即对各小鼠的左前腿部位采用激光(660nm、200mw/cm2)辐照，未光照右前腿作为自身对照，光照10分钟后分别测定光照和不光照的小鼠腿部肌肉阿霉素含量。测定方法如下。
c18柱(安捷伦sb-c18，4.6×150mm，1.8μm)，流动相为甲醇-乙腈-0.01mol·l-1磷酸二氢铵-冰醋酸(50:22:28:0.6)，流速1.0ml·min-1，激发波长479nm，发射波长587nm，柱温30℃。以正定霉素为内标物，取肌肉组织0.5g，加磷酸盐缓冲溶液(ph7.4)1ml，匀浆，加内标液，加氯仿-甲醇(4:1)混合液提取，残渣用甲醇溶解，过滤，进样。
含量＝组织中药物量/组织重量。
结果如下：注射液组(2.6±0.3μg/g)、普通脂质体组(2.1±0.4μg/g)和光刺激-响应脂质体组(2.2±0.4μg/g)未光照部位中的阿霉素的含量没有明显差异；注射液组(2.6±0.4μg/g)和普通脂质体组(2.2±0.4μg/g)光照部位的药物含量与未光照部位相比并没有显著性差异，而阿霉素光刺激-响应脂质体组光照部位(4.9±0.7μg/g)中的药物含量比未光照部位(2.2±0.4μg/g)增加了近1倍多，显著提高了光照部位的药物含量。因此，本发明的阿霉素光刺激-响应脂质体在体内具有明显的光刺激-响应释药特性。
实施例5：阿霉素光刺激-响应脂质体的药效学观察
取对数生长期mcf-7乳腺癌细胞(上海美轩生物科技有限公司)，按每只0.2mlmcf-7乳腺癌细胞悬液(培养基液稀释至2×106/ml)接种于小鼠(60只，北京维通利华实验动物技术有限公司，balb/c裸鼠)右腋偏背部皮下。
于接种肿瘤细胞后第10日，选择肿瘤大小相对均一的小鼠50只(按瘤体积大小排序后随机均匀分入各组)，分为五组(每组10只)：对照组，普通注射液组、普通脂质体组、光刺激-响应脂质体组(光照)和光刺激-响应脂质体组(未光照)。除了对照组尾静脉注射生理盐水外，其它四组分别尾静脉注射相当于10mg/kg阿霉素的普通注射液、普通脂质体和实施例1的阿霉素光刺激-响应脂质体。
注射后，立即使用上述激光(660nm、200mw/cm2，10min)照射，其他组的小鼠不作处理。共给药三次，每隔两天一次。取各组小鼠的肿瘤称重，根据公式计算肿瘤抑制率，结果见表2。
肿瘤抑制率＝(1-ws/wx)×100％
其中，ws为治疗组的肿瘤质量；wx为生理盐水组的肿瘤质量。(x±s表示平均值±标准方差；肿瘤体积＝长×宽×宽/2)
表2药效学试验结果
以上数据表明阿霉素光刺激-响应脂质体与光照结合后，抑瘤效果明显增强。因此，其可以用于制备抗肿瘤药物。
产业上的可利用性
本发明的光刺激-响应脂质体能够提高药物的靶向性和有效性，提供一种制备方法简便、易于工业化生产的光刺激-响应脂质体。本发明的光刺激-响应脂质体可以在工业生产中实施。