一种四嗪二甲酰胺脂质体制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种四嗪二甲酰胺脂质体制剂及其制备方法，该制剂各个成分及其所占重量份为：四嗪二甲酰胺：1.0～2.0份；磷脂：12.5～62.5份；胆固醇：2.5～6.25份；维生素E：0～2.0份；有机溶剂：2.5～7.5份；磷酸盐缓冲溶液：3000～11000份。所述磷脂材料选用卵磷脂、豆磷脂、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、鞘磷脂其中的一种；所述有机溶剂选用乙醇、乙醚、氯仿、二氯甲烷其中的一种：磷酸盐缓冲溶液的pH值选用6.4～7.6之间。本发明通过薄膜分散法或注入法制备脂质体溶液，在制备过程中选用真空干燥或恒温加热搅拌的方法除去药物溶液中的有机溶剂，从而避免有机溶剂的残留。
【专利说明】
一种四嗪二甲酰胺脂质体制剂及其制备方法
技术领域
[0001]本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种四嗪二甲酰胺新剂型的制备方法，具体地说，涉及一种四嗪二甲酰胺脂质体制剂及其制备方法。
[0002]
【背景技术】
[0003]四嗪又名四氮杂苯，是一类具有良好生物活性的抗肿瘤化合物，四嗪二甲酰胺(ZGDHU21)由胡惟孝等合成，是具有自主知识产权的一种新型四嗪类化合物，它能够抑制白血病细胞、肺癌细胞、肝癌细胞、胃癌细胞等的增殖，并且能对诱导分化和凋亡起到一定的作用，裸鼠体内活性研究表明四嗪二甲酰胺对肺癌具有较好的治疗活性，而统计结果显示，肺癌是当今男性发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。四嗪二甲酰胺结构式如图1所示。
[0004]肿瘤通常分为良性肿瘤和恶性肿瘤两种，其中恶性肿瘤就是人们常说的癌症，它的相关疾病有一百多种。癌症是正常细胞发生突变后，不断生长分裂，且不受身体控制的一种机体病变。在当今社会中，癌症的死亡率在各类疾病中高居第二，仅次于心脑血管疾病。因现代社会环境污染的不断加剧，人们生活习惯的不规律，导致癌症的发病率非常高，其将成为人类的又一大杀手。
[0005]脂质体(Liposomes)是磷脂分散在水中形成的球状的、包封一部分内水相的封闭囊泡。二十世纪70年代，Gregoriadis等学者首次提出脂质体可以应用于抗肿瘤药物的传递，开创了抗癌药物给药系统研究的新领域。脂质体可将水溶性或脂溶性的药物包封在内，改变药物的动力学和分布性质，因而其研究和开发成为了一个十分活跃的领域。
[0006]脂质体作为药物载体，具有许多优势。由于其组成和结构的特点，脂质体即可将亲水性药物包封于内水相，也可将亲脂性药物包封于磷脂双分子层;脂质体可增加药物溶解性，其与生物膜相容性好，毒性低;静脉注射后可延缓药物释放，提高生物利用度，具有靶向作用;脂质体作为抗肿瘤药物的载体已经取得了巨大的成功。
[0007]受四嗪二甲酰胺溶解特性的影响(其脂溶性强，水溶性差)，限制了四嗪二甲酰胺普通制剂产品的开发，而且该化合物面世时间短，对其制剂的研究尚未见报道。将四嗪二甲酰胺制备成脂质体新剂型，能改善其水溶性，提高生物利用度并使其具有一定的靶向性。
【发明内容】
[0008]本发明的目的在于克服现有技术中存在的药物在体内无法吸收而滞留的缺陷。本发明提供一种四嗪二甲酰胺脂质体制剂及其制备方法，利用相似相溶的原理，将药物包裹在脂溶性囊泡中，使药物水溶性增加，能够在体内产生生物活性，并具有一定的靶向作用，能作为静脉或肌肉注射剂运用于临床。
[0009]为实现本发明目的，具体技术方案为:
一种四嗪二甲酰胺脂质体制剂，其各个成分及所占重量份为:四嗪二甲酰胺:1.0?2.0份;磷脂:12.5?62.5份;胆固醇:2.5?6.25份;维生素E:0?2.0份;有机溶剂:2.5?7.5份；磷酸盐缓冲溶液:3000?11OOO份。
[0010]所述的磷脂材料选用卵磷脂、豆磷脂、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、鞘磷脂其中的一种，作为优选，所选用磷脂材料为卵磷脂(PC含量98%)。卵磷脂为天然表面活性剂，是细胞膜的组成部分，其与机体有较好的亲和性，是脂质体制备中常用的磷脂材料。在四嗪二甲酰胺脂质体制备过程中，选用卵磷脂制备的溶液粒径小，多分散系数小，包封率尚O
[0011]所述的有机溶剂选用乙醇、乙醚、氯仿、二氯甲烷其中的一种，作为优选，所选用有机溶剂为乙醇。乙醇能较好的溶解药物和磷脂等辅料，所制备四嗪二甲酰胺脂质体溶液较为澄清，粒径小，且乙醇毒性小，对环境和操作人员危害小，便于去除。
[0012]所述的磷酸盐缓冲溶液由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和注射用水配制得到，其pH值选用6.4?7.6之间，作为优选，所选用磷酸盐缓冲溶液的pH值为6.8。使用pH6.8的磷酸盐缓冲溶液，所制备四嗪二甲酰胺脂质体溶液较为稳定，不易析出沉淀，溶液粒径和多分散系数较小，溶液较为澄清。
[0013]胆固醇是天然的两亲性物质，处方中加入胆固醇主要是为了提高脂质体的稳定性，减少药物渗漏，在制备过程中，胆固醇过少和过多都不利于脂质体稳定，所制备溶液粒径和多分散系数均增加。维生素E是抗氧化剂，处方中加入的目的是保护药物和其它辅料，防止氧化变性。
[0014]—种四嗪二甲酰胺脂质体制剂的制备方法，具体包括以下步骤:
(I)将四嗪二甲酰胺、磷脂、胆固醇、维生素E加入有机溶剂中，搅拌或超声处理，使其彻底溶解，制得溶液A。
[0015](2)薄膜分散法制备:将溶液A置于烧瓶中，旋转蒸发去除有机溶剂，瓶壁上形成干膜，在烧瓶中加入磷酸盐缓冲溶液，探头超声进行水化，通过0.45um微孔滤膜过滤，制得脂质体溶液。
[0016](3)注入法制备:也可将溶液A通过针筒注入到持续搅拌的磷酸盐缓冲溶液中，得到混合溶液，将混合溶液置于50?60°C恒温水浴中，持续搅拌，挥发去除有机溶剂，通过
0.45um微孔滤膜过滤，制得脂质体溶液。
[0017]与现有技术相比，本发明的有益效果为:
(I)本发明将四嗪二甲酰胺制备成脂质体，较好的解决了药物水溶性差，不利于给药和吸收的问题，所制备脂质体溶液粒径小、多分散系数小，包封率高，稳定性好。因其结构的特殊性，使药物具有了靶向作用，延长了体内作用时间，提高了生物利用度，有利于疾病治疗。
[0018](2)本发明所选用磷脂、胆固醇等辅料，方便易得，与机体亲和性好，毒性小，所选用有机溶剂毒性小，对环境和操作人员危害小，利于去除。辅料的选取也利于脂质体溶液的制备，使制备流程较为简单，便于操作。
[0019](3)通过常规的薄膜分散法和注入法制备四嗪二甲酰胺脂质体，产品外观形态均较好，溶液较为澄清，略显乳白色，制备过程快速、简便。
[0020](4)本发明将四嗪二甲酰胺制成脂质体溶液，所制备的溶液平均粒径在400nm以下，多分散系数在0.4以下，药物包封率在60%以上，药物的水溶性、稳定性得到了改善，有利于机体吸收。
[0021]
【附图说明】
[0022]图1为四嗪二甲酰胺的化学结构；
图2为本发明实施例1得到的四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径分布图；
图3为本发明实施例2得到的四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径分布图；
图4为本发明实施例3得到的四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径分布图；
图5为本发明实施例4得到的四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径分布图；
图6为本发明实施例5得到的四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径分布图；
图7为本发明实施例6得到的四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径分布图；
图8为本发明实施例3得到的四嗪二甲酰胺脂质体溶液的扫描电镜图；
【具体实施方式】
[0023]下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明，但是本发明并不限于这些实施例。
[0024]实施例1:
四嗪二甲酰胺脂质体制剂，该脂质体包括以下成分及质量:
四嘆二甲酰胺:4mg ；
胆固醇:20mg;
卵磷脂(PC含量98%): 10mg ；
乙醇:10mT,;
磷酸盐缓冲溶液(pH为6.8): 20mL。
[0025]将处方量四嗪二甲酰胺、卵磷脂、胆固醇溶解于乙醇中，搅拌溶解，制得溶液A;将溶液A置于烧瓶中，使用旋转蒸发仪去除有机溶剂乙醇，旋转蒸发仪恒温水浴为45°C，转速100r/min，真空度大于0.09MPa，待瓶壁形成干膜，继续蒸发直至溶剂挥发完全。在烧瓶中加入处方量磷酸盐缓冲溶液，探头超声1min，进行水化，溶液使用0.45um微孔滤膜进行过滤，得到略显乳白色的药物脂质体溶液。
[0026]所得四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径为107.0nm，多分散系数为0.149，药物包封率为78.2%。
[0027]
实施例2:
四嗪二甲酰胺脂质体制剂，该脂质体包括以下成分及质量:
四嘆二甲酰胺:4mg ；
胆固醇:15mg;
卵磷脂(PC含量98%): 150mg；
维生素E:2mg;
乙醚:15mL;
磷酸盐缓冲溶液(pH为6.4): 25mL。
[0028]将处方量四嗪二甲酰胺、卵磷脂、胆固醇、维生素E溶解于乙醚中，搅拌溶解，制得溶液A;将溶液A通过针筒注入到持续搅拌的磷酸盐缓冲溶液中，得到乳白色的混合溶液，将混合溶液置于55°C恒温水浴中，持续搅拌，挥发去除有机溶剂，再使用0.45um微孔滤膜进行过滤，得到略显澄清的乳白色药物脂质体溶液。
[0029]所得四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径为105.4nm，多分散系数为0.152，药物包封率为74.9%。
[0030]
实施例3:
四嗪二甲酰胺脂质体制剂，该脂质体包括以下成分及质量:
四嘆二甲酰胺:8mg ；
胆固醇:1mg;
豆磷脂(PC含量70%): 80mg;
维生素E:6mg;
氯仿:25mL;
磷酸盐缓冲溶液(pH为7.0): 12mL。
[0031]将处方量四嗪二甲酰胺、卵磷脂、胆固醇、维生素E溶解于氯仿中，超声溶解，制得溶液A;将溶液A置于烧瓶中，使用旋转蒸发仪去除有机溶剂乙醇，旋转蒸发仪恒温水浴为400C，转速100r/min，真空度大于0.09MPa，待瓶壁形成干膜，继续蒸发直至溶剂挥发完全。在烧瓶中加入处方量磷酸盐缓冲溶液，探头超声1min，进行水化，溶液使用0.45um微孔滤膜进行过滤，得到略显乳白色的药物脂质体溶液。
[0032]所得四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径为337.9nm，多分散系数为0.313，药物包封率为68.4%。
[0033]
实施例4:
四嗪二甲酰胺脂质体制剂，该脂质体包括以下成分及质量:
四嘆二甲酰胺:6mg ；
胆固醇:25mg;
鞘磷脂:200mg;
维生素E:8mg;
二氯甲烷:20mL;
磷酸盐缓冲溶液(pH为7.6): 40mL。
[0034]将处方量四嗪二甲酰胺、鞘磷脂、胆固醇、维生素E溶解于二氯甲烷中，超声溶解，制得溶液A;将溶液A通过针筒注入到持续搅拌的磷酸盐缓冲溶液中，得到乳白色的混合溶液，将混合溶液置于50 °C恒温水浴中，持续搅拌，挥发去除有机溶剂，再使用0.45um微孔滤膜进行过滤，得到略显乳白色的药物脂质体溶液。
[0035]所得四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径为168.8nm，多分散系数为0.092，药物包封率为75.1%。
[0036]
实施例5:
四嗪二甲酰胺脂质体制剂，该脂质体包括以下成分及质量: 四嘆二甲酰胺:5mg ；
胆固醇:12mg;
磷脂酰丝氨酸:50mg ；
乙醚:30mL;
磷酸盐缓冲溶液(pH为7.2): 44mL。
[0037]本实施例的四嗪二甲酰胺脂质体的具体制备方法与实施例1中的方法相同，区别仅在于采用本实施例中所用的原辅料和用量，以及旋转蒸发仪恒温水浴稳定为30°C，这里不再赘述。制备得到略显乳白色的药物脂质体溶液。
[0038]所得四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径为212.8nm，多分散系数为0.314，药物包封率为69.7%。
[0039]
实施例6:
四嗪二甲酰胺脂质体制剂，该脂质体包括以下成分及质量:
四嘆二甲酰胺:6.5mg ；
胆固醇:22mg;
磷脂酰甘油:250mg;
维生素E:5mg 乙醇:28mL ；
磷酸盐缓冲溶液(pH为6.8): 30mL。
[0040]本实施例的四嗪二甲酰胺脂质体的具体制备方法与实施例2中的方法相同，区别仅在于采用本实施例中所用的原辅料和用量，这里不再赘述。制备得到略显乳白色的药物脂质体溶液。
[0041 ]所得四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径为246.9nm，多分散系数为0.305，药物包封率为70.7%。
[0042]实施例7:
四嗪二甲酰胺脂质体制剂，该脂质体包括以下成分及质量:
四嘆二甲酰胺:8mg ；
胆固醇:16mg;
磷脂酰肌醇:160mg;
维生素E:3mg;
二氯甲烷:18mL;
磷酸盐缓冲溶液(pH为7.2): 32mL。
[0043]本实施例的四嗪二甲酰胺脂质体的具体制备方法与实施例3中的方法相同，区别仅在于采用本实施例中所用的原辅料和用量，这里不再赘述。制备得到略显乳白色的药物脂质体溶液。
[0044]所得四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径为264.7nm，多分散系数为0.255，药物包封率为69.7%。
[0045]
实施例8: 四嗪二甲酰胺脂质体制剂，该脂质体包括以下成分及质量:
四嘆二甲酰胺:3mg ；
胆固醇:22mg;
卵磷脂(PC含量90%):90mg;
维生素E:2mg;
氯仿:12mL；
磷酸盐缓冲溶液(pH为6.4): 26mL。
[0046]本实施例的四嗪二甲酰胺脂质体的具体制备方法与实施例4中的方法相同，区别仅在于采用本实施例中所用的原辅料和用量，这里不再赘述。制备得到略显乳白色的药物脂质体溶液。
[0047]所得四嗪二甲酰胺脂质体溶液的粒径为327.5nm，多分散系数为0.169,药物包封率为71.5%。
[0048]
选取上述实施例中得到的四嗪二甲酰胺脂质体溶液，用注射用水适当稀释，使用激光纳米测定仪对溶液中微粒进行粒径测试。具体的测试结果如图2至图7。从粒径分布图中可以看出，所制备的四嗪二甲酰胺脂质体溶液粒径处于纳米水平，溶液略显澄清并呈乳白色。通过本发明的实施，四嗪二甲酰胺的溶解性得到增强，有利于其药效的发挥。
[0049]图8是实施例3中得到的四嗪二甲酰胺脂质体溶液的扫描电镜图，将溶液稀释25倍，用2%的磷钨酸钠溶液进行染色，取少量滴于硅片上，室温挥发干燥，置于扫描电镜下观察脂质体形态，从电镜图中可以看出，呈类球状。
[0050]取实施例4中得到的四嗪二甲酰胺脂质体溶液，使用zeta电位测定仪进行zeta电位测试，经过测试，本发明的四嗪二甲酰胺脂质体溶液的Zeta电位为-63.97mV，由结果可知，溶液较为稳定。
[0051]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。
【主权项】
1.一种四嗪二甲酰胺脂质体制剂，其特征在于，其各个成分及所占重量份为: 四嗪二甲酰胺:1.0?2.0份;磷脂:12.5?62.5份;胆固醇:2.5?6.25份;维生素E:0?2.0份;有机溶剂:2.5?7.5份;磷酸盐缓冲溶液:3000?11000份，所述的磷脂材料选用卵磷月旨、豆磷脂、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、鞘磷脂其中的一种;所述的有机溶剂选用乙醇、乙醚、氯仿、二氯甲烷其中的一种;所述的磷酸盐缓冲溶液由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和注射用水配制得到，其PH值选用6.4?7.6之间。2.根据权利要求1所述的四嗪二甲酰胺脂质体制剂，其特征在于，所选用磷脂材料为PC含量98%的卵磷脂。3.根据权利要求1所述的四嗪二甲酰胺脂质体制剂，其特征在于，所选用有机溶剂为乙醇。4.根据权利要求1所述的四嗪二甲酰胺脂质体制剂，其特征在于，所选用磷酸盐缓冲溶液的pH值为6.8。5.—种权利要求1所述的四嗪二甲酰胺脂质体制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将四嗪二甲酰胺、磷脂、胆固醇、维生素E加入有机溶剂中，搅拌或超声处理，使其彻底溶解，制得溶液A; (2)薄膜分散法制备:将溶液A置于烧瓶中，旋转蒸发去除有机溶剂，瓶壁上形成干膜，在烧瓶中加入磷酸盐缓冲溶液，探头超声进行水化，通过0.45um微孔滤膜过滤，制得脂质体溶液； (3)注入法制备:也可将溶液A通过针筒注入到持续搅拌的磷酸盐缓冲溶液中，得到混合溶液，将混合溶液置于50?60 0C恒温水浴中，持续搅拌，挥发去除有机溶剂，通过0.45um微孔滤膜过滤，制得脂质体溶液。6.根据权利要求5所述的四嗪二甲酰胺脂质体制剂的制备方法，其特征在于，所制备脂质体溶液，粒径小于400nm，多分散系数小于0.4，药物包封率在60%以上。
【文档编号】A61K31/395GK105853361SQ201610302255
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年5月9日
【发明人】石雷, 吴翰桂, 刘永丽, 梅艳, 丘永秀, 金琳琳
【申请人】石雷