本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种治疗肺癌的中药方剂，具有清热解毒、化痰散结消肿，益气养阴润肺之效。
背景技术：
据世界卫生组织(who)统计，全球范围内肺癌的发病率居高不下，是肿瘤中发病率和死亡率最高的疾病。近年来，由于环境污染、吸烟、人口基础庞大等因素，我国肺癌发病率呈持续上升的趋势，将成为世界第一肺癌大国，肺癌严重威胁人类的生命健康。因此，我们当务之急是采取积极有效的措施防治肺癌。中医认为肺癌是由于正气虚损，阴阳失衡，邪毒乘虚入肺，邪滞于肺，导致肺脏功能失调，肺气媵郁，宣降失司，气机不利，血行受阻，津液失于输布，津聚为痰，痰凝气滞，瘀阻脉络，于是瘀毒胶结，日久形成肺部积块。肺癌是因虚而发病，因虚而致实，是一种全身属虚，局部属实的疾病，虚以气虚、阴虚、气阴两虚为多见，实则气滞、血瘀、痰凝、毒聚之病理变化，正虚之内因为主，外因通过正虚表现为恶毒内侵，与痰浊、瘀血等相杂，合而生变，终成癌变。
现代医学治疗(包括手术、化疗、放疗和靶向治疗等)在肺癌的综合治疗中发挥了不可替代的作用，是目前治疗肺癌特别是早期肺癌的主要手段，但同时也存在许多不足和问题，如毒副反应大、易复发转移及对化疗药物耐药等。中医药在诸多方面，如稳定瘤灶，延长带瘤生存时间、增加机体免疫功能、改善临床症状、提高生活质量、减轻放化疗毒副作用等，均显示出一定的疗效和优势。本发明通过古今中医对肺癌的文献记载及研究进展进行深入探究，并通过多年临床经验，经首都医科大学中医药学系鉴定，由其中药剂学实验室制备，全方消补同施，标本兼顾，益气养阴润肺，解毒化痰散结之功，为治疗肺癌良方。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种治疗肺癌的中药方剂，具有清热解毒、化痰散结消肿，益气养阴润肺之效，而且可以标本兼治，具有不良反应小、简单易行、患者依存性好等优点。
本发明发掘中医丰富临床经验，结合现代药理研究，通过临床的反复验证，选用龙葵、土贝母、山慈菇、山海螺、红景天、黄芪得出的具有清热解毒、化痰散结消肿，益气养阴润肺之效治疗肺癌的中药方剂，各组分用量在下述重量配比范围都具有较好疗效：
龙葵25-35g，土贝母15-25g，山慈菇10-20g，山海螺25-35g，红景天10-20g，黄芪25-35g。
优选为：龙葵30g，土贝母20g，山慈菇15g，山海螺30g，红景天15g，黄芪30g。
本发明的药物，黄芪补气固表，托毒排脓，敛疮生肌，红景天补气清肺、散瘀消肿，二者共凑益气养阴润肺之效，亦能散瘀消肿排脓；龙葵清热解毒；活血消肿，主治疔疮痈肿；土贝母散结毒，消痈肿，治瘰疬痰核，疮疡肿毒；山慈菇清热解毒；消肿散结，主痈疽恶疮，瘰疬结核；山海螺益气养阴，解毒消肿排脓，主肺痈、乳痈、疮疖肿毒、瘰疬。四药配伍，清热解毒、化痰散结消肿功效倍增。全方消补同施，标本兼顾，益气养阴润肺，解毒化痰散结之功，为治疗肺癌良方。
具体实施方式
优选龙葵30g，土贝母20g，山慈菇15g，山海螺30g，红景天15g，黄芪30g，经首都医科大学中医药学系鉴定，由其中药剂学实验室制备。制作方法：取上述药材适量，分别加入10倍的水，浸泡30分钟，微沸条件下加热回流摄取3次，每次1.5小时。纱布滤过，合并滤液，浓缩，干燥，制成干浸膏。
以下通过临床试验，阐述本发明中药方剂的临床疗效：
1.一般资料
30例病例选自2012年10月-2014年12月北京电力医院呼吸科、未接受任何治疗的门诊或住院病人，经电子支气管镜检查并活检组织病理证实为肺癌。其中男21例，女9例；年龄50-73岁，平均67岁；腺癌10例，鳞癌12例，小细胞肺癌7例，其他类型1例；中央型19例，周围型11例。分型按国际肺癌研究学会(iaslc)公布的肺癌tnm分期标准(第七版)，i期6例，ii期16例，iii期6例，iv期2例。健康志愿者30例为对照组，男19例，女11例；年龄51-76岁，平均66岁。纳入标准：以上两组气管镜检查均经观察对象知情同意。近1周未使用过任何药物；各组间年龄、性别差异不显著，具有可比性。排除标准：患有癌症、胶原血管疾病、心力衰竭、严重免疫功能性及器官功能性障碍者。
2.淋巴细胞制作
应用密度梯度分离法分离淋巴细胞，尼龙棉过柱分离t淋巴细胞：小鼠眼球采血后，加入淋巴细胞分离液(体积比为1∶1或1∶2)，以1800r/min离心15min，两层之间的物质即为肺的单个核细胞。收集上述细胞，应用尼龙棉柱子过柱分离细胞，收集过柱淋巴细胞。用台盼蓝染色证实细胞活力在90％以上。
3.淋巴细胞培养及il-2、il-17、ifn-γ检测
将上述已纯化的淋巴细胞悬浮于含10％的胎牛血清的prmi1640液，将纯化的淋巴细胞浓度调整为106/ml，并将悬液依次接种在24孔培养板内，依次为对照组和肺癌组、大剂量方剂(终浓度为10mg/ml)和肺癌组、小剂量方剂(终浓度为2mg/ml)和肺癌组，每组1ml，各组均放入培养箱中培养24h，经离心将上清液与淋巴细胞完全分离，吸取上清液-80℃保存待测。il-2、il-17、ifn-γ均按北京夏斯生物技术品公司盒内所附说明书进行检测。
4.统计学处理
采用spss17.0软件进行统计学分析。实验结果以(均值±标准差)表示，多个样本间的比较采用方差分析，p＜0.05为差异有统计学意义。
5.结果
5.1中药方剂对淋巴细胞生成的il-2、il-17、ifn-γ的影响
与对照组比较，肺癌组生成的il-2、ifn-γ减低，il-17升高，差异有统计学意义(p＜0.05)；加入小剂量中药方剂后，与同组内未加刺激剂组相比，il-2、ifn-γ升高，il-17减低，差异无统计意义。加入大剂量中药方剂后，与同组内未加刺激剂组相比，il-2、ifn-γ升高，il-17减低，而且差异有统计意义(p＜0.05)。见以下表1、表2。
表1中药方剂对淋巴细胞生成il-2、ifn-γ的影响(ng/l)
注：*与肺癌组比较，p＜0.05；^与无刺激比较，p＜0.05。
以下通过动物随机对照试验，进一步阐述本发明中药方剂对肺癌荷瘤鼠瘤组织的抑制作用：
1.材料与试剂
人肺癌a549细胞购自上海中科院细胞库。balb/c裸小鼠由北京维通利华实验动物技术有限公司中心提供，雄性，4-6周，16-20g，spf级环境中饲养。适应环境1周后进行实验。rpmi-1640培养液、胎牛血清购自美国gibco公司；caspase3、caspase9、smac抗体多克隆兔抗人抗体、s-p试剂盒、dab显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司；il-2elisa试剂盒购自美国raybiotech公司。注射用环磷酰胺(cytoxan，ctx，上海华联制药有限公司生产，生产批号041109)，临用前用生理盐水配制成0.3mg/ml溶液。
2.造模、分组给药
取处于对数生长期的细胞(细胞密度达80％-90％为宜)，收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。胰酶消化细胞后用预冷的pbs洗两遍，用pbs吹打细胞沉淀至合适的浓度(1×107-5×107个细胞/ml)。在无菌条件下，用1ml注射器将肿瘤细胞接种于裸小鼠腹部供血丰富区域的皮下，接种量为1×106/只；待成瘤后(肿瘤长、短径大于1mm×1mm)开始治疗。24只小鼠随机分组，分别为模型组，ctx组，中药方剂小、大剂量组，每组6只。模型组给予生理盐水0.4ml/d灌胃；ctx组给予20mg/kg/d腹腔注射；中药方剂小、大剂量组分别给予中药方剂14g/kg/d、56g/kg/d灌胃；均每天1次，连续4周。
3.肿瘤体积、抑瘤率、il-2、il-6、il-10、inf-γ及的测定
于接种后第6周处死动物，剥离肿瘤组织，测量原位肿瘤最大径(a)和最小径(b)。标本以4％中性甲醛固定。肿瘤体积(v)＝ab2/2。抑瘤率(％)＝(对照组v-实验组v)/对照组v×100％。处死小鼠前，对小鼠眼球采血，收集血清，按elisa试剂盒进行il-2、il-6、il-10、inf-γ测定。
4.免疫组化法检测及判定
裸鼠肿瘤标本石蜡包埋，连续4μm切片，二甲苯脱蜡，caspase3、caspase9、smac工作浓度为1∶100，dab显色；s-p法染色按说明书操作。高倍镜下随机观察5个视野，每个视野计数200个细胞，计算阳性细胞占肿瘤细胞数的比例。每组t淋巴细胞加入anti-cd25-pe10μl，室温下避光放置30min，用pbs洗涤2次后，24h内进行流式细胞记数。测定时各荧光通道以相应同类型(iso-type)igg染色作阴性对照。全部数据经facscabibor流式细胞仪及cellquest软件获取和分析。
5.应用密度梯度分离法
分离淋巴细胞，尼龙棉过柱分离t淋巴细胞；小鼠眼球采血后，加入淋巴细胞分离液(体积比1∶1或1∶2)，离心1800r/min，共15min，2层之间的即为肺的单个核细胞。收集上述细胞，应用尼龙棉柱子过柱分离细胞，收集过柱t淋巴细胞。用台盼蓝染色证实细胞活力在90％以上。
6.统计学方法
采用spss17.0软件进行统计学分析。实验结果以(均值±标准差)表示，多个样本间的比较采用方差分析，p＜0.05为差异有统计学意义。
7.结果
6.1各组瘤体积及抑瘤率比较
结果表明，与模型对照组相比较，中药方剂大剂量组、ctx组对荷瘤鼠肺癌实体瘤抑制作用，差异显著，p＜0.05；中药方剂小剂量组虽然也抑制肿瘤，但是统计学意义不显著。ctx抑瘤率为62.13％；中药方剂大剂量组抑瘤率为53.49％；中药方剂小剂量组抑瘤率为26.74％。实验发现，ctx组的抑瘤率还是高于中药方剂组，见表3。
表3各组的瘤体积及抑瘤率比较(均数±标准差)
注：与对照组比较，*p＜0.05。
6.2caspase3、caspase9、smac表达阳性率
与对照组比较，中药方剂大剂量、ctx组能抑制荷瘤鼠肺癌实体瘤的caspase3、caspase9、smac表达。中药方剂小剂量组为阳性，也能增加荷瘤鼠caspase3、caspase9、smac表达，但是统计学意义不显著，见表4。
表4各组caspase3、caspase9、smac阳性表达情况
注：与对照组比较，*p＜0.05。
6.3各组小鼠il-2、il-6、il-10、inf-γ及cd25测定
与对照组比较，中药方剂大剂量组、ctx组能促进il-2、cd25增加。中药方剂小剂量组为阳性也能促进荷瘤鼠生成il-2、cd25，但差异不显著。与对照组比较，中药方剂大剂量、ctx组能促进il-6、il-10、inf-γ。中药方剂小剂量组为阳性，也能促进荷瘤鼠生成il-6、il-10、inf-γ，但是统计学意义不显著。见表5。
表5各组小鼠il-2、cd25(％)比较(均值±标准差)
注：与对照组比较，*p＜0.05。
以下通过动物毒性试验，进一步阐述本发明中药方剂的安全性：
1.实验动物
选用性成熟昆明种小鼠，体重为18-22g，用常规方式饲养，自由采食。购于北京维通利华实验动物技术有限公司中心。
2.中药方剂的急性毒性试验
采用改良寇氏法测定中药方剂对小鼠的经口急性毒性试验的ld50。取50只小鼠随机分为5组，每组10只，雌、雄各半。每组小鼠分笼饲养，每笼5只。按临床剂量2、4、8、10、20倍日剂量给予7、14、28、56、112g/kg组。对各剂量组进行一次性经口灌胃给药，给药后观察并且记录小鼠的摄食、饮水、呼吸、活动和死亡情况，连续观察14d。对死亡小鼠及观察期满处死的小鼠进行剖检，若发现异常组织或脏器则做病理学检查。
3.中药方剂的长期毒性试验
选取60只小鼠，雌雄各半，随机分成中药方剂高剂量、低剂量和空白对照3组，每组20只。每组小鼠分笼饲养，每笼5只。高剂量组按临床成人的50倍日剂量，低剂量组临床成人的10倍日剂量对小鼠灌胃给予中药方剂，空白对照组给予等体积蒸馏水，1次/d，连续13周。每日观察记录小鼠一般状况如进食，行为活动，粪便等。每周称体质量1次。末次给药24h后，每组选取10只小鼠(雌雄各半)，腹腔注射10％水合氯醛麻醉，处死动物解剖观察心、肝、脾、肺、肾、胃等脏器变化。各组余下小鼠停药观察两周后，同法处理，并观察上述指标。所得结果作统计学处理，以t检验比较组间差异显著性。
4.结果
4.1中药方剂的急性毒性试验
在给药期间，中药方剂各剂量组小鼠外观体征、行为活动、摄食、饮水、呼吸及粪便等状况均未见明显变化，动物无一死亡。
4.2中药方剂的长期毒性试验
在给药期间，中药方剂各剂量组小鼠外观体征、行为活动、摄食、饮水、呼吸及粪便等状况均未见明显变化，动物无一死亡。连续给药13周和停药2周后，中药方剂高、低剂量组小鼠体质量正常增长，与空白对照组比较，体质量变化无明显差异。结果见表6。
表6各组小鼠体重变化(g)