本发明涉及一种保健品，具体涉及一种具有保护肝脏和降血脂功能的保健品，属于保健品领域。
背景技术：
随着社会发展和世界人口的老龄化，以及酗酒问题严重的广泛存在，药物的滥用，使得化学性肝损伤已经成为一种常见病、多发病，严重影响人民的健康。所谓化学性肝损伤，是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤，这些化学物质包括酒精、环境中的化学毒物及其某些药物。作为人体的重要解毒器官的肝脏，具有肝动脉和肝静脉双重血液供应，化学物质可通过胃肠道门静脉或体循环进入肝脏进行转化，因此肝脏容易受到化学物中的毒性物质损害。大自然和人类工业生产过程中均存在一些对肝脏有毒性的物质，称为“亲肝毒物”，这些毒物在人群中普遍易感，潜伏期短，病变的过程与感染的剂量直接相关，可引起肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变形、肝硬化和肝癌。长期饮酒对肝脏的损伤也是非常严重的，乙醇进入到人体内，60-80％在肝内被氧化，氧化途径有二：其一是adh乙醇氧化体系；被摄入体内的乙醇被肝细胞内的乙醇脱氢酶催化，脱氢生成乙醛，乙醛被乙醛脱氢酶催化，脱氢生成乙酸，后形成乙酰辅酶a进入三羧酸循环，最后生成二氧化碳和水，释放atp。其二是乙醇诱导肝细胞滑面内质网的微粒体氧化体系(meos)参与乙醇氧化，乙醇在体内被氧化生成乙醛乙酸的过程，大量nad被还原成nadh导致nadh/nad比值升高，一次性大量摄入乙醇，可通过儿茶酚胺的作用引起储存脂肪动员，并同时伴随高血脂症的发生。高血脂，是引起人类动脉粥样硬化性疾病的主要危险因素，易引起脑卒中、冠心病、心肌梗死、猝死等。对于高血脂，中医认为饮食、情志、劳逸等失衡引起机体脏腑之间功能紊乱，人体内环境整体平衡被破坏，气血生化运行功能障碍，血液质量发生改变是其发生的根本原因。病理变化与心、肝、脾、肾、气、血有关，高血脂症的病机特点是以脾肾亏虚、肝脾不调为根本，湿盛、痰、瘀为其标。中医对血脂异常的认识：血脂异常是由于脂质代谢运转异常，使血浆中一种或几种脂质高于正常的代谢性疾病，表现为高胆固醇证、高甘油三脂血证或两者兼有的混合型血脂异常。是动脉粥样硬化、心脑血管疾病和脂肪肝发病的主要原因。西医学认为脂类在血浆中并非以游离态存在，都要与蛋白质结合形成溶解度较大的脂蛋白复合物方能在血液循环中运转。高密度脂蛋白(hdl)水平的升高有利于促进外周组织移除胆固醇，从而防止动脉粥样硬化发生，被认为是抗动脉硬化因子。因某些原因使脂类产生过多，或因其降解，或转运发生障碍，或因遗传代谢缺陷时，分类不同的血浆脂蛋白的含量或质量就会发生变化，导致脂质代谢紊乱，使血脂时间加长，便形成高血脂症。高血脂，一般是由以下因素引起的：①过度进补，比如食用过多高蛋白、高脂肪、高热量食品；②社交应酬多、不良的生活习惯，比如长期饮酒；③缺乏运动；④思想麻痹大意，尤其是年轻人，忙于应酬却缺乏体检的意识；而这些原因对肝脏也造成了巨大的负担，很容易造成肝脏的损伤；可见，肝与高血脂存在巨大的联系。肝脏是机体重要代谢器官，也是机体中药屏障器官，其解毒和吞噬功能对于机体有重要保护作用，但是，我国肝脏疾病发病率高，影响面广，对人民健康和国家经济危害严重。因此对于化学性肝损伤有辅助保护功能和辅助降血脂功能的保健品市场需求量巨大。目前，市场上以辅助降血脂和对化学性肝损伤有辅助保护功能的双功能保健品品种繁多。其中，西药效果显著，但是长期用药所引起的肝肾损害、横纹肌溶解、停药反跳等副作用仍然是本病治疗的难题。而中药治疗的毒副作用小，但是目前市场是缺少具有辅助降血脂功能，同时可减少对肝脏损伤，对化学性肝损伤其辅助保护作用的中药保健品。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足，而提供一种具有保护肝脏和降血脂功能的保健品(命名为步源堂牌清脂护肝片)，采用葛根清凉下火、开胃下食、保肝降脂和三七味微甘而苦、颇似人参之味，及阳明、厥阴血分之药，故能治一切血病；银杏叶益心敛肺，化湿止泻；绞股蓝健脾补肾、化痰止咳、清热解毒和灵芝具有滋补强壮、健脑安神、益精气的特点，以上五味共同达到保护肝脏、对化学性肝损伤具有辅助保护功能和辅助降血脂的双重功能。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种具有保护肝脏和降血脂功能的保健品，是由以下重量的原料经混合、制软材、制粒、干燥、整粒、总混、压片后制备而成的；400g保健品中含有以下重量的原料：葛根提取物100g；三七提取物56g；银杏叶提取物54g；绞股蓝提取物45g；灵芝提取物40g；微晶纤维素101g；硬脂酸镁4g。上述技术方案中，所述的葛根提取物、三七提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物、灵芝提取物、微晶纤维素和硬脂酸镁，均为市售的、现有的、符合各自检验规格的产品。上述技术方案中，所述的保健品的制备方法，包括以下步骤：(1)混合：将检验合格的葛根提取物、三七提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物、灵芝提取物、微晶纤维素分别过80目筛，然后按照所述比例分别称量后进行混合得到混合粉；(2)制软材：将步骤(1)得到的混合粉与乙醇混合均匀，得到软材备用；(3)制粒：将步骤(2)得到的软材用16目筛制备湿颗粒；得到湿颗粒备用；(4)干燥：将步骤(3)得到的湿颗粒进行干燥，水分控制在5.0％以内，得到干颗粒备用；(5)整粒：将步骤(4)得到的干颗粒过18目筛进行整粒，得到的颗粒备用；(6)总混：将步骤(5)得到的颗粒与所述比例的硬脂酸镁进行混合，得到的总混颗粒备用；(7)压片：将步骤(6)得到的总混颗粒置于压片机中压片，片量为0.4g/片，严格控制制片重差异在±5％以内，片剂即为保健品。对片剂进行抛光、挑剔残片、裂片后再进行内包装、外包装、检验和入库后就可销售。(8)内包装：采用口服固体药用高密度聚乙烯瓶为内包装材料，进行内包装，180片/瓶；(9)外包装：贴标签，装箱；(10)检验、入库：按照企业质量标准的方法及要求进行检验，合格成品入库。优选的，步骤(1)中，混合时间为30min，混合时的搅拌速率为40转/分钟。优选的，步骤(2)中，乙醇为质量浓度为95％的乙醇。优选的，步骤(4)中，干燥的温度为50-60℃，水分控制在5.0％以内。优选的，步骤(6)中，混合时间为20min，混合时的搅拌速率为40转/分钟。说明：本发明生产所用的乙醇符合gb10343食用酒精；口服药用高密度聚乙烯瓶复合ybb00122002；所有原辅料均符合企业标准规定要求，生产过程严格按《保健食品良好生产规范》执行。生产的步骤(1)-步骤(8)均是在30万洁净区内完成的，可较好的控制产品质量，生产的产品微生物等所有指标符合企业标准(依据gb16740-1997制定)要求。本发明的保健品，每100g中含标志性成份葛根素2.4g、总皂苷3.5g；口服，每日2次，每次3片(少年儿童、孕妇及乳母忌用)。本发明中的葛根，味甘微辛，气清香，性凉，主入脾胃经，有发表解肌，升阳透疹、解热生津之功效。葛根素是从中药葛根的根中提取的活性物质，具有扩张冠状动脉，降压抗心肌缺血，改善微循环，调节血脂代谢等作用；葛根素具有对化学性肝损伤具有辅助保护功能和辅助降血脂功能。本发明中的三七提取物，性温、味甘、微苦；入肝、胃经；能活血化瘀、补气补血、消肿止痛。三七能止血而不留淤，有散瘀止血之功效，可以治疗瘀血阻滞、跌打损伤所引起的疼痛，又可用于各种出血症。三七总甙，不仅具有滋补强壮、耐缺氧、抗衰老、抗疲劳等作用，还具有止血、镇痛、消炎、抑制血小板聚集作用；尤其是能扩冠脉，增加心肌供血及缺氧的耐受性，又同时具有降血脂、扩血管的作用。使其成为防治心血管疾病和中老年保健的理想药物。此外，三七提取物还具有提高免疫功能，保护肝脏的功效，三七总甙具有保护肝细胞的作用，对于肝炎、肝纤维化及肝硬化等多种肝痛都具有较好的疗效。故三七提取物具有保护肝脏，对化学性肝损伤具有辅助保护功能和辅助降血脂的双重作用。本发明中的银杏叶提取物，性平、味甘、苦、涩，具有活血化瘀、通经止痛、敛肺平喘、化浊降脂等功效，用于瘀血阻络、胸痹心痛，中风偏瘫、肺虚咳喘和高血脂症。此外银杏叶提取物还具有清除自由基或抑制自由基形成的作用的能力，具有抗肝损伤和保护肝脏的作用。故银杏叶提取物具有保护肝脏，对化学性肝损伤具有辅助保护功能和辅助降血脂的双重作用。本发明中的绞股蓝提取物，其主要成分是绞股蓝皂苷、多糖和黄酮类，绞股蓝总皂苷能抑制肝微粒体自发的和由多种自由基发生系统所致的脂质过氧化，而且能拮抗由脂质过氧化所致的膜流动性降低，具有保护肝细胞的作用；还具有降血脂、调血脂、降酶护肝、减轻脂肪肝、促进肝细胞再生、抗肿瘤、降血糖、抗衰老等药理作用。故绞股蓝提取物具有保护肝脏，对化学性肝损伤具有辅助保护功能和辅助降血脂的双重作用。本发明的灵芝提取物，具有护肝、抗氧化和清除自由基等多种作用，对多种理化及生物因素引起的肝损伤具有保护作用；无论在肝脏损害发生前还是发生后，灵芝提取物都具有保护肝脏、减轻肝损伤、抗脂质过氧化的作用。此外，灵芝提取物还具有调节血脂、降低血脂、调节脂质代谢和增强抗脂质过氧化的作用。故灵芝提取物具有保护肝脏，对化学性肝损伤具有辅助保护功能和辅助降血脂的双重作用。本发明采用乙醇为润湿剂。50％的乙醇，软材易结块、不易制成颗粒；75％的乙醇，软材手握成团，轻压即散，干颗粒手感较硬；而95％的乙醇，软材手握成团，轻压即散，干颗粒用手捻能成粗糙的细粉；故本发明采用95％的乙醇作为润湿剂。本发明采用微晶纤维作为填充剂。微晶纤维是天然纤维素的水解产物，性质稳定，与主要原料不发生化学反应；作为填充剂用于片剂中，可以使颗粒较松散，均匀细小，结合性能好；同时吸水后能使片剂迅速膨胀而崩解，因此它有兼做崩解剂。故本发明选用微晶纤维素。本发明选用硬脂酸镁作为润滑剂。硬脂酸镁作为润滑剂的用量一般为0.1％-1％，物料的流动性常用休止角表示，休止角越小，表明粉体的流动性越好，一般认为休止角≤10°，流动性可满足生产需要。本发明申请人以休止角为指标，考察了添加1％硬脂酸镁颗粒的流动性，以实施例1为例，当硬脂酸镁的用量为1％左右时，休止角≤10°，流动性可满足生产需要。本发明制备成片剂时，混合时间为30min；混合是制剂工艺的基本程序之一，其目的是保证各组分含量均匀、均一性和外观色泽一致。本发明申请人考察了混合时间(15分钟、30分钟和45分钟)对混合粉的均匀度的影响，以实施例1为例，当混合时间为15分钟时，混合不均匀，而混合30分钟、45分钟时，混合都比较均匀，但是考虑到生产效果和成本，优选混合30min；而混合30min后的混合粉，混合粉不同部位的标志性成分总皂苷和葛根素的含量一是一致的，故可证明混合粉混合均匀。本发明制成片剂，工艺较简单，同时运输、贮存及携带、应用都比较方便，这正是片剂的突出的特点之一，而且产品的形状稳定，剂量准确，机械生产产量大、成本低及价格便宜，易于被消费者接收等优点。由上述内容可知，本发明是由葛根提取物、三七提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物、灵芝提取物、微晶纤维素、硬脂酸镁为主要原料制成的保健食品；经动物试验证明，具有对化学性肝损伤有辅助保护功能的保健功能；经动物试验及人体试食试验证明，具有对化学性肝损伤保护功能和辅助降血脂的保健功能。附图说明图1为本发明保健品制备方法的工艺流程图；其中：代表30万洁净区，也就是说明书附图中的虚线方框代表30万洁净区。图2为检测报告六的功效成分检测结果(该图含有2页)。图3为检测报告七的卫生学检测结果(该图含有2页)。图4为检测报告八的稳定学检测结果(该图含有5页)。图5为对化学性肝损伤有辅助保护功能的动物实验结果(该图含有1页)。图6为具有辅助降血脂功能的动物实验结果(该图含有1页)。图7为人体试食实验结果(该图含有1页)。具体实施方式以下对本发明技术方案的具体实施方式详细描述，但本发明并不限于以下描述内容：本发明中，微晶纤维素、硬脂酸镁符合《中华人名共和国药典》二部2010版“微晶纤维素”、硬脂酸镁”项下规定；葛根提取物的质量、三七提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和灵芝提取物的质量要求见表1-5：表1：葛根提取物的质量要求表2：三七提取物的质量要求表3：银杏叶提取物的质量要求表4：绞股蓝提取物的质量要求表5：灵芝提取物的质量要求本发明以下实施例中，用到的主要生产设备名称及型号见表6：表6：主要生产设备名称及型号名称型号设备生产厂家摇摆式制粒机yk-160常州科宇干燥设备有限公司压片机zp31d上海天合制药机械有限公司高效干燥箱gz-2000上海天合制药机械有限公司本发明的以下实施例中，三七提取物、灵芝提取物、绞股蓝提取物、葛根提取物、银杏叶提取物，均购买于宣城市百草植物工贸有限公司；微晶纤维素购买于安徽山河药用辅料股份有限公司。下面结合具体的实施例对本发明进行具体的阐述：实施例1：一种具有保护肝脏和降血脂功能的保健品(命名为步源堂牌清脂护肝片)，400g保健品中含有以下重量的原料：葛根提取物100g；三七提取物56g；银杏叶提取物54g；绞股蓝提取物45g；灵芝提取物40g；微晶纤维素101g；硬脂酸镁4g；是通过下述方法制备而成的：(1)混合：将检验合格的葛根提取物、三七提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物、灵芝提取物、微晶纤维素分别过80目筛，然后按照所述比例分别称量后进行混合得到混合粉；混合时间为30min，混合时的搅拌速率为40转/分钟；(2)制软材：将步骤(1)得到的混合粉与质量浓度为95％的乙醇混合均匀，得到软材备用；(3)制粒：将步骤(2)得到的软材用16目筛制备湿颗粒；得到湿颗粒备用；(4)干燥：将步骤(3)得到的湿颗粒进行干燥，干燥的温度为50-60℃，水分控制在5.0％以内，得到干颗粒备用；(5)整粒：将步骤(4)得到的干颗粒过18目筛进行整粒，得到的颗粒备用；(6)总混：将步骤(5)得到的颗粒与所述比例的硬脂酸镁进行混合，得到的总混颗粒备用；混合时间为20min，混合时的搅拌速率为40转/分钟；(7)压片：将步骤(6)得到的总混颗粒置于压片机中压片，共计1000片，片量为0.4g/片，严格控制制片重差异在±5％以内，片剂即为保健品。对片剂进行抛光、挑选残片、裂片后再进行内包装、外包装、检验和入库后就可销售。(8)内包装：采用口服固体药用高密度聚乙烯瓶为内包装材料，进行内包装，180片/瓶；(9)外包装：贴标签，装箱；(10)检验、入库：按照企业质量标准的方法及要求进行检验，合格成品入库。本发明中，葛根素具有对化学性肝损伤具有辅助保护功能和辅助降血脂功能，绞股蓝、三七中皂苷含量丰富，在人体中具有对化学性肝损伤具有辅助保护功能和辅助降血脂的生理活性，因此将葛根素和总皂苷定位标志性成分，每100g中含葛根素2.4g、总皂苷3.5g，详见检测报告六。对本发明实施例1得到的保健品进行了急性毒性试验、ames试验、骨髓嗜多染红细胞微核试验、精子畸形试验、30d喂养试验等试验，同时进行了功效成分、卫生学、稳定学等检测，还进行了对化学性肝损伤有辅助保护功能的动物试验、具有辅助降血脂功能的动物试验以及辅助降血脂功能人体试食试验，具体结果如下所示：检测报告一：小鼠急性毒性试验将本发明实施例1得到的保健品送至山东省疾病预防控制中心进行检测，急性毒性试验的方法、结果如下所示：1材料和方法1.1样品：由山西步全生物科技有限公司提供，为棕黄色片剂，阴凉通风干燥处保存。人体推荐量为2.4g/人.日，成人体重按60kg计。样品研磨成粉末作为受试物供实验用。1.2实验动物：spf级icr小鼠，共20只，雌雄各半，体重18～22g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，生产许可证号：scxk(京)2012-0001。饲养环境为屏障级，使用许可证号：syxk(鲁)2008-0005，室温20～24℃，相对湿度45～65％。实验动物标准饲料为北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：scxk(京)2009-0008号。1.3剂量选择与受试物给予方式：称取10.0g受试物，以蒸馏水配至20ml，终浓度为0.5g/ml，分两次灌胃给予实验动物，间隔4h，每次灌胃量为0.2ml/10g.bw，累积染毒剂量为20.0g/kg.bw。1.4主要仪器与试剂：电子天平1.5试验方法：按照最大耐受量(mtd)法试验进行。实验前动物空腹16h备用(不限制饮水)。动物称重、灌胃给予受试物后，记录动物的中毒表现及死亡情况，连续观察14d。1.6试验数据统计：计算动物体重均值与标准差、死亡率等。1.7结果判定：按照mtd法试验求得小鼠经口急性毒性mtd，并判定受试物毒性分级。2结果：灌胃给予受试物后，各试验动物未见明显中毒症状，14d内动物无死亡(见表1)。试验结果显示，该受试物对两种性别小鼠的mtd均大于20.0g/kg.bw。根据急性毒性分级标准，该样品属无毒级。表1.小鼠急性毒性实验结果3小结：最大耐受量试验结果显示，该受试物对两种性别小鼠的mtd均大于20.0g/kg.bw。根据急性毒性分级标准，该样品属无毒级。检测报告二：ames试验将本发明实施例1得到的保健品送至山东省疾病预防控制中心进行检测，ames试验的方法、结果如下所示：1材科和方法1.1样品：由山西步全生物科技有限公司提供，为棕黄色片剂，阴凉通风干燥处保存。人体推荐量为2.4g/人.日，成人体重按60kg计。样品研磨成粉末作为受试物供实验用。1.2实验动物试验菌株：为经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型ta97、ta98、ta100、ta102，活化系统为多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆(s-9)制备的s-9混合液。1.3剂量选择与受试物给予方式：取受试物，分别以蒸馏水、二甲基亚砜(dmso)、95％乙醇、丙酮作溶剂，经过比较，该受试物在蒸馏水中溶解效果最好，故试验中选取蒸馏水作溶剂。根据毒性测定结果，试验设立8、40、200、1000、5000μg/皿5个剂量，同时设立自发回变组、溶剂对照组和阳性对照组。称取受试物5.00g，置于容量瓶中，以蒸馏水作溶剂，定容至100ml，用蒸汽消毒器0.068mpa，20min处理，冷却后取出放置4℃保存，浓度为50000μg/ml，取蒸馏水依次进行1∶4稀释，得出浓度分别为10000、2000、400、80μg/ml。每皿加入0.1ml，受试物浓度分别相当于5000、1000、200、40、8μg/皿。阳性对照组所用阳性物为敌克松、2-氨基芴、甲基磺酸甲酯、1，8-二羟基蒽醌(见表2)，所用溶剂均为dmso。1.4主要仪器与试剂：bakersg603aint生物安全柜、binderkbw240恒温培养箱、julabotw20恒温水浴、hirayamahve-50蒸汽压力消毒器、iulcountermatflash全自动菌落计数器、yds-50液氮罐、电子天平。阳性物为2-氨基芴(sigma-aldich公司)、甲基磺酸甲酯(nerck-schuchand公司)、1，8-二羟基蒽醌(acrosorganics公司)，敌克松(chemservice公司)。1.5试验方法：试验按照平板掺入法在加s-9与不加s-9混合液的条件下进行，每个组别设3个平皿。增菌培养，融化顶层培养基分装于无菌小试管。在45℃水浴中保温的顶层培养基2ml中，依次加入测试菌株新鲜增菌液0.1ml、受试物0.1ml(活化时加入s-9混合液0.5ml)，混匀，迅速倾入底层培养基上，转动平皿使顶层培养基均匀分布在底层上，平放固化，37℃培养48h观察结果。另做阳性对照、溶剂对照和未处理对照。整套试验在相同条件下进行两次。1.6试验数据统计：计算3个平皿中的菌落数均值、标准差。1.7结果判定：若受试物的回变菌落数为自发回交菌落数的2倍以上，并具有剂量-反应关系则判定为阳性。2结果：由表2-1、表2-2可见，两次试验中受试物各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍，亦无剂量-反应关系，说明在加与不加s-9时该样品对鼠伤寒沙门氏菌ta97、ta98，ta100、ta102四株试验菌株均未呈现遗传毒性。表2-1ames试验结果(第一次)表2-2ames试验结果(第二次)注：(1)敌克松，50μg/皿(2)2-氨基芴，10μg/皿(3)甲基磺酸甲酯，0.5μl/皿(4)1，8-二羟基蒽醌，50μg/皿3小结：说明在加与不加s-9时该样品对鼠伤寒沙门氏菌ta97、ta98、ta100、ta102四株试验菌株均未呈现遗传毒性。检测报告三：小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验将本发明实施例1得到的保健品送至山东省疾病预防控制中心进行检测，小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验的方法、结果如下所示：1材料和方法1.1样品：由山西步全生物科技有限公司提供，为棕黄色片剂，阴凉通风干燥处保存。人体推荐量为2.4g/人.日，成人体重按60kg计。样品研磨成粉末作为受试物供实验用。1.2实验动物：spf级icr小鼠，共50只，雌雄各半，体重25～30g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：scxk(京)2009-0004。饲养环境为屏障级，使用许可证号：syxk(鲁)2008-0005，室温20～24℃，相对湿度45～65％。实验动物标准饲料为北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：scxk(京)2009-0008号。1.3剂量选择与受试物给予方式：小鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。实验设立3个实验组，染毒剂量分别为2.5、5.0、10.0g/kg.bw，另设蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组(40mg/kg.bw)。分别称取2.5、5.0、10.0g受试物，以蒸馏水配至20ml，终浓度分别为0.125、0.25、0.50g/ml，灌胃给予实验动物。灌胃量为0.2ml/10g.bw，共两次，间隔24h。1.4主要仪器与试剂：电子天平、olympuscx21生物显微镜，小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，甲醇(分析纯)，giemsa染液(sigma公司)，环磷酰胺(江苏恒瑞医药股分有限公司，12021725)。1.5试验方法：末次给予受试物后6h处死动物，分离胸骨。取骨髓，经涂片、固定、染色等常规制片。每只动物镜检1000个嗜多染红细胞(pce)，记录微核细胞数，计算微核率(即微核细胞数/嗜多染红细胞数，以千分率表示)。同时观察200个pce，计数观察到的正染红细胞(nce)数目，并计算pce/nce比值。1.6试验数据统计：按照poisson分布进行统计分析。1.7结果判定：试验组与对照组相比，试验结果微核率实验组有明显的剂量-反应关系，并有统计学意义时，判定为阳性结果。2结果：由表3可见，雄性动物阴性对照组pce/nce比值为1.26，实验组比值介于1.24～1.32之间；雌性动物阴性对照组pce/nce比值为1.31，实验组比值介于1.22～1.35之间。受试物各剂量组两性别小鼠比值均不低于阴性对照组的20％，说明受试物未对骨髓细胞产生细胞毒性作用。受试物各剂量组微核率与阴性对照组比较无显著性差异(p＞0.05)，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较有极显著性差异(p＜0.01)，说明该样品无致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核作用。表3小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果注：**p＜0.01(与阴性对照组比较)3小结：说明该样品无致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核作用。检测报告四：小鼠精子畸形试验将本发明实施例1得到的保健品送至山东省疾病预防控制中心进行检测，小鼠精子急性试验的方法、结果如下所示：1材料和方法1.1样品：由山西步全生物科技有限公司提供，为棕黄色片剂，阴凉通风干燥处保存。人体推荐量为2.4g/人.日，成人体重按60kg计。样品研磨成粉末作为受试物供实验用。1.2实验动物：spf级icr小鼠，共25只，雄性，体重25～30g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：scxk(京)2009-0004。饲养环境为屏障级，使用许可证号：syxk(鲁)2008-0005，室温20～24℃，相对湿度45～65％。实验动物标准饲料为北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：scxk(京)2009-0008号。1.3剂量选择与受试物给予方式：小鼠随机分为5组，每组5只。实验设立3个实验组，染毒剂量分别为2.5、5.0、10.0g/kg.bw，另设蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组(40mg/kg.bw)。分别称取2.5、5.0、10.0g受试物，以蒸馏水配至20ml，终浓度分别为0.125、0.25、0.50g/ml，灌胃给予实验动物。灌胃量为0.2ml/10g.bw，连续5d，1.4主要仪器与试剂：电子天平、olympuscx21生物显微镜，甲醇(分析纯)，伊红染液，环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，12021725)。1.5试验方法：首少灌胃后第35d处死动物，常规制片。每只动物计数1000个结构完整的精子，记录畸变类型和数量，计算精子畸形率(以百分率表示)。1.6试验数据统计：按照x2检验进行统计分析。1.7结果判定：试验组与对照组相比，试验结果微核率实验组有明显的剂量-反应关系，并有统计学意义时，判定为阳性结果。2结果：由表4-1，表4-2可见，受试物各剂量组小鼠精子畸形率与阴性对照组比较元显著性差异(p＞0.05)，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较有极显著性差异(p＜0.01)，说明该样品无致小鼠精子畸形作用。表4-1小鼠精子畸形试验结果(一)注：**p＜0.01(与阴性对照组比较)。表4-2小鼠精子畸形试验结果(二)3小结：说明该样品无致小鼠精子畸形作用。检测报告五：大鼠30d喂养试验将本发明实施例1得到的保健品送至山东省疾病预防控制中心进行检测，大鼠30天喂养试验的方法、结果如下所示：1材料和方法1.1样品：由山西步全生物科技有限公司提供，为棕黄色片剂，阴凉通风干燥处保存。人体推荐量为2.4g/人.日，成人体重按60kg计。样品研磨成粉末作为受试物供实验用。1.2实验动物：spf级sd大鼠，共80只，雌雄各半，体重61～86g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：scxk(京)2009-0004。饲养环境为屏障级，使用许可证号：syxk(鲁)2008-0005，室温20～24℃，相对湿度45～65％。实验动物标准饲料为北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：scxk(京)2009-0008号。1.3剂量选择与受试物给予方式：大鼠80只，随机分为4组，每组20只，雌雄各半。根据人体推荐量设立3个实验组，染毒剂量分别为1.0、2.0、4.0g/kg.bw(分别相当于人体推荐量的25，50、100倍)。将受试物按照动物体重的10％计算食物摄入量掺入饲料中，即1.0％、2.0％、4.0％(质量分数)喂饲实验动物。对照组给予基础饲料。单笼喂养，自由饮食，连续现察30d。1.4主要仪器与试剂：abbottcd3700血细胞分析仪、hitachi7180全自动生化分析仪、heraeusmultifuge3plus离心机、病理设备(leicaasp200s全自动脱水机、eg1150包埋机、rm2245切片机，sakuratissue-tekprisma、tissue-tekglasg2组织染色封片一体机)、电子天平、olympuscx21生物显微镜等。1.5试验方法：临床检查：每天观察并记录动物的一般表现、行为、中毒表现和死亡情况。每周称一次体重和2次食物摄入量，计算每周和总食物利用率。实验末期禁食16h，称取动物体重(供计算肝、脾、肾、睾丸、等脏器系数使用)后，经腹主动脉取血，进行血液生化及血液学测定，解剖动物并取材。血液学测定采用k2edta-抗凝血，指标包括血红蛋白、红细胞计数、白细胞总数及其分类等。血液生化学测定采用血清，测定指标包括谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白和白蛋白，并计算白蛋白、球蛋白比值等。实验结束时对所有动物及脏器进行大体检查，称取肝、脾、肾、睾丸等脏器重量，根据脏器重量和禁食后的动物体重，计算其脏器系数。将肝、脾、肾、胃、肠、睾丸、卵巢等脏器固定保存，进行组织病理学检查。1.6试验数据统计：计量资料使用microsoftexcel和spss软件进行均数、标准差的计算和方差分析(或秩和检验)，数据以均数±标准差形式表示。数据方差齐时采用方差分析，计算f值。f值＜f0.05时结论为各组均数间差异无显著性；f值≥f0.05，即p≤0.05，用多个实验组和对照组间均数的两两比较方法进行统计。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后进行统计。若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。计数资料采用x2检验。1.7结果判定：将临床检查、生长发育情况、血液学、血生化、大体解剖、脏器重量和脏体比，联系统计结果进行综合分析，初步判断毒作用特点、程度、靶器官，初步估计引起有害效应的剂量和靶器官，得出noael。2结果：2.1动物的一般表现：试验周期内各实验组动物总体生长状况良好，体重逐周增长，未见中毒体征及死亡。2.2体重、食物利用率测定结果：由表5、表6、表7、表8和表9可见，各实验组每周体重、进食量、食物利用率和体重增重、总进食量、总食物利用率与对照组比较均无显著性差异(p＞0.05)，且均在本实验室正常值范围内。表530d喂养对大鼠体重的影响表630d喂养对大鼠每周进食量的影响表730d喂养对大鼠体重每周增重的影响表830d喂养对大鼠每周食物利用率的影响注：*p＜0.05(与对照组比较)表930d喂养对大鼠总食物利用率的影响2.3血液学测定结果：由表10和表11可见，雄性实验动物低剂量组红细胞计数，低、高剂量组单核细胞百分比；雌性动物中剂量组嗜碱性细胞百分比与对照组比较存在显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)，但仍在本实验室正常值范围内。其余各实验组各血液学指标与对照组比较均无显著性差异(p＞0.05)，且其值均在本实验室正常值范围内。表10大鼠30d喂养试验末期血液学检查结果注：**p＜0.01(与对照组比较)。表1130d喂养对大鼠白细胞的影响注：*p＜0.05，**p＜0.01(与对照组比较)。2.4血液生化学测定结果：由表12-1和表12-2可见，雄性动物高剂量组肌酐和雌性动物低剂量组血糖与对照组比较在统计学上存在显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)，但其值仍在本实验室正常值范围内，不认为存在生物学意义。其余各实验组动物血生化各指标与对照组比较均无显著性差异(p＞0.05)，且其值均在本实验室正常值范围内。表12-1大鼠30d喂养试验末期血液生化结果汪：**p＜0.01(与对照组比较)。表12-2大鼠30d喂养试验末期血液生化结果注：*p＜0.05(与对照组比较)。2.5病理解剖2.5.1大体解剖：实验结束时对所有动物进行大体检查，肝脏大小正常、颜色新鲜、表面光滑、质地柔软、边缘锐利、无结节包块等。取出两侧肾和肾上腺，对准肾门将肾以最大剖面剖开，暴露肾盂，检查皮质和髓质的厚度、颜色正常，界限清晰。未见胃肠粘膜出血、溃疡、增厚、淋巴滤泡增生等病变。观察脾切面马氏小体清晰可辨。睾丸/卵巢形态、大小正常。各实验组动物的肝、肾、胃、肠、脾和卵巢/睾丸组织中，未见明显异常。2.5.2脏器系数测定结果：由表13、表14可见，肝、脾、肾、睾丸等脏器的重量和脏器系数与对照组比较均无显著性差异(p＞0.05)。表13大鼠30d喂养脏器重量表14大鼠30d喂养脏体比结果2.5.3组织病理学检查结果：取高剂量组和对照组雌、雄动物的肝、脾、肾、胃、肠、睾丸、卵巢等脏器进行组织病理学检查。2.5.3.1肝脏正常结构清楚，肝小叶排列整齐，可见规则放射状排列肝细胞索、正常血窦、中央静脉、门管区。肝细胞呈多边形，胞浆轻度嗜酸性着色，细胞核圆形，中央位。对照组和高剂量组少数动物可观察到轻微病理改变(结果见表15-1)。(1)雄性对照组1/10例和雌性对照组1/10例标本内可观察到肝小叶内点状的肝细胞坏死灶：单个或数个肝细胞坏死，细胞浆固缩、浓染，或细胞核破碎、溶解消失，细胞结构破坏甚至不复可见。(2)雄性对照组1/10例和雌性高剂量组1/10例、对照组1/10例标本肝小叶内可见点状的炎细胞浸润灶。表15-1肝脏组织病理学检查结果2.5.3.2肾脏正常结构清楚。皮质、髓质界限清楚，肾单位均匀分布于皮质，肾小体毛细血管球，肾小囊半月形腔隙清晰可见。肾小管近曲小管被覆单层柱状上皮，核圆、基底位，细胞间分界不清。集合管胞浆透明，核圆、中央位，细胞分界清楚。肾盂粘膜被覆移行上皮。对照组和高剂量组少数动物可观察到轻微病理改变(结果见表15-2)。(1)雄性高剂量组1/10例和雌性对照组1/10例标本内可见肾小球毛细血管球肿胀，囊腔变窄，甚至毛细血管球与囊腔粘连。(2)雄性对照组1/10例标本内可观察到肾小管蛋白管型，腔内管型均质红染。(3)雄性高剂量组1/10例和雌性高剂量组1/10例、对照组1/10例标本肾间质内可观察到点状炎性细胞浸润灶。表15-2肾脏组织病理学检查结果2.5.3.3胃前胃部分粘膜上皮为复层鳞状上皮，表面有角化，固有膜薄，粘膜肌层发达，粘膜下层为疏松结缔组织，富含血管。腺胃腺上皮为单层柱状上皮，由主细胞、壁细胞、粘液细胞组成，固有膜内有大量紧密排列的腺体，腺体间有少量结缔组织，肌层发达。对照组和高剂量组动物均未观察到病理改变(结果见表15-3)。表15-3胃组织病理学检查结果2.5.3.4小肠可清晰辨认粘膜、粘膜下层、肌层、浆膜层。粘膜表面是指状突起的绒毛，覆以单层柱状上皮，粘膜内分布大量肠腺。对照组和高剂量组动物均未观察到病理改变(结果见表15-4)。表15-4小肠组织病理学检查结果2.3.5.3.5脾可见被膜结缔组织和平滑肌深入实质形成的小梁，团块状白髓，和广阔的红髓。白髓生发中心清晰，周围一层淋巴母细胞带。对照组和高剂量组动物均未观察到病理改变(结果见表15-5)。表15-5脾组织病理学检查结果2.3.5.3.6睾丸最外层为致密结缔组织组成的白膜，其下方为大量曲精小管，由外而内可见各阶段细胞：精母细胞、精原细胞、精子细胞和精子。可见形态不规则，界限不清的支持细胞。对照组和高剂量组动物均未观察到病理改变(结果见表15-6)。表15-6睾丸组织病理学检查结果2.3.5.3.7卵巢由皮质和髓质组成。被膜下方皮质内可见不同发育阶段的卵泡，即原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡，还可见黄体，白体等。对照组和高剂量组动物均未观察到病理改变(结果见表15-7)。表15-7卵巢组织病理学检查结果综上所述，大体观察各实验组动物的肝、肾、胃、肠脾和卵巢/睾丸组织中，未见明显异常。组织学检查中，对照组和高剂量组少数动物的标本出现病理改变，但这些病理改变程度较轻且无组间特异性分布，考虑与动物质量有关，与对照组相比，不认为实验组出现有意义的病理改变。2.3.6大鼠30d喂养试验小结：在试验期内各实验组动物生长发育良好，体重增重、食物利用率、脏器重量和脏器系数等各项指标均在本实验室正常值范围内。实验组血常规及血生化各指标均在本实验室正常值范围内。病理组织学检查实验组被检脏器未见有意义的病理改变。检测报告六：功效成分检测报告将本发明实施例1得到的保健品送至山东省疾病预防控制中心进行检测，主要功效成分检测结果如图2所示：检测报告七：卫生学检测报告将本发明实施例1得到的保健品送至山东省疾病预防控制中心进行检测，卫生学检测结果如图3所示：检测报告八：稳定学检测报告将本发明实施例1得到的保健品送至山东省疾病预防控制中心进行检测，稳定学检测结果如图4所示：动物实验一：对化学性肝损伤有辅助保护功能的动物试验将本发明实施例1得到的保健品送至山东省疾病预防控制中心，进行对化学性肝损伤有辅助保护功能的动物实验，动物实验方法如下所述，动物实验结果如图5所示：1材料和方法1.1样品：由山西步全生物科技有限公司提供，为棕黄色片剂，人体推荐剂量为2.4g/人.日(成人体重以60kg计)。1.2实验动物：选用北京华阜康生物科技股份有限公司(生产许可证号：scxk(京)2009-0004)繁殖的spf级icr雄性小鼠，体重18.0～22.0g，共60只，随机分为5组，分别为样品低剂量组、中剂量组、高剂量组、空白对照组、模型对照组。实验环境：屏障环境，实验动物使用许可证号为syxk(鲁)2008-0005。室温20～22℃，相对湿度45～65％。饲料：为北京华阜康生物科技股份有限公司实验动物标准饲料，生产许可证号为scxk(京)2009-0008。1.3剂量选择与受试物给予方式：样品人体推荐量为2.4g/60kg.bw，实验设三个剂量组，即：0.20g/kg.bw组、0.40g/kg.bw组、1.20g/kg.bw组，低、中、高三个组的剂量分别相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、30倍。同时设立空白对照组和模型对照组。以蒸馏水为溶剂将样品分别配至所需浓度，即取0.40g(低)、0.80g(中)、2.40g(高)样品用蒸馏水分别配至40ml，空白对照组和模型对照组灌胃蒸馏水，按每天0.2ml/10g.bw连续经口灌胃30d后，开始测定各项指标。1.4主要仪器与试剂：spectramaxplus酶标仪、cpa2202s型电子天平、pl203型电子天平、2000genogrindertm高通量组织研磨机、离心机、漩涡混匀器、sw振荡水浴槽、leicacm1800冰冻切片机、手术器械、冰醋酸(分析纯)。丙二醛(mda)试剂盒：南京建成生物工程研究所，批号为20130610。还原型谷胱甘肽(gsh)试剂盒：南京建成生物工程研究所，批号为20130610。甘油三酯(tg)试剂盒(gpo-pad法)：北京北化康泰临床试剂公司，批号为20130112。1.5试验方法：实验第30d将模型组及样品各剂量组按12ml/kg.bw一次灌胃给予50％乙醇(由无水乙醇用蒸馏水稀释)，空白对照组给予蒸馏水。隔夜禁食16小时后处死动物，取肝脏称重，计算肝脏系数。再进行肝组织中mda、gsh、tg含量测定，并作病理组织学检查。1.5.1指标检测：取肝脏制成1％匀浆，采用试剂盒法测定mda、gsh和tg含量。1.5.2病理组织学检查：取小鼠肝脏左叶，从肝左叶中部做横切面取材，冰冻切片，油红0染色。镜检时，从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，用40倍物镜连续观察整个组织切片。主要观察脂滴在肝脏的分布、范围和面积。评分标准：.1.6试验数据统计：以excel软件建立数据库，用spss软件进行统计分析。采用方差分析，先进行方差齐性检验，方差齐，计算f值，f值＜f0.05，p＞0.05，结论：各组均数间差异无显著性意义；f值≥f0.05，p≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法(dunnett检验法)进行统计分析；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐性要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。1.7结果判定：对化学性肝损伤有辅助保护功能(酒精肝损伤模型)：①肝脏mda、gsh、tg三项指标结果阳性，可判断该受试样品对乙醇引起的肝损伤有辅助保护作用，②肝脏mda、gsh、tg三项指标中任二项指标阳性，且肝脏病理结果阳性，可判断该受试样品对乙醇引起的肝损伤有辅助保护作用。2结果：2.1样品对小鼠体重的影响表1样品对小鼠体重的影响注：p值与空白对照组比较。由表1可见，模型对照组及各实验组小鼠的造模前体重和体重增加值与空白对照组比较均无显著性差异(p＞0.05)。2.2肝匀浆中各项指标的检测结果2.2.1肝匀浆中过氧化脂质降解产物mda的测定结果：表2肝匀浆中mda的测定结果注：p1值：与空白对照组比较；p2值：与模型对照组比较；由表2可见，模型对照组的mda含量明显高于空白对照组，差异有统计学意义(p＜0.01)，表明损伤模型成立。低、中、高剂量组的mda含量明显低于模型对照组，存在极显著性差异(p＜0.01)。2.22肝匀浆中gsh测定结果：表3肝匀浆中gsh的测定结果注：p1值：与空白对照组比较；p2值：与模型对照组比较；由表3可见，模型对照组的gsh含量明显低于空白对照组，差异有统计学意义(p＜0.05)，表明损伤模型成立。低、高剂量组的gsh含量明显高于模型对照组，存在显著性差异(p＜0.05)。2.2.3肝匀浆中tg的测定结果：表4肝匀浆中tg的测定结果注：p1值：与空白对照组比较；p2值：与模型对照组比较；由表4可见，模型对照组的tg含量明显高于空白对照组，有极显著性差异(p＜0.01)，表明损伤模型成立。低、中、高剂量组的tg含量明显低子模型对照组，存在显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)。2.3病理检查结果：2.3.1对小鼠肝脏重量、肝脏系数和病理指标的影响表5对小鼠肝脏重量、肝脏系数的影响注：p1值：与空白对照组比较；p2值：与模型对照组比较；由表5可见，模型对照组的肝脏系数明显高于空白对照组，差异有极显著性(p＜0.01)，表明损伤模型成立。低剂量组的脏器系数明显低于模型对照组，存在极显著性差异(p＜0.01)。表6对小鼠病理指标的影响注：p1值：与空白对照组比较；p2值：与模型对照组比较；由表6可见，模型对照组的肝脏病理评分明显高于空白对照组，差异有极显著性(p＜0.01)，表明损伤模型成立，低剂量组的肝脏病理评分明显低于模型对照组，存在极显著性差异(p＜0.01)。2.3.2组织学检查结果：空白对照组正常结构清楚，肝小叶排列整齐，结构完整，可见规则放射状排列肝细胞索、正常血窦、中央静脉、门管区。肝细胞呈多边形，胞浆轻度嗜酸性着色，细胞核圆形，中央位，细胞无变性、坏死及炎细胞浸润。模型对照组以中央静脉为中心出现弥漫性病理改变，肝细胞排列紊乱，肿胀及气球样变，可见肝细胞脂肪变性，肝细胞胞浆内出现界限清晰、大小不一的圆形脂滴空泡，脂肪病变总分明显增加。各剂量组与模型对照组比较，肝小叶结构较清晰，肝细胞浊肿、脂肪变性明显减轻。3小结实验结果表明，模型对照组的丙二醛(mda)、甘油三酯(tg)及肝脏病理评分明显升高，谷胱甘肽(gsh)明显降低，与空白对照组比较有显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)，表明肝损伤模型成立。低、中、高剂量组的mda明显低于模型对照组，差异有极显著性(p＜0.01)；低、高剂量组的gsh含量明显高于模型对照组，存在显著性差异(p＜0.05)；低、中、高剂量组的tg含量明显低于模型对照组，存在显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)；低剂量组的肝脏病理评分明显低于模型对照组，存在极显著性差异(p＜0.01)。根据《保健食品检验与评价技术规范》判定标准，该样品对化学性肝损伤有辅助保护作用。动物实验二：具有辅助降血脂功能的动物试验将本发明实施例1得到的保健品送至山东省疾病预防控制中心，进行具有辅助降血脂功能的动物试验，实验方法如下所示，实验结果如图6所示：1材料和方法1.1样品：为棕黄色片剂，人体推荐量为2.4g/人.日，成人体重按60kg计。1.2实验动物：由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，spf级健康sd雄性大鼠40只，体重150～180g。生产许可证号为scxk(京)2012-0001。屏障环境，使用许可证号为syxk(鲁)2008-0005，室温20～24℃，相对湿度45～65％。实验动物标准饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：scxk(京)2009-0008。高脂饲料：基础饲料78.8％、胆固醇1％、猪油10％、蛋黄粉10％、胆盐0.2％。1.3剂量选择与受试物给予方式：实验设三个剂量组，即：0.2g/kg.bw、0.4g/kg.bw、1.2g/kg.bw，分别相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、30倍。以蒸馏水为溶剂将样品分别配至所需浓度，即称取0.8g、1.6g、4.8g样品用蒸馏水分别配至40ml，灌胃给样，模型对照组灌胃给予同体积的蒸馏水，灌胃量均为1ml/100g.bw，每日一次，连续30天，并每周称量体重，于实验结束时禁食采尾血测定各项血脂指际。1.4主要仪器与试剂：pl2002型电子天平，hitachi7180全自动生化分析仪，血清总胆固醇测定试剂盒，甘油三酯测定试剂盒，高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒1.5试验方法：以基础饲料饲喂大鼠观察11天后，取尾血，测定血清总胆固醇(tc)，甘油三酯(tg)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)，根据tc水平将动物随机分为4组：高脂对照组、3个受试物组(0.2g/kg.bw、0.4g/kg.bw、1.2g/kg.bw)，分别相当于人体推荐量的5倍、10倍、30倍)，自正式试验开始，各组动物换用高脂饲料。受试物分别用蒸馏水配至所需浓度，灌胃给样，高脂对照组灌胃给予同体积的蒸馏水，灌胃量均为1ml/100g.bw，每日一次，连续灌胃30天后，取尾血测定各项血脂指标.1.6试验数据统计：以excel软件建立数据库，用spss软件进行统计分析，先进行方差齐性检验，方差齐时采用方差分析，计算f值，f值＜f0.05，p＞0.05，结论：各组均数间差异无显著性意义；f值≥f0.05，p≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法(dunnett检验法)进行统计分析；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐性要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。1.7结果判定：1.7.1辅助降低血脂功能结果判定：在血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇三项指标检测中血清总胆固醇和甘油三酯二项指标阳性，可判定该受试样品辅助降血脂功能动物实验结果阳性。1.7.2辅助降低甘油三酯结果判定：①甘油三酯二个剂量组结果阳性；②甘油三酯一个剂量组结果阳性，同时高密度脂蛋白胆固醇显著高子对照组，可判定该受试样品辅助降低甘油三酯动物实验结果阳性。1.7.3辅助降低血清总胆固醇结果判定：①血清总胆固醇二个剂量组结果阳性；②血清总胆固醇一个剂量组结果阳性，同时高密度脂蛋白胆固醇显著高于对照组，可判定该受试样品辅助降低血清总胆固醇动物实验结果阳性。2结果：2.1样品对大鼠体重的影响表1样品对大鼠体重的影响由表1可见，在整个实验过程中，各组动物生长活动正常，受试物各剂量组动物的体重与高脂对照组比较，无显著性差异(p＞0.05)。2.2样品对高血脂大鼠血脂的影响表2样品对高血脂大鼠tc、tg、hdl-c的影响注：*与高脂对照组比较p＜0.05；**与高脂对照组比较p＜0.01由表2可见，给予高脂饲料后，高脂对照组实验后与实验前比较，大鼠的血清tc、tg均明显升高，表明高血脂模型成立。与高脂对照组比较，0.4g/kg.bw组及1.2g/kg.bw组均能明显降低高脂大鼠的血清tc和tg水平(p＜0.05或p＜0.01)。2.2样品对高血脂大鼠血脂水平的影响表3样品对高血脂大鼠血脂水平的影响由表3可见，给予高脂饲料后，与高脂对照组相比，样品低、中、高剂量组大鼠的血清tc下降百分率分别为13.33％、15.24％、22.22％，血清tg下降百分率分别为21.62％、32.09％、34.12％、血清hdl-c上升分别为-0.02mmol/l、0.02mmol/l、0.04mmol/l。3小结：实验结果表明：经口给予大鼠不同剂量的样品30d，与高脂对照组比较，0.4g/kg.bw组及1.2g/kg.bw组均能明显降低高脂大鼠的血清tc和tg水平(p＜0.05或p＜0.01)。根据《保健食品检验与评价技术规范》判定标准，样品有辅助降血脂功能。临床实验：辅助降血脂功能人体试食试验将本发明实施例1得到的保健品送至山东省疾病预防控制中心山东省中医药大学第二附属医院，进行临床实验，试验方法如下所示，人体试食实验结果如图7所示：1材料与方法1.1样品步源堂牌清脂护肝片，由山西步全生物科技有限公司提供，0.4g/片*180片/瓶，人体推荐量为每日2次，每次3片。1.2受试者选择1.2.1纳入标准：受试者性别不限，为单纯血脂异常人群，保持正常饮食。半年内采血两次，两次血清总胆固醇(tc)均≥5.2mmol/l或血清甘油三酯(tg)≥1.65mmol/l，作为备选对象。受试者为非住院的高血脂症患者。1.2.2排除标准：1.2.2.1年龄在18岁以下或65岁以上者。1.2.2.2妊娠期或哺乳期妇女，对保健食品过敏者。1.2.2.3合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病患者。1.2.2.4短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果判断者。1.2.2.5不符合纳入标准，未按规定食用受试样品，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判定者。1.3分组设计采用自身和组间两种对照设计。将106例受试者按血脂水平随机分为试食组和对照组，试食组53例，对照组53例，分组尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。1.4试验方法试食组服用试食样品，对照组采用空白对照，服用方法为每日2次，每次3片，连续服用30-45天，试验期间不改变原来的生活及饮食习惯，正常饮食。1.5试验仪器及试剂全自动血液分析仪xt-1800i(日本希森美康)；全自动尘化分析仪7600-110(日立)；尿液分析仪uritest-500b(桂林优利特)；x光机xr/d(美国ge)；心电图仪ecg-1350p(日本光电)；b超诊断仪preirus(二郎神，日立)。血细胞分析稀释液：日本希森美康(批号：g3182)；尿试纸条：优利特(批号：g56130393)；总蛋白试剂盒：北京利德曼(批号：305232e)；白蛋白试剂盒：北京利德曼(批号：304273d)；谷丙转氨酶试剂盒：日本和光(批号：ap933)；谷草转氨酶试剂盒：日本和光(批号：ap931)；甘油三酯试剂盒：德国欧泰克(批号：935820)；总胆固醇试剂盒：德国欧泰克(批号：865273)；肌酐试剂盒：四川新成(批号：0713041)；血糖试剂盒：上海骏实(批号：13100919)；尿素氮试剂盒：德国欧泰克(批号：865273)；尿酸试剂盒：德国欧泰克(批号：935820)。2观察指标2.1一般情况观察：详细询问病史，了解患者饮食情况、精神、睡眠、大小便、血压、心率等。2.2安全性观察：2.2.1血尿便常规检查：白细胞计数、红细胞计数、血小板计数、血红蛋白、尿常规、大便常规。2.2.2生化指标测定：血清白蛋白(alb)、总蛋白(tp)、谷丙转氨酶(alt)、谷草转氨酶(ast)、尿素氨(urea)、肌酐(cr)、葡萄糖(glu)。2.2.3腹部b超，心电图，x线胸部透视(仅在试验开始前做一次)。2.3功效性观察：2.3.1功效指标：血清总胆固醇(tc)水平和降低百分率、甘油三酯(tg)水平和降低百分率、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)水平及上升幅度。2.3.2功效判定标准：有效：tc降低＞10％；tg降低＞15％；hdl-c上升＞0.104mmol/l。无效：未达到有效标准者。观察血清总胆固醇(tc)有效率，甘油三酯(tg)有效率，高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)有效率及总有效率。3统计方法采用spss17.0统计软件进行统计分析，凡自身对照资料可以采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，对转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t′检验或秩和检验；方差齐但变异系数太大(如cv＞50％)的资料应用秩和检验。有效率及总有效率采用x2检验。四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。4结果判定比较试食后血清总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)变化情况，试食组试食前后自身比较及试食后试食组与对照组组间比较，差异有显著性，并达到有效判定标准，可判定血清总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)结果阳性。人体试食试验结果判定：①血清总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)二项指标阳性，高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)不显著低于对照组，可判定该受试样品具有辅助降血脂功能作用；②血清总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)二项指标中一项指标阳性，高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)不显著低于对照组，可判定该受试样品具有辅助降低血清总胆固醇(tc)或辅助降低甘油三酯(tg)的作用。5结果5.1一般情况观察5.1.1病例脱失率说明纳入受试者106人，试食组53例，对照组53例，试验后结束后，试食组有1例受试者因失访被筛除，对照组有1例受试者因失访被筛除，脱失率为1.9％。最后实际有效例数为104例，试食组52例，对照组52例。5.1.2试食组与对照组均衡性比较104例受试者，试食组52例，对照组52例。试食组：男/女为19/33，年龄为52.37±11.54岁；对照组：男/女为23/29，年龄为50.94±10.43岁。试食前试食组血清tc、tg、hdl-c水平及年龄、性别与对照组比较，差异无显著性(p＞0.05)，提示两组之间具有可比性。(见表1)表1试验前两组血清tc、tg、hdl-c水平及年龄、性别均衡性比较5.1.3试食组与对照组一般情况比较对试食者试食前后精神、睡眠、饮食情况进行问诊，两组试食前后一般情况良好，精神、睡眠、饮食情况均未见明显异常。两组受试者的试验前后血压、心率基本处于正常范围，且试食前后自身比较，差异无显著性(p＞0.05)，表明试食步源堂牌清脂护肝片对人体一般情况无不良影响。(见表2)表2试验前后两组一般情况比较5.1.4试食前后两组血常规、尿常规、大便常规的比较两组受试者的试验前后白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板基本处于正常范围内，且试验前后自身比较无显著改变(p＞0.05)。两组受试者试验前后尿常规、大便常规基本处于正常范围内。(见表3)表3试食前后两组血常规、尿常规、大便常规的比较5.1.5试食前后两组血生化指标的比较两组受试者的试验前后血清总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、葡萄糖基本处于正常范围内，且试验前后自身比较无显著改变(p＞0.05)。(见表4)表4试食前后两组血生化指标的比较5.1.6腹部b超，心电图，x线胸部透视检测：均基本正常。5.1.7试食期间未见其他不良反应。5.2功效观察试验前后血清tc、tg、hdl-c水平变化情况：试食组试食后血清tc、tg与试食前比较，差异均有显著性(p＜0.05)，试食组试食后血清hdl-c与试食前比较，差异无显著性(p＞0.05)；试食组试食后血清tc、tg与对照组比较，差异均有显著性(p＜0.05)，试食组试食后血清hdl-c与对照组比较，差异无显著性(p＞0.05)。(见表5、6、7、8)表5试食前后两组血清总胆固醇变化注：**与试食前比较p＜0.05：##与对照组比较p＜0.05。表6试食前后两组血清甘油三酯变化注：**与试食前比较p＜0.05；##与对照组比较p＜0.05。表7试食前后两组血清高密度脂蛋白胆固醇变化表8试食前后有效率情况比较6小结6.1受试者在连续服用步源堂牌清脂护肝片期间，精神、睡眠、饮食、大小便、血压、各项临床指标等均未见明显变化，未见其他不良反应。说明本品对试食者身体健康无不良影响。6.2步源堂牌清脂护肝片试食组血清tc下降率19.44％，tg下降率19.66％，hdl-c降低0.03mmol/l，tc有效率55.8％，tg有效率59.6％，hdl-c有效率34.6％，总有效率15.4％；对照组血清tc下降率3.53％，tg下降率-5.96％，hdl-c降低0.12mmol/l，tc有效率28.8％，tg有效率13.5％，hdl-c有效率15.4％，总有效率0。试食组试食后血清tc、tg与试食前比较，有显著性差异(p＜0.05)，试食组试食后血清hdl-c与试食前比较，无显著性差异(p＞0.05)；试食后试食组血清tc、tg与对照组比较，有显著性差异(p＜0.05)，试食后试食组血清hdl-c与对照组比较，无显著性差异(p＞0.05)。试食前后均未见明显不良反应。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)评价标准，可判定该受试样品具有辅助降血脂功能作用。上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。当前第1页12