一种重楼皂苷VII的新用途的制作方法

本发明属于药学技术领域，涉及一种重楼皂苷vii的新用途。

背景技术：

乳腺癌是威胁妇女健康的常见恶性肿瘤之一，发病率居女性恶性肿瘤首位，且呈逐年上升趋势。在我国，乳腺癌的发病率增长速度高出西方国家1到2个百分点，仅2003-2009年间中国城市乳腺癌死亡率增长了38.91％。根据《2015中国癌症统计数据》结果提示，乳腺癌的发病率(10万分之272.4)和死亡率(10万分之70.7)均处在较高水平，成为45岁以下女性最主要的癌症致死原因。对于乳腺癌患者而言，病变发展到晚期，约50％乳腺癌会发生转移扩散，导致骨、肺、局部淋巴结、肝脏和大脑等多处病变，乳腺癌的转移部位与原发部位在细胞属性上存在明显差异，会对原发性乳腺癌的治疗方案产生抵抗，导致肿瘤治疗预后效果差且容易复发，成为治疗失败的重要原因。在中医理论指导下，中药抗肿瘤研究近年来进步较快，在抗乳腺癌方面已显示出独有特色，从中草药中寻找适宜的抗乳腺癌药物是一大趋势。

重楼为百合科植物云南重楼parispolyphyllasmithvar.yunnanensis(franch.)hand.-mazz.和七叶一枝花parispolyphyllasmithvar.chinensis(franch.)hara的干燥根茎，收载于2015版《中华人民共和国药典》(一部)，主产于四川、云南、陕西等地，为清热解毒类中药。在中医理论指导下，重楼已有上千年的应用历史，民间用于治疗疔疮痈肿等，目前临床常用于炎症、肿瘤的治疗。现已有楼莲胶囊、金复康口服液等几种复方成药在国内上市销售，它还是著名中成药云南白药、宫血宁胶囊等的主要组成药物。现代药理研究发现，重楼中发挥主要药效作用的是其中的甾体皂苷类成分，即重楼皂苷，重楼皂苷vii即为其中之一，目前，已发现重楼皂苷vii具有抗炎、抗肿瘤等生物活性，但重楼皂苷vii在抗乳腺癌中的应用目前尚未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种重楼皂苷vii的新用途，为提供重楼皂苷vii在治疗抗乳腺癌中新的药物用途。

本发明所采用的技术方案是：一种重楼皂苷vii的新用途，重楼皂苷vii在制备治疗抗乳腺癌药物中的应用。

本发明的特点还在于，

重楼皂苷vii作为制备治疗抗乳腺癌药物组合物时的主药。

重楼皂苷vii通过百合科植物滇重楼、七叶一枝花、延龄草中任一获取，作为制备抗乳腺癌药物组合物时的主药。

重楼皂苷vii作为制备抗乳腺癌药药物组合物中主药的质量百分含量为0.1％～99.9％。

本发明的有益效果是：本发明的一种重楼皂苷vii的新用途，对乳腺癌细胞株和小鼠移植瘤的生长均具有良好的抑制作用，能够诱导乳腺癌细胞发生凋亡。重楼皂苷vii抗乳腺癌活性高且作用明确，同时可配以临床上接受的赋形剂，制备成口服剂型(片剂，酊剂，可分散性粉剂，颗粒剂，乳剂，糖浆剂，硬胶囊，软胶囊等)或者非口服剂型(注射剂，喷雾剂，贴剂等)用于乳腺癌的治疗。

附图说明

图1是本发明一种重楼皂苷vii的新用途的重楼皂苷vii诱导乳腺癌细胞发生凋亡图；

图2是图1中一种重楼皂苷vii的新用途的重楼皂苷vii诱导乳腺癌细胞发生凋亡比率图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

重楼皂苷vii，其化学结构为：

重楼皂苷vii通过现有提取方法能够从百合科植物滇重楼、七叶一枝花、延龄草中任一一种获取，或通过化学合成途径获得。

本发明提供了一种重楼皂苷vii的新用途，具体实验过程如下：

实施例一

重楼皂苷vii体外对乳腺癌细胞的生长抑制作用

1、实验方法

人乳腺癌细胞mcf-7、zr-75-30、mda-mb-231分别生长于含10％胎牛血清，100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素的mem培养基、rpmi-1640培养基、l-15培养基中，置于含5％co2，37℃培养箱里培养。

取对数生长期的细胞配制成5×10⁴个/ml浓度细胞悬液，每孔100μl接种于96孔板中培养24小时，待细胞充分贴壁后，弃去原有培养基，加入由培养基配制成的不同浓度梯度的重楼皂苷vii，每孔100μl。37℃分别培养24、48、72小时，培养结束后每孔加入5mg/ml的mtt10μl继续培养4小时后弃去上清液，每孔加入dmso150μl，微量振荡器振荡10分钟以充分溶解结晶物。利用酶标仪在492nm波长下测定各孔吸光值(a值)，按以下公式计算药物对肿瘤细胞体外增殖的抑制率(inhibitoryratio，ir)。

ir(％)＝[a492(control)-a492(sample)]/[a492(control)-a492(blank)]×100％

2、实验结果

重楼皂苷vii作用三种不同的乳腺癌细胞株24、48、72小时后，有不同程度的细胞增殖抑制作用，且其生长抑制作用呈浓度依赖性，半数抑制浓度(ic50)如表1所示。

表1重楼皂苷vii作用不同乳腺癌细胞株的ic50值

实施例二

重楼皂苷vii诱导乳腺癌细胞凋亡

1、实验方法

收集对数生长期的mcf-7、zr-75-30、mda-mb-231细胞，用不含edta的0.25％的胰酶消化，接种于6孔板，调整细胞数目为每孔1.0×10⁵个，培养24小时，之后弃去培养基，加入重楼皂苷vii(浓度分别为12、10、36μmol/l)，处理细胞24小时。同时设置0h的annexinv-fitc和pi的单染孔做对照。24小时后，将细胞上清液转移至15ml离心管内，pbs洗涤2次，加入不含edta的胰酶消化细胞，之后转移至离心管中，加入培养基终止消化，500×g离心5min，去除上清液，滤纸倒扣滤干。用1mlpbs将细胞重悬后转移至1.5mlep管中，轻轻吹打均匀后500×g离心5min。弃上清液，多余液体用滤纸条吸干。加入400μl1×bindingbuffer重悬细胞，再加入5μlannexinv-fitc轻轻混匀，室温避光孵育15min，之后加入10μlpi染液，轻轻混匀，冰浴避光孵育5min。重悬后，滤网过滤，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。

2、实验结果

实验结果如图1所示，重楼皂苷vii诱导乳腺癌细胞发生凋亡；如图2所示则为重楼皂苷vii诱导乳腺癌细胞发生凋亡比率；其三种乳腺癌细胞株经重楼皂苷vii处理24小时后，均发生凋亡，与空白对照组相比具有显著性差异。

实施例三

重楼皂苷vii体内抗乳腺癌小鼠移植瘤实验

1、实验方法

取balb/c小鼠，将动物分笼饲养，适应环境3天后开始实验。取对数生长期的小鼠4t1乳腺癌细胞，胰蛋白酶消化，离心，去上清，计数，生理盐水调细胞浓度至2×10⁷个/ml，将细胞接种于小鼠右前肢腋窝皮下，0.1ml/只，并记为接种第1天。每隔2天记录移植瘤长径(a)、短径(b)，及小鼠体重，按下列公式计算肿瘤体积(v)，v＝a×b²/2。待肿瘤长至100mm³时，将动物随机分为4组，每组6只：(1)空白对照组：腹腔注射生理盐水，0.2ml/只；(2)环磷酰胺对照组：按20mg/kg腹腔注射环磷酰胺；(3)重楼皂苷vii低剂量组：按5mg/kg腹腔注射重楼皂苷vii；(4)重楼皂苷vii高剂量组：按10mg/kg腹腔注射重楼皂苷vii；各组均连续给药15天。停药次日，称重后，麻醉，处死小鼠。完整剥离肿瘤，去除血污、脂肪等非肿瘤组织，称瘤体重量，计算肿瘤生长抑制率。肿瘤生长抑制率(％)＝(1-给药组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100％。小鼠免疫器官脏器指数的测定：处死小鼠后，剥离脾脏和胸腺，称重后，计算脏器指数，脏器指数＝脏器重量(mg)/动物体重(g)。

2、实验结果

重楼皂苷vii及阳性对照药环磷酰胺给予荷瘤小鼠15天后，对荷瘤小鼠体重、肿瘤体积、瘤重等有不同程度的影响，具体数据如表2所示。

表2重楼皂苷vii对荷瘤小鼠体重、肿瘤体积、瘤重、抑瘤率的影响

处死小鼠后，解剖取脾、胸腺，计算免疫器官脏器指数，具体如表3所示。

表3不同药物对荷瘤小鼠免疫器官脏器指数影响

实验1～实验3证明，重楼皂苷vii对乳腺癌细胞株和小鼠移植瘤的生长均具有良好的抑制作用：(1)重楼皂苷vii在体外对人乳腺癌细胞mcf-7，zr-75-30，mda-mb-231均有很强的生长抑制作用，48小时的半数抑制浓度(ic50)值分别为7.72μmol/l、7.16μmol/l、19.83μmol/l；(2)能够诱导乳腺癌细胞发生凋亡；(3)能够对乳腺癌小鼠体内移植瘤产生明显的生长抑制作用，10mg/kg剂量组的抑瘤率也可达到41.63％，可明显抑制荷瘤小鼠皮下移植瘤的生长，并可提高荷瘤小鼠脾脏指数与胸腺指数。

重楼皂苷vii抗乳腺癌活性高且作用明确，同时可配以临床上接受的赋形剂，制备成口服剂型(片剂，酊剂，可分散性粉剂，颗粒剂，乳剂，糖浆剂，硬胶囊，软胶囊等)或者非口服剂型(注射剂，喷雾剂，贴剂等)，制备成临床给药制剂用于乳腺癌的治疗。