本发明涉及用于活化某些人细胞中的nrf2的局部组合物。nrf2的活化对于抗衰老益处来说至关重要。
背景技术：
人皮肤由两个重要的层组成：称为真皮的较厚层和位于其上的称为表皮的较薄层。真皮负责强度、弹性和厚度。随着衰老，该层的厚度减小，据信这是衰老皮肤中皱纹出现的部分原因。表皮由提供弹性和屏障性质的多种细胞组成。角质形成细胞占表皮中细胞总数的75-80％。在表皮内，角质形成细胞以四个不同分化阶段存在。这种分化对于皮肤的某些基本功能(即对于对抗环境因素的保护屏障和防止机体水分流失)来说是必需的。皮肤主要由三种主要类型的细胞组成，它们是角质形成细胞、黑素细胞和成纤维细胞。
2相酶(phase-2enzyme)是主要的解毒酶，并且是细胞抵御氧化剂和其它有毒化学物质的重要部分。
虽然每个单独的2相基因可能通过多种机制得到调控，但对于许多2相基因共有的是keap1-nrf2-are信号传送系统。nrf2，核因子红细胞2-相关因子2，是通常被其阻遏物keap1隔离的转录因子。与keap1的结合促进nrf2的蛋白酶体降解。nrf2从keap1的解离允许前者与配偶体(partner)异二聚化(heterodimerize)，与顺式作用的dna调控元件结合，并促进下游基因的转录。nrf2异二聚体所结合并活化的dna调控元件称为抗氧化反应元件(are)。已知典型的are序列的一个或多个拷贝存在于包括ho-1在内的2相基因的5'-旁侧区域中。
每种细胞类型其本身或鉴于与其它类型的相互作用都在皮肤的外观和健康方面发挥独特作用。核因子红细胞2-相关因子2(nrf2)是皮肤对氧化应激反应的主要调节剂，其充当保护机制。nrf2调节各种酶的下游表达，所述酶调节抗氧化机制和解毒机制。因此，诱导nrf2活化的化学试剂普遍用作筛选物(screens)以鉴定适于各种皮肤益处(包括抑制黑素细胞中黑色素的合成以及抑制成纤维细胞和角质形成细胞中的活性氧)的活性物质。
草药提取物以其解毒效果而闻名，并且已知某些提取物上调nrf2的表达。目前可以通过使用基于抗氧化反应元件(are)细胞系的高通量筛选来确定草药的潜能。一些草药诱导nrf2的部分活化，其可能是2至3倍增加的量级。
wo14095198a1(unilever)公开了在化妆品组合物中使用茶(camelliasinensis)的提取物用于增强皮肤的免疫力。
wo13060710a2(unilever)公开了局部化妆品组合物，其含有用于抗炎益处的选定比率的绿茶提取物和红茶提取物。
us5306486a(unilever，1994)公开了化妆品组合物，其包含绿茶和防晒化合物。该组合物阻挡紫外线辐射。
us2005/0084566a1(bavan)公开了生产可溶于热水中的速溶茶的方法，其包括以下步骤：(a)通过用硬温水处理红茶叶形成提取物，(b)通过使茶提取物在部分真空下通过闪蒸器来提馏其芳香挥发物提取物，(c)通过使提取物经历反复澄清和抛光以获得澄清的浓缩物来从提取物分离至少12重量％的不溶性固体，(d)从澄清的浓缩物分离6-10％可溶性固体，(e)通过加入食用酸将浓缩物的ph调节至中性，(f)将在步骤(b)中获得的芳香挥发物加入浓缩物中，和(g)获得基本上不含水分的茶粉，其能够在热水中复原以产生基本上无浑浊(haze)和模糊不清(cloudiness)的速溶茶。在该方法中，将芳香物添加回不含不溶性物质的浓缩物中，并且该方法涉及热水可溶性速溶茶的生产，已知所述速溶茶基本上不含热水不溶性茶固体。
us2007/0160737a1(联合利华)公开了制造作为饮料消费的芳香绿茶产品的方法，其包括以下步骤：提供包含重量比为至少0.7:1的t-2-己烯醛和芳樟醇的芳香组合物，并将该芳香组合物与茶产品组合。
cn102091006a(longrunteagroup，2011)公开了洁面乳，其包含5-20重量％的茶提取物、5-20重量％的辅酶q10、5-20重量％的余甘果(emblicaoffcinalis)汁和其它物质。据称该洁面乳提供抗紫外线、抗氧化、收缩毛孔、抗菌、抗痤疮、脱脂、抗辐射性、抗过敏性、多余脂肪去除、保湿、抗衰老、平滑和弹力改善、皱纹和细微纹沟预防以及游离碱去除；并且据称皮肤免疫力在长期使用后增强，从而保护在有害环境中的皮肤。
us20080050459a1(3labinc)公开了化妆品制剂，其包含有效量的余甘子(phyllanthusemblica)果实提取物和至少一种寡肽如寡肽-4和寡肽-5(原弹性蛋白寡肽)。该化妆品制剂可进一步包含甘草提取物和α-熊果苷。该化妆品制剂意图用于细纹和皱纹和/或亮肤。
adhikari等人已在internationaljournalofcosmeticscience,2008,30,353-360中公开了草药(例如余甘果和茶)提取物具有抑制酪氨酸酶活性的能力，但该活性被评定为小于其它草药(如光果甘草(glycyrrhizaglabra)和桑(morusalba))的50％。
chaudhuri等人在cosmetics&toiletries122(2007),pp.73-80中讨论了余甘子中包含的单宁类对黑色素合成的抑制效果。
技术实现要素：
植物的植物提取物广泛用于化妆品组合物和药物组合物中。通常，它们组合使用，即作为两种、三种、四种或甚至更多种植物的分开或混合的提取物使用。大多数时间，提取物发挥它们自身的作用，例如，植物x的根的提取物润湿皮肤，而另一植物y的叶的提取物增加皮肤弹性。极少有这样的提取物，已知它们彼此相互作用以提供全新的效果或比它们的单独效果之和更多的效果。
我们在体外测试条件下已意外地观察到第一植物余甘果和第二植物茶的植物提取物之间的协同相互作用。提取物协同相互作用，这通过活化成纤维细胞或黑素细胞中至少之一的nrf2或其下游基因显露其自身。
根据第一方面，公开了局部组合物，其包含：
(i)第一提取物，其包含从余甘果提取的植物活性物；和
(ii)第二提取物，其包含从茶提取的挥发性植物活性物，
其中所述第二提取物包含按重量份计0.1:1至10:1比率的e-2-己烯醛和芳樟醇。
根据第二方面，公开了第一方面的局部组合物用于活化nrf2的用途。
根据第三方面，公开了第一方面的局部组合物用于上调黑素细胞中血红素加氧酶1(ho-1)的基因表达的用途。
根据第四方面，公开了第一方面的局部组合物用于上调成纤维细胞中nqo1的基因表达的用途。
根据第五方面，公开了活化nrf2的方法，其包括施用第一方面的局部化妆品组合物的步骤。
根据第六方面，公开了上调黑素细胞中ho1的基因表达的方法，其包括施用第一方面的局部组合物的步骤。
根据第七方面，公开了上调成纤维细胞中nqo1的基因表达的方法，其包括施用第一方面的局部组合物的步骤。
根据另一方面，公开了第一方面的局部组合物，其用于活化nrf2。
根据另一方面，公开了第一方面的局部组合物，其用于上调黑素细胞中ho1的基因表达。
根据另一方面，公开了局部组合物，其用于上调成纤维细胞中nqo1的基因表达。
根据另一方面，公开了包含从余甘果提取的植物活性物的第一提取物和包含从茶提取的挥发性植物活性物的第二提取物在制备用于活化nrf2的局部组合物中的用途，其中所述第二提取物包含按所述提取物的重量份计0.1:1至10:1比率的e-2-己烯醛和芳樟醇。
根据另一方面，公开了包含从余甘果提取的植物活性物的第一提取物和包含从茶提取的挥发性植物活性物的第二提取物在制备用于上调黑素细胞中ho1的基因表达的局部组合物中的用途，其中所述第二提取物包含按所述提取物的重量份计0.1:1至10:1比率的e-2-己烯醛和芳樟醇。
根据另一方面，公开了包含从余甘果提取的植物活性物的第一提取物和包含从茶提取的挥发性植物活性物的第二提取物在制备用于上调成纤维细胞中nqo1的基因表达的局部组合物中的用途，其中所述第二提取物包含按所述提取物的重量份计0.1:1至10:1比率的e-2-己烯醛和芳樟醇。
具体实施方式
对于本领域的普通技术人员来说，通过阅读下列详细描述和所附权利要求书，这些和其它方面、特征和优点会变得明显。
以”x至y”/“x-y”的形式表达的数值范围被理解为包括x和y。当针对特定特征，以”x至y”/“x-y”的形式描述多个优选范围时，应理解组合不同端点的所有范围均也被涵盖。
如本文所用，术语“包含”/“包括”涵盖术语“基本上由……组成”和“由……组成”。在使用术语“包含”/“包括”的情况下，所列的步骤或选项不必是穷尽的。除非另外指明，否则将以”x至y”/“x-y”的形式表达的数值范围理解为包括x和y。在指定任何值或量的范围时，任何特定的上限值或量可以与任何特定的下限值或量相关联。除了在实施例和比较例中，或者除非另有明确说明，否则所有数字应被理解为由词语“约”修饰。除非另外指明，否则本文中包含的所有百分比和比率均按重量计算。除非另外指定，否则如本文所用，不定冠词“a”或“an”和其相应的定冠词“the”是指至少一个或者一个或多个。以上单独小节中提及的本发明的各种特征在适当时适用于其它小节(加上必要的变更)。因此，在一个小节中指定的特征可以适当地与在其它小节中指定的特征组合。小节标题仅为方便而添加，而不旨在以任何方式限制本公开。
余甘果
余甘子(amla)是阿育吠陀草药。其为植物余甘果(emblicaofficinalis)的果实，也称为余甘子(phyllanthusemblica)。该果实也被称为印度醋栗。该植物是大戟科的一员，生长到中等大小的树，其在遍及印度次大陆的平原和山前地区中可见。其用于许多食用草药制剂以及化妆品组合物中。在下文中详述余甘果的提取物的来源和产地。
优选来自余甘果的植物活性物是通过水醇提取从其根、茎、叶或树皮提取的。优选第一提取物包含按所述提取物的重量计大于5重量％的鞣花酸。此外，提取物还包含维生素c。这样的提取物可以在名为phytolifesciencespvtltd,india的供应商处商购，其网站为http://www.plpl.in/herbal-extract-india.htm。
第一提取物用作本发明的组合物中的成分。优选本发明的局部组合物包含占所述第一提取物的0.001-10重量％的量的从余甘果提取的植物活性物。
茶
本发明的组合物包含来自茶的挥发性植物提取物，所述茶是茶植物。该植物为中国茶(camelliasinensisvar.sinensis)。或者，其为阿萨姆茶(camelliasinensisvar.assamica)。另外或者，挥发性植物提取物由以上两个品种的组合获得。
优选来自茶的挥发性植物活性物是从其叶或纤维提取的，或者所述活性物包含在通过挥发性植物活性物的真空提馏、水蒸气蒸馏或分馏而获得的馏分中。
用于制备来自茶的挥发性植物活性物的优选方法如下：
该方法包括从植物鲜叶压榨出汁的第一步骤。该步骤留下经压榨的叶的残余物。将残余物在干燥器中干燥。该步骤导致干燥的叶残余物和富含芳香化合物的干燥器排气。芳香化合物作为芳香冷凝物从排气中回收。该方法的更多细节可见于us2007/0160737a1(unilever)。
优选蒸馏芳香冷凝物以浓缩之。该芳香冷凝物是从茶提取的挥发性植物活性物。活性物包含按重量份计0.1:1至10:1比率的e-2-己烯醛和芳樟醇。
优选比率为0.1:1至5:1。除了上述两种成分之外，提取物优选包含其它挥发性成分，即水杨酸甲酯。茶的挥发性提取物与其它地方报道的各种其它提取物的区别在于其中存在的两种重要成分的特定比率。优选从茶提取的挥发性植物活性物包含大于80重量％的挥发性成分，更优选大于90重量％且还更优选大于95重量％的挥发性成分。另一区别点在于其它地方报道的提取物通常是指含有大量非挥发性成分的提取物。含有茶提取物的一些其它现有技术组合物含有挥发性成分以及非挥发性成分，其中一种或两种成分是缺失的或比率是完全不同的。
优选本发明的组合物包含占所述第二提取物的0.001-10重量％的量的从茶提取的挥发性植物活性物。
本发明的组合物的进一步细节
如本文所用，“局部组合物”意图包括用于为更好的皮肤健康益处而施用至外表面(例如哺乳动物尤其是人的皮肤)的组合物。进一步优选本发明的组合物为化妆品组合物。进一步优选本发明的组合物是免洗型或冲洗型组合物，优选免洗型组合物，并包括主要为增强皮肤健康而施用至人体但也可为改善外观、清洁、气味控制或一般美学而使用的任何产品。如本文所用，“皮肤”意图包括面部和身体(例如，颈部、胸部、背部、手臂、腋下、手、腿、臀部和头皮)上的皮肤并且尤其意指眼周(under-eye)的面部。本发明的局部组合物尤其可用于施用至出现皱纹或更可能出现皱纹的皮肤区域上，尤其是身体暴露于太阳的部分。
本发明的组合物可以是液体、洗剂、乳膏、泡沫、擦洗剂、凝胶、皂条或爽肤水的形式，或者用器具或经由面膜、垫或贴施用。皮肤组合物的非限制性实例包括免洗型皮肤洗剂和乳膏、洗发香波、护发素、沐浴露、盥洗皂条(toiletbar)、止汗剂、除臭剂、脱毛剂、唇膏、粉底、睫毛膏、免晒美黑剂(sunlesstanner)和防晒露。
本发明的组合物可以根据制备这种组合物的通常方式制备。可以参考标准教科书和配方指南。
当化妆品组合物为化妆品组合物时，其优选包含基料，优选皮肤/化妆品可接受的载体。载体充当稀释剂、分散剂或载体。载体可包括通常用于皮肤组合物中的材料如水、液体或固体润肤剂、推进剂、粉末、乳化剂、溶剂、保湿剂、增稠剂。本发明的组合物中的载体是单一媒介物或者一种或多种媒介物的混合物。优选载体以80重量％至99重量％，优选85重量％至90重量％存在于皮肤组合物中。
本发明的组合物还会包含化妆品可接受的载体。水是最优选的载体。水的量例如可以为化妆品组合物的1-99重量％，优选5-90重量％，更优选35-70重量％，最佳为40-60重量％。通常组合物会是水油乳液，其在一些实施方案中可以是水包油乳液。优选的乳液为油包水种类。
在载体是乳液的情况下，优选颗粒分散在水油乳液的油相中，因为这可以改善组合物中染料的稳定性。
在本发明的组合物中可以包含润肤剂材料作为载体。这些可以为硅油、合成酯和/或烃的形式。润肤剂的量可以例如为组合物的约0.1-95重量％，更优选约1-50重量％的任何范围/数值。
硅油可以分为挥发性和非挥发性种类。如本文所用，术语“挥发性”是指在环境温度(25℃)下具有可测量的蒸气压的那些材料。挥发性硅油优选选自含有3-9，优选4-5个硅原子的环状聚二甲基硅氧烷(环聚二甲基硅氧烷)或线性聚二甲基硅氧烷。在许多液体状态的本发明的组合物中，挥发性硅油作为载体可以形成组合物的相对大组分。量可以为例如组合物的5重量％至80重量％，更优选20重量％至70重量％。
可用作润肤剂材料的非挥发性硅油包括聚烷基硅氧烷、聚烷基芳基硅氧烷和聚醚硅氧烷共聚物。本文可用的基本上非挥发性的聚烷基硅氧烷包括例如聚二甲基硅氧烷。本发明的组合物中可用的优选非挥发性润肤剂包括聚二甲基硅氧烷。
可以有效地采用有机聚硅氧烷交联聚合物。这些材料的代表为可由许多供应商获得的聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物和聚二甲基硅氧烷交联聚合物，包括dowcorning(9040、9041、9045、9506和9509)、generalelectric(sfe839)、shinetsu(ksg-15、16和18[聚二甲基硅氧烷/苯基乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物])和grantindustries(
当聚硅氧烷作为载体大量存在并且水也存在时，体系可能是油连续的。这些通常会要求用油包水乳化剂如聚二甲基硅氧烷共聚醇(例如
酯润肤剂包括：
a)具有10-20个碳原子的脂肪酸的烯基或烷基酯。其实例包括新戊酸异二十烷基酯、新戊酸异癸酯、异壬酸异壬酯(isononylisonanoate)、蓖麻油酸十六烷基酯、肉豆蔻酸油醇酯、硬脂酸油醇酯和油酸油醇酯。
b)醚-酯如乙氧基化脂肪醇的脂肪酸酯。
c)多元醇酯。丁二醇、乙二醇单和二脂肪酸酯、二乙二醇单和二脂肪酸酯、聚乙二醇(200-6000)单和二脂肪酸酯、丙二醇单和二脂肪酸酯、聚丙二醇2000单油酸酯、聚丙二醇2000单硬脂酸酯、乙氧基化丙二醇单硬脂酸酯、甘油基单和二脂肪酸酯、聚甘油聚脂肪酯(polyglycerolpoly-fattyester)、乙氧基化甘油基单硬脂酸酯、1,3-丁二醇单硬脂酸酯、1,3-丁二醇二硬脂酸酯、聚氧乙烯多元醇脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯和聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯是令人满意的多元醇酯。特别有用的是c1-c30醇的季戊四醇、三羟甲基丙烷和新戊二醇酯。示例为季戊四醇四乙基己酸酯。
d)蜡酯如蜂蜡、鲸油蜡和三山嵛精蜡。
e)甾醇酯，其实例为胆固醇脂肪酸酯。
f)脂肪酸糖酯如蔗糖多山嵛酸酯和蔗糖多棉子油酸酯。
特别有用的还有以
为适合的化妆品可接受的载体的烃包括矿脂、矿物油、c11-c13异构烷烃、聚α烯烃，并且尤其是异十六烷，可作为
多元醇型保湿剂可以作为化妆品可接受的载体使用。典型的多元醇包括聚亚烷基二醇，且更优选亚烷基多元醇和它们的衍生物，包括丙二醇、二丙二醇、聚丙二醇、聚乙二醇及其衍生物、山梨糖醇、羟丙基山梨糖醇、己二醇、1,3-丁二醇、异戊二醇、1,2,6-己三醇、甘油、乙氧基化甘油、丙氧基化甘油及其混合物。保湿剂的量可以为组合物的0.5-50重量％，更优选1-15重量％的任何范围/数值。最优选甘油(glycerol，也称为glycerin)。甘油的量可以为组合物的1重量％至50重量％，更优选10-35重量％，最佳为15-30重量％。
除了化妆品可接受的载体，本发明的组合物还可包含多种其它功能成分。在本发明的组合物中可包含防晒剂活性物。这些会是具有至少一个吸收290-400nm的紫外光的生色团的有机化合物。生色有机防晒剂可以分为以下种类(具有具体实例)，包括：对氨基苯甲酸、其盐及其衍生物(乙基、异丁基、甘油基酯；对二甲氨基苯甲酸)；氨基苯甲酸酯(邻氨基苯甲酸酯；甲基、薄荷基、苯基、苄基、苯乙基、芳樟基、萜品基和环己烯基酯)；水杨酸酯(辛基、戊基、苯基、苄基、薄荷基、甘油基和二丙二醇酯)；肉桂酸衍生物(薄荷基和苄基酯、α-苯基肉桂腈；丁基肉桂酰丙酮酸酯)；二羟基肉桂酸衍生物(伞形酮、甲基伞形酮、甲基乙酰-伞形酮)；三羟基肉桂酸衍生物(七叶亭、甲基七叶亭、瑞香素，以及糖苷七叶苷和瑞香苷)；烃(二苯基丁二烯、二苯乙烯)；二亚苄基丙酮和亚苄基乙酰苯；萘酚磺酸盐(2-萘酚-3,6-二磺酸和2-萘酚-6,8-二磺酸的钠盐)；二羟基-萘甲酸及其盐；邻和对羟基二苯基二磺酸盐；香豆素衍生物(7-羟基、7-甲基、3-苯基)；二唑(2-乙酰基-3-溴吲唑、苯基苯并噁唑、甲基萘并噁唑(methylnaphthoxazole)、各种芳基苯并噻唑)；奎宁盐(二硫酸盐、硫酸盐、氯化物、油酸盐和单宁酸盐)；喹啉衍生物(8-羟基喹啉盐、2-苯基喹啉)；羟基或甲氧基取代的二苯甲酮；尿酸和紫尿酸(vilouricacid)；单宁酸及其衍生物(例如六乙基醚(hexaethylether))；胡椒基丁醚((butylcarbityl)(6-propylpiperonyl)ether)；氢醌；二苯甲酮(羟苯甲酮、舒利苯酮、二羟苯宗(dioxybenzone)、苯酰间苯二酚、2,2',4,4'-四羟基二苯甲酮、2,2'-二羟基-4,4'-二甲氧基二苯甲酮、奥他苯酮、4-异丙基二苯甲酰甲烷；丁基甲氧基二苯甲酰甲烷；依托立林；和4-异丙基-二苯甲酰甲烷)。特别有用的是：对甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、4,4'-叔丁基甲氧基二苯甲酰甲烷、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、辛基二甲基对氨基苯甲酸、二棓酰基三油酸酯、2,2-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮、4-[双(羟丙基)]氨基苯甲酸乙酯、2-乙基己基-2-氰基-3,3-二苯基丙烯酸酯、2-乙基己基水杨酸酯、对氨基苯甲酸甘油酯、3,3,5-三甲基环己基水杨酸酯、邻氨基苯甲酸甲酯、对二甲氨基苯甲酸或氨基苯甲酸酯、对二甲基氨基苯甲酸2-乙基己酯、2-苯基苯并咪唑-5-磺酸、2-(对二甲氨基苯基)-5-锍基苯并噁唑酸和它们的混合物。
特别优选的为这样的材料，如以parsol
在组合物中可以包含多种增稠剂。示例性但非限制性的实例为硬脂酸、丙烯酰胺/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(aristoflex
可以将防腐剂合意地掺入本发明的化妆品组合物中以防止潜在的有害微生物的生长。用于本发明的组合物的合适传统防腐剂为对羟基苯甲酸的烷基酯。其它最近使用的防腐剂包括乙内酰脲衍生物、丙酸盐和多种季铵化合物。化妆品化学家熟悉合适的防腐剂并且常规地选择它们以满足防腐挑战测试并且提供产品稳定性。特别优选的防腐剂为苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯、咪唑烷基脲、脱氢醋酸钠和苄醇。应顾及组合物的用途和防腐剂与组合物中其它成分之间的可能不兼容性来选择防腐剂。防腐剂优选以组合物的0.01重量％至2重量％的量使用。
本发明的组合物还可含有维生素和黄酮类化合物。示例性的水溶性维生素为烟酰胺、维生素b2、维生素b6、维生素c和生物素。可用的水不溶性维生素包括维生素a(视黄醇)、维生素a棕榈酸酯、抗坏血酸四异棕榈酸酯、维生素e(生育酚)、维生素e乙酸酯和dl-泛醇。特别合适的维生素b6衍生物为吡哆素棕榈酸酯。优选的黄酮类化合物包括葡糖基橙皮苷和芸香苷。当在本发明的组合物中存在时，维生素或黄酮类化合物的总量可例如为组合物的0.001-10重量％，更优选0.01-1重量％，最佳为0.1-0.5重量％。
脱屑剂是另外任选的组分。示例为α-羟基羧酸和β-羟基羧酸以及这些酸的盐。前者包括乙醇酸、乳酸和苹果酸的盐。水杨酸为β-羟基羧酸的代表。当存在时这些材料的量可为组合物的0.1-15重量％。
本发明的组合物中可任选地包含多种草本提取物。示例为石榴、白桦树(betulaalba)、绿茶、洋甘菊、甘草、齿叶乳香树、橄榄(油橄榄)叶、山金车花、薰衣草和它们的提取物组合。提取物可以是水溶性或水不溶性的，分别在亲水性或疏水性的溶剂中进行。水和乙醇为优选的提取溶剂。
可适于本发明的组合物的混杂的其它辅助化妆品成分包括神经酰胺(例如神经酰胺3和神经酰胺6)、共轭亚油酸、着色剂(例如铁氧化物)、金属(锰、铜和/或锌)葡糖酸盐、尿囊素、棕榈酰五肽-3、氨基酸(例如丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸和它们的混合物)、三甲基甘氨酸、pca钠、螯合剂如edta二钠、乳浊剂如二氧化钛、天冬氨酸镁和它们的组合。量可为组合物的0.000001-3重量％。
可以存在少量乳化表面活性剂。表面活性剂可为阴离子、非离子、阳离子、两性和它们的混合物。含量可例如为0.1-5重量％，更优选0.1-2重量％，最佳为0.1-1重量％。有利地，表面活性剂的存在量应不足以使泡沫形成。在这些情况下，存在小于2重量％，优选小于1重量％，且最佳小于0.5重量％的表面活性剂。可使用乳化剂如peg-100硬脂酸酯以及乳液稳定剂如鲸蜡硬脂醇并且可使用鲸蜡硬脂醇聚醚-20，且通常以不超过组合物的5重量％的量使用。
适用于本发明的组合物的其它任选的添加剂包括用以增强保湿的阳离子铵化合物。这样的化合物包括羟丙基三(c1-c3烷基)铵单取代的糖的盐、羟丙基三(c1-c3烷基)铵单取代的多元醇的盐、二羟丙基三(c1-c3烷基)铵盐、二羟丙基二(c1-c3烷基)单(羟乙基)铵盐、瓜尔羟丙基三甲基铵盐、2,3-二羟丙基三(c1-c3烷基或羟烷基)铵盐或它们的混合物。在最优选的实施方案中并且当需要时，本发明中采用的阳离子铵化合物为季铵化合物1,2-二羟丙基三甲基氯化铵。如果使用，这样的化合物通常占组合物的0.01-30重量％，且更优选约0.1重量％至约15重量％。
当使用阳离子铵化合物时，与其一起使用的任选的添加剂为保湿剂如取代的脲如羟甲基脲、羟乙基脲、羟丙基脲；双(羟甲基)脲；双(羟乙基)脲；双(羟丙基)脲；n,n'-二羟甲基脲；n,n'-二羟乙基脲；n,n'-二羟丙基脲；n,n,n'-三羟乙基脲；四(羟甲基)脲；四(羟乙基)脲；四(羟丙基)脲；n-甲基-n'-羟乙基脲；n-乙基-n'-羟乙基脲；n-羟丙基-n'-羟乙基脲和n,n'-二甲基-n-羟乙基脲或它们的混合物。当术语羟丙基出现时，含义为3-羟基-正丙基、2-羟基-正丙基、3-羟基-异丙基或2-羟基-异丙基的统称。最优选羟乙基脲。后者从nationalstarch&chemicaldivisionofici以商品名
当使用时，基于组合物的总重量，本发明的组合物中取代的脲的量为0.01-20％，更优选0.5-15％，并且最优选2-10％，并且包括所有包括在其中的范围。
当使用阳离子铵化合物和取代的脲时，在最特别优选的实施方案中，基于组合物的总重量，使用至少0.01-25％，更优选0.2-20％，并且最优选1-15％的保湿剂如甘油，并且包括所有包括在其中的范围。
当制备本发明的组合物时，通常将成分在大气条件下以适中的剪切混合。优选地，组合物显示4-6的ph。
用于本发明的组合物的包装可以是化妆品、乳膏、洗涤和洗液类型产品常见的罐或管以及任何其它形式。可局部施用组合物，并且优选每平方厘米皮肤施用1-4毫克组合物。组合物优选在包装形式中基本上为白色或无色(透明的)，但在施用至皮肤时可转变为有色组合物。
本发明的方法和用途
在一个方面，用途本质上是非治疗性的。或者，其本质上是治疗性的。当用途本质上是非治疗性的时，其优选用于美容目的。
在一个方面，本发明的方法本质上是非治疗性的。或者，其本质上是治疗性的。当方法本质上是非治疗性的时，其优选用于美容目的。
与组合物的用途有关的优选方面的描述经必要的变更适用于本发明的方法。
本发明的方法可通过施用至需要改善表皮皮肤屏障益处的皮肤来每日一次或多次进行。所使用的组合物的量及其施用频率可以变化。通常，将少量组合物(例如0.1-5ml)施用至皮肤。随后可任选地进行冲洗步骤，这取决于组合物是否被配制成“免洗型”或“冲洗型”产品。
现在会通过以下非限制性实施例说明本发明。
实施例
实施例1：arec32中的nrf2活化
余甘果果实的水醇提取物的来源是印度艾哈迈达巴德phytolifesciencesp.ltd(http://phytoherbs.in/product.html)。其可从该供应商处商购。余甘果的产地是印度。在使用前，将提取物用如下所述的成纤维细胞的细胞培养基稀释至0.001％。
通过遵循us2007/0160737a1(unilever)中公开的方法，内部获得茶的挥发性植物提取物。植物的产地是印度。提取物含有按重量份计0.14:1比率的e-2-己烯醛和芳樟醇。使用前，使用与上述相同的细胞培养基将提取物稀释至0.001％。
arec32细胞获自crxbiosciences(英国苏格兰邓迪)。将arec32细胞以2x104细胞/孔的密度接种到96孔板(平底白色、不透明、无菌、有盖)中，每孔100μl完全培养基。然后将细胞板在37℃、5％co2下在95％湿润培养箱中孵育24小时，之后添加活性物。将叔丁基氢醌(tbhq)用作测定阳性对照。为了进行nrf2活性测定，使用购自promega的被动裂解缓冲液(plb)(5x)来裂解细胞。用蒸馏水以1:5的比率稀释plb以制备1xplb溶液。向96孔板的每个孔中加入20μl的1xplb，包括没有细胞的2个孔(对照孔)。用铝箔覆盖板以保护免受光的影响，并且在室温下在震荡培养箱中孵育20分钟。20分钟后，将18μl细胞裂解物从透明96孔细胞培养板转移到不透明、白色、平底96孔板。将白色平底板进行荧光素酶测定。通过使用来自promega的荧光素酶测定系统进行荧光素酶测定。使用tecaninfinitem1000仪器上的注射器加入80μl荧光素酶试剂。使用绿色1过滤器测量发光10秒的时间段。使用2秒的典型延迟时间和10秒的读取时间。在1min内从各孔获取4个读数。将板前进到下一个孔以重复注入-然后-读取过程。在表1中，荧光素酶值表示为相对于对照的倍数变化。
表1
注：
-对经受缺氧萎凋(90分钟)的茶叶也进行水性提取，并且在实验中使用提取物。其仅显示1.86倍增加
-对经受非缺氧萎凋的茶叶也进行水性提取，并在实验中使用提取物。
其仅显示2.03倍增加
-仅芳樟醇几乎没有显示出相对于对照的任何改变
-仅e-2-己烯醛显示相对于对照仅1.1倍增加
-当与每个孔中的余甘果的植物提取物(1ml培养基含有500ppm提取物)组合时，芳樟醇相对于单独的余甘果没有显示改善
-当与每个孔中的余甘果的植物提取物(1ml培养基含有500ppm提取物)组合时，e-2-己烯醛相对于单独的余甘果没有显示改善
表1中的数据表明当两种提取物在一起时，nrf2的活化显著更高。数据进一步清楚地表明，总体效果是协同的，因为该效果大于它们单独效果的可预测的简单算术加和，并且在单独剂量的一半时也如此。
实施例2：黑素细胞中的ho1表达
将1*10^5hemn(人表皮黑素细胞新生期)铺板于12孔板中，并在37℃下在5％co2中孵育24小时。第二天加入活性物，并且在24小时后收获细胞。使用ambionpurelinkrna微型试剂盒(cat#12183020)从这些细胞提取总细胞rna。使用bio-radiscript(cat#1708891)进行cdna合成。然后使用用于ho1的特异性正向(aagactgcgttcctgctcaac)和反向(aaagccctacagcaactgtcg)引物进行qpcr。在我们的情况下，在bio-raddna引擎梯度循环仪系统(bio-raddnaenginegradientcyclersystem)中进行pcr40个循环。使用δδct方法计算倍数变化。(参考wo2010/046316a2，unilever)。观察结果在表2中列出。
表2
表2中的数据表明当两种提取物在一起时，ho1的基因表达显著更多。数据进一步清楚地表明，总体效果是协同的，因为该效果大于它们单独效果的可预测的简单算术加和，并且在单独剂量的一半时也如此。
实施例3：成纤维细胞中的nqo1表达
将1*10^5hdfa(人真皮成纤维细胞成熟期)铺板于12孔板中，并在37℃下在5％co2中孵育24小时。第二天加入活性物，并且在24小时后收获细胞。使用ambionpurelinkrna微型试剂盒(cat#12183020)从这些细胞提取总细胞rna。使用bio-radiscript(cat#1708891)进行cdna合成。然后使用用于nqo1的特异性正向(gaagagcactgatcgtactggc)和反向(ggatactgaaagttcgcaggg)引物进行qpcr。在我们的情况下，在bio-raddna引擎梯度循环仪系统中进行pcr40个循环。使用δδct方法计算倍数变化。(参考wo2010/046316a2，unilever)。观察结果在表3中列出。
表3
表3中的数据表明当两种提取物在一起时，nqo1的基因表达显著更多。数据进一步清楚地表明，总体效果是协同的，因为该效果大于它们单独效果的可预测的简单算术加和。