一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物的制作方法

文档序号:18941025发布日期:2019-10-23 01:09阅读:143来源:国知局
本发明属于中药领域,具体涉及一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物。
背景技术
:随着社会的发展,人们忙碌而紧张的工作,使得人体亚健康现象比较普遍,比如身体容易疲劳,免疫力较低,容易引起其他疾病的产生。亚健康状态使得人工作的效率降低,精神状态欠佳。现有技术中,直接使用西药调节亚健康状态一般不太适合,西药的副作用可能会给亚健康人群造成心理和身体上的不良影响。采用中药调节为一种较好的方式。但是现有技术中公开的中药大多没有进行一些实验来验证其具有缓解疲劳、提高免疫力的效果。即现有技术中药的效果不确定,缓解疲劳、提高免疫力的程度也不确定,长期服用是否会产生不良影响也没有得到验证。因此,提供一种组合物,其具有良好的、确定的缓解疲劳、提高免疫力的效果,且长期服用无不良影响,是十分有必要的。技术实现要素:针对现有技术的不足,本发明提供一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物。以小鼠为实验对象,验证所述组合物在缓解疲劳,提高免疫力方面的具体效果。另外,本发明还提供一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物的制备方法。一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物,按重量份数计,包括以下组分:优选的,一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物,按重量份数计,包括以下组分:优选的,所述酒中乙醇的体积分数为20-45%。优选的,所述酒中含有2,5-二甲基吡嗪。优选的,所述酒中,按质量分数计,所述2,5-二甲基吡嗪的含量为0.01-0.1%。优选的,所述组合物还包括马鹿茸、红景天和灵芝中的至少一种。进一步优选的,所述组合物,按重量份数计,还包括马鹿茸3-10份、红景天20-40份和灵芝20-40份中的至少一种。优选的,所述糖为冰糖、单糖(如葡萄糖)、双糖(如蔗糖、乳糖和麦芽糖)或低聚糖中的至少一种;进一步优选的,所述糖为冰糖。一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物的制备方法,包括以下步骤:(1)按配方量称取各组分,然后粉碎人参、甘草、当归、玛咖,过20-40目筛网,制得粉碎物,备用;(2)将步骤(1)制得的粉碎物搅拌混合,然后加入酒和茶多酚,浸泡40-60小时,然后渗漉,收集浸出液,再过滤,取滤液,备用;(3)将糖粉碎,过20-40目筛网,然后加入步骤(2)制备的滤液中,搅拌溶解,制得所述组合物。或者,一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物的制备方法,包括以下步骤:(1)按配方量称取各组分,然后粉碎人参、甘草、当归、玛咖、马鹿茸、红景天和灵芝,过20-40目筛网,制得粉碎物,备用;(2)将步骤(1)制得的粉碎物搅拌混合,然后加入酒和茶多酚,浸泡40-60小时,然后渗漉,收集浸出液,再过滤,取滤液,备用;(3)将糖粉碎,过20-40目筛网,然后加入步骤(2)制备的滤液中,搅拌溶解,制得所述组合物。优选的,步骤(2)中搅拌的速度为200-300转/分钟,搅拌的时间为20-40分钟,使得粉碎物充分混合。优选的,步骤(2)中浸泡的温度为10-30℃。优选的,步骤(3)之后还包括灌装、包装过程(所述灌装、包装过程为常规技术)。所述组合物需在0-10℃下保藏。一种缓解疲劳、提高免疫力的饮料,包含本发明所述的组合物。相对于现有技术,本发明的有益效果如下:(1)本发明所述组合物具有缓解疲劳、提高免疫力的功效。特别是人参、甘草、当归和酒的同时使用,使得本发明所述的组合物的缓解疲劳、提高免疫力的功效显著。另外,各组分的用量对所述组合物的功效也具有重要影响。(2)本发明制备得到的组合物长期使用也无副作用,十分适合亚健康人群使用。具体实施方式为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案,现列举以下实施例进行说明。需要指出的是,以下实施例对本发明要求的保护范围不构成限制作用。实施例1一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物,按重量份数计,包括以下组分:所述酒中乙醇的体积分数为25%。所述酒中含有2,5-二甲基吡嗪。所述酒中,按质量分数计,所述2,5-二甲基吡嗪的含量为0.05%。所述组合物,按重量份数计,还包括马鹿茸3份、红景天20份。一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物的制备方法,包括以下步骤:(1)按配方量称取各组分,然后粉碎人参、甘草、当归、玛咖、马鹿茸和红景天,过20目筛网,制得粉碎物,备用;(2)将步骤(1)制得的粉碎物搅拌混合,然后加入酒和茶多酚,浸泡45小时,然后渗漉,收集浸出液,再过滤,取滤液,备用;(3)将糖粉碎,过20目筛网,然后加入步骤(2)制备的滤液中,搅拌溶解,制得所述组合物。步骤(2)中搅拌的速度为200转/分钟,搅拌的时间为40分钟,使得粉碎物充分混合。步骤(2)中浸泡的温度为15℃。实施例2一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物,按重量份数计,包括以下组分:所述酒中乙醇的体积分数为45%。所述酒中含有2,5-二甲基吡嗪。所述酒中,按质量分数计,所述2,5-二甲基吡嗪的含量为0.08%。所述糖为冰糖。一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物的制备方法,包括以下步骤:(1)按配方量称取各组分,然后粉碎人参、甘草、当归、玛咖,过30目的筛网,制得粉碎物,备用;(2)将步骤(1)制得的粉碎物搅拌混合,然后加入酒和茶多酚,浸泡48小时,然后渗漉,收集浸出液,再过滤,取滤液,备用;(3)将糖粉碎,过30目的筛网,然后加入步骤(2)制备的滤液中,搅拌溶解,制得所述组合物。步骤(2)中搅拌的速度为300转/分钟,搅拌的时间为20分钟,使得粉碎物充分混合。步骤(2)中浸泡的温度为20℃。实施例3一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物,按重量份数计,包括以下组分:所述酒中乙醇的体积分数为35%。所述酒中含有2,5-二甲基吡嗪。所述酒中,按质量分数计,所述2,5-二甲基吡嗪的含量为0.03%。所述糖为冰糖。一种缓解疲劳、提高免疫力的组合物的制备方法,包括以下步骤:(1)按配方量称取各组分,然后粉碎人参、甘草、当归、玛咖,过40目筛网,制得粉碎物,备用;(2)将步骤(1)制得的粉碎物搅拌混合,然后加入酒和茶多酚,浸泡60小时,然后渗漉,收集浸出液,再过滤,取滤液,备用;(3)将糖粉碎,过40目筛网,然后加入步骤(2)制备的滤液中,搅拌溶解,制得所述组合物。步骤(2)中搅拌的速度为200转/分钟,搅拌的时间为30分钟,使得粉碎物充分混合。步骤(2)中浸泡的温度为25℃。对比例1与实施例2相比,对比例1中不含有甘草和当归,其余组分和制备过程与实施例2相同。对比例2与实施例2相比,对比例2中所述酒中不含2,5-二甲基吡嗪,且组合物中不含茶多酚,其余组分和制备过程与实施例2相同。对比例3与实施例2相比,对比例3中所述组合物人参50份,甘草8份,其余组分和制备过程与实施例2相同。产品效果测试抗疲劳测试实验动物:选用上海西普尔-必凯实验动物有限公司繁殖的健康spf昆明种小鼠200只,生产许可证号scxk(沪)2013-0016,合格证编号:2008001670384。各平行实验组初始体重范围为18-22g。按体重随机分为四大组(即i组、ii组、ⅲ组、ⅳ组),其中i组小鼠40只,分为4个小组,每组10只,进行负重游泳实验;ii组小鼠40只,分为4个小组,每组10只,进行血浆尿素测定;ⅲ组小鼠40只,分为4个小组,每组10只,进行肝糖原测定;ⅳ组小鼠40只,分为4个小组,每组10只,进行血乳酸测定。实验1:负重游泳实验将i组中的4个小组小鼠中的一个组灌胃去离子水作为空白对照组,另外一个小组灌胃实施例2制备的组合物,剩余两个小组分别灌胃对比例1和对比例2制备的组合物。按照0.02ml/g的标准,每天给小鼠灌胃,连续灌胃30天。最后一次灌胃30分钟后,小鼠尾根部负荷5%体重的铅丝,置于游泳箱中游泳,直至小鼠用不动为止(例如累死或累晕),测定各组小鼠的负重游泳时间,取平均值,结果如表1所示。表1:空白对照组实施例2对比例1对比例2游泳时间(分钟)95.8162.3132.2135.1从表1可以看出,实施例2制备的组合物灌胃小鼠后,小鼠的体力更好。另外,相同条件下灌胃对比例3制备的组合物,小鼠的游泳时间为145.5分钟。实验2:血浆尿素测定将ii组中的4个小组小鼠中的一个组灌胃去离子水作为空白对照组,另外一个小组灌胃实施例2制备的组合物,剩余两个小组分别灌胃对比例1和对比例2制备的组合物。按照0.02ml/g的标准,每天给小鼠灌胃,连续灌胃30天。最后一次灌胃30分钟后,在温度为30℃的水中不负重,游泳90分钟,休息60分钟后立即眼眶采血,取血浆测定各组小鼠游泳后血浆尿素水平,取平均值,结果如表2所示。表2:从表2可以看出,实施例2制备的组合物灌胃小鼠后,小鼠的血浆尿素运动后含量更低。实验3:肝糖原测定将ⅲ组中的4个小组小鼠中的一个组灌胃去离子水作为空白对照组,另外一个小组灌胃实施例2制备的组合物,剩余两个小组分别灌胃对比例1和对比例2制备的组合物。按照0.02ml/g的标准,每天给小鼠灌胃,连续灌胃30天。最后一次灌胃30分钟后,立即处死,取肝脏,测定各组小鼠肝糖原储备量,取平均值,结果如表3所示。表3:从表3可以看出,实施例2制备的组合物灌胃小鼠后,小鼠的肝中肝糖原储备量最高。另外,相同条件下灌胃对比例3制备的组合物,小鼠的肝中肝糖原含量为31.2mg/g肝。实验4:血乳酸测定将ⅳ组中的4个小组小鼠中的一个组灌胃去离子水作为空白对照组,另外一个小组灌胃实施例2制备的组合物,剩余两个小组分别灌胃对比例1和对比例2制备的组合物。按照0.02ml/g的标准,每天给小鼠灌胃,连续灌胃30天。最后一次灌胃30分钟后,眼眶采血(即安静状态),然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止,立即眼眶采血(即运动后0分钟),休息20min后再眼眶采血(即运动后20分钟),取血测定小鼠血乳酸含量的平均值,结果如表4所示。表4:从表4可以看出,实施例2制备的组合物灌胃小鼠后,小鼠经过相同运动后,小鼠血乳酸含量相对低,表明小鼠的抗疲劳能力更强。综上实验1-4的结果可以看出,服用本发明实施例2制备的组合物,小鼠的抗疲劳能力更强。免疫力测试实验动物由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供的健康spf昆明种小鼠,生产许可证号为scxk(沪)2012-0002。选用体重18-22g雌性200只。实验环境:室温20-24℃,相对湿度40-60%。实验组为将实施例2和对比例1、对比例2制备的组合物按照0.02ml/g的标准的剂量给小鼠,连续一个月,每天给小鼠口服一次。另设置空白对照组(即服用等量的去离子水)和只口服等量的本发明所述的酒(乙醇的体积分数为15%)对照组。实验5:cona诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验(mtt法)各组动物连续灌胃一个月后,颈椎脱臼法处死动物,无菌取脾,置于盛有适量无菌hank’s液(用于制备单个细胞悬浮液)的小平皿中,研磨脾脏,制成单个细胞悬液,经200目筛网过滤,用hank’s液洗2次,每次离心10min(1000r/min),然后将细胞悬浮于1mlrpmi1640完全培养液中,台酚兰染色计数活细胞数(均在95%以上),用rpmi1640(用于培养细胞)完全培养液调整细胞浓度为3×106个/ml。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1ml,一孔加75μlcona液(用于诱导小鼠脾淋巴细胞转化)(100μg/ml),另一孔作为对照,置37℃、5%co2培养箱中培养72h。培养结束前4h,每孔轻轻吸去上清液0.7ml,加入0.7ml不含小牛血清的rpmi1640培养液,同时加入mtt(用于检测细胞的一种试剂)(5mg/ml)50μl/孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入1ml酸性异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完全溶解。将溶解液移入96孔培养板中,每孔做三个平行孔,用酶标仪在波长570nm下测定各孔吸光度值。最后用加cona液孔的光密度值减去不加cona液孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力,结果如表5所示(表中为统计的平均值)。表5:组别动物数(n)光密度差值实施例2100.164对比例1100.110对比例2100.108空白对照组100.098酒对照组100.124从表5可以看出,服用实施例2制备的组合物的小鼠的淋巴细胞的增殖能力最强。实验6:小鼠血清溶血素测定(血凝法)各组动物连续灌胃一个月,实验结束前5天,制备2%(v/v,用生理盐水配制)的srbc(绵羊红细胞)悬液,每只鼠腹腔注射0.2ml进行免疫,5d后小鼠摘取眼球取血离心收集血清。血清倍比稀释后,将不同稀释度的血清放在微量血凝扳内,每孔100μl,再加入100μl0.5%srbc悬液,混匀,放入湿润的平盖内,加盖,温箱孵育3h,观察血球凝集程度,计算抗体积数平均值,结果如表6所示(表中为统计的平均值)。表6:从表6可以看出,服用实施例2制备的组合物的小鼠的抗体积数平均值最大,表明小鼠的免疫能力最强。实验7:小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验各组动物连续灌胃一个月,小鼠腹腔注射20%(v/v,用生理盐水配制)压积鸡红细胞(2000rpm,10min处理)悬液1ml,间隔30min,颈椎脱臼处死,取腹腔巨噬细胞洗液1ml,滴于载玻片上,放入垫有湿纱布的搪瓷盒内,移置37℃孵箱温育30min。孵毕,于生理盐水中漂洗,以除去未贴片细胞。晾干,以甲醇固定,4%(v/v)giemsa(姬姆萨染液)-磷酸缓冲液染色,再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数,每片计数100个巨噬细胞,按下式计算吞噬率和吞噬指数:吞噬率(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100%;吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数;结果如表7所示(表中统计的为每组的平均值)。表7:组别动物数(n)吞噬率吞噬指数实施例21034.70.41对比例11028.40.33对比例21027.40.35空白对照组1026.50.33酒对照组1026.70.32从表7可以看出,服用实施例2制备的组合物的小鼠的吞噬率和吞噬指数最大,表明小鼠的免疫能力最强。实验8:nk细胞活性测定(ldh测定法)各组动物连续灌胃一个月后,颈椎脱臼处死小鼠,无菌取脾,置于盛有适量无菌hank’s液(用于制备单个细胞悬浮液)的小平皿中,撕碎脾脏,制成单细胞悬液,经200目筛网过滤,用hank’s液洗2次,每次离心10min(1000r/min),弃上清将细胞浆弹起,加入0.5ml灭菌水20秒,裂解红细胞后再加入0.5ml2倍hank’s液及8mlhank’s液,离心10min(1000r/min),用含10%小牛血清rpmi1640(用于培养细胞)完全培养液重悬,1%冰乙酸稀释后计数,台酚兰染色计数活细胞数(均在95%以上),用rpmi1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/ml。试验前24h将靶细胞(yac-1细胞)传代培养,应用前以hank’s液洗3次,用rpmi1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/ml。取yac-1细胞和脾细胞各100μl(效靶比50:1)加入u型96孔培养板中,yac-1细胞自然释放孔加yac-1细胞和培养液各100μl,yac-1细胞最大释放孔加yac-1细胞和2.5%triton(细胞裂解液)各100μl,上述各项均设三个平行孔,于37℃、5%co2培养箱中培养4h,然后将96孔培养板以1500r/min离心5min,每孔吸取上清液100μl置平底96孔培养板中,同时加入ldh(乳酸脱氢酶)基质液100μl,反应8min,每孔加入1mol/l的hcl30μl,在酶标仪490nm处测定光密度值,计算nk细胞(自然杀伤细胞,是机体重要的免疫细胞)活性,结果如表8所示。表8:组别动物数(n)nk细胞活性实施例21039.1对比例11033.5对比例21034.5空白对照组1029.2酒对照组1031.8从表8可以看出,服用实施例2制备的组合物的小鼠的nk细胞活性最大,表明小鼠的免疫能力最强。另外,相同条件下,服用对比例3制备的饮料,小鼠的nk细胞活性的值为36.2。综上所述,本发明制备得到的组合物可显著提高小鼠的免疫功能。且大量长期服用不会引起中毒现象。当前第1页12
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