一种抗冠状病毒的中药颗粒剂及其制备方法和用途与流程

本发明属于中医药学领域，具体涉及中药颗粒剂，该中药颗粒剂可用于治疗冠状病毒性疾病，例如新型冠状病毒性肺炎(covid-19)。本发明还涉及制备所述中药颗粒剂的方法，以及该中药颗粒剂用于治疗冠状病毒性疾病的用途。

背景技术：

冠状病毒科(coronaviridae)病毒是自然界广泛存在的一大类病毒，感染脊椎动物，如人、鼠、猪、猫、犬、狼、鸡、牛、禽类。新型冠状病毒(sars-cov-2)属于冠状病毒科中的β属冠状病毒，基因特征与sarsr-cov和mersr-cov有明显区别。该病毒对紫外线和热敏感，56℃30分钟、乙醚、75％乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒。基于目前的流行病学调查和研究结果，该病毒潜伏期为1-14天，多为3-7天；传染源主要是新型冠状病毒感染的患者，无症状感染者也可能成为传染源；主要传播途径为经呼吸道飞沫和接触传播，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能，其他传播途径尚待明确。

根据中医学理论，新型冠状病毒性肺炎(covid-19)属于中医“疫”病范畴，致病因素为湿毒，核心病机为湿毒壅肺、阻遏气机，病理特点可概括为“湿、毒、闭、虚”。新型冠状病毒性肺炎患者尸体解剖和穿刺组织病理观察结果显示，肺脏呈不同程度实变，脾脏和淋巴细胞数量明显缩小和减少，部分血管内皮脱落，内膜炎及血栓形成，胆囊高度充盈，肾脏间质充血及肾小球肾小管病变，提示新型冠状病毒性肺炎造成较为严重的肺部、肾脏及免疫系统损伤(王毅，李翔，张俊华，薛睿，钱竞扬，张晓慧，张晗，刘清泉，范骁辉，张伯礼.基于网络药理学的宣肺败毒汤治疗新型冠状病毒性肺炎机制研究.中国中药杂志，1-9，2020)。

中医药治疗病毒性疾病有较长的历史且已积累了丰富的经验。中医药治疗病毒性传染病也有良好效果，例如在治疗sars、甲型h1n1等疾病方面取得了明显成效。研究证实，中药的整体调节，能够增强人体免疫力，同时还有抑制和杀灭病毒的作用。已有证据表明，中医药在治疗新型冠状病毒性肺炎方面发挥了重要作用，例如用于治疗中医证候表现为湿毒郁肺的新冠肺炎患者的中药配方，该配方以汤剂(水煎)形式服用，但现有技术没有公开该汤剂的煎煮或制备方法，也没有公开该配方对新型冠状病毒以外的其他冠状病毒是否有作用。另外，中药汤剂有许多缺点，例如不便于运输、保存，以及给药剂量不易确定。

因此，对于能够有效治疗冠状病毒性疾病，例如新型冠状病毒性肺炎的中药颗粒剂存在未满足的需求。

技术实现要素：

本发明的一个目的是提供能够有效治疗冠状病毒性疾病(特别是新型冠状病毒性肺炎)的中药颗粒剂，该颗粒剂包含可有效治疗冠状病毒性疾病患者的中药活性提取物。

本发明的还一个目的是提供一种制备能够有效治疗冠状病毒性疾病(特别是新型冠状病毒性肺炎)的中药颗粒剂的方法。

本发明的再一个目的是提供一种使用中药颗粒剂治疗冠状病毒性疾病，特别是新型冠状病毒性肺炎的方法，或中药颗粒剂在制备用于治疗冠状病毒性疾病，特别是新型冠状病毒性肺炎的药物中的用途。

本申请的发明人根据中医药学理论，针对新型冠状病毒性肺炎的整体证候表现，在中医古代验方的基础上，结合现代科学技术，经研究确定了一个中药配方，该配方由中药材麻黄、苦杏仁、生石膏、薏苡仁、苍术、广藿香、虎杖、马鞭草、芦根、葶苈子、化橘红、青蒿和甘草构成，且经临床治疗实践证明该配方制剂对新型冠状病毒性肺炎患者的疗效确切，特别是在减少轻症患者转重症方面表现出独特优势。基于上述发现，本发明人完成了本发明。

可以从不同方面描述本发明，这些方面及其任何形式中所描述的发明相互独立又彼此关联，相互结合构成本发明的内容。

一方面，本发明提供一种可有效治疗冠状病毒性疾病(例如，新型冠状病毒性肺炎)的中药颗粒剂，该中药颗粒剂包含中药材麻黄、苦杏仁、生石膏、薏苡仁、苍术、广藿香、虎杖、马鞭草、芦根、葶苈子、化橘红、青蒿和甘草的抗冠状病毒活性提取物，包括第一提取物和第二提取物，或由第一提取物和第二提取物组成，其中所述的第一提取物和所述的第二提取物的提取单独进行，且使用本说明书实施例4和实施例5中描述的方法测定，该中药颗粒剂每10克颗粒含总量不少于2.3毫克的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱，每10克颗粒包含不少于42.7毫克的柚皮苷，且每10克颗粒包含不少于7.7毫克的甘草酸。所述的第一提取物为使用水或醇水溶液提取麻黄、苦杏仁、生石膏、薏苡仁、苍术、广藿香、虎杖、马鞭草、芦根、葶苈子、化橘红和青蒿得到的提取物。所述的第二提取物为使用水或醇水溶液提取甘草得到的提取物。第一提取物的制备或提取过程特征在于生石膏先煎，提取后加入麻黄、苦杏仁、薏苡仁、苍术、虎杖、马鞭草、芦根、葶苈子和化橘红提取，过滤，得第一滤液，药渣中加入青蒿、广藿香提取，过滤，得第二滤液，合并第一滤液和第二滤液得到所述的第一提取物。根据本发明的中药颗粒剂，除包含本发明的中药活性提取物外，它还可以包含药用辅料。

还一方面，本发明提供一种制备本发明的中药颗粒剂的方法，该方法可以包括如下步骤：

(1)将生石膏置于3至15倍量水或醇水溶液中提取10至90分钟，优选20至40分钟，更优选30分钟，然后加入麻黄、苦杏仁、薏苡仁、苍术、虎杖、马鞭草、芦根、葶苈子和化橘红，用3至15倍量水提取一次或多次，每次20分钟至90分钟，过滤，提取多次时合并滤液，得第一滤液，药渣直接用于下一步；

(2)向药渣中加入青蒿和广藿香，用3至10倍量水提取一次或多次，每次10至80分钟，过滤，提取多次时合并滤液，得第二滤液；

(3)合并第一滤液和第二滤液，浓缩，得第一浓缩液；

(4)将甘草单独置于3至15倍量水或醇水溶液中提取一次或多次，每次20至90分钟，过滤，提取多次时合并滤液，浓缩滤液，得第二浓缩液；

(5)合并第一浓缩液和第二浓缩液，且进一步浓缩至相对密度约为1.02-1.05(60℃)，得最终浓缩物；

(6)将所得最终浓缩物喷雾干燥，得药粉；

(7)取全部药粉，加入适合比例的药用辅料，混匀，制粒，干燥，制得本发明的中药颗粒剂。

再一方面，本发明提供根据本发明的中药活性提取物或中药颗粒剂在制备用于治疗冠状病毒性疾病(例如，新型冠状病毒性肺炎)的药物中的用途。或者，本发明提供一种使用本发明的中药颗粒剂治疗冠状病毒性疾病(例如，新型冠状病毒性肺炎)患者的方法，该方法包括给冠状病毒性疾病(例如，新型冠状病毒性肺炎)患者施用治疗有效量的本发明的中药颗粒剂。或者，本发明提供一种用于治疗冠状病毒性疾病(例如，新型冠状病毒性肺炎)患者的中药颗粒剂，该中药颗粒剂包含本发明的中药活性提取物。

临床前试验和临床治疗结果证明，根据本发明的中药活性提取物和中药颗粒剂能够使患者的免疫系统对抗冠状病毒的能力得到提高，患者的一种或多种症状得到减轻或消除，轻症不向重症转变或转变的几率小，重症向普通型或轻型症状转变或转变的几率增加，患者痊愈的时间缩短，病程缩短，以及核酸转阴更快。因此，根据本发明的中药活性提取物和中药颗粒剂能够有效治疗冠状病毒性疾病患者，例如新型冠状病毒性肺炎患者，特别对轻症和普通型患者疗效显著，可明显减轻发热、咳嗽、憋喘和乏力等症状，治疗后ct诊断也显示有关症状显著改善。

附图说明

图1显示了根据本发明的中药颗粒剂(xfbd)对小鼠肺指数的影响

图2(2a和2b)显示了根据本发明的中药颗粒剂对小鼠血清胃肠激素的影响

图3(3a、3b、3c和3d)显示了根据本发明的中药颗粒剂对小鼠肺组织中炎性因子含量的影响

具体实施方式

上文已从一般方面概述了本发明，下面将结合实施例进一步详细描述本发明。

为准确理解本发明中所使用的术语，下面特别定义部分术语的含义。对于在此没有特别定义的术语，它们具有本领域技术人员普遍理解和接受的含义。如果在此所定义的某个术语的含义与本领域技术人员普遍理解和接受的含义不一致，则该术语的含义以在此所定义的含义为准。

本发明中使用的术语“麻黄”是指麻黄科植物草麻黄ephedrasinicastapf、中麻黄ephedraintermediaschrenketc.a.mey.或木贼麻黄ephedraequisetinabge.的干燥草质茎。

本发明中使用的术语“苦杏仁”是指蔷薇科植物山杏prunusarmeniacal.var.ansumaxim.、西伯利亚杏prunussibirical.、东北杏prunusmandshurica(maxim.)koehne或杏prunusarmeniacal.的干燥成熟种子。夏季采收成熟果实。

本发明中使用的术语“生石膏”是指硫酸盐类矿物硬生石膏族生石膏，主含含水硫酸钙(caso4·2h2o)，采挖后，除去杂石及泥沙。

本发明中使用的术语“薏苡仁”是指禾本科植物薏苡coixlacryma-jobil.var.ma-yuen(roman.)stapf的干燥成熟种仁。

本发明中使用的术语“苍术”是指菊科植物苍术atractylodeslancea(thunb.)dc.或北苍术atractylodeschinensis(dc.)koidz.的干燥根茎，并用麦麸炒制的炮制品；可减少其燥性，药性温和。

本发明中使用的术语“广藿香”是指唇形科植物广藿香pogostemoncablin(blanco)benth.的干燥地上部分。

本发明中使用的术语“虎杖”是指蓼科植物虎杖polygonumcuspidatumsieb.etzucc.的干燥根茎和根。

本发明中使用的术语“马鞭草”是指马鞭草科植物马鞭草verbenaofficinalisl.的干燥地上部分。

本发明中使用的术语“芦根”是指禾本科植物芦苇phragmitescommunistrin.的新鲜或干燥根茎。

本发明中使用的术语“葶苈子”是指十字花科植物播娘蒿descurainiasophia(l.)webb.exprantl.或独行菜lepidiumapetalumwilld.的干燥成熟种子。

本发明中使用的术语“化橘红”是指芸香科植物化州柚citrusgrandis‘tomentosa’或柚citrusgrandis(l.)osbeck的未成熟或近成熟的干燥外层果皮。

本发明中使用的术语“青蒿”是指菊科植物黄花蒿artemisiaannual.的干燥地上部分。

本发明中使用的术语“甘草”是指豆科植物甘草glycyrrhizauralensisfisch.、胀果甘草glycyrrhizainflatabat.或光果甘草glycyrrhizaglabral.的干燥根和根茎。

本发明中使用的术语“中药活性提取物”是指用合适的溶剂例如水或醇水溶液提取任何形式的所述中药材(包括中药材饮片、中药材粉末，例如中药材微粉化粉末)得到的具有抗冠状病毒活性的任何形式的物质，包括特定的有效成分和包含有效成分的混合物。该提取物的形式包括但不限于固体、半固体、溶液、混悬液、浓缩液、膏状体和粉末。

适用于提取中药材以得到本发明中药活性提取物的水是指可用于制备中药活性提取物的各种水，包括药用水，例如蒸馏水和去离子水等。

本发明中使用的术语“醇水溶液”是指适合浓度(例如低浓度，特别是10-50％v/v)的醇的水溶液，适用的醇的例子包括低级醇，优选乙醇。在一定条件下，也可以使用高于浓度高于50％v/v的醇的水溶液。

本发明中使用的术语“提取一次或多次”是指通常提取1至3次，优选1或2多次，特殊情况下根据需要可以提取更多次。

本发明中使用的术语“患者”与“受试者”可以相互代替使用，是指易患冠状病毒性疾病或冠状病毒易感的哺乳动物，特别是指人。

本发明中使用的术语“冠状病毒”是指属于冠状病毒科(coronaviridae)的病毒，特别是指冠状病毒属的病毒(coronavirus)的病毒，更特别是指新型冠状病毒(sars-cov-2)，包括它们的任何突变体。

本发明中使用的术语“冠状病毒性疾病”是指由冠状病毒科(coronaviridae)病毒，特别是冠状病毒属(coronavirus)的病毒，更特别是新型冠状病毒(sars-cov-2)，包括它们的任何突变体，引起的疾病。

本发明中使用的术语“治疗”意指在患者中提升其免疫系统对抗冠状病毒的能力，在患者中减轻或消除冠状病毒性疾病的一种或多种症状，防止轻症向重症转化，提高重症病人向普通病人转变的几率，缩短患者痊愈的时间，使病程缩短，以及促进核酸转阴。

本发明中使用的短语“治疗有效量”是指根据本发明的中药活性提取物或药物组合物在被给予患者时提供所期望的临床治疗效果的量，所述的临床效果为患者的免疫系统对抗冠状病毒的能力得到提高，患者的一种或多种症状得到减轻或消除，轻症未转化为重症，重症患者向普通型或轻型患者转变几率增加，患者痊愈的时间缩短，病程缩短，以及核酸转阴更快。

本发明中所用的术语“药学上可接受的赋形剂”意指在药物制剂领域中常规使用的任何赋形剂，只要该赋形剂不对本发明的中药颗粒剂的预期质量和疗效产生不良反应或影响。特定赋形剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。例如，可以作为制药上可接受的赋形剂包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等。必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在本领域技术人员的知识范围内。

本申请中公开的所有数值范围包括其端值在内，且包括没有明确列出的该范围内的任何小范围。

根据本发明的一方面，本发明涉及可用于治疗冠状病毒性疾病(例如，新型冠状病毒性肺炎)的中药颗粒剂，该中药颗粒剂包含麻黄6份、苦杏仁15份、生石膏30份、薏苡仁30份、苍术10份、广藿香15份、虎杖20份、马鞭草30份、芦根30份、葶苈子15份、化橘红15份、青蒿12份和甘草10份的中药活性提取物，该中药活性提取物由第一提取物和第二提取物组成，其中所述的第一提取物和所述的第二提取物的提取单独进行，且使用本说明书实施例4和实施例5中描述的方法测定，该中药颗粒剂每10克颗粒包含不少于2.3毫克的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量，每10克颗粒包含不少于42.7毫克的柚皮苷，且每10克颗粒包含不少于7.7毫克的甘草酸。其中，所述的第一提取物是如下重量份的中药材的水提物或醇水提取物：麻黄6份、苦杏仁15份、生石膏30份、薏苡仁30份、苍术10份、广藿香15份、虎杖20份、马鞭草30份、芦根30份、葶苈子15份、化橘红15份和青蒿12份；且所述的第二提取物为甘草10份的水提物或醇水提取物。

本领域技术人员理解上述中药材的重量份是相对的，可以根据中医药学理论，对其中一种或几种中药材的量各自独立地进行合理调整。例如，麻黄可以为4-8份，苦杏仁可以为12-18份，生石膏可以为24-36份，薏苡仁可以为24-36份，苍术可以为8-12份，广藿香可以为12-18份，虎杖可以为16-24份，马鞭草可以为24-36份，芦根可以为24-36份，葶苈子可以为12-18份，化橘红可以为12-18份，青蒿可以为9-15份，甘草可以为8-12份。因此，这一方面所有显而易见的变化形式都在本发明的范围之内。

在该方面的一个实施方案中，可通过包括如下步骤的方法制得所述的第一提取物：

(1)将生石膏置于3至15倍量水或醇水溶液中提取10至90分钟，优选20至40分钟，更优选30分钟，然后加入麻黄、苦杏仁、薏苡仁、苍术、虎杖、马鞭草、芦根、葶苈子和化橘红，用3至15倍量水提取一次或多次，每次20分钟至90分钟，过滤，提取多次时合并滤液，得第一滤液，药渣直接用于下一步；

(2)向药渣中加入青蒿和藿香，加入3至10倍量水，提取一次或多次，每次10至80分钟，过滤，提取多次时合并滤液，得第二滤液；

(3)合并第一滤液和第二滤液，浓缩，得所述的第一提取物。

在该方面的另一个实施方案中，可通过包括如下步骤的方法制得所述的第二提取物：

将甘草置于3至15倍量水或醇水溶液中提取一次或多次，每次20至90分钟，过滤，提取多次时合并滤液，浓缩滤液，得所述的第二提取物。

在该方面的再一个实施方案中，通过包括如下步骤的方法制得所述的第一提取物：

(1)将生石膏置于3至15倍量水或醇水溶液中提取10至90分钟，优选20至40分钟，更优选30分钟，然后加入麻黄、苦杏仁、薏苡仁、苍术、虎杖、马鞭草、芦根、葶苈子和化橘红，用3至15倍量水提取一次或多次，每次20分钟至90分钟，过滤，提取多次时合并滤液，得第一滤液，药渣直接用于下一步；

(2)向药渣中加入青蒿和藿香，加入3至10倍量水，提取一次或多次，每次10至80分钟，过滤，提取多次时合并滤液，得第二滤液；

(3)合并第一滤液和第二滤液，浓缩，得所述的第一提取物；且

通过包括如下步骤的方法制得所述的第二提取物：

将甘草置于3至15倍量水或醇水溶液中提取一次或多次，每次20至90分钟，过滤，提取多次时合并滤液，浓缩滤液，得所述的第二提取物。

在该方面的优选实施方案中，通过包括如下步骤的方法制得所述的第一提取物：

(1)将生石膏置于10倍量水或醇水溶液中提取20至40分钟，优选30分钟，然后加入麻黄、苦杏仁、薏苡仁、苍术、虎杖、马鞭草、芦根、葶苈子和化橘红，用10倍量水提取一次或两次，每次1小时，过滤，提取两次时合并滤液，得第一滤液，药渣直接用于下一步；

(2)向药渣中加入青蒿和藿香，加入6倍量水，提取一次或两次，每次20至40分钟，过滤，提取两次时合并滤液，得第二滤液；以及

(3)合并第一滤液和第二滤液，浓缩，得所述的第一提取物。

在该方面的优选实施方案中，通过包括如下步骤的方法制得所述的第二提取物：

将甘草置于10倍量水或醇水溶液中提取一次或两次，每次40至80分钟，优选60分钟，优选40分钟，过滤，提取两次时合并滤液，浓缩滤液，得所述的第二提取物。

在该方面的更优选实施方案中，通过包括如下步骤的方法制得所述的第一提取物：

(1)将生石膏置于10倍量水或醇水溶液中提取20至40分钟，更优选30分钟，然后加入麻黄、苦杏仁、薏苡仁、苍术、虎杖、马鞭草、芦根、葶苈子和化橘红，用10倍量水提取一次或两次，每次1小时，过滤，提取两次时合并滤液，得第一滤液，药渣直接用于下一步；

(2)向药渣中加入青蒿和藿香，加入6倍量水，提取一次或两次，每次20至40分钟，过滤，提取两次时合并滤液，得第二滤液；以及

(3)合并第一滤液和第二滤液，浓缩，得所述的第一提取物；且

通过包括如下步骤的方法制得所述的第二提取物：

将甘草置于10倍量水或醇水溶液中提取一次或两次，每次40至80分钟，优选60分钟，优选40分钟，过滤，提取两次时合并滤液，浓缩滤液，得所述的第二提取物。

本领域技术人员知道，在该方面的任何一种实施方案中，所述的加水量、提取时间和提取次数不是绝对的，即使用在所述范围以外且接近所述范围端值的相应参数值也可能实现本发明的目的。因此，上述实施方案的所有显而易见的变化形式都在本发明的范围之内。

根据本发明的中药颗粒剂除了包含上述方面任一形式所涉及的本发明中药活性提取物外，还可以包含药用辅料。

本发明的中药颗粒剂中的辅料包括适用于中药颗粒剂中的任何辅料，只要该辅料不对本发明的中药颗粒剂的质量和性能产生不利影响即可。中药颗粒剂中常用的辅料主要有稀释剂、润湿剂、崩解剂等。常用的稀释剂主要有蔗糖、糊精、淀粉、乳糖、甘露醇、木糖醇、双歧糖等。常用的润湿剂主要有水、不同浓度的乙醇等；粘合剂常用高分子粘合剂，其种类非常多，如乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇、海藻酸钠等。为提高中药颗粒剂的崩解度和释放度，可加入适宜的崩解剂，常用的崩解剂有微晶纤维素、羧甲基淀粉钠等。本领域技术人员根据本说明书公开的内容能够选择和确定本发明的中药颗粒剂中的适用的辅料。

本发明的中药颗粒剂还可以包含适用的添加剂，这些添加剂是本领域中已知的，例如乳化剂、芳香剂、增溶剂、抗结剂、消泡剂、粘合剂、缓冲剂、ph调节剂、推进剂、螯合剂以及防腐剂等。

根据本发明的还一方面，提供一种制备本发明的中药颗粒剂的方法，该方法可以包括如下步骤：

(1)将生石膏置于3至15倍量水或醇水溶液中提取10至90分钟，优选20至40分钟，更优选30分钟，然后加入麻黄、苦杏仁、薏苡仁、苍术、虎杖、马鞭草、芦根、葶苈子和化橘红，用3至15倍量水提取一次或多次，每次20分钟至90分钟，过滤得第一滤液，提取多次时合并滤液，药渣直接用于下一步；

(2)向药渣中加入青蒿和广藿香，用3至10倍量水提取一次或多次，每次10至80分钟，过滤，提取多次时合并滤液，得第二滤液；

(3)合并第一滤液和第二滤液，浓缩，得第一浓缩液；

(4)将甘草单独置于3至15倍量水或醇水溶液中提取一次或多次，每次20至90分钟，过滤，提取多次时合并滤液，浓缩滤液，得第二浓缩液；

(5)合并第一浓缩液和第二浓缩液，且进一步浓缩至相对密度约为1.02-1.05(60℃)，得最终浓缩物；

(6)将所得最终浓缩物喷雾干燥，得药粉；

(7)向所得药粉中加入适量的所述药用辅料，充分混匀，喷入高浓度(例如70-95％、80-95％和90-95％)乙醇溶液，制成颗粒，干燥，制得本发明的中药颗粒剂。

在该方面的一个优选的实施方案中，所述的制备方法包括如下步骤：

(1)将生石膏置于10倍量水或醇水溶液中提取30分钟，然后加入麻黄、苦杏仁、薏苡仁、苍术、虎杖、马鞭草、芦根、葶苈子和化橘红，用10倍量水提取一次或两次，每次1小时，过滤，提取两次时合并滤液，得第一滤液，药渣直接用于下一步；

(2)向药渣中加入青蒿和广藿香，用3至10倍量水提取一次或两次，每次10至80分钟，过滤，提取两次时合并滤液，得第二滤液；

(3)合并第一滤液和第二滤液，浓缩，得第一浓缩液；

(4)将甘草单独置于3至15倍量水或醇水溶液中提取一次或两次，每次20至90分钟，过滤，提取两次时合并滤液，浓缩滤液，得第二浓缩液；

(5)合并第一浓缩液和第二浓缩液，且进一步浓缩至相对密度约为1.02-1.05(60℃)，得最终浓缩物；

(6)将所得最终浓缩物喷雾干燥，得药粉；以及

(7)取全部药粉，加入药用辅料(干粉:辅料＝2～3:1)，充分混匀，湿法制成颗粒，干燥，制得本发明的中药颗粒剂。

在该方面的更优选的实施方案中，所述的制备方法包括如下步骤：

甘草单煎，加入10倍量水煎煮二次，第一次60分钟，第二次40分钟，过滤，合并滤液，滤液浓缩至适量，备用；生石膏先煎，加10倍量水提取30分钟，然后加入除青蒿、广藿香之外的其余九味继续提取60分钟，过滤，滤液备用，药渣加入青蒿、广藿香，加6倍量水提取30分钟，过滤，合并滤液，滤液浓缩适量；上述浓缩液混合，喷雾干燥得药粉；取全部药粉加入药用辅料乳糖和甘露醇(乳糖:甘露醇＝2:1，干粉:辅料＝2～3:1)，混匀，喷入90％乙醇溶液，湿法制成制粒，60℃以下干燥，制得本发明的中药颗粒剂。

本领域技术人员知道，为了促进实现本发明的目的，在上述方法步骤中可以增加一个或几个步骤。例如，在提取之前，可以浸泡中药材一段时间，也可以将中药材进行物理加工处理以便有利于活性物质的提取。所有这些显而易见的变化形式都在本发明的范围之内。

例如，本领域技术人员知道，在本说明书公开内容的基础上，可以使用相应的中药材单独或它们的混合物，通过本领域中常规粉碎、浸提和分离方法，例如浸渍、渗滤、液-液萃取、水提醇沉、醇提水沉和透析等方法，制备得到本发明中适用的中药活性提取物。还可以通过商业途径购买本发明中所用中药的一种或几种的活性提取物，然后与其余中药的提取物配伍，得到本发明的中药活性提取物。这些变化形式都在本发明的范围之内。

因此，根据上述方法以及在以下实施例中举例说明的方法，本领域技术人员能够轻易地制备得到本发明的中药活性提取物，且可以进一步将其制备成所需要的固体剂型。

本发明的中药颗粒剂的功效为解表清热，祛湿解毒，主治湿毒郁肺症，可用于治疗由冠状病毒引起的疾病，例如新型冠状病毒感染肺炎。经试验和临床治疗结果证明，本发明的中药颗粒剂能够使患者的免疫系统对抗冠状病毒的能力得到提高，患者的一种或多种症状得到减轻或消除，轻症不向重症转变或转变的几率减小，重症向普通型或轻型症状转变或转变的几率增加，患者痊愈的时间缩短，病程缩短，以及核酸转阴更快。本发明的中药颗粒剂对新型冠状病毒感染肺炎的早期普通型症候以及轻症和普通型患者疗效显著，可明显减轻发热、咳嗽、憋喘和乏力等症状，ct诊断也显示治疗后有关症状显著改善。

因此，根据本发明的再一方面，本发明涉及本发明的中药活性提取物或中药颗粒剂在制备用于治疗冠状病毒性疾病(尤其是新型冠状病毒性肺炎)的药物中的用途。

在该方面的一种变化形式中，本发明提供一种使用本发明的中药颗粒剂治疗冠状病毒性疾病(例如，新型冠状病毒性肺炎)患者的方法，该方法包括给冠状病毒性疾病(例如，新型冠状病毒性肺炎)患者施用治疗有效量的本发明的中药颗粒剂。

在该方面的另一种变化形式中，本发明提供一种用于治疗冠状病毒性疾病(例如，新型冠状病毒性肺炎)患者的中药颗粒剂，该中药颗粒剂包含本发明的中药活性提取物。

本发明的中药颗粒剂可以制成单位剂量形式供患者服用。术语“单位剂量形式”意指适合于作为用于人体受试者和其它哺乳动物的单位剂量的物理分散单位，每个单位包含计算产生所需治疗作用的预定量的本发明的中药颗粒剂，所述的预定量通常为5-20克，例如10、15或20克本发明的中药颗粒剂，但是根据需要也可以包含更大量的本发明中药颗粒剂。

通常，本发明的中药颗粒剂通过口服给药。本发明的中药颗粒剂可经口服使用，例如，一日两次，每次5-30克，例如10-20克，优选10克本发明的颗粒剂。具体给药的剂量取决于被治疗的患者的体重、疾病的性质和严重程度、药物的给药方式以及给药周期或时间间隔等因素。对于某些情况特殊的患者，具体给药应遵医嘱。

本发明的中药颗粒剂可以与本领域中已知的其它可用于治疗冠状病毒性疾病的药物联合使用。本领域技术人员能够想到和确定可以与本发明的中药颗粒剂联合使用且不会产生不利效果的抗冠状病毒药物。

实施例

为进一步说明本发明，提供下面的实施例。这些实施例仅用于举例说明本发明，本发明的范围不限于所提供的实施例。

下面实施例中使用的中药材均从市场购得且经鉴别合格，所使用的实验试剂和实验仪器为本领域中的常用实验试剂和实验仪器，并且所使用的测定方法为本领域中的常用方法，特别说明的除外。例如，在制备本发明中药颗粒剂的实施例2中使用了如下设备：中药多能提取罐(t-150，天津毕盛制药机械有限公司)；组合式中药液浓缩锅(b-0.5，天津毕盛制药机械有限公司)；三维混合机(syh-50，常州市常航干燥设备有限公司)；摆荡制粒机(wk-60，淄博史克制药设备制造有限公司)；真空干燥箱(yzg-1400，常州耀飞干燥设备科技有限公司)；槽型混合机(wch-10，淄博史克制药设备制造有限公司)。但是，本领域技术人员知道也可以使用这些实验设备的等效设备，以及根据生产规模换用其它合适的设备。

实施例1

本发明中药颗粒剂的制备

配方组成：

麻黄150克、苦杏仁375克、生石膏750克、薏苡仁750克、苍术250克、广藿香375克、马鞭草750克、虎杖500克、芦根750克、葶苈子375克、化橘红375克、青蒿300克和甘草250克。

中药活性提取物的制备：

以上十三味，甘草单煎，其余药味先将石膏置于十倍量水或醇水溶液中提取30分钟，然后加入除青蒿、藿香之外的其余药材用十倍量水提取一小时，过滤得滤液，药渣加入青蒿、藿香，再加入六倍量水提取30分钟，合并提取液，60℃以下浓缩；甘草加入十倍量水提取二次，每次一小时，滤液浓缩适量；合并浓缩液相对密度约为1.02(60℃)，喷雾干燥，得到中药活性提取物粉末1100克。

中药颗粒剂的制备：

取如上所得的全部药粉，加入适量的乳糖、甘露醇和少许微晶纤维素，充分混匀，喷入90％乙醇溶液，制成颗粒，60℃干燥，制得1500克颗粒，即本发明的中药颗粒剂。

实施例2

本发明中药颗粒剂的制备

配方组成：

麻黄240克、苦杏仁600克、生石膏1200克、薏苡仁1200克、苍术400克、广藿香600克、马鞭草1200克、虎杖800克、芦根1200克、葶苈子600克、化橘红600克、青蒿480克和甘草400克。

中药活性提取物的制备：

每批次取所示量的饮片(除甘草以外)，煎煮2次，一煎加10倍水，先煎生石膏30分钟，然后其他药味(除青蒿和广藿香)煎煮60分钟，过滤得一煎提取液，加入青蒿和广藿香随一煎药渣加6倍水，二煎煎煮30分钟，提取液250目滤网过滤，滤液减压浓缩至比重1.03～1.10(60℃以下)；另取400克甘草单煎，一煎10倍水，煎煮60分钟，二煎10倍水，煎煮40分钟，提取液250目滤网过滤，滤液减压浓缩至比重1.03～1.10(60℃以下)，合并以上浓缩浸膏，喷雾干燥，得到中药活性提取物粉末1200克。

中药颗粒剂的制备：

取如上所得本发明中药活性提取物干粉，加辅料乳糖与甘露醇(比例为2:1)，用乙醇浓度为90％湿法制粒，干燥(70℃)90分钟，整粒，制得1600克颗粒，即本发明的中药颗粒剂。

实施例3

本发明中药颗粒剂的制备

配方组成：

中药活性提取物的制备：

在多功能提取罐(型号dt-3m3，温州中制药机械设备厂)中，生石膏置于10倍量水中先煎30分钟，再加入其他药材(青蒿和广藿香除外)煎煮60分钟，过滤得一煎提取液，青蒿和广藿香随一煎药渣投料加6倍水，二煎煎煮30分钟，提取液过滤，60℃以下浓缩(组合式浓缩锅b-11，天津市毕达盛制药机械有限公司)至相对密度为1.02-1.10(60℃)；甘草单煎，一煎加10倍水，煎煮60分钟，二煎加10倍水，煎煮40分钟，提取液过滤，60℃以下浓缩至相对密度为1.02-1.10(60℃)，合并以上浓缩浸膏，喷雾干燥(中试型喷雾干燥机h-spray5s，北京霍尔斯生物科技有限公司)，得本发明中药活性提取物干粉20公斤。

中药颗粒剂的制备：

取如上所得本发明中药活性提取物干粉，以干粉:辅料＝2.1～2.7:1加辅料(乳糖:甘露醇＝2:1)，混合30分钟，放入槽型搅拌机(型号wch-10，淄博史克制药设备制造有限公司)，加入适量90％乙醇制软材，湿法制粒，干燥，整粒，即得本发明中药颗粒剂25.8公斤。

实施例4.本发明中药颗粒剂中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量测定方法

采用如下条件的hplc方法测定了本发明颗粒剂中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量。

色谱条件与系统适应性。高效液相色谱u3000(赛默飞世尔科技有限公司，美国)；色谱柱：hlpersilgoldc18(250×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1％磷酸(含0.1％三乙胺)(3：97)；检测波长207nm；柱温30℃；流速1ml/min；理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于2000。

对照品溶液制备。取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml各含40μg的混合溶液，即得。

供试品溶液制备。取根据实施例3所述方法制备的本发明颗粒剂适量，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇溶液25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例5.本发明中药颗粒剂中柚皮苷和甘草酸的含量测定方法

采用如下条件的hplc方法测定了本发明颗粒剂中柚皮苷和甘草酸的含量。

色谱条件。高效液相色谱u3000(赛默飞世尔科技有限公司，美国)；色谱柱：acquityuplcbehc18(2.1×100mm，1.7μm)；流速：0.35ml/min；柱温：30℃；进样量：1.0μl；波长：254nm/284nm；流动相a：0.1％甲酸水，b：乙腈，梯度洗脱如下：

对照品溶液制备。取柚皮苷、甘草酸铵对照品适量，精密称定，用甲醇配制成每1ml含柚皮苷0.8mg、甘草酸铵0.2mg的混合溶液，即得(甘草酸重量＝甘草酸铵重量/1.0207)。

供试品溶液制备。取根据实施例3所述方法制备的本发明中药颗粒剂适量，混匀，研细，取约1.0g，精密称定，精密加入70％甲醇25ml，超声处理30min，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心10分钟(转速为每分钟13000转)，取上清液，滤过，取续滤液，即得。

测定法。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例6

本发明中药组合物的中药材提取方法对提取物组成的影响

为确定本发明的中药组合物中的中药材单煎和合煎提取方法对提取物成分的含量的影响，发明人开展了如下实验研究。

研究方法：用以下七种方法进行样品制备：(1)麻黄6g加60ml水回流提取1h；(2)甘草10g加100ml水回流提取1h；(3)全方238g药材加入2380ml水回流提取1h；(4)全方无麻黄加入2320ml水回流提取1h；(5)全方无甘草加入2280ml水回流提取1h；(6)238ml全方无甘草提取液中加入10ml单味甘草提取液；(7)228ml全方无麻黄提取液中加入6ml单味麻黄提取液。样品制备结束后进样分析测盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱和甘草酸铵的含量。

实验结果：如表1所示，麻黄甘草合煎后，有利于麻黄碱的提取，但是甘草无论是与麻黄合煎还是与除麻黄外其他药材合煎，都会发生有效成分的含量降低。因此在本发明的提取工艺中，将甘草单煎，不和其他药材合煎。

表1.麻黄、甘草不同提取方式对有关成分的含量影响

实施例7

本发明的中药颗粒剂对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺

小鼠病证结合模型的治疗作用

1试验材料

1.1受试药物

本发明中药颗粒剂，生产日期20200306，规格5g/袋，由现代中药创新中心使用实施例1中所述的方法制备。

用法：1天2次/一次2袋。

1.2阳性对照药物

磷酸氯喹糖衣片，批号2002114，有效期至2022.01，四川升和药业股份有限公司生产。用法用量：1-2天：1.0g/60kg/d；3-7天：0.5g/60kg/d。

重组人干扰素α2b注射液(假单胞菌)，批号r0191201，有效期至2021.11.25，规格300万iu/1ml，天津未名生物医药有限公司生产。用法用量1000万iu//d。

1.3实验动物

220只balb/c小鼠，spf级，体重10-12g，雌雄各半，1100112011011024/5scxk(京)2016-0006

1.4毒株及细胞

1.4.1病毒毒株：人类冠状病毒(hcov-229e)，由中国医学科学院医药生物技术研究所提供，本实验室传代，-80℃冰箱保存备用。

1.4.2细胞株：人胚肺细胞(mrc-5)购自北京北纳创联生物技术研究院，本室传代，液氮保存备用。

2方法及结果

2.1剂量设计及药物配制

本发明中药颗粒剂：人临床用量为20g/60kg/d，即0.33g/kg体重；试验时小鼠用量分别设7.34g/kg/d、3.67g/kg/d、1.84g/kg/d三个剂量，分别相当于临床2倍、等倍及1/2倍剂量。

2.2病毒传代

取已长成单层mrc-5细胞的25cm2培养瓶，倒掉培养液，用细胞维持液冲洗细胞面3遍后，加入hcov-229e的病毒液200μl，置37℃5％co2培养箱中培，每日倒置显微镜下观察细胞病变情况，72-96h，直至80％细胞出现明显病变(cpe)后，将细胞培养瓶置于-80℃低温冰箱冻存，病毒液反复冻融3次后，用于检测病毒毒力。

2.3病毒滴度测定

取已长成单层mrc-5细胞的培养板，倒掉培养液，用细胞维持液冲洗细胞面3遍后，按10倍稀释接种不同滴度的hcov-229e病毒液，10-1～10-8共8个稀释度，100μl/孔，每个浓度4个复孔，同时设正常细胞对照。置37℃5％co2培养箱中培养，每日倒置显微镜下观察细胞病变情况，72～96h记录各孔的细胞病变情况。按reed-muench计算50％细胞病变浓度(tcid50)

2.4造模及检测

取balb/c小鼠90只，spf级，体重10-12g，雌雄各半，按体重等级随机分为正常对照组，229e感染组，寒湿对照组，疫毒袭肺证小鼠病证结合模型组(以下简称疫毒袭肺模型组)，磷酸氯喹阳性药组、干扰素α2b阳性药组、本发明中药颗粒剂高、中、低剂量组，每组10只。除正常对照组和229e感染组外，其余小鼠每天持续置于90±3％相对湿度，无风，温度4±2℃的人工气候箱中，4小时刺激后取出，连续7天。

除正常对照组和寒湿对照组外，其余小鼠于寒湿刺激第5天、第6天，用乙醚轻度麻醉后，以100tcid50hcov-229e病毒液滴鼻感染，50μl/只。第1次感染当天各给药组开始给药，本发明中药颗粒剂各剂量组及磷酸氯喹阳性药组灌胃给药，0.2ml/10g；正常对照组、寒湿对照组、229e感染组、疫毒袭肺模型组在同等情况下给予生理盐水；干扰素α2b阳性药组雾化吸入原药液，每次20min。给药每日1次，连续3天。感染第4天称重后解剖进行检测，并观察及检测下列指标：

2.4.1中医证候表现观察每日观察各组小鼠活动度、活跃程度、皮肤毛发状态和大便状态。

2.4.2取肺称重，计算肺指数及其抑制率

肺指数＝[肺湿重(g)/体重(g)]×100

2.4.3肺组织中核酸检测(rt-pcr法)

核酸裂解处理

小鼠解剖后将肺组织分装置于-80℃低温冰箱中保存；将小鼠肺组织从-80℃低温冰箱中取出，置于洁净的研钵中，倒入少量液氮并使用研杵将其研磨成粉末，收集粉末于1.5ml离心管中并立即加入1mltrizolreagent，轻弹管底，尽快混合样品至重悬；室温水平放置离心管，孵育20min；4℃，12000rpm，离心10min；将澄清上清液移入新的1.5ml离心管中；加入0.2ml氯仿，盖紧管盖，用力摇动离心管15s，室温孵育2-3min至液体分层；4℃，12000rpm，离心15min；将透明上清液小心移入新的1.5ml离心管中，加入0.5ml异丙醇，混匀，室温孵育30min；4℃，12000rpm，离心10min；弃去上清，用1ml75％乙醇轻洗沉淀(使白色沉淀轻轻飘起)；4℃，7500rpm，离心5min；吸尽上清液，短暂干燥rna沉淀5-10min；用20μldepc水溶解沉淀，﹣80℃低温冰箱保存。

核酸测定

对照品核酸处理：depc-h2o作为阴性对照。阳性对照品进行10、100、1000倍梯度稀释。

试剂配制：取n×18μlhcov-229e核酸荧光pcr检测混合液，n×1μl内部对照品，与n×1μlrt-pcr酶(n为反应管数)，振荡混匀数秒，3000rpm离心数秒。

加样：取上述混合液20μl置于pcr管中，然后将样品核酸提取液、depc-h2o、阳性对照品各5μl分别加入pcr管中，改进管盖，离心数秒使所有液体置于底部，立即进行pcr扩增反应。

循环参数设置为：45℃×10min；95℃×15min；再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环40次；单点荧光检测在60℃，反应体系为25μl。

2.4.4小鼠血清中gas、mtl及肺组织中炎性因子检测(elisa法)

解剖后将小鼠血浆放置在室温静置30min，3000xg离心10min，吸取上清至新的ep管内-20℃保存。检测时按照试剂盒说明书操作，酶标仪450nm吸光度检测各指标。

肺组织匀浆液样本：小鼠取肺组织称重后，收集小鼠肺组织，-4℃保存。称量50mg肺组织加入500μl生理盐水后，使用超声细胞破碎仪匀浆组织，使用低温高速离心机-4℃1000xg离心10分钟。吸取上清液之后分装，保存于-80℃冰箱贮存备用。避免反复冻融。检测时按照试剂盒说明书操作，酶标仪450nm吸光度检测各指标。

2.4.5小鼠外周血t淋巴细胞亚群及b淋巴细胞比例流式检测

离心机4℃预冷。小鼠摘眼球取血，向装有10ml1×pbs的15ml离心管中加入3滴血(约150μl)，1600rpm，5min，室温离心；用移液管小心弃去上清，每管加入1ml红细胞裂解液重悬细胞沉淀，室温裂解约5-10min至液体从浑浊变澄清，加入10mlpbs终止裂解，2000rpm，5min，4℃离心，弃上清。细胞沉淀用10mlpbs重悬，2000rpm，5min，4℃离心，弃上清，用200μl封闭液(含5％fbs的pbs)重悬，并将细胞悬液转移至1.5mlep管中，4℃封闭30min。避光于封闭液中配制流式抗体如下：fitc标记抗小鼠cd3e、pe标记抗小鼠cd19，percp-cy5.5标记抗小鼠cd4、apc标记抗小鼠cd8a，每一管细胞的配制体积为：抗体各0.3μl，封闭液50μl。

细胞悬液2000rpm，5min，4℃离心，弃上清。加入流式抗体，每管50μl，4℃避光染色30min，加入1mlpbs，2000rpm，5min，4℃离心，弃上清。用200μl含2％fbs的pbs重悬细胞，转移至流式管中，上机检测。

2.5试验结果

2.5.1对中医证候表现的影响

模型小鼠置于智能人工气候箱寒湿刺激第4天，出现扎堆不动，活动度下降、活跃程度降低，同时出现烦躁不安、撕咬打斗表现，皮毛潮湿缠结、大便颜色变浅黏腻，表明初起即有寒湿证的表现。寒湿刺激第5天加载冠状病毒感染至感染后第4天，模型组小鼠出现扎堆不动现象，活动度大幅下降、不再出现厮打表现，皮毛出现不泽干枯、大便颜色变深变干特点，符合中医证候表现，形成人冠状病毒寒湿疫毒袭肺证小鼠病证结合模型。本发明中药颗粒剂三个剂量组与疫毒袭肺模型组比较，小鼠活动度和反应能力均显著增加，皮毛及大便状态均有一定程度改善。

2.5.2对小鼠肺指数的影响

表2.本发明的中药组合物在人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠病证结合模型中的治疗作用

注：与正常对照组比较^##p<0.01；与疫毒袭肺模型组比较^**p<0.01。

表2和图1结果显示：疫毒袭肺模型组小鼠肺指数显著增加，与正常对照组比较有显著性差异(p<0.01)；本发明中药颗粒剂高、中、低剂量均可显著降低小鼠肺指数，与疫毒袭肺模型组比较有显著性差异(p<0.01)，肺指数抑制率分别为54.96％、81.08％、58.48％。说明本发明中药颗粒剂对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠病证结合模型有明显的治疗作用。

2.5.3对小鼠血清胃动素(mtl)和胃泌素(gas)的影响

表3.本发明的中药组合物在人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠病证结合模型中的治疗作用

注：与正常对照组比较，^##p<0.01；与疫毒袭肺模型组比较，^**p<0.01

表3、图2(2a和2b)结果显示：疫毒袭肺模型组小鼠血清中gas含量显著降低、mtl含量显著增高，与正常对照组比较有显著性差异(p<0.01)；本发明中药颗粒剂三个剂量组可显著升高gas含量，高、中剂量组可显著降低mtl含量，与疫毒袭肺模型组比较均有显著性差异(p<0.05，p<0.01)。

2.5.4对小鼠肺组织病毒载量的影响

表4.本发明的中药组合物在人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺证小鼠病证结合模型中的治疗作用

注：与正常对照组比较，^##p<0.01；与疫毒袭肺模型组比较，^**p<0.01。

表4结果显示：正常对照组和寒湿对照组动物肺组织中无hcov-229e核酸表达；疫毒袭肺模型组小鼠肺组织中有显著核酸表达；本发明中药颗粒剂三个剂量组可显著降低肺组织中病毒核酸表达量。