治疗心血管疾病的方法和材料与流程

治疗心血管疾病的方法和材料
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2019年5月10日提交的美国专利申请第62/846,452号的优先权。在先申请的公开内容被视为本技术公开内容的一部分，并以其整体并入本技术。


背景技术：
1.技术领域
3.本发明提供涉及治疗患有心血管疾病的哺乳动物的方法和材料。例如，本发明提供了将含有灵芝(ganoderma lucidum)的组合物给予被确定为患有心血管疾病或有风险患有或发展心血管疾病的哺乳动物的方法和材料。本发明还提供了用于减缓年龄相关的、获得性或先天性心血管功能障碍进展的方法和材料。
4.2.背景信息
5.心血管疾病是心脏、心脏瓣膜和血管疾病的总称，包括冠心病、风湿性和先天性心脏病、静脉血栓栓塞、动脉粥样硬化、心脏瓣膜病、脑血管病、主动脉-髂动脉疾病和外周血管病(steward等，jrsm cardiovasc.dis.,6:1-9(2017))。患有心血管疾病的对象可能会出现多种并发症，例如心肌梗塞、中风、心绞痛、短暂性脑缺血发作、充血性心力衰竭、主动脉瘤、严重的瓣膜狭窄或反流以及死亡。在美国，心血管疾病占死亡人数的二分之一。因此，心血管疾病的治疗和预防是重要的公共卫生领域。


技术实现要素：

6.本发明提供涉及治疗患有心血管疾病的哺乳动物的方法和材料。例如，本发明提供了将含有灵芝(gl)提取物的组合物给予被确定为患有心血管疾病或有风险患有或发展心血管疾病的哺乳动物的方法和材料。本发明还提供了将包含gl提取物的组合物给予哺乳动物以减缓年龄相关的心功能障碍的进展的方法和材料。给予具有一种或多种gl提取物的组合物能够治疗心血管疾病和/或减缓如本文所述的与年龄相关的、获得性或先天性心功能障碍的进展，使得临床医生和患者得以进行有效的治疗。
7.通常，本发明的一个方面的特征在于一种用于治疗患有心血管疾病的哺乳动物的方法。所述方法包括(或基本上由以下组成或由以下组成)(a)确定需要包含灵芝提取物的组合物的治疗以治疗心血管疾病的哺乳动物，和(b)向哺乳动物给予所述组合物。所述哺乳动物可以是人。所述心血管疾病可以是年龄相关的心功能障碍。所述心血管疾病可以是获得性的心功能障碍。所述心血管疾病可以是先天性的心功能障碍。确定步骤可包括确认哺乳动物包含对组合物治疗有反应的一种或多种心血管疾病症状。确定步骤可包括确认哺乳动物有发展包含对组合物治疗有反应的一种或多种心血管疾病症状的风险。
8.在另一个方面，本发明的特征在于一种用于治疗患有心血管疾病的哺乳动物的方法。所述方法包括(或基本上由以下组成或由以下组成)将包含灵芝提取物的组合物给予确认患有血管疾病或有发展心血管疾病风险的哺乳动物，该心血管疾病包括一种或多种对该
组合物的治疗有反应的症状。所述哺乳动物可以是人。所述心血管疾病可以是年龄相关的心血管功能障碍。所述心血管疾病可以是获得性的心功能障碍。所述心血管疾病可以是先天性的心功能障碍。
9.在另一方面，本发明的特征在于减缓哺乳动物体内与年龄相关的心血管功能障碍的发展的方法。所述方法包括(或基本上由以下组成或由以下组成)(a)确定哺乳动物需要包含灵芝提取物的组合物的治疗以减缓与年龄相关的心血管功能障碍的发展，和(b)向哺乳动物给予所述组合物。所述哺乳动物可以是人。
10.在另一方面，本发明的特征在于减缓与年龄相关的心血管功能障碍的发展的方法。本方法包括(或基本上由以下组成或由以下组成)将包含灵芝提取物的组合物给予确定为需要治疗以减缓与年龄相关的心血管功能障碍的发展的哺乳动物。所述哺乳动物可以是人。确定的哺乳动物可具有对于组合物治疗有反应的一种或多种与年龄相关的心血管功能障碍的症状。
11.在另一方面，本发明的特征在于减缓哺乳动物体内获得性的心血管功能障碍的发展的方法。所述方法包括(或基本上由以下组成或由以下组成)(a)确定哺乳动物需要包含灵芝提取物的组合物的治疗以减缓获得性的心血管功能障碍的发展，和(b)向哺乳动物给予所述组合物。所述哺乳动物可以是人。
12.在另一方面，本发明的特征在于减缓获得性的心血管功能障碍的发展的方法。本方法包括(或基本上由以下组成或由以下组成)将包含灵芝提取物的组合物给予确定为需要治疗以减缓获得性的心血管功能障碍的发展的哺乳动物。所述哺乳动物可以是人。确定的哺乳动物可具有对于组合物治疗有反应的一种或多种获得性的心血管功能障碍的症状。
13.在另一方面，本发明的特征在于减缓哺乳动物体内先天性的心血管功能障碍的发展的方法。所述方法包括(或基本上由以下组成或由以下组成)(a)确定哺乳动物需要包含灵芝提取物的组合物的治疗以减缓先天性的心血管功能障碍的发展，和(b)向哺乳动物给予所述组合物。所述哺乳动物可以是人。
14.在另一方面，本发明的特征在于减缓先天性的心血管功能障碍的发展的方法。本方法包括(或基本上由以下组成或由以下组成)将包含灵芝提取物的组合物给予确定为需要治疗以减缓先天性的心血管功能障碍的发展的哺乳动物。所述哺乳动物可以是人。确定的哺乳动物可具有对于组合物治疗有反应的一种或多种先天性的心血管功能障碍的症状。
15.除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语的意义与本发明所属领域普通技术人员通常所理解的相同。虽然在本发明的实施或测试中可以采用类似于或等同于本文所述的那些方法和材料，但是，下面描述了合适的方法和材料。本文中述及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献都通过引用全文纳入本文。在抵触的情况下，以本说明书(包括定义在内)为准。此外，材料、方法和实施例都仅是说明性，并不构成限制。
16.从下述发明详述和所附权利要求书很容易了解本发明的其他特征和优点。
附图说明
17.图1a-c：灵芝(gl)治疗可减轻主动脉瓣狭窄的严重程度。a：实验示意图显示，从2个月到11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠被给予仅西方饮食(“wd”)或补充有gl的西方饮食(“gl”)。b:瓣尖分离距离(mm)在多个时间点随gl治疗而增加(*表示p《0.05)。c:峰值速度
(mm/sec)在多个时间点随gl治疗而降低(*表示p《0.05)。
18.图2a-c：gl治疗导致左心室收缩功能的改善。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:gl治疗增加了射血分数(*表示p《0.05)。c:gl治疗降低了整体纵向应变(p《0.05)，表明lv收缩功能得到改善。
19.图3a-3c：gl治疗导致左心室收缩力/收缩功能的改善。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:gl治疗使整体圆周应变降低(p《0.01)。c:径向应变随着gl治疗而增加(p＝0.08)。gl治疗的变化方向表明两个图中的lv功能都有所改善。
20.图4a-4c：gl治疗导致左心室舒张/舒张功能的改善和/或心室舒张僵硬度的降低。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:gl治疗后，早期充盈的二尖瓣峰值速度(e)与舒张早期二尖瓣环速度(e')或“e/e'”比值降低(*表示p《0.001)，这与舒张的改善一致。c:反向纵向应变率随gl治疗而增加(p《0.001)，这与改善的lv舒张一致。
21.图5a-5c：gl治疗导致左心室质量的改善，这与预防和主动脉瓣狭窄的患者和动物常见的慢性左心室超负荷的适应不良肥大反应一致。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:通过超声心动图测量测量的左心室质量随着gl治疗而减少(*表示p《0.05)。c:gl降低了由全心湿重测量的总体心脏质量(p《0.05)。
22.图6a-d：gl治疗导致暴露于乙酰胆碱后内皮功能的改善，这与心血管发病率和死亡率降低有关。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:gl治疗3个月后，暴露于乙酰胆碱后的内皮依赖性舒张得到改善(例如，相当于早期动脉粥样硬化，*表示p《0.05)。c:gl治疗6个月后，暴露于乙酰胆碱后的内皮依赖性舒张得到改善(例如，相当于中度动脉粥样硬化，*表示p《0.05)。d:gl治疗9个月后，暴露于乙酰胆碱后的内皮依赖性舒张得到改善(例如，相当于中度动脉粥样硬化，*表示p《0.05)。请注意，gl的长期治疗显著改善了高胆固醇血症的小鼠的内皮功能，几乎完全防止了内皮功能的时间依赖性损伤，这种影响普遍与心血管发病率和死亡率的降低有关。
23.图7a-d：gl治疗通过改善血管平滑肌对一氧化氮的反应性导致血管舒缩功能的改善。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:在动脉粥样硬化的最早期阶段(治疗3个月)，对一氧化氮供体硝普钠的非内皮依赖性舒张并未受损。c:wd处理6个月(中度动脉粥样硬化)会损害非内皮依赖性舒张，但用gl治疗得到了显著改善(*表示p《0.05)。d:wd小鼠在9个月的时间点暴露于硝普钠后的非内皮依赖性舒张显著受损，而通过gl治疗几乎完全正常化(*表示p《0.05)。
24.图8a-g：gl治疗导致血管对收缩激动剂的反应发生变化。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:与wd相比，在三个月的处理后，用gl治疗后暴露于激动剂前列腺素f
2α
(pgf
2α
)后的血管收缩(g)增加(*表示p《0.05)。c:与wd相比，在6个月的处理后，用gl治疗后暴露于激动剂前列腺素f
2α
(pgf
2α
)后的血管收缩(g)反常地减少(*表示p《0.05)。d:与wd相比，在9个月的处理后，用gl治疗后暴露于激动剂前列腺素f
2α
(pgf
2α
)后的血管收缩(g)增加(*表示p《0.05)。e：与wd相比，在用gl治疗3个月后，暴露于激动剂血清素(5-ht)后的血管收缩(g)增加(*表示p《0.05)。f:与wd相比，在用gl治疗6个月后，暴露于激动剂血清素(5-ht)后的血管收缩(g)未变化。g：与wd相比，在用gl治疗9个月
后，暴露于激动剂血清素(5-ht)后的血管收缩(g)增加(*表示p《0.05)。总之，这些数据表明血管平滑肌细胞的收缩功能通过gl的长期治疗得到显著改善，并且可以在功能上逆转延长的wd的负面影响。
25.图9a-e：gl治疗导致内膜斑块胶原厚度的变化(用天狼星红染色并用圆偏振光成像)。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:在用gl治疗的9月龄小鼠中，薄胶原纤维的比例增加。c-d：用gl处理的小鼠的中等厚度纤维(黄色/橙色)基本没有变化，尽管在gl处理后相对较粗的纤维有减少的趋势。e：接受gl的9个月的小鼠的厚纤维比例减少(*表示p《0.05)。总的来说，这些数据表明gl可以逆转和/或减弱在推进动脉粥样硬化中胶原结构的一些有害变化。
26.图10a-c：gl治疗减少了整体斑块大小，但导致内膜斑块钙化的实质性变化(用茜素红染色并用明场显微镜成像)。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:与年龄匹配的同窝仔相比，gl治疗6个月和9个月后内膜斑块减少。c:在接受gl治疗的患有晚期动脉粥样硬化(9个月时间点)的小鼠中，内膜斑块钙化显著减少(*表示p《0.05)。
27.图11a-b：gl治疗导致α平滑肌肌动蛋白适度增加，以抵消动脉粥样硬化进展过程中的病理变化(qrt-pcr)。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b：α-sma通过长期wd喂养降低，并且与病理性平滑肌去分化一致，这种现象在6个月和9个月时被gl部分抵消。虽然很微妙，但这与图8中显示的功能收缩数据大致一致。
28.图12a-c：有或没有gl治疗的情况下，动脉粥样硬化进展期间内皮一氧化氮合酶和nadph氧化酶2的变化(qrt-pcr)。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:gl的长期治疗在任何时间点都没有恢复enos的表达。c：gl长期治疗仅在高胆固醇血症的小鼠治疗9个月后适度降低nox2表达。
29.图13a-b：gl导致动脉粥样硬化早期和晚期(光泽精增强的化学发光)中基础活性氧水平的改善。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:在用gl治疗3或9个月后，用gl长期治疗导致主动脉中活性氧水平的轻微但不显著降低，这表明活性氧水平的主动抑制只是长期gl治疗后改善内皮功能的次要因素。
30.图14a-d：gl导致中度/中等动脉粥样硬化中nadph氧化酶活性的改善(nadph刺激的光泽精增强的化学发光)。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:用gl长期治疗3个月不会导致nadph氧化酶活性降低。c:gl的长期治疗导致主动脉中nadph氧化酶活性在6个月的治疗后适度降低。d:在9个月的治疗后，使用gl的长期治疗并未导致nadph氧化酶活性降低。
31.图15a-c：gl导致晚期动脉粥样硬化中基质金属蛋白酶活性的异构体依赖性变化。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:gl长期治疗可降低动脉粥样硬化疾病最晚期阶段的mmp2表达(即，治疗9个月后)(*表示与年龄匹配的wd组相比p《0.05)。c:与wd相比，在治疗3至9个月后，在动脉粥样硬化进展期间，gl不会持续或显著影响mmp9的表达。
32.图16a-c：gl导致动脉粥样硬化中纤维化信号的改变。a:实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:gl在疾病中期(治疗6个月)增加tgfβ1
表达，这在某些情况下可以减少炎症基因的表达，例如inos(*表示p《0.05)。c:col1a1表达在gl治疗的小鼠疾病的早期和中期阶段持续降低。
33.图17a-c：gl导致动脉粥样硬化中炎症信号的改变。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:在测量的所有时间点，gl不会持续或显著改变tnfα。c:诱导型一氧化氮合酶(inos，一种炎症基因)的表达在gl治疗的小鼠疾病中期降低(*表示p《0.05)。
34.图18a-b：gl导致晚期动脉粥样硬化小鼠衰老细胞负荷减少。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:gl降低高胆固醇血症的小鼠主动脉中p16
ink4a
的表达(细胞衰老的关键标志物)。
35.图19a-d：gl不会一致地影响与动脉粥样硬化中异位成骨相关的关键基因的mrna水平。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b：骨形态发生蛋白2(心血管组织异位钙化的主要驱动因素)不会因gl的长期治疗而减少。c：runx2(成骨的主要调节因子，通常由慢性bmp2升高引起)不会因gl的长期治疗而降低。d：osterix(一种通常由bmp2信号传导诱导的转录因子)在早期动脉粥样硬化中略有减少，但在动脉粥样硬化疾病的后期阶段没有显著减少。
36.图20a-c：gl不会一致地影响与动脉粥样硬化中异位钙化相关的关键基因的mrna水平。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:gl在早期/中期疾病阶段不会改变spp1的表达，但在晚期动脉粥样硬化(9个月时间点)中会轻微降低spp1的表达。c:gl不会改变整个动脉粥样硬化疾病谱中alpl的表达。
37.图21a-c：gl治疗导致按体重归一化后的左心室质量的改善，这与预防和主动脉瓣狭窄的患者和动物常见的慢性左心室超负荷的适应不良肥大反应一致。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:即使在按体重归一化后，通过超声心动图测量测量的左心室质量也随着gl治疗而减少(*表示p《0.05)。c:在对身体大小的变化进行归一化后，由全心湿重测量的总体心脏质量没有被gl改变。
38.图22a-b：gl治疗导致动脉粥样硬化斑块中内膜斑块胶原蛋白水平的增加。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:用灵芝(gl)长期治疗高胆固醇血症的小鼠后，主动脉斑块内膜部分总胶原负荷的变化。请注意，在高胆固醇血症的小鼠中治疗9个月后，gl的长期治疗显著增加了动脉粥样硬化斑块中胶原蛋白的总量，这通常与富含脂质的动脉粥样硬化斑块的稳定一致。
39.图23a-d：gl不会一致地影响与左心室纤维化相关的关键基因的mrna水平。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b-c：直方图显示了整个疾病进展过程中基质金属蛋白酶-2(mmp2)或基质金属蛋白酶-9(mmp9)的表达模式。d:gl确实在疾病早期/晚期持续改变骨膜素(periostin，postn)的表达，但在疾病中期(6个月时间点)降低postn。
40.图24a-e：灵芝长期治疗的高胆固醇血症的小鼠左心室中胶原纤维厚度的变化。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b-e：直方图显示了整个疾病进展过程中每种胶原蛋白厚度的变化。gl在任何阶段都不会改变厚度，这表明gl在整个疾病进展过程中都没有改变左心室不同厚度的组成。
41.图25a-e：灵芝长期治疗高胆固醇血症的小鼠左心室促纤维化标志物基因表达水
平的变化。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b-c：请注意，在整个疾病进展过程中，每个基因都有不同的表达模式tgfβ1(图b)和tgfβ2(图c)。d-e：在早期/晚期疾病阶段，gl治疗不会一致地改变col1a1和col3a1的表达。gl确实显著降低了疾病中期(6个月时间点)的col3a1表达。
42.图26a-b：灵芝长期治疗的高胆固醇血症的小鼠左心室衰老标志物基因表达的变化。a：实验示意图显示，对2个月至11个月大的ldlr-/-/apob
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小鼠给予wd或gl。b:在疾病的早期/中期，gl治疗导致左心室中衰老细胞标记物细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2a(cdkn2a或p16ink4a)的显著减少。请注意，gl不会改变p16ink4a晚期疾病阶段(9个月时间点)的表达。
43.发明详述
44.本发明提供用于治疗患有心血管疾病的哺乳动物的方法和材料，用于治疗有发展心血管疾病的风险的哺乳动物的方法和材料，用于减缓年龄相关的、获得性的或先天性的心血管功能障碍的进展的方法和材料。例如，本发明提供将包含一种或多种gl提取物的组合物给予确定患有心血管疾病的哺乳动物以治疗心血管疾病的方法和材料。如本文所述，术语“心血管疾病”是指涉及心脏、心脏瓣膜和/或血管及其子组件(例如血管/静脉瓣)的一类疾病，包括“心功能障碍”，其涉及心脏、心脏瓣膜、血管和/或其他被认为归类为心血管系统的结构的衰老相关、获得性或先天性功能障碍。在一些情况下，可将含有一种或多种gl提取物的组合物给予确定患有或有风险发展与年龄相关的、获得性或先天性心血管功能障碍的哺乳动物，以减缓该与年龄相关的、获得性或先天性功能障碍的进展。
45.任何合适的哺乳动物都可以被确定为患有心血管疾病或有患心血管疾病的风险。例如，人类和其他灵长类动物如猴子可以被确定为患有心血管疾病或有患心血管疾病的风险。在一些情况下，狗、猫、马、牛、猪、羊、小鼠或大鼠可被确定为患有本文所述的心血管疾病。
46.可以用包含一种或多种如本文所述的gl提取物的组合物治疗任何合适的心血管疾病。例如，心血管疾病，包括但不限于心肌病、高血压性心脏病(例如与高血压有关)、心力衰竭、瓣膜性心脏病、先天性心脏病、风湿性心脏病、肺心病、心律失常、心内膜炎、心肌炎、嗜酸性粒细胞性心肌炎、主动脉瘤、肾动脉狭窄、冠状动脉疾病、外周动脉疾病和脑血管疾病，可以如本文所述进行治疗。在一些情况下，可以用包含一种或多种如本文所述的gl提取物的组合物治疗在心血管组织中具有与年龄相关的心功能障碍的哺乳动物。
47.如本文所述，通过确定心血管风险评分，可以将哺乳动物(例如，人)确定为患有心血管疾病或与年龄相关的心功能障碍或具有患有心血管疾病或与年龄相关的心功能障碍的风险。在某些情况下，风险评分由既往心血管事件(例如中风或心脏病发作)的病史确定。在某些情况下，风险评分由现有的心血管疾病决定。风险评分的实例包括但不限于assign、framingham、qrisk、agatson钙化评分和ascvd风险评分。可用于确定如本文所述待治疗的哺乳动物的评分和风险因素的其他实例包括但不限于：冠状动脉钙化评分、瓣膜钙化评分、超声心动图评分和疾病分层、高敏感性c反应蛋白(hs-crp)、踝臂压力指数、脂蛋白(a)、载脂蛋白a-i和b、纤维蛋白原、脂蛋白亚类和颗粒浓度、同型半胱氨酸、n端b型利钠肽原(nt-probnp)、白细胞计数和肾功能标志物。
48.如本文所述，哺乳动物(例如，人)可通过确定心肌的功能而被确定为患有心血管
疾病。测量心肌功能的实例包括但不限于测量心脏的电活动(例如，心电图)、心肌灌注成像(例如，单光子发射计算机断层扫描(spect))、无应力心脏成像(例如，静息超声心动图、门控计算机断层扫描(ct)成像或磁共振成像(mri))和心脏负荷测试(例如，负荷超声心动图或核负荷试验)。
49.在某些情况下，通过确定左心室(lv)舒张功能、lv收缩储备能力、动脉僵硬度、心脏瓣膜功能、各种组织中的血流和/或血管变窄、和/或内皮细胞功能，可以确定哺乳动物是否患有与年龄相关的心功能障碍。
50.一旦被确定为患有心血管疾病、具有患心血管疾病的风险和/或需要本文所述的治疗，则可以如本文所述治疗哺乳动物。例如，一旦哺乳动物被确定为需要减缓与年龄相关的、获得性的或先天性的心脏、心脏瓣膜或血管功能障碍的进展，则可以向哺乳动物给予包含一种或多种gl提取物的组合物。
51.如文本所述可使用任何合适的gl提取物。例如，可以配制组合物以包括具有表1中描述的成分的gl提取物。如本文所用，“灵芝(ganoderma lucidum)”、“灵芝提取物”、“lingzhi”、“lingzhi提取物”、“reishi”、“reishi提取物”或“gl提取物”是指包含在灵芝源材料中或从灵芝源材料中提取的生物活性分子的广泛组合物的制剂，包括任何提取物结构、子结构、组分或衍生/分离的子组分。任何合适的灵芝源材料均可用于生产gl提取物。例如，整个菌伞、根、茎、菌盖和/或孢子可以从灵芝获得并单独用作治疗剂或用作生产gl提取物的源材料。
52.表1
53.成分范围具体量的实例粗多糖≥8.0％15.9％总三萜≥4.0％5.8％其它≤88％ 54.可使用任何合适的方法来生产可用于制备本文提供的组合物的gl提取物。例如，任何gl提取物的递送方式可以包括但不限于以未加工或加工形式直接食用菌伞和/或其成分，孢子/gl菌伞结构的超声破碎，co2和/或孢子/gl菌伞结构的冲击压裂，将孢子/gl菌伞结构粉碎成可消费的粉末形式，孢子/gl菌伞结构的化学降解和提取(包括但不限于乙醇、水和其他提取介质)，和/或这些提取方法的任何组合，可用于制备gl结构、子结构、组分、衍生/分离的子组分或提取物。在某些情况下，gl提取物可以通过商业途径获得。实例包括但不限于可以从浙江寿仙谷医药股份有限公司(灵芝碎灵芝孢子提取物，g20160355)；安徽利民生物科技股份有限公司(丹化灵芝孢子粉，批准文/货号：g20141225；丹化灵芝口服液批准文/货号：g20040863；灵芝孢子油软胶囊，批号20525c)，或仙芝楼生物科技有限公司(灵芝孢子油软胶囊；灵芝细胞壁破碎孢子粉，批准文号/货号g20100068)，御惠牌(npn/货号80035167)，浙江康巴药业有限公司(批准文号/货号g20140842)或浙江寿仙谷药业(灵芝孢子油软胶囊，g20200107)获得的gl组合物。
55.一旦获得，gl提取物可原样使用，可用于配制包含gl提取物的组合物，或可添加至食品，例如但不限于膳食替代品、零食和饮料。在某些情况下，gl提取物可用于配制为多种维生素、片剂或胶囊的食品补充剂。当配制包含一种或多种gl提取物以用于如本文所述使用的组合物时，该组合物可包含任何合适量的gl提取物。例如，可将组合物配制成包含《1％
(例如，浓缩饮料或膳食/零食中的重量/体积)至约99.9％(例如，胶囊形式)的gl提取物。在一些情况下，包含gl提取物的组合物可包含gl提取物作为用于治疗心血管疾病和/或用于减缓与年龄相关的、获得性或先天性的心功能障碍的进展的唯一活性成分。在一些情况下，组合物可以配制成含有一种或多种gl提取物和一种或多种其他成分。例如，包含gl提取物的组合物可包括一种或多种如表2-3中所述的其他成分。
56.表2.swanson 7蘑菇复合物(草药补充剂)
57.成分百分比gl提取物14％姬松茸(agaricus blazei)提取物14％淡色生赤壳菌(bionectria ochroleuca)14％灰树花菌(grifola frondosa)14％猴头菌(hericium erinaceus)14％香菇(lentinula edodes)14％采绒革盖菌(coriouls versicolor)14％
58.表3.solgar灵芝香菇舞茸提取物
[0059][0060]
含包含gl提取物的组合物可以在数天至数月或数年的时间段内一次或多次给予哺乳动物。在一些情况下，可以将包含gl提取物的组合物配制成药学上可接受的组合物以给予哺乳动物。例如，治疗有效量的包含gl提取物的组合物可以与一种或多种药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂一起配制。药物组合物可以配制成固体或液体形式给予，包括但不限于无菌溶液、悬浮液、缓释制剂、片剂、胶囊、丸剂、粉剂和颗粒剂。
[0061]
可用于本文所述药物组合物中的药学上可接受的载体、填充剂和赋形剂包括但不限于离子交换物质、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂，血清蛋白质如人血清白蛋白，缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
[0062]
包含本文所述的gl提取物的药物组合物(例如，包含对解决心血管疾病的一种或多种症状有活性的gl提取物的药物组合物)可设计用于口服或肠胃外(包括皮下、肌内、静
脉内和皮内)给予。当口服给药时，药物组合物可以是丸剂、片剂或胶囊剂的形式。适用于肠胃外给予的组合物包括水性和非水性无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质。可用单位剂量或多剂量容器，例如密封的安瓿和药瓶提供该制剂，也可通过冷冻干燥(冻干)条件保存该组合物，临用前只需要加入无菌液体载体如注射用水即可使用。临时注射溶液和悬浮液可由无菌粉末剂、颗粒剂和片剂制备。
[0063]
在一些情况下，包括gl提取物的药学上可接受的组合物可以局部或全身给予。例如，本文提供的组合物可以通过静脉注射或输血局部给予。在一些情况下，本文提供的组合物可以全身性地、口服地或通过注射给予哺乳动物(例如，人)。
[0064]
有效剂量可根据心血管疾病的严重程度、给予途径、对象的年龄和一般健康状况、赋形剂的使用、与其他治疗方法共同使用的可能性以及治疗医师的判断而变化。例如，包含gl提取物的组合物的合适剂量可在约10微克至约1000微克、约1毫克至约1000毫克或约1克至10克组合物/天的范围内，这取决于产品纯度、总产品组成(有或没有破裂的孢子壳)和所治疗的病症。
[0065]
包含本文所述的gl提取物的组合物的有效量可以是减轻哺乳动物(例如人类)心血管疾病症状和/或减缓与年龄相关的、获得性或先天性心功能障碍的进展而不对哺乳动物产生严重毒性的任何量。例如，包含gl提取物的组合物的有效量可以是每天约25mg至50mg。如果特定哺乳动物对特定量没有反应，则给予的组合物的量可以增加，例如两倍。在接受更高的剂量后，可以监测哺乳动物对治疗和毒性症状的反应，并进行相应的调整。有效量可以保持不变，也可以根据哺乳动物对治疗的反应而调整为滑动量表或可变剂量。各种因素会影响用于特定应用的实际有效量。例如，给予频率、治疗持续时间、多种治疗剂的使用、给予途径和病症(例如心血管疾病)的严重程度可能需要增加或减少给药的实际有效量。
[0066]
包含本文所述的gl提取物的组合物的给予频率可以是减轻哺乳动物(例如人类)心血管疾病症状和/或减缓与年龄相关的、获得性或先天性心功能障碍的进展而不对哺乳动物产生显著毒性的任何频率。例如，包含gl提取物的组合物的给予频率可以是大约每天一次至大约每月一次。在治疗期间，本文所述的包含gl提取物的组合物的给予频率可以保持恒定或可变。用包含本文所述的gl提取物的组合物的治疗过程可包括休息期。例如，包含gl提取物的组合物可以在两周内每天给药，然后是两周的休息期，这样的方案可以重复多次。对于有效量，各种因素会影响用于特定应用的实际给予频率。例如，有效量、治疗持续时间、多种治疗剂的使用、给予途径和病症(例如心血管疾病)的严重程度可能需要增加或减少给予频率。
[0067]
在一些情况下，包含gl提取物的组合物可以与心血管疾病的其他预防或治疗疗法组合使用。例如，但不限于，包含gl提取物的组合物可以与ace抑制剂、醛固酮抑制剂(例如，依普利酮或螺内酯)、血管紧张素ii受体阻滞剂、β-阻滞剂、钙通道阻滞剂、降胆固醇药物、地高辛、利尿剂、正性肌力治疗、镁或钾、前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9型(pcks9)抑制剂、血管扩张剂和/或华法林一起给予。
[0068]
包含本文所述的gl提取物的组合物的有效持续时间可以是减轻哺乳动物(例如人类)心血管疾病症状和/或减缓与年龄相关的、获得性或先天性心功能障碍的进展而不对哺乳动物产生显著毒性的任何持续时间。在某些情况下，有效持续时间可以从几天到几个月
到几年不等。多个因素会影响用于特定治疗的实际有效持续时间。例如，有效持续时间可随给予频率、有效量、多种治疗剂的使用、给药途径和所治疗病症的严重程度而变化。
[0069]
在一些情况下，可以监测治疗过程和/或与所治疗的病症(例如，心血管疾病)相关的一种或多种症状的严重性。可以使用任何合适的方法来确定是否正在治疗患有心血管疾病的哺乳动物。例如，临床扫描技术可用于确定正在治疗的哺乳动物(例如人)中心血管疾病症状的存在或不存在。
[0070]
以下实施例将进一步描述本发明，这些实施例不限制权利要求书所述的本发明范围。
实施例
[0071]
实施例1
–
使用灵芝对ldlr-/-/apob
100/100
小鼠进行长期治疗(治疗持续时间9个月)
[0072]
小鼠品系和动物饲养
[0073]
将ldlr-/-/apob
100/100
小鼠杂交以保持两个基因突变的纯合性，并产生同窝匹配的ldlr-/-/apob
100/100
后代，这些后代被随机分配到对照组或实验治疗组。ldlr-/-/apob
100/100
小鼠模型先前已证明可预测ii期临床试验中的患者反应(nct02481258：评估ataciguat(hmr1766)对中度钙化主动脉瓣患者主动脉瓣钙化影响的ii期随机、安慰剂控制、双盲研究)。将小鼠置于西方饮食+灵芝(gl)或仅西方饮食(“wd”)中，并分成图中所示的组：“wd”或“gl”。每组保持西方饮食+/-gl 9个月。
[0074]
结果
[0075]
心血管系统将含氧血液输送到身体的所有组织，因此涉及每个组织的健康和整个生物体的寿命。因此，研究衰老对心脏和动脉系统的影响有助于治疗与年龄相关的心功能障碍。在衰老过程中，心血管组织的病理改变包括左心室(lv)舒张功能改变、lv收缩逆转能力减弱、动脉僵硬增加和内皮功能受损。在这项研究中，对接受gl治疗的小鼠进行了评估：主动脉瓣狭窄、lv舒张收缩功能、lv收缩力收缩功能、lv舒张僵硬度、内皮功能和平滑肌功能。
[0076]
心血管僵硬伴随着年龄相关的心功能障碍。因此，经过gl的9个月的治疗后，使用峰值速度和收缩期瓣尖分离测量评估主动脉瓣功能。与仅wd对照组相比，gl组表现出显著降低的峰值速度(p《0.01)(图1c)并且表现出更大的收缩瓣尖分离距离(p＝0.06，图1b)。请注意，瓣尖分离距离的增加和跨血管峰值速度的降低与主动脉瓣狭窄严重程度的降低和功能改善的迹象一致。
[0077]
接下来，对左心室收缩和收缩功能的评估显示在一系列测试中有所改善。虽然射血分数的差异在两组之间没有显著差异(p《0.08)，但gl组的射血分数确实增加(图2b)。在测量整体纵向应变时，gl组比wd对照组表现出显著下降(例如，更负)(p《0.05，图2c)。gl组还表现出整体圆周应变的显著降低(例如，更负)(p《0.01，图3b)。最后，gl径向应变的增加(p《0.08，图3c)表示了第四个证据。总的来说，所有四项证据表明，gl治疗后左心室收缩力和收缩功能得到改善。
[0078]
对整体lv功能的进一步测试表明，在用gl治疗后，心室舒张功能得到改善。e/e'比率(早期充盈的二尖瓣峰值速度(e)与早期舒张期二尖瓣环速度(e'))在gl治疗的小鼠中降低(p《0.001，图4b)。同时，反向纵向应变率随gl治疗而增加(p《0.001，图4c)。这两个发现都
与左心室舒张/舒张功能的改善和/或心室舒张僵硬度的降低一致。
[0079]
心室适应/适应不良的另一个标志是心室质量。特别是，心室增厚与对慢性左心室超负荷的适应不良肥大反应有关，常见于主动脉瓣狭窄患者和动物。左心室质量的超声心动图测量显示gl治疗的小鼠减少(p《0.01，图5b，按体重归一化后仍然存在，图21b)以及整体心脏湿重减少(图5c，按图21c中的体重归一化)，表明gl可能有助于预防左心室适应不良的肥厚反应。
[0080]
在衰老过程中，血管会发生结构和功能上的改变。例如，管腔扩大导致壁增厚，从而导致内皮细胞功能下降。功能下降表现为响应各种生理刺激的舒张能力下降，这可导致血管僵硬度增加、血栓形成风险增加以及动脉粥样硬化及其并发症加速。因此，在用gl治疗后评估了内皮功能。乙酰胆碱治疗后测量内皮舒张显示gl治疗显著改善了内皮舒张(p《0.05，图6b-d；6b
–
3个月，6c
–
6个月，6d
–
9个月)。高胆固醇血症的小鼠的内皮功能改善与心血管发病率和死亡率降低有关。
[0081]
在衰老过程中，血管平滑肌细胞对内皮释放的保护因子(例如一氧化氮)的敏感性降低，最终会促进血管张力增加、血管僵硬度和血管钙化加速。因此，非内皮依赖性舒张机制在衰老过程中发挥着越来越大的作用。评估非内皮依赖性舒张有助于全面了解gl治疗。通过使用一氧化氮供体(硝普钠)测量血管平滑肌反应来评估非内皮依赖性舒张，并表明用gl治疗可改善舒张(p《0.05，图7b-d；7b
–
3个月，7c
–
6个月，7d
–
9个月)。血管平滑细胞的响应的增加表明功能增加，这补充了内皮依赖性舒张的改善(图6)。
[0082]
血管钙化和硬化的早期阶段与血管平滑肌收缩蛋白表达的损失和力产生的损失有关，这突出了非内皮依赖性机制的其他重要性。在用收缩性激动剂前列腺素f
2α
(图8b-d；8b
–
3个月，8c
–
6个月，8d
–
9个月)和血清素(图8e-g；8e
–
3个月，8f
–
3个月，8g
–
9个月)治疗后，测量血管平滑肌收缩显示，在多个时间点用gl治疗后收缩显著增加(两者均p《0.05)。收缩的改善伴随着血管平滑肌的反应性的增加，从而显示出gl对内皮依赖性和非依赖性机制的影响。
[0083]
内膜斑块纤维化可能是斑块僵硬度(其可增加血管钙化)的主要因素，也可能是斑块破裂和心血管事件风险的重要决定因素。使用图9b中的天狼猩红染色和圆偏振光成像(其允许评估相对胶原纤维厚度)测量胶原纤维厚度显示，长期使用gl治疗增加了严重动脉粥样硬化内膜斑块内薄胶原纤维的比例，使其更类似于未成熟斑块(例如，类似于较小的3个月wd病变)。这与9个月时间点gl治疗的小鼠/病变中厚纤维比例的减少有关。然而，如图22b所示，gl可能会增加整体斑块纤维化，这将稳定富含脂质的斑块。总的来说，这些结构改善伴随着心血管僵硬度的其他测量(例如，图4中的左心室舒张僵硬度)的改善而发生，这表明gl对多种组织中心血管僵硬度和斑块稳定性的影响更广泛。
[0084]
虽然内膜斑块大小是心血管风险的重要决定因素，但内膜斑块组成是心血管风险、心血管僵硬度和对降脂治疗的反应(例如，病变消退的倾向)的主要决定因素。特别是，心血管钙化不仅会增加发病率和死亡率的风险，而且使斑块因降脂/风险因素缓解而消退的可能性大大降低。使用茜素红染色对斑块大小和钙化负荷进行的组织病理学评估(图10)表明，长期使用gl治疗仅适度减弱高胆固醇血症小鼠的病变大小(图10b)，但与年龄和同窝小鼠匹配的wd小鼠相比，显著降低了主动脉斑块中的钙负荷(图10c)。因此，这些数据表明gl是一种可行的策略，可减少心血管钙化和随后相关的心血管风险增加、心血管僵硬度增
加，并改善响应积极降脂的病变消退。
[0085]
血管平滑肌细胞中收缩蛋白表达的减少(通常称为vsmc去分化)促进血管纤维化和钙化。gl治疗小鼠的主动脉段中α平滑肌肌动蛋白表达的分析表明，在动脉粥样硬化晚期，α-sma倾向于随着gl治疗而增加(图11)。这表明gl治疗可能是一种可行的策略，以降低血管平滑肌去分化和随后的各种疾病状况下的心血管发病率/死亡率。
[0086]
内皮一氧化氮合酶(enos)的表达是一氧化氮生物利用度和非内皮依赖性舒张的主要促进因素，在疾病中通过增加nadph氧化酶衍生的自由基(特别是nox2同种型)来对抗。enos表达的测量表明，在早期、中期或晚期动脉粥样硬化中，用gl长期治疗并未显著增加enos表达(图12b)。然而，nox2表达的测量确实表明，这种有害基因的表达在gl治疗9个月后适度降低(与9个月的wd相比，图12c)。使用光泽精增强的化学发光评估的活性氧水平还表明，gl可能会降低疾病早期的基础活性氧水平(治疗3个月后的图13b)，并降低疾病后期的nadph氧化酶活性(治疗6个月后的图14c)。这表明长期使用gl治疗可能有利于减少动脉粥样硬化中活性氧的产生并改善内皮依赖性舒张，尽管这种变化的幅度可能使其成为导致观察到的血管功能显著改善的次要机制(图6)。
[0087]
基质金属蛋白酶同种型的变化是胶原纤维厚度、组织硬度和斑块因胶原降解引起的破裂易感性变化的主要因素。gl治疗的小鼠的主动脉中mmp2和mmp9的表达的测量表明，长期用gl治疗显著降低了疾病晚期的mmp2表达(治疗9个月后的图15b，p《0.05)。mmp9在相同组织中的表达不会因长期服用gl而发生持续或显著变化。这表明长期使用gl治疗可能是减少心血管组织中过度基质重塑和降低心血管事件风险的可行策略。
[0088]
转化生长因子β-1是组织纤维化和基质重塑的主要调节因子，还可以以上下文相关的方式调节细胞增殖和炎症。主动脉中tgfβ-1的测量表明，在动脉粥样硬化的中等/中度阶段，用gl长期治疗会增加tgfβ1表达(治疗6个月后的图16b，p《0.05)，这可能有助于抑制炎症。下游tgfβ-1靶基因胶原蛋白1a1(col1a1)在gl治疗的小鼠的疾病早期阶段(图16c，在3个月和6个月的时间点)的表达降低，这与显示gl治疗内膜斑块中胶原纤维厚度减少的组织学数据一致(图9)。总的来说，这些数据表明，用gl治疗可能是一种可行的策略，其可以增强tgfβ-1信号传导并利用其保护作用，同时在动脉粥样硬化进展过程中降低病理性胶原动力学/周转。
[0089]
炎症是动脉粥样硬化斑块扩张和不稳定的主要驱动因素，并且还与随着年龄的增长加速心血管硬化有关。高胆固醇血症的小鼠的主动脉组织中的tnfα测量表明，长期用gl治疗不会显著降低这种上游驱动炎症的关键因素的表达(图17b)。然而，inos的测量显示gl在中度/中等动脉粥样硬化中降低了这种促炎基因的表达(图17c，p《0.05)。这提示长期的gl治疗可能被证明可有效减少动脉粥样硬化疾病特定阶段的炎症信号。
[0090]
细胞衰老被认为是加速的机体衰老和出现多种病理年龄相关表型(心血管疾病和其他病症)的主要因素。p16
ink4a
(衰老细胞负荷的关键标志物)的测量表明，对于wd，随着时间的推移，衰老会增加，而用gl治疗可以减少晚期动脉粥样硬化中的衰老细胞负荷(图18b，9个月的治疗)。这表明gl可作为一种衰老药物，可用于预防多种与年龄相关的心血管疾病，以及多种其他与年龄相关的、与衰老相关的、慢性发病和/或其他疾病状况。
[0091]
大量证据表明，心血管钙化可以由不同部位(主动脉、主动脉瓣、微血管等)的成骨和非成骨机制诱导，这些机制的优先靶向可能会推动新策略的发展，以减缓复杂斑块内钙
化的进展。bmp2(心血管组织钙化的主要驱动因素，图19b)、runx2(成骨的主要调节器，图19c)和osterix(通常由bmp2信号传导诱导的转录因子)的测量表明，gl不会减少中度至重度血管疾病中的成骨信号传导。这些数据还表明，虽然gl在疾病早期(即治疗3个月后)不降低bmp2(图19b)或runx2(图19c)，但gl治疗确实倾向于降低早期疾病中的osterix表达(图19d)。血管组织中与成骨驱动钙化相关的其他基因的测量
‑‑
例如骨桥蛋白(图20b中的spp1)和碱性磷酸酶(图20c中的alpl)，进一步支持了gl对晚期动脉粥样硬化疾病中成骨信号传导没有影响。总的来说，这些数据表明gl可能在非常早期的疾病中选择性地调节一些成骨信号因子，但不太可能是导致晚期疾病中gl驱动的钙化减少的主要机制(即，gl可以通过非成骨机制减少钙化)。重要的是，这也表明gl可能会减少心血管组织中的钙化(例如，图10c)，但不会通过干扰异位和原位骨化的保守机制对骨的骨化/骨矿物质密度产生负面影响。
[0092]
wd+gl治疗后左心室的评估
[0093]
除了评估总体左心室功能外，还分析了左心室的纤维化。如前所述，基质金属蛋白酶同种型的变化是胶原纤维厚度、组织硬度和斑块因胶原降解引起的破裂易感性变化的主要因素。gl治疗的小鼠的左心室中mmp2和mmp9的表达的测量表明，长期用gl治疗降低了疾病晚期的mmp2表达(图23b显示了在治疗6个月和9个月时表达的降低)。与仅接受西方饮食的小鼠相比，左心室中mmp9的表达略有增加(图23c)。此外，骨膜蛋白(posn)(一种分泌的细胞外基质蛋白，在组织发育和再生中起作用，包括伤口愈合和心肌梗塞后的心室重构)在疾病的中期发生了改变(图23d)。这表明长期使用gl治疗不会改变左心室的纤维化，因此可能是减少心血管组织中过度基质重塑和降低心血管事件风险的可行策略。
[0094]
胶原纤维的厚度可能是斑块僵硬度(其可增加血管钙化)的主要因素，也可能是斑块破裂和心血管事件风险的重要决定因素。如图24a所示，并且如图9中的实验所进行的那样，使用图24b-e中的天狼猩红染色和圆偏振光成像(其允许评估相对胶原纤维厚度)测量胶原纤维厚度表明，用gl长期治疗不会显著改变厚度。在整个疾病进展过程中，左心室中薄胶原纤维的比例没有变化。因此，结合其他心血管僵硬度测量的改善(例如，图4中的左心室舒张僵硬度)表明gl对多种组织中心血管僵硬度和斑块稳定性的影响更广泛。
[0095]
如上所述，转化生长因子β-1是组织纤维化和基质重塑的主要调节因子。左心室中tgfβ-1的测量表明，在动脉粥样硬化的任何阶段，用gl长期治疗不会显著改变tgfβ1或tgfβ2的表达(图25b和25d)，这可能有助于抑制炎症。有趣的是，在gl治疗的小鼠中，包括胶原蛋白1a1(col1a1)和胶原蛋白3a1(col3a1)在内的tgfβ信号下游靶基因的表达均在疾病中期(图25c和25e在6个月的时间点)降低。总的来说，这些数据表明用gl治疗可能是增强tgfβ-1和/或tgfβ-2信号传导并利用tgfβ信号传导的保护作用的可行策略。
[0096]
最后，为了确定用wd或wd+gl治疗的小鼠左心室的细胞衰老，测量了p16
ink4a
(细胞衰老的关键标志物)的表达。在此，p16
ink4a
的表达表明对于wd，衰老随着时间推移而增加，而用gl治疗可以减少动脉粥样硬化期间左心室中的衰老细胞负荷(图26b，3个月治疗和6个月治疗)。这些结果表明，gl可以作为一种衰老药物，可用于预防多种与年龄相关的心血管疾病。
[0097]
实施例2
–
将灵芝提取物给予确定患有心血管疾病的人
[0098]
基于心电图(ecg)的结果，人类患者被鉴定为患有心血管疾病，并被确定需要用包
含gl提取物的组合物进行治疗。向患者口服给予200mg剂量的包含gl提取物的药物组合物。在治疗过程中，使用心电图监测患者的症状。心电图结果显示症状减轻。每次心电图检查后，都会评估给予的剂量和频率，但不会进行任何更改。鉴于症状成功减轻，治疗继续，目的是在症状消除后重新评估剂量。
[0099]
实施例3
–
将灵芝提取物给予人以减缓与年龄相关的心功能障碍人类患者被确定为需要用包含gl提取物的组合物治疗以减缓患者体内与年龄相关的、获得性或先天性心功能障碍的发展。将每天剂量为200mg的包含gl提取物的药物组合物口服给予被确定的人类患者。患者接受这种治疗几个月到几年(在某些情况下，在他们的剩余生命中)以减缓与年龄相关的心功能障碍的发展。
[0100]
其他实施方式
[0101]
应理解，虽然结合具体说明描述了本发明，但上述说明旨在阐释而非限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书所限定。其他方面、优点和修改在以下权利要求的范围内。