针对替诺福韦及其衍生物的抗体

针对替诺福韦及其衍生物的抗体1.对相关申请的交叉引用本技术要求2019年9月20日提交的美国临时专利申请no.62/903,404的权益，其内容经此引用并入本文。2.领域本发明涉及针对替诺福韦和替诺福韦衍生物的抗体，以及包含其的组合物和试剂盒。3.背景替诺福韦（tfv）是选择性抑制逆转录病毒如hiv-1和乙型肝炎中的逆转录酶（rt）的核苷酸逆转录酶抑制剂。其主要用于治疗hiv-1/aids和慢性乙型肝炎感染。替诺福韦通过并入生长的dna链而诱导dna转录的过早链终止，由此防止病毒复制并降低病毒载量。“prep”（暴露前预防）疗法是指每日给予替诺福韦和恩曲他滨以预防hiv感染的方案。已经表明替诺福韦的日剂量在通过性传播和药物使用处于高感染风险的对象中使得hiv发病率降低48.9%。4.对基于富马酸替诺福韦二吡呋酯（tdf）/恩曲他滨（ftc）的prep的依从性的药理学测量——其中在基质，如血浆、干血斑（dbs）或毛发中评估tfv药物水平（参见例如gandhi,m.和greenblatt,r.m.,anninternmed.,137(8):696-697(2002)；gandhi等人,aids,23(4):471-478(2009)；和liu等人,plosone,9(1):e83736.3885443(2014)），比自我报告的依从性更准确地捕获药物摄入和预测结果（marrazzo等人,nengljmed,372(6):509-518(2015)；grant等人,nengljmed,363(27):2587-2599(2010)；anderson等人,scitranslmed.,4(151):151ra125(2012)；vandamme,l.和corneli,a.,nengljmed.,368(1):84(2013)；blumenthal,j.和haubrich,r.,expertopin.pharmacother.,14(13):1777-1785(2013)；musinguzi等人,aids,30(7):1121-1129(2016)；donnell等人,jacquirimmunedeficsyndr.,66(3):340-348(2014)；和thigpen等人,nengljmed.,367(5):423-434(2012)）。药物依从性监测在prep中尤其重要（baxi等人,jacquirimmunedeficsyndr.,68(1):13-20(2015)；和koss等人,clininfectdis.,66(2):213-219(2018)），其中反应的替代性生物标志物（例如治疗中的hiv病毒载量）不可得。但是，当前的分析任何基质（包括易得的尿液）中的prep药物水平的方法（koenig等人,hivmed.,18(6):412-418(2017)）需要液相色谱-串联质谱法（lc-ms/ms），其无法实时进行。5.仍然需要提供对替诺福韦或其衍生物的prep疗法的依从性的精确、快速和低成本监测的组合物和方法。6.发明概述本公开提供多克隆抗体组合物，其包含特异性结合替诺福韦（tfv）或替诺福韦衍生物的哺乳动物抗体的异质群体，其中所述哺乳动物抗体的异质群体针对式(i)或式(ii)的化合物或其可药用盐生成：其中：r1和r2各自独立地选自氢、c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、芳基、芳基烷基、氰基烷基和-(c1-c6-亚烷基)-y-(c1-c6烷基)，其中y选自-o-、-nh-、-s-、-c(o)nh-、-c(o)o-、-c(o)s-、-oc(o)nh-、-oc(o)o-和-nhc(o)nh-；且x是连接基。7.本公开还提供一种用于检测样品中的替诺福韦或替诺福韦衍生物的存在的固体载体，其包含固定于其上的上述多克隆抗体组合物。8.还提供一种检测获自对象的样品中的替诺福韦或替诺福韦衍生物的方法，所述方法包括：(a)在允许替诺福韦或替诺福韦衍生物（如果存在于样品中）与多克隆抗体组合物结合的条件下，使获自对象的样品与上述固体载体接触，和(b)检测与多克隆抗体组合物结合的替诺福韦或替诺福韦衍生物的结合。9.本公开进一步提供一种用于检测获自对象的样品中的替诺福韦或替诺福韦衍生物的存在的测定法，其包括：(a)使生物样品与上述多克隆抗体组合物接触，其中对象正在经受替诺福韦或替诺福韦衍生物的治疗；和(b)检测与替诺福韦或替诺福韦衍生物结合的多克隆抗体组合物。10.本公开提供多克隆抗体组合物用于检测获自对象的样品中的替诺福韦或替诺福韦衍生物的用途，其中所述多克隆抗体组合物包含特异性结合替诺福韦（tfv）或替诺福韦衍生物的哺乳动物抗体的异质群体，并且其中所述哺乳动物抗体的异质群体针对式(i)或式(ii)的化合物或其可药用盐生成：其中：r1和r2各自独立地选自氢、c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、芳基、芳基烷基、氰基烷基和-(c1-c6-亚烷基)-y-(c1-c6烷基)，其中y选自-o-、-nh-、-s-、-c(o)nh-、-c(o)o-、-c(o)s-、-oc(o)nh-、-oc(o)o-和-nhc(o)nh-；且x是连接基。11.附图简述图1是列出对来自伴侣prep研究的尿样进行的elisa和lfa免疫测定法的数据的表。这两种免疫测定法都利用本文中公开的替诺福韦结合抗体。将免疫测定法数据与来自对血浆样品进行的液相色谱-串联质谱法（lc-ms/ms）的数据进行比较。12.图2a-2g是显示伴侣prep尿样1-38（图2a）、39-76（图2b）、77-114（图2c）、115-152（图2d）、153-190（图2e）、191-229（图2f）和230-250（图2g）的曲线数据的表。13.图3是列出对来自i-breathe研究的尿样进行的elisa和lfa免疫测定法的数据的表。这两种免疫测定法都利用本文中公开的替诺福韦结合抗体。将免疫测定法数据与来自对血浆样品进行的液相色谱-串联质谱法（lc-ms/ms）的数据进行比较。14.图4a-4g是显示i-breathe尿样1-38（图4a）、39-76（图4b）、77-114（图4c）、115-152（图4d）、153-190（图4e）、191-228（图4f）和229-231（图4g）的曲线数据的表。15.发明详述本公开至少部分基于与替诺福韦（tfv）和替诺福韦衍生物结合的高度特异性多克隆抗体的生成，其能够检测尿液和血清中的临床相关截止值的tfv。16.定义为了便于理解本技术，下面定义许多术语和短语。在详述的通篇阐述了另外的定义。17.本文所用的术语“免疫球蛋白”或“抗体”是指在脊椎动物的血液或其它体液中发现的蛋白质，其被免疫系统用于识别和中和外来物，如细菌和病毒。通常，免疫球蛋白或抗体是包含至少一个互补决定区（cdr）的蛋白质。cdr形成抗体的“高变区”，其负责抗原结合（下文进一步论述）。完整免疫球蛋白通常由四个多肽组成：重(h)链多肽的两个相同拷贝和轻(l)链多肽的两个相同拷贝。各重链含有一个n端可变（vh）区和三个c端恒定（ch1、ch2和ch3）区，各轻链含有一个n端可变（vl）区和一个c端恒定（cl）区。抗体的轻链可基于它们的恒定结构域的氨基酸序列被指定为两种不同类型之一：kappa（κ）或lambda（λ）。在典型的免疫球蛋白中，各轻链通过二硫键连接到重链，且两条重链通过二硫键互相连接。轻链可变区与重链可变区对齐，轻链恒定区与重链的第一恒定区对齐。重链的其余恒定区彼此对齐。18.每对轻链和重链的可变区形成抗体的抗原结合位点。vh和vl区具有相同的一般结构，每个区包含四个框架区（fw或fr）。本文所用的术语“框架区”是指可变区内的位于cdr之间的相对保守的氨基酸序列。在各个可变结构域中存在四个框架区，被称为fr1、fr2、fr3和fr4。框架区形成β折叠，其提供可变区的结构框架（参见例如c.a.janeway等人(eds.),immunobiology,5thed.,garlandpublishing,newyork,n.y.(2001)）。19.框架区通过三个cdr连接。如上文论述，三个cdr，被称为cdr1、cdr2和cdr3，形成抗体的“高变区”，其负责抗原结合。cdr形成环，其连接由框架区形成的β-折叠结构，并在一些情况下包含由框架区形成的β-折叠结构的一部分。尽管轻链和重链的恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但恒定区可影响可变区的取向。恒定区还表现出各种效应子功能，如通过与效应子分子和细胞的相互作用参与抗体依赖性的补体介导的溶解或抗体依赖性的细胞毒性。20.如本文所用，当抗体或其它实体（例如抗原结合结构域）“特异性识别”或“特异性结合”抗原或表位时，其优先识别蛋白质和/或大分子的复杂混合物中的抗原，并且对抗原或表位的结合亲和力明显高于对没有展示出抗原或表位的其它实体的亲和力。在这方面，“明显更高的亲和力”是指亲和力足够高以致能够使用所需测定法或测量装置检测与实体有区别的抗原或表位。通常，其是指具有至少107m-1（例如》107m-1、》108m-1、》109m-1、》1010m-1、》1011m-1、》1012m-1、》1013m-1等）的结合常数(ka)的结合亲和力。在某些这样的实施方案中，抗体能够结合不同抗原，只要不同的抗原包含该特定表位。在某些情况下，例如，来自不同物种的同源蛋白可能包含相同的表位。21.术语“抗体的片段”、“抗体片段”和抗体的“抗原结合片段”在本文中可互换使用，以指保留特异性结合抗原的能力的抗体的一个或多个片段（通常参见holliger等人,nat.biotech.,23(9):1126-1129(2005)）。抗体片段理想地包含例如一个或多个cdr、可变区（或其部分）、恒定区（或其部分）或其组合。抗体片段的实例包括但不限于，(i)fab片段，其是由vl、vh、cl和ch1结构域组成的一价片段，(ii)f(ab’)2片段，其是包含在铰链区通过二硫桥连接的两个fab片段的二价片段，(iii)fv片段，其由抗体的单臂的vl和vh结构域组成，(iv)fab’片段，其通过使用温和还原条件断裂f(ab’)2片段的二硫桥而得，(v)二硫键稳定化fv片段（dsfv），和(vi)结构域抗体（dab），其是特异性结合抗原的抗体单可变区结构域（vh或vl）多肽。22.本文所用的术语“单克隆抗体”是指由针对抗原上的单表位的b淋巴细胞的单克隆产生的抗体。相反，“多克隆”抗体是由动物体内的不同b细胞谱系分泌的抗体。多克隆抗体是识别相同抗原上的多个表位的免疫球蛋白分子的异质集合。cambridgeuniversitypress,cambridge,1987中；各自的整个内容经此引用并入本文。28.本文所用的术语“烷基”是指含有1至24个碳原子，例如1至16个碳原子（c1-c16烷基）、1至14个碳原子（c1-c14烷基）、1至12个碳原子（c1-c12烷基）、1至10个碳原子（c1-c10烷基）、1至8个碳原子（c1-c8烷基）、1至6个碳原子（c1-c6烷基）、或1至4个碳原子（c1-c4烷基）的直链或支链饱和烃链。烷基的代表性实例包括但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、正十一烷基和正十二烷基。29.本文所用的术语“烯基”是指含有2至24个碳原子并含有至少一个碳-碳双键的直链或支链烃链。烯基的代表性实例包括但不限于，乙烯基、2-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、3-丁烯基、4-戊烯基、5-己烯基、2-庚烯基、2-甲基-1-庚烯基和3-癸烯基。30.本文所用的术语“炔基”是指含有2至24个碳原子并含有至少一个碳-碳三键的直链或支链烃链。炔基的代表性实例包括但不限于，乙炔基、丙炔基和丁炔基。31.本文所用的术语“芳基”是指具有在芳环体系中的6-14个环碳原子和0个杂原子的单环或多环（例如双环或三环）4n+2芳环体系（例如具有在环状阵列中共享的6、10或14个π电子）的基团（“c6-c14芳基”）。在一些实施方案中，芳基具有6个环碳原子（“c6芳基”；例如苯基）。在一些实施方案中，芳基具有10个环碳原子（“c10芳基”；例如萘基，如1-萘基和2-萘基）。在一些实施方案中，芳基具有14个环碳原子（“c14芳基”；例如蒽基和菲基）。芳基可被描述为例如c6-c14元芳基，其中术语“元”是指该部分内的非氢环原子。芳基包括但不限于，苯基、萘基、蒽基和菲基。32.本文所用的术语“芳基烷基”是指其中至少一个氢原子（例如一个、两个或三个氢原子）被芳基替代的如本文定义的烷基。芳基烷基的代表性实例包括但不限于，苄基、2-苯乙基、3-苯丙基、9-芴基、二苯甲基和三苯甲基。33.术语“氰基”是指基团-cn。34.本文所用的术语“氰基烷基”是指其中至少一个氢原子（例如一个氢原子）被氰基替代的如本文定义的烷基。35.本文所用的术语“环烷基”是指含有3至10个碳原子和0个杂原子的饱和碳环环系。环烷基可以是单环、双环、桥连、稠合或螺环的。环烷基的代表性实例包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、金刚烷基、双环[2.2.1]庚烷基、双环[3.2.1]辛烷基和双环[5.2.0]壬烷基。[0036]本文所用的术语“杂烷基”是指其中一个或多个碳原子已被独立地选自s、o、p和n的杂原子替代的如本文定义的烷基。杂烷基的代表性实例包括但不限于，烷基醚、仲和叔烷基胺和烷基硫。[0037]本文所用的术语“杂芳基”是指芳族单环环系或芳族双环环系或芳族三环环系。芳族单环的环是含有至少一个独立地选自n、o和s的杂原子（例如1、2、3或4个独立地选自o、s和n的杂原子）的5或6元环。五元芳族单环的环具有两个双键，六元芳族单环的环具有三个双键。双环杂芳基的实例是附加稠合到如本文定义的单环芳基或如本文定义的单环杂芳基上的单环杂芳基环。三环杂芳基的实例是稠合到两个独立地选自如本文定义的单环芳基或如本文定义的单环杂芳基的环上的单环杂芳基环。单环杂芳基的代表性实例包括但不限于，吡啶基（包括吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基）、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡咯基、苯并吡唑基、1,2,3-三唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基、噻吩基、呋喃基、噁唑基、异噁唑基、1,2,4-三嗪基和1,3,5-三嗪基。双环杂芳基的代表性实例包括但不限于，苯并咪唑基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并呋喃基、苯并噁二唑基、苯并吡唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并三唑基、苯并噁二唑基、苯并噁唑基、苯并吡喃基、咪唑并吡啶、咪唑并噻唑基、吲唑基、吲哚基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、萘啶基、嘌呤基、吡啶并咪唑基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、噻唑并吡啶基、噻唑并嘧啶基、噻吩并吡咯基和噻吩并噻吩基。三环杂芳基的代表性实例包括但不限于，二苯并呋喃基和二苯并噻吩基。单环、双环和三环杂芳基经由环内所含的任何碳原子或任何氮原子连接到母体分子部分上。[0038]本文所用的术语“杂环”或“杂环的”是指单环杂环、双环杂环或三环杂环。单环杂环是含有至少一个独立地选自o、n和s的杂原子的三元、四元、五元、六元、七元或八元环。三元或四元环含有0个或1个双键，和1个选自o、n和s的杂原子。五元环含有0个或1个双键，和1、2或3个选自o、n和s的杂原子。六元环含有0、1或2个双键，和1、2或3个选自o、n和s的杂原子。七元和八元环含有0、1、2或3个双键，和1、2或3个选自o、n和s的杂原子。单环杂环的代表性实例包括但不限于，氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基、氮杂环丙烷基、二氮杂环庚烷基、1,3-二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、1,3-二硫杂环戊烷基、1,3-二噻烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑啉基、异噻唑烷基、异噁唑啉基、异噁唑烷基、吗啉基、噁二唑啉基、噁二唑烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、氧杂环丁烷基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡唑啉基、吡唑烷基、吡咯啉基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢噻吩基、噻二唑啉基、噻二唑烷基、1,2-噻嗪基、1,3-噻嗪基、噻唑啉基、噻唑烷基、硫代吗啉基、1,1-二氧化硫代吗啉基（硫代吗啉砜）、噻喃基和三噻烷基。双环杂环是稠合到苯基上的单环杂环、或稠合到单环环烷基上的单环杂环、或稠合到单环环烯基上的单环杂环、或稠合到单环杂环上的单环杂环、或螺杂环基团、或桥连单环杂环环系，其中该环的两个非相邻原子通过1、2、3或4个碳原子的亚烷基桥或2、3或4个碳原子的亚烯基桥连接。双环杂环的代表性实例包括但不限于，苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并二氢吡喃基、2,3-二氢苯并呋喃基、2,3-二氢苯并噻吩基、2,3-二氢异喹啉、2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基、氮杂双环[2.2.1]庚基（包括2-氮杂双环[2.2.1]庚-2-基）、2,3-二氢-1h-吲哚基、异吲哚啉基、八氢环戊二烯并[c]吡咯基、八氢吡咯并吡啶基和四氢异喹啉基。三环杂环的实例是稠合到苯基上的双环杂环、或稠合到单环环烷基上的双环杂环、或稠合到单环环烯基上的双环杂环、或稠合到单环杂环上的双环杂环、或其中双环的两个非相邻原子通过1、2、3或4个碳原子的亚烷基桥或2、3或4个碳原子的亚烯基桥连接的双环杂环。三环杂环的实例包括但不限于，八氢-2,5-环氧并环戊二烯、六氢-2h-2,5-甲桥环戊二烯并[b]呋喃、六氢-1h-1,4-甲桥环戊二烯并[c]呋喃、氮杂-金刚烷（1-氮杂三环[3.3.1.13,7]癸烷）和氧杂-金刚烷（2-氧杂三环[3.3.1.13,7]癸烷）。单环、双环和三环杂环经由环内所含的任何碳原子或任何氮原子连接到母体分子部分上。[0039]本文所用的术语“亚烷基”、“亚芳基”、“亚杂烷基”、“亚杂芳基”、“亚环烷基”和“亚杂环基”是指分别衍生自烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基或杂环基的二价基团。[0040]在一些情况下，基团（例如烷基）中的碳原子数由前缀“cx-cy‑”标示，其中x是基团中的最小碳原子数，y是最大碳原子数。因此，例如，“c1-c3-烷基”是指含有1至3个碳原子的烷基。[0041]术语“取代基”是指取代在所示基团的原子上的基团。[0042]当基团或部分可被取代时，术语“取代的”是指在使用“取代”的表述中指示的基团上的一个或多个（例如1、2、3、4、5或6个；在一些实施方案中1、2或3个；在另一些实施方案中1或2个）氢可被一系列列举的所示基团或被本领域技术人员已知的合适基团（例如一个或多个下列基团）替代。取代基包括但不限于，卤素、酮基、硫基、氰基、异氰基、硫氰基、异硫氰基、硝基、氟烷基、烷氧基氟烷基、氟烷氧基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、卤烷氧基、杂烷基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环、环烷基烷基、杂芳基烷基、芳基烷基、羟基、羟烷基、烷氧基、烷氧基烷基、芳氧基、氨基、烷基氨基、酰基氨基、氨基烷基、芳基氨基、磺酰基氨基、亚磺酰基氨基、磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基、亚磺酰基、羧基、酮、酰胺、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯和酰基。[0043]对于本文所述的化合物，其基团和取代基可根据原子和取代基的允许化合价选择，以使该选择和取代产生稳定化合物，例如没有自发发生转化，如通过重排、环化、消除等。[0044]免疫原如上文论述，替诺福韦（tfv）是一种核苷酸类似物逆转录酶抑制剂（ntrti）。替诺福韦在与d-amp的3’碳对应的位置缺少羟基，以阻止dna链延伸所必需的5’至3’磷酸二酯键的形成。一旦并入生长的dna链中，替诺福韦造成dna转录的过早终止，以阻止病毒复制。富马酸替诺福韦二吡呋酯（替诺福韦dr，tdf）在美国由gilead作为viread®销售，并被批准用于治疗成人和儿童的hiv感染和慢性乙型肝炎病毒（hbv）感染。替诺福韦也可在gilead作为truvada®（其含有300mgtdf（富马酸替诺福韦二吡呋酯）和200mgftc（恩曲他滨,emtriva®））、descovy®（25mgtaf（替诺福韦艾拉酚胺）和200mgftc（恩曲他滨））销售的固定剂量组合片剂中提供。替诺福韦可在五种三药组合片剂中提供：atripla®（600mg依法韦仑、200mgftc（恩曲他滨）和300mgtdf（富马酸替诺福韦二吡呋酯）、eviplera®（25mg利匹韦林、200mgftc（恩曲他滨）和245mg替诺福韦）、complera®（200mgftc（恩曲他滨）、25mg利匹韦林和300mgtdf（富马酸替诺福韦二吡呋酯））、biktarvy®（50mg比克替拉韦、200mgftc（恩曲他滨）和25mgtaf（替诺福韦艾拉酚胺））、odefsey®（200mgftc（恩曲他滨）、25mg利匹韦林和25mgtaf（替诺福韦艾拉酚胺）），所有这些也由gilead销售。替诺福韦可在两种四药组合片剂中提供：stribild®（150mg埃替格韦、150mg可比司他、200mgftc（恩曲他滨）和300mgtdf（富马酸替诺福韦二吡呋酯））、genvoya®（150mg埃替格韦、150mg可比司他、200mgftc（恩曲他滨）和10mgtaf（替诺福韦艾拉酚胺）），两者也都由gilead销售。[0045]使用口服富马酸替诺福韦二吡呋酯/恩曲他滨（tdf/ftc）的暴露前预防（prep）是在处于风险中的个体中预防hiv感染的最有效策略之一（grant等人,nengljmed.,363(27):2587-2599(2010)；thigpen等人,nengljmed.,367(5):423-434(2012),choopanya等人,lancet,381(9883):2083-2090(2013)；和baeten等人,nengljmed.,367(5):399-410(2012)）。更最近，口服替诺福韦艾拉酚胺（taf）已被批准用于prep并表现出相对于tdf改进的性质（ray等人,antiviralresearch,125:63-70(2016)；和declercq,e.,biochemicalpharmacology,119:1-7(2016)）。prep现在得到疾病控制预防中心（thecentersfordiseasecontrolandprevention）（cdc）和世界卫生组织（theworldhealthorganization）（who）的广泛推荐，并且正在进入全球实施阶段（centersfordiseasecontrol(cdc).preexposureprophylaxisforthepreventionofhivintheunitedstates:aclinicalpracticeguidelineꢀ‑ꢀ2017update(2018年4月发表)；worldhealthorganization(who).guidelineonwhentostartantiretroviraltherapyandonpre-exposureprophylaxisforhiv,2015年9月30日）。[0046]无论如何，迄今的prep试验和研究已强调应该解决三个主要的考虑因素以提高prep有效性：(1)依从性和有效性之间的关系（amico,k.r.,curropinhivaids,7(6):542-548(2012)），(2)药理学测量比自我报告的依从性更准确地预测prep的效力（vandamme等人,nengljmed.,367(5):411-422(2012)；marrazzo等人,nengljmed.,372(6):509-518(2015)；agot等人,aidsbehav.,19(5):743-751(2015)；blumenthal,j.和haubrich,r.,expertopinpharmacother.,14(13):1777-1785(2013)；corneli等人,jacquirimmunedeficsyndr.,68(5):578-584(2015)；vanderstraten等人,j.intaidssoc.,19(1):20642(2016)），和(3)prep药物水平的实时监测（gupta等人,hypertension,70(5):1042-1048(2017)；和checchi等人,jama,312(12):1237-1247(2014)）可改进后续prep药物服用。本文所述的组合物和方法解决这些顾虑。[0047]本公开提供一种多克隆抗体组合物，其包含特异性结合替诺福韦（tfv）或替诺福韦衍生物的哺乳动物抗体的异质群体。下面给出替诺福韦的结构：。[0048]或者，哺乳动物抗体的异质群体可与替诺福韦的衍生物特异性结合。在某些实施方案中，哺乳动物抗体的异质群体针对包含缀合到蛋白质的替诺福韦衍生物的免疫原生成，所述免疫原是式(i)的化合物：或其可药用盐，其中：r1和r2各自独立地选自氢、c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、芳基、芳基烷基、氰基烷基和-(c1-c6-亚烷基)-y-(c1-c6烷基)，其中y选自-o-、-nh-、-s-、-c(o)nh-、-c(o)o-、-c(o)s-、-oc(o)nh-、-oc(o)o-和-nhc(o)nh-；且x是连接基。[0049]在一些实施方案中，r1和r2各自是氢。在一些实施方案中，r1和r2各自是-(c1-c6-亚烷基)-y-(c1-c6烷基)，其中y是-oc(o)o-。在一些实施方案中，r1和r2各自是-ch2oc(o)och(ch3)2。[0050]基团x是将蛋白质连接到式(i)的化合物的其余部分的连接基部分。在一些实施方案中，x包含衍生自两个反应性基团，如反应性基团ra和rb的反应的部分，其中基团ra和rb之间的反应得到将蛋白质共价连接到式(i)的化合物的其余部分的结构部分（moiety）。例如，基团ra可以是存在于蛋白质上的氨基酸侧链上的反应性基团，如胺（例如来自赖氨酸残基）、巯基（例如来自半胱氨酸残基）或羧酸（例如来自天冬氨酸或谷氨酸残基)。基团rb可以是与氨基酸侧链反应的反应性基团，如异硫氰酸酯、异氰酸酯、伯胺、马来酰亚胺、琥珀酰亚胺酯、卤代乙酰基等。[0051]在一些实施方案中，x包含选自以下的部分：。[0052]本领域技术人员会认识到，这些部分衍生自两个反应性基团，如上文论述的那些的反应。例如，硫脲是异硫氰酸酯与伯胺的反应产物，酰胺是琥珀酰亚胺酯与伯胺的反应产物，等等。[0053]在一些实施方案中，x也可包括一个或多个另外的连接原子基团，如亚烷基、亚杂烷基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基和亚杂环基。[0054]在一些实施方案中，x是：其中：n是1、2、3或4；且a选自芳基、杂芳基、环烷基和杂环基。[0055]在一些实施方案中，x是：。[0056]在一些实施方案中，蛋白质可以是大于2kda分子量的任何蛋白质，例如甲状腺球蛋白、白蛋白或血蓝蛋白。[0057]在一些实施方案中，免疫原是下式的化合物：或其可药用盐。[0058]在一些实施方案中，哺乳动物抗体的异质群体针对包含式(ii)的替诺福韦衍生化合物或其可药用盐的免疫原生成。[0059]本文所述的化合物可包含一个或多个不对称中心，因此可以以各种异构形式存在，例如对映异构体和/或非对映异构体。例如，本文所述的化合物可以是单独的对映异构体、非对映异构体或几何异构体的形式，或可以是立体异构体的混合物的形式，包括外消旋混合物和富集一种或多种立体异构体的混合物。异构体可通过本领域技术人员已知的方法从混合物中分离，包括手性高压液相色谱法（hplc）和手性盐的形成和结晶；或可通过不对称合成制备优选的异构体。参见例如jacques等人,enantiomers,racematesandresolutions(wileyinterscience,newyork,1981)；wilen等人,tetrahedron,33:2725(1977)；eliel,stereochemistryofcarboncompounds(mcgraw-hill,ny,1962)；和wilen,tablesofresolvingagentsandopticalresolutionsp.268(e.l.eliel,ed.,univ.ofnotredamepress,notredame,ind.1972)。[0060]术语“可药用盐”是指用相对无毒的酸或碱（取决于在本文所述的化合物上存在的特定取代基）制备的化合物的盐。当本公开的化合物含有相对酸性官能团时，可通过使这样的化合物的中性形式与足量的所需碱（纯的或在合适的惰性溶剂中）接触来获得碱加成盐。可药用碱加成盐的实例包括钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、有机氨基盐或镁盐，或类似的盐。当本公开的化合物含有相对碱性官能团时，可通过使这样的化合物的中性形式与足量的所需酸（纯的或在合适的惰性溶剂中）接触来获得酸加成盐。可药用酸加成盐的实例包括衍生自无机酸，如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、单氢碳酸、磷酸、单氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、单氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些，以及衍生自有机酸，如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等的盐。也包括氨基酸的盐，如精氨酸盐等，和有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸（galactunoricacids）等的盐（参见例如berge等人,journalofpharmaceuticalscience,66:1-19(1977)）。本公开的某些特定化合物可含有碱性和酸性官能团以使该化合物可转化成碱加成盐或酸加成盐。这些盐可通过本领域技术人员已知的方法制备。[0061]本文公开的化合物可例如根据本领域已知的合成方法合成。可通过有机合成领域的技术人员公知的方法分离和提纯所述化合物和中间体。用于分离和提纯化合物的常规方法的实例可包括但不限于在固体载体如硅胶、氧化铝或用烷基硅烷基团衍生的二氧化硅上的色谱法、在高温或低温下重结晶并任选用活性炭预处理、薄层色谱法、在各种压力下蒸馏、在真空下升华和研制，如例如furniss,hannaford,smith和tatchell在vogel’stextbookofpracticalorganicchemistry,第5版(1989),pub.longmanscientific&technical,essexcm202je,england中所述。[0062]各独立步骤的反应条件和反应时间可随所用的特定反应物和所用反应物中存在的取代基而变。反应可以以常规方式后处理，例如通过从残留物中除去溶剂并根据本领域公知的方法进一步提纯所需化合物，例如但不限于，结晶、蒸馏、萃取、研制和色谱法。除非另有描述，原材料和试剂可购得，或可由本领域技术人员由市售材料使用化学文献中描述的方法制备。原材料，如果不可购得，可通过选自以下技术的程序制备：标准有机化学技术、与已知的结构类似化合物的合成类似的技术或与合成实施例部分中描述的程序类似的技术。[0063]常规实验法，包括适当操控反应条件、试剂和合成路线的次序、与反应条件无法相容的任何化学官能的保护和在该方法的反应序列的合适的点的脱保护，包括在本公开的范围内。合适的保护基和使用这样合适的保护基保护和脱保护不同取代基的方法是本领域技术人员公知的；其实例可见于pgmwutsandtwgreene,greene’sbooktitledprotectivegroupsinorganicsynthesis(4thed.),johnwiley&sons,newyork(2006)。[0064]多克隆抗体组合物本文所述的多克隆抗体组合物可通过(a)向动物施用上述免疫原；和(b)从动物中分离特异性结合替诺福韦或替诺福韦衍生物的抗体制成。免疫原可施用于任何合适的动物，以使动物对该免疫原或抗原“免疫”。用于生成抗体的合适动物包括但不限于小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔、猫、狗、猪、绵羊、山羊、马和牛。动物理想地是小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠或兔。[0065]多克隆抗体通常通过用免疫原（如本文所述）与佐剂（如弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、油包水乳剂（例如specol）和水包油乳剂（例如ribiadjuvantsystem®ꢀ(ras),sigma-aldrich,st.louis,mo）组合使动物免疫产生（参见例如stils,jr.,h.f.,ilarjournal,46(issue3):280-293(2005)）。可使用常规方法，如例如schunk,m.k.和macallum,g.e.,ilarjournal,46(issue3):241-257(2005)；g.c.howard和d.r.bethell(eds.),basicmethodsinantibodyproductionandcharacterization(routledgerevivals),第1版,crcpress(2019)；和hanly等人,ilarjournal,37:93-118(1995)）中描述的那些进行免疫。[0066]尽管该组合物理想地包含多克隆抗体，但在一些实施方案中，该组合物可包含针对本文公开的式(i)或式(ii)化合物生成的单克隆抗体。单克隆抗体通常使用杂交瘤技术产生，最初描述在köhler和milstein,eur.j.immunol.,5:511-519(1976)中。单克隆抗体也可使用重组dna方法产生（参见例如美国专利4,816,567），从噬菌体展示抗体库分离（参见例如clackson等人nature,352:624-628(1991)；和marks等人,j.mol.biol.,222:581-597(1991)），或由携带完全人免疫球蛋白系统的转基因小鼠产生（参见例如lonberg,nat.biotechnol.,23(9):1117-25(2005)和lonberg,handb.exp.pharmacol.,181:69-97(2008)）。[0067]在免疫后，可监测动物中的抗体滴度以确定所需的免疫阶段，该阶段对应于所需抗体库（repertoire）的富集或偏倚的量。部分免疫的动物通常仅接受一次免疫，并且在检测到应答后不久从其收集产生抗体的细胞。完全免疫的动物表现出峰值滴度，其通过将免疫原或抗原一次或多次重复注射到宿主哺乳动物中实现，通常以2-3周为间隔。[0068]一旦在免疫动物中实现所需抗体滴度，从动物中分离并纯化目标抗体。抗体纯化通常涉及从血清（对于多克隆抗体）或从杂交瘤细胞系的腹水或培养上清液（对于单克隆抗体）分离抗体。抗体纯化方法是本领域已知的，并且可以是粗略的（crude）到高度特异性的。在这方面，粗纯化方法涉及沉淀包括抗体的血清总蛋白的亚群。一般的抗体纯化方法涉及某些抗体种类（例如igg）的亲和纯化，而不考虑抗原特异性。相反，特异性纯化方法涉及仅亲和纯化样品中的结合至特定抗原或免疫原的那些抗体。要认识到，抗体纯化的程度（粗略的、一般的、特异性的）取决于抗体的预期应用。[0069]通过上述方法产生的多克隆抗体可以是包含哺乳动物抗体的异质群体的组合物的形式。该组合物理想地是可药用（例如生理学可接受的）组合物，其包含载体，优选可药用（例如生理学可接受的）载体，和哺乳动物抗体的异质群体（例如多克隆抗体）。在本公开中可使用任何合适的载体，并且这样的载体是本领域众所周知的。例如，该组合物可含有防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。任选可使用两种或更多种防腐剂的混合物。此外，该组合物中可包含缓冲剂。合适的缓冲剂包括例如柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾和各种其它酸和盐。任选可使用两种或更多种缓冲剂的混合物。制备药用组合物的方法是本领域技术人员已知的并描述在例如remington:thescienceandpracticeofpharmacy,lippincottwilliams&wilkins；21sted.（2005年5月1日）中。[0070]样品术语“样品”、“生物样品”和“受试样品”在本文中可互换使用，并且是指含有或怀疑含有替诺福韦或替诺福韦衍生物的物质。生物样品可来源于任何合适的来源。在一个实施方案中，生物样品的来源是人体物质（例如血液、血清、血浆、尿液、唾液、汗液、痰液、精液、粘液、泪液、淋巴液、羊水、间质液、肺灌洗液、脑脊液、粪便、毛发、乳汁、组织、器官等）。在一些实施方案中，样品是尿液、血清、毛发或唾液。样品可以是液体样品、固体样品的液体提取物、流动的微粒固体或固体粒子的流体悬浮液。[0071]样品可获自任何合适的对象，但理想地获自人类对象。在一些实施方案中，对象是正在经受替诺福韦或其衍生物的治疗的人类。例如，对象可以是具有被人免疫缺陷病毒（hiv）感染的风险的人类，在这种情况下，该人可能正在经受暴露前预防（“prep”）疗法并且正在接受每日给予替诺福韦和恩曲他滨以预防hiv感染的方案，如本文所论述。或者，对象可能是已感染hiv或hbv的人类，在这种情况下，感染的人可能正在接受单独或与其它抗逆转录病毒剂联合的替诺福韦的日剂量。[0072]在一些实施方案中，液体生物样品可在用于测定前稀释。例如，在样品是人体体液（例如血清、尿液或唾液）的实施方案中，该流体可用适当的溶剂（例如pbs缓冲液）稀释。流体样品可在使用前稀释大约1倍、大约2倍、大约3倍、大约4倍、大约5倍、大约6倍、大约10倍、大约100倍或更多。[0073]在另一些实施方案中，样品可能经过分析前处理。分析前处理可提供额外的功能，如除去非特异性蛋白质和/或有效但价廉的可实施的混合功能。分析前处理的一般方法包括例如使用电动捕集（electrokinetictrapping）、ac电动力学、表面声波、等速电泳、介电电泳、电泳和本领域已知的其它预浓缩技术。在一些情况下，液体样品可在用于测定前浓缩。例如，在样品是人体体液（例如血清、尿液或唾液）的实施方案中，该流体可通过沉淀、蒸发、过滤、离心或其组合浓缩。流体样品可在使用前浓缩大约1倍、大约2倍、大约3倍、大约4倍、大约5倍、大约6倍、大约10倍、大约100倍或更多。[0074]测定法/方法为了检测样品中的替诺福韦或替诺福韦衍生物，本公开还提供了固体载体，其包含固定于其上的上述多克隆抗体组合物。术语“固相”和“固体载体”在本文中可互换使用，并且是指可用于附着和/或吸引并固定一种或多种抗体的任何材料。本领域已知的任何固体载体都可以用于本文所述的方法。合适的固体载体的实例包括电极、试管、珠粒、微粒、纳米粒子、微孔板或多孔板的孔、凝胶、胶体、生物细胞、片材、条（例如试纸条）、样品垫和芯片。[0075]在一个实施方案中，固体载体理想地包含固定在其表面上的与替诺福韦或替诺福韦衍生物结合的多种（例如两种或更多种、50种或更多种、100种或更多种、1,000种或更多种或5,000种或更多种）抗体。本文所用的术语“固定（的）”是指结合成员与固体载体表面的稳定缔合。如本文论述，在固体载体与样品之间的足够孵育时间后，如果样品中存在替诺福韦或其衍生物，则理想地通过固定抗体将其捕获在固体载体的表面上。[0076]抗体或抗体片段可经由接头（linkage）附着于固体载体，所述接头可包含载体和/或抗体的任何部分、官能化或修饰以促进抗体附着于载体。抗体与载体之间的接头可包括一个或多个化学或物理键（例如通过范德华力、氢键合、静电相互作用、疏水/亲水相互作用等的非特异性附着）和/或提供这些键的化学间隔基（chemicalspacers）。可使用许多技术将抗体附着于多种多样的固体载体（参见例如美国专利5,620,850；和heller,acc.chem.res.,23:128(1990)）。[0077]本公开还提供一种检测获自对象的样品中的替诺福韦或替诺福韦衍生物的方法，所述方法包括(a)在允许替诺福韦或替诺福韦衍生物（如果存在于样品中）与多克隆抗体组合物结合的条件下，使获自对象的样品与具有固定于其上的多克隆抗体组合物的固体载体接触，和(b)检测与多克隆抗体组合物结合的替诺福韦或替诺福韦衍生物的结合。[0078]还提供了一种用于检测获自对象的样品中的替诺福韦或替诺福韦衍生物的存在的测定法，其包括：(a)使生物样品与上述多克隆抗体组合物接触，其中对象正在经受替诺福韦或替诺福韦衍生物的治疗；和(b)检测与替诺福韦或替诺福韦衍生物结合的多克隆抗体组合物。本文所用的术语“测定法”和“生物测定法”是指用于确定样品、组合物或其它基体材料（bulkmaterial）中的物质或被分析物的存在或浓度的生物测试程序。[0079]除用于“捕获”样品中的替诺福韦或替诺福韦衍生物外，多克隆抗体组合物还可用于检测与固定在固体载体上的多克隆抗体结合的替诺福韦的结合。当多克隆抗体组合物也用于检测时，哺乳动物抗体的异质群体的至少一部分包含可检测标记。在多克隆抗体组合物不用作“检测”抗体的实施方案中，替诺福韦或替诺福韦衍生物与固定的多克隆抗体组合物的结合导致第一复合物的形成，并且该方法进一步包括使样品与包含第二抗体和附着于其上的可检测标记的缀合物接触，其中该缀合物与第一复合物结合。在任一情况下，该方法进一步包括评估来自可检测标记的信号的存在，其中来自可检测标记的信号的存在指示替诺福韦或其衍生物在样品中的存在。[0080]在一些实施方案中，多克隆抗体组合物可用可检测标记直接或间接标记，以促进与多克隆抗体结合的替诺福韦（或其衍生物）的检测。因此，在一些实施方案中，该方法包括(a)在允许替诺福韦或其衍生物（如果存在于样品中）与多克隆抗体结合的条件下，使获自对象的样品与一种或多种包含可检测标记并与替诺福韦或替诺福韦衍生物特异性结合的多克隆抗体（如多克隆抗体组合物）接触，和(b)评估来自可检测标记的信号的存在，其中来自可检测标记的信号的存在指示替诺福韦或其衍生物在样品中的存在。在另一些实施方案中，该方法包括(a)在允许替诺福韦或其衍生物（如果存在于样品中）与多克隆抗体组合物（也称为“捕获抗体”）结合以形成第一复合物的条件下，使获自对象的样品与多克隆抗体组合物接触；(b)使样品与包含第二抗体（也称为“检测抗体”）和附着于其上的可检测标记的缀合物接触，其中该缀合物与第一复合物结合；和(c)评估来自可检测标记的信号的存在，其中来自可检测标记的信号的存在指示替诺福韦或其衍生物在样品中的存在。[0081]本文所用的术语“缀合物”是指包含抗体或其抗原结合片段和可检测标记的复合物。在本公开的上下文中，缀合物的第二抗体（或其抗原结合片段）部分与靶抗原（例如替诺福韦或其衍生物）特异性结合，这导致该缀合物连接到捕获的被分析物和形成免疫夹心（immunosandwich）（在本文中也称为“免疫夹心复合物（immunosandwichcomplex）”）。要认识到，在夹心免疫测定格式中，第一（捕获）抗体和第二（检测）抗体识别靶分析物/抗原上的两个不同的非重叠表位。[0082]如上文论述，合适的可检测标记包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料和放射性材料（参见例如zola,monoclonalantibodies:amanualoftechniques,crcpress,inc.(1987)）。例如，可检测标记可以是放射性同位素（例如3h、14c、32p、35s或125i）、荧光或化学发光化合物（例如异硫氰酸荧光素、罗丹明或荧光素）或酶（例如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或辣根过氧化物酶）。在本公开内容中可使用本领域已知的用于单独将抗体与可检测标记缀合的任何方法（参见例如hunter等人,nature,144:945(1962)；david等人,biochemistry,13:1014(1974)；pain等人,j.immunol.meth.,40:219(1981)；和nygren,j.histochem.andcytochem.,30:407(1982)）。由附着于抗体的可检测标记生成的信号可基于其光谱性质进行测量。[0083]可以使用本领域已知的任何合适的方法使样品或固体载体与多克隆抗体组合物接触。本文所用的术语“接触”是指任何类型的合并作用，其使抗体，特别是固定在固体载体上的抗体，与样品中的目标被分析物（例如替诺福韦）足够紧密地贴近，以致如果样品中存在对抗体特异性的目标被分析物，将发生结合相互作用。接触可以以各种不同方式实现，包括直接将样品与多克隆抗体组合物合并，或通过邻近样品引入固体载体而使样品暴露于包含固定于固体载体上的多克隆抗体组合物的固体载体。接触可以根据需要重复多次。[0084]在一些实施方案中，替诺福韦或其衍生物和多克隆抗体之间的结合亲和力应该足以在测定条件下保持结合，测定条件包括洗涤步骤以除去非特异性结合的分子或粒子。例如，替诺福韦或替诺福韦衍生物与互补抗体的结合常数可在至少大约104至大约106m-1、至少大约105至大约109m-1、至少大约107至大约109m-1之间、大于大约109m-1或更大。固体载体与样品体积（samplevolume）之间的接触理想地保持（即孵育）足够的时段，以允许替诺福韦或其衍生物与抗体之间发生结合相互作用。在一个实施方案中，样品体积与固体载体一起孵育至少30秒和最多10分钟。例如，样品可与固体载体一起孵育大约1、2、3、4、5、6、7、8或9分钟。在一个实施方案中，样品可与固体载体一起孵育大约2分钟。此外，该孵育可在促进特异性结合相互作用的结合缓冲液中进行，例如白蛋白（例如bsa）、非离子洗涤剂（tween-20、tritonx-100）和/或蛋白酶抑制剂（例如pmsf）。可在测定中通过改变结合缓冲液来操控或改变抗体或抗体片段的结合亲和力和/或特异性。在一些实施方案中，可通过改变结合缓冲液来提高结合亲和力和/或特异性。在另一些实施方案中，可通过改变结合缓冲液来降低结合亲和力和/或特异性。结合相互作用的其它条件，例如温度和盐浓度，也可凭经验确定，或可基于制造商的说明书。例如，该接触可在室温（21℃-28℃，例如23℃-25℃）、37℃或4℃下进行。[0085]检测替诺福韦或其衍生物与多克隆抗体组合物的结合理想地包括使用免疫测定法。本文所用的术语“免疫测定法”是指通过使用抗体或抗原测量溶液中的大分子或小分子的存在或浓度的生物化学试验。可使用任何合适的免疫测定法，并且多种多样的免疫测定类型、配置和格式是本领域中已知的并在本公开的范围内。免疫测定法的合适类型包括但不限于酶联免疫吸附测定法（elisa）、侧流测定法（lateralflowassay，lfa）（也称为“侧流免疫测定法”）、竞争性抑制免疫测定法（例如正向和反向）、放射免疫测定法（ria）、荧光免疫测定法（fia）、化学发光免疫测定法（clia）、计数免疫测定法（cia）、酶放大免疫测定技术（emit）、一步抗体检测测定法、均相测定法、非均相测定法、飞行捕获测定法（captureontheflyassay）、单分子检测测定法等。这些方法公开在例如美国专利6,143,576；6,113,855；6,019,944；5,985,579；5,947,124；5,939,272；5,922,615；5,885,527；5,851,776；5,824,799；5,679,526；5,525,524；和5,480,792；国际专利申请公开wo2016/161402和wo2016/161400；和adamczyk等人,anal.chim.acta,579(1):61-67(2006)中。在一个实施方案中，使用侧流测定法（lfa）。侧流测定法（lfa）是用于检测和量化复杂混合物中的被分析物的纸基平台，其中将样品置于测试装置上并在5-30分钟内显示结果（参见例如k.m.koczula和a.gallotta,essaysinbiochemistry,60:111-120(2016)）。[0086]免疫测定格式可以是“直接”、“间接”、“夹心”或“竞争”的。在直接格式中，抗原直接吸附（固定）在表面固体载体（例如elisa板）上。然后通过与酶（例如辣根过氧化物酶（hrp））缀合的抗体检测抗原。对于间接格式，抗原也直接吸附在固体载体的表面上，但采用两步检测法：(1)未标记的一抗结合到特异性抗原，然后(2)施加针对一抗的宿主物种的酶缀合二抗。夹心格式涉及使用捕获抗原和检测抗原来固定和检测样品中的抗原。具体地，用捕获抗体涂布固体载体的表面，所述捕获抗体结合并固定施加到其上的样品中存在的靶抗原。然后加入检测抗体。检测抗体可用抗体直接标记（“直接夹心免疫测定法”）以便能够检测和量化抗原。或者，如果检测抗体未标记，需要二级酶缀合检测抗体（“间接夹心测定法”）。当抗原小并且只有一个表位或抗体结合位点时，通常使用竞争格式，并且涉及标记纯化的抗原而非抗体。来自样品的未标记抗原和标记抗原竞争结合到捕获抗体。与仅具有标记抗原的测定孔比较时，来自纯化抗原的信号的下降指示抗原在样品中的存在。[0087]在捕获的抗原（即替诺福韦或其衍生物）与可检测地标记的抗体或缀合物反应后，可除去未与捕获的抗原结合的任何抗体、抗体片段或缀合物的组分，接着任选的洗涤步骤。任何未结合的抗体、抗体片段或缀合物的组分可通过任何合适的手段从免疫夹心中分离，例如微滴驱动（dropletactuation）、电泳、电润湿、介电电泳、静电驱动、电场介导、电极介导、毛细管力、层析法、离心、抽吸或基于表面声波(saw)的洗涤方法。[0088]要认识到，上述抗原捕获和免疫夹心形成方法的不同构象（conformation）在本公开的范围内。确实，上述固体载体、缀合物和可检测标记的各种组分可以以任何合适的组合、构象或格式布置或使用。例如，所公开的方法可以以一步、延迟一步（delayedone-step）或两步格式进行。检测试剂（例如微粒、缀合物、荧光团等）可酌情预混或依序加入。[0089]所公开的方法可包含质量控制组分。在本文所述的免疫测定法和试剂盒的背景下，“质量控制组分”包括但不限于校准物、对照物和敏感度组（sensitivitypanels）。可使用“校准物”或“标准品”（例如一种或多种，如多种）以建立用于内插被分析物，如抗原的浓度的校准（标准）曲线。或者，可使用接近参考水平或对照水平（例如“低”、“中”或“高”水平）的单一校准物。多种校准物（即多于一种校准物或不同量的校准物）可联合使用以构成“敏感度组”。校准物任选是一系列校准物的一部分，其中每个校准物不同于该系列中的其它校准物，例如通过浓缩或检测方法（例如比色或荧光检测）。[0090]在某些实施方案中，本文所述的方法涉及将样品中的替诺福韦或替诺福韦衍生物的水平与预定值或截止值进行比较。本文所用的术语“预定截止值”、“截止值”、“预定值”、“参考水平”和“阈值水平”是指用于通过将测定结果与预定截止值/水平进行比较来评估对替诺福韦治疗方案的依从性的测定截止值，其中预定截止值/预定值已经与各种临床参数（例如对治疗方案的依从性、疾病的存在、疾病的阶段、疾病的严重性、进展、未进展、疾病的改善等）关联或相关。截止值也可用于评估诊断、预后或治疗效力。众所周知，截止值可随检测方法或测定法的性质而变。预定截止值/预定值的精确值可在测定法之间变化，而本文所述的相关性应该普遍适用。本领域普通技术人员可使用常规方法确定或选择合适的截止值或阈值。在一些实施方案中，可使用算法确定用于决策的预定值或阈值。这种算法可考虑各种因素，包括例如(i)对象的年龄（例如在较高年龄时的阈值较高），(ii)hiv状况，(iii)性别，和(iv)样品（例如尿液或血清）。[0091]本文公开的方法能够以在尿液中至少大约1,500ng/ml（例如大约1,600ng/ml、1,700ng/ml、1,800ng/ml、1,900ng/ml、2,000ng/ml、3,000ng/ml、4,000ng/ml、5,000ng/ml或更大）和在血清中至少大约10ng/ml（例如大约15ng/ml、20ng/ml、25ng/ml、30ng/ml、40ng/ml、50ng/ml、75ng/ml、100ng/ml、500ng/ml或更大）的临床相关截止值检测替诺福韦或其衍生物。要认识到，为了监测对特定替诺福韦治疗方案的依从性/顺从性，本文公开的检测替诺福韦或其衍生物的方法可在治疗期间重复两次或更多次。该方法可重复任何必要的次数以确保准确评估对替诺福韦疗法的依从性（例如2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多次）。[0092]试剂盒和仪器化本文还提供了用于进行上述方法的试剂盒。包括在试剂盒中的说明书可粘附在包装材料上或可作为包装插页包含。说明书可以是书面或印刷材料，但不限于此。本公开设想了能够存储这样的说明书并将其传达给最终用户的任何介质。这样的介质包括但不限于电子存储介质（例如磁盘、磁带、盒式磁带、芯片）、光学介质（例如cdrom）等。本文所用的术语“说明书”可包括提供说明书的互联网站的地址。[0093]试剂盒可包括包含微流体模块的盒。在一些实施方案中，微流体模块可集成在盒中。该盒可以是一次性的。该盒可包括一种或多种可用于实施上文公开的方法的试剂。该盒可包括一个或多个容器，以容纳作为一种或多种分开的组合物，或任选地，在试剂的相容性允许的情况下作为混合物的试剂。该盒还可包括从用户的角度看可能理想的其它材料，如缓冲液、稀释剂、标准品（例如校准物和对照物）和/或可用于样品处理、洗涤或进行测定法的任何其它步骤的任何其它材料。[0094]试剂盒可进一步包含用于量化样品中存在的替诺福韦或其衍生物的参考标准。参考标准可用于建立标准曲线以供内插和/或外推替诺福韦或替诺福韦衍生物浓度。试剂盒可包括浓度水平不同的参考标准。例如，试剂盒可包括一种或多种具有高浓度水平、中浓度水平或低浓度水平的参考标准。就参考标准的浓度范围而言，这可根据测定法优化。[0095]试剂盒还可包括质量控制组分（例如敏感度组、校准物和阳性对照）。质量控制试剂的制备是本领域众所周知的，并描述在各种免疫诊断产品的插页上。敏感度组成员任选用于建立测定性能特征，并且是试剂盒试剂的完整性和测定法的标准化的有用指示物。[0096]试剂盒还可任选包括进行测定法或促进质量控制评估所需的其它试剂，如缓冲液、盐、酶、酶辅因子、底物、检测试剂等。其它组分，如用于分离和/或处理受试样品的缓冲液和溶液（例如预处理试剂）也可包括在试剂盒中。试剂盒可另外包括一种或多种其它对照物。试剂盒的一种或多种组分可以冻干，在这种情况下试剂盒可进一步包含适用于冻干组分的重构的试剂。一种或多种组分可以是液体形式。[0097]试剂盒的各种组分任选根据需要在合适的容器中提供。试剂盒可进一步包括用于容纳或储存样品的容器（例如用于尿液、唾液、血浆或血清样品的容器或筒，或用于储存、运输或处理组织以产生组织抽吸物的适当容器）。如果适当，试剂盒任选可含有反应容器、混合容器和促进试剂或受试样品的制备的其它组件。试剂盒还可包括一个或多个用于辅助获得受试样品的样品收集/采集仪器，如各种血液收集/转移装置（例如微量取样装置、微针或其它微创无痛血液收集方法；血液收集管；刺血针；毛细血液收集管；其它单指尖-刺血收集方法；颊拭子、鼻/咽拭子；16号或其它尺寸的针、手术刀或激光器（例如特别是手持式）、注射器、无菌容器或套管，以用于获得、储存或抽吸组织样品）。[0098]如本文所述的概念、试剂盒和方法可在任何系统或仪器上实施，包括任何手动、自动或半自动系统。理想地，使用自动或半自动系统实施该方法。在某些实施方案中，本文所述的测定法、试剂盒和试剂盒组件可在电化学或其它手持式或即时测定系统上实施，例如执行夹心测定法的abbottpointofcare(i-stat®,abbottlaboratories)电化学测定系统。免疫传感器和它们的制造方法和在一次性试验装置中的操作描述在例如美国专利5,063,081；7,419,821；7,682,833；和7,723,099和美国专利申请公开no.2004/0018577中。[0099]以下实施例进一步例示本发明，但当然不应被解释为以任何方式限制其范围。[0100]实施例1本实施例描述了使用本文公开的抗体检测尿样中的替诺福韦（tfv）的elisa测定法的开发。[0101]假设通过免疫测定法测量的尿液中tfv浓度与血浆中的tfv浓度（临床试验中的短期prep依从性的金标准）相关，并与hiv防护相关。为了测试这一假说，使用酶联免疫吸附测定法（elisa）在伴侣prep研究中从来自活性prep组的hiv阴性男性和女性的随机取样队列中收集的储存尿样中测量tfv水平（定量下限[lloq]为1000ng/ml）。使用液相色谱-串联质谱法（lc-ms/ms）以0.31ng/ml的lloq测量日期匹配的血浆tfv浓度。使用相同队列和prep中的所有hiv血清转换者的目的性抽样，进行病例-队列分析以评估最近尿液tfv水平≥1500ng/ml（先前显示准确预测最近prep给药的阈值）与hiv防护之间的关联性。使用加权cox比例风险模型并针对年龄、性别和性行为作出调整。[0102]为了评估尿液tfv浓度≥1,500ng/ml与防止感染hiv之间的关联性，进行巢式病例-对照分析。将在hiv感染的首次证据（即hiv-1rna的首次阳性测试）日期收集的病例样品与在同一个研究访视月收集的对照样品匹配。如果在常规尿样存档之间观察到病例的hiv首次证据，选择来自最近存档访问的对照。对照样品以35:1（这是估算值开始稳定的比率）匹配，并从在病例的hiv检测日期为hiv阴性的参与者危险集（包括未来的血清转换者）中随机取样。对照可匹配多个病例。针对匹配组调整的条件逻辑回归估算在≥1,500ng/ml的尿液tfv浓度下的hiv感染的优势比，其近似于在时间匹配危险集抽样法下的率比（rr）。针对参与者性别、年龄和在入选前一个月与他们的研究伴侣的任何无避孕套性行为的报告控制调整的模型。重复所有模型以便也评估血浆tfv》40ng/ml与hiv防护的关联。病例样品太少以致无法进行足够有力的基于性别的亚组分析。[0103]在伴侣prep研究中随机使用tdf或tdf/ftc的4,432个个体中，292个包括在巢式队列中。在这些参与者中，39%是女性，中位数年龄是33岁（四分位距[iqr]=28-39）。该队列中的参与者贡献722份成对的尿液和血浆样品。在研究中使用prep的同时血清转换成hiv的52个个体中，22个在访视中提供了首次检测出hiv的尿样，并作为病例被包括。作为可能的对照，包括另外69个在hiv感染前收集的血清转换样品。在病例中，55%是女性，中位数年龄是33岁（iqr=27-39）。[0104]血浆和尿液样品从收集到测定的中位数持续时间分别是20个月和103个月。在队列中，中位数tfv浓度在通过elisa测定的尿液中为37,500ng/ml（iqr=500-90,000ng/ml），在通过lc-ms/ms测定的血浆中为65.4ng/ml（iqr=1.6-103.0ng/ml）。这两种测量的斯皮尔曼等级相关系数（ρ）为0.46（p《0.001）。在558个可检测到tfv（≥lloq0.31ng/ml）的血浆样品中，486个具有可检测到tfv（≥lloq1,000ng/ml）的配对尿样，敏感度为87%（95%ci=84-90%）。有164个血浆样品无法检测到tfv，其中119个具有无法检测到tfv的配对尿样，特异性为73%（95%ci=65-79%）。在468个血浆tfv》40ng/ml的个体中，420个具有tfv≥1,500ng/ml的配对尿样，敏感度为90%（95%ci=87-92%）。最后，254份血浆样品的tfv水平≤40ng/ml，其中146份具有tfv《1,500ng/ml的配对尿样，特异性为57%（95%ci=51-64%）。[0105]总之，在这一病例-对照研究中，来自280个个体的770份对照样品与22份病例样品匹配。在这两个活性prep研究组的参与者中，尿液tfv≥1500ng/ml与调整模型中的hiv风险降低71%（95%ci=30-88%）相关联。与此相比，血浆tfv》40ng/ml与hiv风险降低87%（95%ci=54-96%）相关联。[0106]表1.与通过新型免疫测定法测得的尿液tfv浓度》1500ng/ml相关联的hiv风险降低百分比。[0107]因此，在大型完成的prep试验中，使用上述新型免疫测定法测量的尿液tfv水平预测了hiv防护。对于通过lc-ms/ms测量的血浆中的tfv检测（这是短期prep依从性的既定指标），尿液中的tfv的检测显示了良好敏感度和特异性。本实施例的结果表明，使用实时测定法评估尿液中的tfv水平可能是对prep依从性的现有客观指标的有价值的补充。[0108]实施例2这一实施例描述了使用本文公开的抗体检测尿样中的替诺福韦（tfv）的即时（poc）侧流免疫测定法（lfa）的开发。[0109]这一分析的目的是在多样化的患者群体中比较针对prep的新型poc测试与基于实验室的elisa。使用elisa和poclfa试验分析来自两个基于富马酸替诺福韦二吡呋酯（tdf）的prep使用者队列的尿样：伴侣prep研究，其招募异性恋的男性和女性，和i-breathe研究，其招募使用雌激素的跨性别女性和使用睾酮激素疗法的跨性别男性。计算poc试验的敏感度、特异性和准确度，并在1,500ng/ml和4,500ng/ml的截止值下与基于实验室的elisa进行比较。[0110]总体而言，测试来自两个队列中324位参与者的684份尿样。在伴侣prep中，测试来自278位参与者（41%女性）的454份样品；中位数年龄是33岁（四分位距（iqr）为28-39）。在i-breathe中，测试来自46个个体（50%跨性别女性）的231份样品；中位数年龄是31岁（iqr25-40）。总体而言，在505份tfv水平大于或等于使用基于实验室的elisa的截止值的样品中，505个poc测试结果也是阳性的，得到100%的敏感度。在179份tfv水平低于截止值的样品中，178份在poc测试中为阴性，得到99.4%的特异性。与elisa相比，poclfa的准确度为99.8%。比较lc-ms/ms、elisa和lfa测定法的结果的原始数据显示在图1ꢀ‑ꢀ图4中。[0111]在接受prep的324名女性和男性（顺性别者和跨性别者）中，与基于实验室的elisa方法相比，尿液tfv的新型poc测试的敏感度、特异性和准确度都超过99%。考虑到低尿液tfv水平与hiv血清转换事件的关联性、使用lfa的简单性及其预期的低成本，这种poc测试是辅助prep依从性的有前途的工具，其可广泛扩展到现实世界的临床环境中。实施例的结果暗示在随机对照试验中使用这种即时测试的依从性支持的评价。[0112]实施例3这一实施例描述了用于进一步验证如本文所述的替诺福韦免疫测定法的研究。[0113]这一研究利用了来自target的样品，target是在泰国进行的tdf/ftc的直接观察疗法（dot）随机化、开放标签的临床药代动力学研究（cressey等人,bmcinfectdis.,17:496(2017)）。在target中，将健康参与者随机（1:1:1）分配到3组中的1个组（每组10位参与者，总共n=30）以接受直接观察剂量的tdf300mg/ftc200mg6周：组1中的参与者每天一次接受tdf/ftc（“高依从性”）；组2中的参与者每周4次接受tdf/ftc（“中等依从性”）；组3中的参与者每周2次接受tdf/ftc（“低依从性”）。参与者从星期一至星期五进行给药的直接观察；周末的药物摄入通过视频/图像呼叫监测。在治疗给药6周和洗脱4周的过程中收集并储存尿样。该研究由以下机构的伦理委员会批准：theinstituteforthedevelopmentofhumanresearchprotections，themedicalsciencesdepartment,thaiministryofpublichealth；sanpatonghospital；和universityofwashington。该研究在clinicaltrials.gov登记（#nct0301260)并详细描述在gandhi等人,jacquirimmunedeficsyndr,81:72-77(2019)）中。[0114]将target中收集的尿样等分以通过液相色谱/串联质谱法（lc-ms/ms）和免疫测定法进行测量。由于tfv浓缩在尿液中（truvada®（恩曲他滨和富马酸替诺福韦二吡呋酯）片剂包装说明书；u.s.foodanddrugadministration.2004.批准，可见于:gilead.com/；/media/files/pdfs/medicines/hiv/truvada/truvada_pi.pdf.；和custodio等人,antimicrobagentschemother.,60:5135-5140(2016)），并且为了将tfv水平与文献中的那些比较（koenig等人,hivmed.,18:412-418(2017)），在分析前将尿样1:1000稀释。对于基于lc-ms/ms的方法，通过反相高效lc分离tfv，并通过ms/ms使用电喷雾正电离在多反应监测模式中量化[tfv,287.9/175.9(q1/q3)]。基于lc-ms/ms的测定法的定量下限（lloq）为500ng/ml。对于基于elisa的免疫测定法，制备已知浓度的tfv工作溶液。校准物或不同浓度的tfv与半抗原一起在微量滴定板上孵育以生成剂量反应曲线。elisa板读数器（platereader）基于校准曲线外推未知样本中的tfv浓度。基于elisa的免疫测定法的lloq为1,000ng/ml。[0115]为了预测poc测定法的低于尿液tfv水平的不同截止值的概率，使用混合效应区间回归模型，以对数尿液免疫测定浓度作为因变量，自最后剂量以来的天数作为自变量。分析限于在给药1周后获得的点尿样（spoturinesamples），以模拟在基于tdf/ftc的prep或art开始后的临床访视时的尿液收集。由于食物对tdf药代动力学的影响极小，在模型中不考虑食物摄入。使用估算的平均值、人与人的差异和残差变异，由该模型计算自最后剂量以来的任何时间低于给定截止值的概率。基于来自先前研究的参与者反馈，特异性差的试验是令人苦恼的（vanderstraten等人,aids.,29:2161-2171(2015)；和vanderstraten等人,aqualitativeevaluationofwomen’sexperiencereceivingdrugfeedbackinmtn-025/hopeꢀ–ꢀanhivpreventionopen-labeltrialofthedapivirinevaginalring.mtn-025/hopestudygroup.aids2018conference.amsterdam,thenetherlands；2018,abstractthpec334.2018。可见于:programme.aids2018.org）。焦点是找出对24小时内的给药具有高特异性的截止值，其仍对不依从性具有足够的敏感度。由于自最后剂量以来的时间的任何二分法将掩盖一些重要的区别，并且由于在相同个体上重复测量，没有检查简单的接收者操作特征曲线。[0116]一旦确定合适的截止值，通过将两种不同测定法中高于该截止值的tfv水平与低于该截止值的tfv水平交叉制表，与lc-ms/ms相比较地计算免疫测定法的敏感度和特异性。使用来自target中的所有尿样的结果和然后将计算限制于通过这两种测定法都可检测到药物的尿样，还计算了由这两种测定法生成的tfv水平之间的斯皮尔曼相关性。最后，使用bland-altman方法计算通过免疫测定法和lc-ms/ms都为阳性的尿液tfv水平之间的一致性（blandjm,altmandg,lancet,1:307-310(1986)）。[0117]通过免疫测定法的中值tfv水平在给药后一天为12,000ng/ml；给药后2天为5,000ng/ml；给药后3天为1,500ng/ml；此后低于定量下限（≥4天）。1,500ng/ml的免疫测定截止值准确地将在前24小时内服用了剂量的患者的98%归类为依从的。在1,500ng/ml截止值下，免疫测定法的特异性和敏感度与lc-ms/ms相比为99%和94%；这两种测定法的tfv水平之间的相关性高（0.92,p,0.00001）。[0118]这一实施例的结果证明，本文所述的tfv免疫测定法在大型dot研究中是高度特异性的、敏感的并与lc-ms/ms测量具有强相关性。[0119]实施例4这一实施例描述了检测来自实施例3中描述的target研究的尿样中的替诺福韦（tfv）的侧流免疫测定法（lfa）的开发。[0120]使用来自上述target研究的尿样，如前所述开发对替诺福韦的侧流测定法（lfa）（koczulakm,gallottaa.,essaysbiochem,60:111-120(2016)）。lfa试纸条组件包括样品垫，将试样（例如尿液）施加于其上；涂有与胶体金纳米粒子缀合的替诺福韦特异性抗体的缀合物垫（conjugatepad）；硝基纤维素膜，其上带有由替诺福韦抗原组成的测试线和由抗兔抗体组成的对照线；和设计为通过毛细作用将样品抽吸经过反应膜的吸收垫。关于该测定法设计的进一步细节描述在例如gandhi等人,aids,34:255-260(2020)中。[0121]为了评估lfa的性能，将尿样等分以通过lc-ms/ms和lfa进行测量。对于基于lc-ms/ms的方法，通过反相高效lc从一千倍稀释的尿液中分离替诺福韦，并如上所述通过ms/ms使用电喷雾正电离在多反应监测模式中量化（tfv,287.9/175.9m/z(q1/q3)）（gandhi等人,eclinicalmedicine（thelancet出版）。可见于:doiorg/101016/jeclinm201808004(2018)）。基于lc-ms/ms的测定法的定量下限（lloq）为500ng/ml。对于lfa，将两到三滴尿液从尿样施加到lfa上，并在大约2分钟后，读取lfa窗口上的线。[0122]计算lfa的敏感度、特异性和准确度，并通过将两种不同测定法中高于/低于1,500ng/ml阈值的值交叉制表而与lc-ms/ms进行比较。由于误分类非常少见，基于使用二项分布的精确计算呈现置信区间（agrestia,katerim,ꢀ“categoricaldataanalysis,”ꢀin:lovricm.(ed),internationalencyclopediaofstatisticalscience,berlin,heidelberg:springer；2011）。[0123]在targetdot研究中的参与者中收集的637份尿样中，随机选择300份通过lfa和lc-ms/ms的金标准法测试以进行验证。lfa与lc-ms/ms相比表现出97%特异性（95%ci93–99%）和99%敏感度（94–100%）。lfa准确地将24小时内服用了剂量的患者的98%归类为依从的。[0124]实施例5这一实施例描述在大型暴露前预防（prep）示范项目中检查尿液替诺福韦（tfv）水平和hiv血清转换和客观依从性指标之间的关系的研究。[0125]向1,085位男男性行为者（msm）和140名跨性别女性提供prep（grant等人,lancetinfectdis,14:820-829(2014)）。每12周收集尿液，并在prep开始后4周和8周、然后每12周制备干血斑（dbs）。在所有访视中对iprex开放标签扩展（prex-ole）研究中血清转换的参与者和保持hiv阴性的随机子集中的参与者分析tfv-二磷酸（tfv-dp）和ftc-三磷酸（ftc-tp）的dbs测定（grant等人，见上文）。对于所有提供了选择加入同意书（opt-inconsent）的人，每12周收集tfv和ftc的毛发样品，并在血清转换者和保持hiv阴性的人的随机子集中进行分析（gandhi等人,lancethiv,3:e521-e528(2016)）。有资格参与相关分析的参与者需要在iprex-ole的持续时间（中位数72周）内的一次或多次访视时可提供来自所有三种生物基质（尿液、dbs、毛发）的样品。在查看尿液tfv水平与血清转换之间的关联性的特异性分析中包括来自血清转换者的额外尿样（n=10）。研究中的所有个体提供知情同意书，包括样品储存和进一步测试，并且来自各研究场所的机构审查委员会批准了该研究。[0126]任何低于定量下限的tfv水平被认为是阴性的（《1,000ng/ml）。免疫测定法的定量上限是50,000ng/ml。使用先前描述和验证的基于lc–ms/ms的方法，测量dbs中的tfv-dp和ftc-tp浓度（zheng等人,jpharmbiomedanal,122:16–20(2016)），并测量毛发中的ftc和tfv浓度（liu等人,plosone,9:e83736(2014)）。[0127]对于血清转换分析，在血清转换访视时的个体；血清转换访视前的个体；以及保持hiv阴性的个体之间使用kruskal-wallis'检验比较通过免疫测定法得到的尿液tfv浓度。分析接收者操作曲线（roc）以确定两个尿液tfv截断点，并与未来hiv血清转换的结果进行比较。混合效应逻辑回归仅在血清转换访视前收集的样品中检查截断点与hiv血清转换之间的关联。检查斯皮尔曼相关系数和散点图以对具有来自所有三种生物基质的样品的参与者评估通过免疫测定法得到的tfv尿液浓度与dbs中的tfv-dp和ftc-tp水平以及毛发中的tfv和ftc水平之间的关系。将在无法检测到的尿液tfv水平（《1,000ng/ml）下的尿液测定法的敏感度和特异性与通过dbs中的tfv-dp浓度界定的两种不足依从性水平进行比较：定量极限（《3.5fmol/punch）和极低依从性（《350fmol/punch，估计平均每周依从性《2片/周）（grant等人,lancetinfectdis,14:820-829(2014)）；和anderson等人,antimicrobagentschemother,62:e01710-e01717(2018)）。基于roc曲线的分析和检查基于lc-ms/ms的方法以量化尿液中的tfv水平的先前数据，选择尿液测定的检测下限（1,000ng/ml）作为最佳单截止值（lalley-chareczko等人,jacquirimmunedeficsyndr,79:173-178(2018)）。[0128]中值尿液tfv水平在保持hiv阴性的个体中为15,000ng/ml（n=105；四分位距:1,000-45,000）；在最终血清转换的个体中为5,500（n=11；四分位距:1,000-12,500）；并在血清转换时都检测不到（n=9；p《0.001）。尿液tfv水平层的下降与未来的hiv血清转换相关联（p=0.03）。无法检测到的尿液tfv与无法检测到的dbstfv二磷酸水平相比为100%敏感和81%特异，与通过dbs的低依从性（《2剂/周）相比为69%敏感但94%特异。[0129]本文中引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利经此引用并入本文，就像各个参考文献逐一和明确地被指出经此引用并入本文并全文阐述在本文中。[0130]除非本文中另行指明或与上下文明显矛盾，术语“一”和“该”和“至少一种”和类似指示词在描述本发明的文本中（尤其在以下权利要求书的文本中）的使用应被解释为既涵盖单数，又涵盖复数。除非本文中另行指明或与上下文明显矛盾，后接一个或多个项目的名单的术语“至少一种”（例如，“a和b的至少一种”）的使用被解释为是指选自这些列举项的一项（a或b）或列举项的两项或更多项的任何组合（a和b）。除非另行指明，术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应被解释为开放式术语（即是指“包括，但不限于”）。除非本文中另行指明，本文中的数值范围的列举仅意在充当逐一提到落在该范围内的各单独数值的简写法，并且各单独数值就像在本文中逐一列举那样并入本说明书。除非本文中另行指明或另外与上下文明显矛盾，本文中描述的所有方法可以以任何合适的顺序进行。除非另行要求，本文中提供的任何和所有实例或示例性措辞（例如“如”）的使用仅意在更好地阐明本发明而非限制本发明的范围。说明书中的措辞都不应被解释为指明任何未要求保护的要素对本发明的实践是必不可少的。[0131]在本文中描述了本发明的优选实施方案，包括本发明人已知的用于实施本发明的最佳模式。本领域普通技术人员在阅读上文的描述后可能显而易见这些优选实施方案的变动。本发明人期望技术人员酌情利用这样的变动，并且本发明人预计到与本文中的具体描述不同地实施本发明。因此，本发明包括如适用的法律允许的本文所附的权利要求书中列举的主题项的所有修改和等同物。此外，除非本文中另行指明或与另外上下文明显矛盾，本发明包括上述要素在其所有可能的变动下的任何组合。当前第1页12当前第1页12