薄荷提取物的化妆品应用的制作方法

专利名称:薄荷提取物的化妆品应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及至少一种薄荷科植物的细胞提取物的用途，用作尤其是由情绪型应激所诱导的黑素生成的抑制剂，和/或用作除色素剂。
背景技术：
黑素生成是合成黑素的过程，其是造成细胞色素沉着的原因。它是经L-酪氨酸氨基酸羟基化作用所引发的复杂生化过程，其导致形成L-二羟基苯基丙氨酸(L-dihydroxyphenylalamine，L-DOPA)。然后，通过特异性黑素细胞相关酶酪氨酸酶的作用将L-DOPA转化为多巴色素，并且随后的还原氧化反应导致多巴色素到黑素的转化。酪氨酸酶的产生及其活性部分地决定了所产生的黑素的量。转移到角质形成细胞的黑素的量和类型就其而言决定了人皮肤可见色素沉着的程度。
已知黑素主要提供针对皮肤抗太阳和更一般而言抗UV射线的保护功能。黑素吸收这些射线，从而显著降低在照射期间会由产生的自由基所引起的损伤现象的风险。
然而，在角质形成细胞、内皮细胞、成纤维细胞和朗格汉斯细胞中，在应答外源刺激例如污染或UV射线，和/或内源刺激例如由于衰老或内部应激而导致的内源刺激时，黑素会过量地或者甚至异常地合成。
事实上，这两类刺激方法中的几种可以共存。
因此，UV照射首先通过直接刺激黑素细胞诱导黑素合成，其次通过角质形成细胞、内皮细胞和成纤维细胞的引发和/或促进信息经介质间接刺激黑素生成。具体而言，角质形成细胞表现为通过合成介质例如α-MSH(α-黑素细胞刺激激素)、内皮缩血管肽、E2前列腺素和NO，与黑素细胞相通。
已经提出活性剂用于对抗尤其是由外源刺激所诱导的过量色素沉着的发展，并且尤其是恢复皮肤的正常色。作为这些活性剂的实例，尤其可以提及的是L-抗坏血酸、曲酸、氢醌等。然而，这些活性剂不能治疗更具体而言由内部应激所诱导的过量色素沉着。
因此需要具有可以治疗由后一刺激方法所诱导的过量色素沉着的活性剂。
本发明人已经准确地证实，完全出乎意料地，薄荷科植物的细胞提取物可以用作活性剂，其能够抑制黑素生成过程，尤其是，由代表最近所述活性的内部应激所诱导的黑素生成过程。
在文件WO 2004/058282中，已经提出将辣薄荷的衍生物用作对皮肤具有镇静作用的活性剂。然而所述文件没有提及相同类型提取物针对由内部应激所诱导的黑素生成过程的特性，更不用说它在预防和/或治疗由情绪型应激所诱导的过量黑素生成的相关皮肤疾病中的效果了。
本发明人发现的新活性有利于预防和/或减少黑素的合成和/或释放以及对抗内部应激之后发生的过量的皮肤色素沉着或皮肤疾病。
在本发明的内容中，表述“内部应激”和“情绪型应激”是等同的，并且这两者都用于表示由心理应激或者疲劳所诱导即引起或者扩增的内源修正。
情绪型应激尤其能够通过将激素和/或神经激素例如儿茶酚胺释放进入到血液和进入到外周组织中而证实自己。
这尤其可以通过儿茶酚胺量的增加反映出来，去甲肾上腺素就是其中之一此时参考去甲肾上腺素能型应激。
为了证明薄荷提取物对由内部应激所诱导的黑素生成的作用，本发明人已经使用了体外多细胞角质形成细胞/黑素细胞/神经细胞模型。发现在体外模型中刺激的去甲肾上腺素适合用于评估有潜力的活性剂对由情绪型应激诱导的黑素生成的作用。
因此，本发明人已经注意到在该模型中通过抑制黑素生成的另一间接伙伴即多肽化学元素降钙素基因相关肽(CGRP)的释放，来反映薄荷提取物的活性。
现在，已知角质形成细胞产生应答CGRP刺激的促黑素激素因子，其调节生长、黑素合成和黑素细胞的树突化(dendricity)。(Mashiko.Toyoda et al.，The society for investigate dermatology，Inc，Vol.4，N°2，September 1999)。
CGRP是由降钙素基因产生的37氨基酸肽，并且是分布最广的和最大量的感觉神经肽。也已经显示它由应答外部刺激例如UV照射的神经末梢分泌(Scholzen et al，Journal of investigative dermatology symposiumproceedings，1999，4(1)55-60)，并且由外部攻击例如污染刺激它的分泌。
更近期地，也已经注意到CGRP的产生会被刺激应答情绪型应激。因此，已经显示可以通过应激激素例如去甲肾上腺素和肾上腺素刺激CGRP分泌。

发明内容因此，本发明人已经发现薄荷提取物具有抑制CGRP释放的特性，并且因此使得可以调节并且尤其是抑制黑素生成，特别是在黑素生成由情绪型应激诱导的情况下。
为此，根据它的一个方面，本发明涉及一种用于预防和/或减少尤其是由情绪型应激所诱导的黑素的合成和/或释放的治疗性或者非治疗性处理、尤其是化妆品处理的方法，其中使用包含至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物作为活性剂的化妆品组合物。
根据它的另一个方面，本发明涉及一种用于预防和/或治疗尤其是由情绪型应激所诱导的过量皮肤色素沉着的治疗性或者非治疗性处理、尤其是化妆品处理的方法，其中使用如上所定义的组合物。
根据它的另一个方面，本发明涉及一种用于预防和/或治疗与尤其是由情绪型应激所诱导的过量黑素生成相关的皮肤疾病的治疗性或者非治疗性处理、尤其是化妆品处理的方法，其中使用如上所定义的化妆品组合物。
根据它的另一个方面，本发明还涉及新型组合物，其中薄荷提取物可以有利地与额外的除色素剂组合，所述额外的除色素剂根据与薄荷提取物作用机理即通过抑制CGRP的机理所不同的机理作用于黑素生成。例如，额外的除色素剂可以根据酪氨酸酶的抑制机理或者间接刺激黑素生成的第二信使如NO或前列腺素的抑制机理起作用。
根据不同的作用方法同时起作用的这种组合使得可以对于色素斑点和瑕疵获得改善的总体效果。
因此，本发明的对象也是化妆品和/或皮肤病学组合物，其特征在于它包含在生理可接受介质中的至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物，并与至少一种除色素剂组合，所述除色素剂根据酪氨酸酶的抑制机理或者间接刺激黑素生成的第二信使如NO或前列腺素的抑制机理起作用。
根据具体实施方案，本发明涉及皮肤病学和/或化妆品组合物，其特征在于它包含在生理可接受介质中的至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物，并与至少一种角质层分离脱落、抗NO和/或螯合剂组合。
前述试剂不同于抗坏血酸及其衍生物。
根据本发明的另一个具体实施方案，本发明涉及皮肤病学和/或化妆品组合物，其特征在于它包含在生理可接受介质中的至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物和至少一种除色素剂，并与至少一种角质层分离脱落、抗NO、抗UV、增白、消炎、螯合和/或抗氧化剂结合。
根据另一具体实施方案，本发明涉及皮肤病学和/或化妆品组合物，其特征在于它包含在生理可接受介质中的至少一种辣薄荷属植物的至少一种细胞提取物，并与至少是抗坏血酸(维生素C)或至少一种其衍生物如抗坏血酸磷酸镁(维生素C PMg)、抗坏血酸糖基酯(维生素C G)、抗坏血酸磷酸钠(维生素C PNa)和3-O-乙基抗坏血酸组合。
因此本发明的一个目的也是提出薄荷提取物和/或新型组合物，其对于预防和治疗由太阳等引起的皮肤色素沉着例如雀斑样痣(单纯型的或者太阳或老年型的)、PUVA雀斑样痣、日光雀斑样痣、网状雀斑样痣、雀斑或者黑斑病(褐黄斑)是尤其有效的，并且更具体而言对于抑制黑素生成过程是尤其有效的。
本发明人尤其已经发现薄荷提取物，并且尤其是薄荷科植物的细胞提取物和下文所述额外除色素剂的组合证明尤其可用于提供这种效果。
本发明还涉及皮肤病学和/或化妆品组合物，其特征在于它包含在生理可接受介质中的至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物，所述提取物的比例以干活性物质计小于0.4wt％，相对于组合物的总重量。
根据本发明的组合物可以配制来用于局部或者口服施用。
本发明还涉及至少一种薄荷科植物的细胞提取物和/或根据本发明的组合物的体内或者体外用途，作为除色素剂。
本发明还涉及至少一种薄荷科植物的细胞提取物和/或根据本发明的组合物的体内或者体外用途，作为抑制尤其是由情绪型应激所诱导的黑素生成的除色素剂。
本发明还涉及至少一种薄荷科植物的细胞提取物和/或根据本发明的组合物的用途，作为皮肤增白剂。
对本发明来说，术语“黑素生成”是指黑素合成的过程，其包括，例如与合成黑素化学前体即其中间体之一或副产物的过程相关的所有酶促和/或非酶促反应。
对本发明来说，术语“抑制”表示减少、限制或者阻断过程的作用或者功能。
对本发明来说，当黑素生成发生时，如果一种物质直接作用于黑素生成所发生部位的表皮黑素细胞的活力，和/或如果它通过抑制黑素生成所涉及的酶中的一种或者通过作为黑素合成链中的化合物之一的结构类似物插入，然后该链可以被阻断，并因此确保除色素作用来干扰黑素生物合成的步骤之一，则认为该物质是除色素作用的。
提取物的定义术语“至少一种薄荷的提取物”应当理解为“薄荷细胞提取物”并且因此理解为“薄荷科的至少一种植物的细胞提取物”。
至少一种薄荷的提取物可以是由得自薄荷科的任何植物材料制备的提取物，所述材料已经通过体外或者体内培养获得。
术语“体外培养”意指本领域中技术人员熟知的使得可以人工获得植物或者植物部分的所有技术。
从而，例如根据本发明，提取物可以是由体外培养(根、茎、叶)获得的至少一种薄荷的器官提取物、或者甚至器官细胞的提取物，或者是至少一种薄荷的未分化细胞的提取物。优选地，使用从体外培养获得的未分化细胞所获得的提取物。
术语“未分化植物细胞”意指不表现特异性特化的任何特征，并且能够独自而不是以依赖于其他细胞的状态生存的任何植物细胞。在诱导作用下，这些未分化植物细胞可能能够进行任何与它们的基因组一致的分化。
薄荷科包括几个种。
根据本发明可以使用的薄荷科的属中，作为实例可以提及的属是水薄荷(Mentha aquatica)、野薄荷(Mentha arvensis)、欧薄荷(Mentha longifolia)、辣薄荷(Mentha piperita)、唇萼薄荷(Mentha pulegium)和留兰香(Menthaspicata)。
根据本发明更具体而言所考虑的种来自辣薄荷属。
根据本发明可以使用本领域中技术人员已知的任何提取方法。尤其可以提及的是醇提取物，尤其是乙醇提取物和水-醇提取物。也可以使用文件WO04/058282中所述的方法制备的提取物。这种提取物可包含10-110g/l，或者甚至45-75g/l的干活性物质。例如，这种提取物可包含2-30g/l的糖类(通过M.Dubois et al.，Analytical Chemistry 28，n°3笫350-356页，1956的方法确定)和0.2-2.7g/l的多酚(用铁氰化钾通过比色试验测量)，包括羟基苯乙烯(hydroxycinnamic)化合物、黄酮、黄烷酮和香豆素。
薄荷提取物也可购得。因此，根据本发明可以使用GREENTECH公司销售的加拿大薄荷叶的水-乙二醇提取物，ALBAN MULLER公司销售的辣薄荷叶的丙二醇提取物，以及SILAB公司以名称CALMISKIN销售的辣薄荷叶提取物。
薄荷提取物以有效赋予用其配制的组合物以根据本发明所需特性的量存在。
除非另外提及，薄荷提取物的量以干活性物质表示。术语“干活性物质”用来表示在将提取物干燥之后残余物的量，正如它能通过本领域中技术人员已知的任何方法测量的那样。例如，能够根据申请WO 2004/058282中所述的方案实施测量。
因此，本发明的化妆品或者皮肤病学组合物可包含的薄荷提取物干活性物质的量小于0.4wt％，尤其是小于0.1wt％，甚至是0.05wt％～0.001wt％，相对于组合物的总重量。
由于明显的原因，薄荷提取物用量可以大范围地变化，并且尤其取决于所希望的CGRP-抑制活性和/或施用方法，即根据相应的组合物选择局部或者口服施用。
例如，根据本发明的组合物中，更具体而言是旨在局部应用的组合物中，薄荷提取物可使用的量以干活性物质计为0.001wt％～0.4wt％，尤其是0.002wt％～0.35wt％，特别是0.003wt％～0.1wt％。
薄荷提取物与除色素剂的组合如上所具体说明的那样，本发明还涉及一种组合物，其包含与至少一种除色素剂组合的至少一种薄荷提取物，所述除色素剂根据与CGRP抑制机理不同的机理作用于黑素生成。它尤其可以包括根据酪氨酸酶的抑制机理或者间接刺激黑素生成的第二信使的抑制机理起作用的除色素剂。
作为根据本发明可以使用的除色素剂的非限制性代表，尤其可以提及的是曲酸、熊果苷、鞣花酸、lucinol、S亚油酸、凝血酸、4-甲氧基水杨酸钾、一磷酸腺苷二钠OT或者二羟基二丙基联苯(DDB)。
根据具体实施方案，本发明还涉及一种组合物，其包含至少一种辣薄荷属植物的至少一种细胞提取物，并与至少是抗坏血酸(维生素C)或其一种衍生物如抗坏血酸磷酸镁(维生素C PMg)、抗坏血酸糖基酯(维生素C G)、抗坏血酸磷酸钠(维生素C PNa)和3-O-乙基抗坏血酸组合。
当根据本发明的组合物包含与至少一种除色素剂尤其是如上所列的除色素剂组合的至少一种薄荷提取物时，其中所述除色素剂根据酪氨酸酶抑制机理或者间接刺激黑素生成的第二信使的抑制机理起作用，它们也可额外地包含如下所述的至少一种角质层分离脱落、抗NO、抗UV、增白、消炎、螯合和/或抗氧化剂。
本发明的化妆品和/或皮肤病学组合物可包含0.1～7wt％、优选0.5～7wt％的除色素剂，相对于组合物的总重量。
当然，该量本身也可以尤其是根据所用除色素剂的性质而大范围地变化，并且也可以取决于所希望的除色素活性和/或为相应组合物所选择的施用方法。
皮肤疾病如上所具体说明的那样，根据本发明的薄荷提取物和/或组合物证实对于预防和/或治疗过量皮肤色素沉着以及尤其是与具体而言由情绪型应激所诱导的过量黑素生成相关的皮肤疾病而言是特别有利的。
此外，根据本发明的薄荷提取物和/或组合物也可以用于预防和/或治疗黑素沉着过多症。
黑素沉着过多症对应于皮肤中黑素过载或者黑素异常分布。
在黑素沉着过多症中，可以将与表皮相关的异常病症黑皮病与真皮异常病症蓝皮病(ceruloderma)区分开来。
黑皮病可以由表皮基底层中活性黑素细胞量的增加或者在黑素细胞量没有任何改变的情况下表皮中黑素量的增加所导致。后一种情况构成大多数的皮肤色素沉着过多。
它们尤其可以由增加的酪氨酸酶合成、黑素体黑变作用的增加、向角质形成细胞的转移的增加和/或在角质形成细胞中黑素体存活率的增加所诱导。
作为黑素沉着过多(hypermellanose)的实例，更具体而言可以提及的是雀斑样痣、PUVA雀斑样痣、日光雀斑样痣、网状雀斑样痣、雀斑和黑斑病(或褐黄斑)。
雀斑样痣是表皮的黑素细胞增生过多症(hypermelanocytoses)。如果它们的颜色没有被日光改变，那么它们属于单纯型，否则属于太阳或者老年型。后者通常具有更大的尺寸。在暴露于光照的区域中观察它们。它们出现在日晒后的年轻个体中，以及暴露于太阳下后的年长个体中。超过70岁的个体中90％以上表现出太阳型雀斑样痣，尤其是在手背、面部、手臂、背部的上半部分和颈部和肩膀上。几个太阳型雀斑样痣可以连接，从而形成大的覆盖物。
PUVA雀斑样痣是略微不同于太阳型雀斑样痣的斑，并且出现在接受长时间PUVA治疗的患者中。它们出现在暴露于UVA照射的区域中。
日光雀斑样痣出现在无补骨脂素(psoralene)的情况下使用日光浴在一次强烈暴晒之后或者在长期有规律的暴晒之后的轻微光照型患者中。
网状雀斑样痣是太阳型雀斑样痣的变体，其颜色非常暗，几乎是黑色。
雀斑，或者说斑点，出现在暴露于光照的区域中(面部、手背、前臂)，更具体而言出现在具有非常浅色皮肤的个体中。暴露在太阳下后它们的颜色加重。
至于黑斑病或者褐黄斑，它是只存在于暴露于光照的区域中的色素沉着过多。它出现在怀孕或者激素治疗期间，或者出现在服用某种药物时。
发现根据本发明考虑的薄荷提取物和/或组合物对于预防和/或治疗所有这些表皮黑素细胞增生过多症都是有效的。根据本发明的有利实施方案，薄荷提取物也可以与对于皮肤呈活性并且尤其是能够与所希望的除色素作用协作的其他试剂组合。
活性试剂尤其可以选自角质层分离脱落、抗NO、抗UV、增白、螯合和/或抗氧化剂，应当理解相同的化合物可以具有这些特性中的几种。
对本发明来说，角质层分离或脱落剂是使表皮上层脱落以及除去负载有黑素的死细胞的试剂。
在这个方面，酚衍生物，更具体而言，水杨酸或其衍生物之一和/或山毛榉树芽提取物，是最合适的。
因此，优选地，酚衍生物选自扑热息痛、所谓的N-(4-羟基酚)乙酰胺或者作为替代方案的对乙酰氨基酚、水杨酸和水杨酸衍生物。
当酚衍生物是水杨酸衍生物时，它优选选自自5-正辛酰基水杨酸、5-正癸酰基水杨酸和5-正十二烷酰基水杨酸或者它们的盐中的一种。
还可以提及的是AHA、BHA、及衍生物、氨基酸及酸的衍生物。
作为UV射线吸收剂(或者抗UV剂)的非限制性代表，更具体而言可以提及的是对氨基苯甲酸(PABA)、对氨基苯甲酸甘油酯、对氨基苯甲酸乙基二羟基丙酯、辛基甲氧基肉桂酸酯、对甲氧基肉桂酸2-乙氧基乙酯、2，4-二羟基二苯酮、2-羟基-4-甲氧基二苯酮、2-羟基-4-甲氧基-4-甲基苯精(benzine)二苯酮、2-羟基-4-甲氧基-4-甲基二苯酮-5-磺酸酯、尿刊酸乙酯、2-苯基-5-甲基苯并唑、4-甲氧基-4-叔丁基二苯酰甲烷和对甲氧基肉桂酸乙基己酯及其类似物。
作为抗氧化剂，尤其可以提及的是多酚衍生物。
可以用于本发明组合物的多酚化合物可选自例如a)黄酮类化合物，b)鼠尾草酸或者鼠尾草酚，c)任选取代的(2，5-二羟基苯基)羧酸和(2，5-二羟基苯基)亚烷基羧酸、及其衍生物、尤其是其盐、酯或酰胺，d)咖啡酸的酯或者酰胺e)单宁酸及其混合物。
根据本发明可以使用的黄酮类化合物中，尤其可以提及的是紫杉叶素、儿茶素、表儿茶素、圣草酚、柑橘素、芸香苷、曲克芦丁、柯因、红橘素、木犀草素、表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、槲皮素、漆树黄酮、山柰素、高良姜素、没食子儿茶素、和表儿茶素没食子酸酯。
可以使用的某些多酚存在于可以以已知的方式提取它们的植物中。可以使用茶叶提取物(茶(Camellia sinensis)或山茶(Camellia japonica))。尤其将提及的是Nikko公司以名称Sunphenon销售的绿茶提取物，其具体而言包含黄酮类化合物。
如上所定义的多酚存在的比例可以是0.1wt％～1wt％，相对于组合物的总重量。
抗NO剂可以更具体地选自银杏(gingko biloba)、山楂、橄榄树、葡萄、罗勒、姜、蒜和绿茶的提取物及其混合物。
发现银杏提取物尤其最有利。这种提取物尤其以商业形式配销。在根据本发明的化妆品或者皮肤病组合物中，银杏提取物通常以基于固体的0.01wt％～10wt％的浓度存在，相对于组合物的总重量。
作为根据本发明可以使用的螯合剂的非限制性代表，尤其可以提及的是乙二胺四乙酸四钠(tetrasodium hedetate)和/或柠檬酸。
作为根据本发明可以使用的增白剂的非限制性代表，尤其可以提及的是抗坏血酸(维生素C)和衍生物，例如抗坏血酸磷酸镁(维生素C PMg)、抗坏血酸糖基酯(维生素C G)、抗坏血酸磷酸钠(维生素C PNa)、3-O-乙基抗坏血酸，春黄菊，多酚例如鞣花酸、曲酸、或者甘草提取物。
它尤其可以包含至少是维生素C G和/或甘草提取物。
维生素C G得自维生素C，并且使用环糊精葡聚糖转移酶(CGTase)通过生物技术从该维生素和淀粉中获得。它同时作为增白剂、自由基清除剂和角质层分离剂。
根据一个变化实施方案，尤其是用于局部应用的化妆品和/或皮肤病学组合物，除薄荷提取物之外，可包含至少一种抗NO剂例如银杏提取物和增白剂例如维生素C G。
例如，根据本发明的组合物可以包含至少一种辣薄荷提取物，银杏提取物、维生素C G、甘草提取物、水杨酸和山毛榉树芽提取物。
当然，根据本发明的组合物，除薄荷提取物以外，可包含适当组合的一种或者多种用于该制剂的其他活性剂、添加剂和/或载体，更具体而言根据基于组合物考虑的施用方法进行选择。
尤其是，根据所选择的应用方法或者施用方法，根据本发明的组合物可以是通常所用的药物形式中的任何一种。
更具体地，根据本发明的组合物可以配制来局部应用或口服施用。
更具体而言关于用于局部应用的组合物，它们可以是水、水-醇或者油溶液、溶液类型的分散体、或者洗液或乳清(serum)类型的分散体、具有奶类的液体或者半液体稠度的乳液、霜或者含水或无水凝胶类型的悬浮液或者乳液、微乳液、微胶囊、微粒、或者离子和/或非离子类型的泡状(vesicular)分散体。
例如它们可以是护理霜、护理啫哩、支撑面膜、粉底化妆品、遮暇产品、掩饰用化妆品、眼影、眉笔、眼圈粉、睫毛膏或者卸妆产品。
当本发明的组合物是乳液时，脂肪相的比例可以是5wt％～80wt％，优选为5wt％～50wt％，相对于组合物的总重量。在该组合物中以乳液形式所用的油、乳化剂和辅助乳化剂选自化妆品和/或皮肤病领域中通常使用的那些。乳化剂和辅助乳化剂可以以相对于组合物的总重量0.3wt％～30wt％、优选0.5wt％～20wt％的比例存在于组合物中。
当本发明的组合物是油溶液或者凝胶时，脂肪相可以占组合物总重量的90wt％以上。
根据通常的方法制备这些组合物。
以已知的方式，本发明的化妆品或者皮肤病学组合物可包含化妆品或者皮肤病领域的常用佐剂，例如脂肪物质、乳化剂、亲水或亲脂胶凝剂、亲水或亲脂活性剂、防腐剂、抗氧化剂、香料、填料、遮蔽剂和颜料。
至于本发明中可以使用的脂肪物质，可以提及的是矿物油例如氢化聚异丁烯和液体凡士林，植物油例如牛油树脂的液体级分、向日葵油和杏仁油，动物油例如全氢化角鲨烯、合成油、尤其是Purcellin oil、肉豆蔻酸异丙酯和棕榈酸乙基己酯，和氟油例如全氟聚醚。也可使用脂肪醇、脂肪酸，例如硬脂酸，以及例如蜡尤其是石蜡、巴西棕榈蜡和蜂蜡。也可使用硅氧烷化合物例如硅油以及例如环状聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷的混合物、和硅橡胶纯胶料、树脂和蜡。
至于本发明可以使用的乳化剂，可以提及的是，例如硬脂酸甘油酯、聚山梨醇酯60、HENKEL公司以名称Sinnowax AO销售的十六十八烷醇/含33mol环氧乙烷的氧乙烯基化十六十八烷醇的混合物、GATTEFOSSE公司以名称Tefose63销售的PEG-6/PEG-32/乙二醇硬脂酸酯的混合物、PPG-3十四烷基醚、硅氧烷乳化剂例如十六烷基聚二甲基硅氧烷共聚醇和山梨聚糖单或三硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、或者氧乙烯基化山梨聚糖单硬脂酸酯(20 EO)。
至于本发明可以使用的溶剂，可以提及的是低级醇，尤其是乙醇和异丙醇、和丙二醇。
作为亲水胶凝剂，可以提及的是羧酸聚合物例如CARBOMER、丙烯酸共聚物例如丙烯酸酯/丙烯酸烷基酯共聚物、聚丙烯酰胺、和尤其是聚丙烯酰胺的混合物、SEPPIC公司以商品名Sepigel 305销售的C13-14-异链烷烃和月桂基聚氧乙烯(7)醚、多糖例如纤维素衍生物例如羟烷基纤维素，尤其是羟丙基纤维素和羟乙基纤维素、天然胶例如瓜耳胶、角豆树胶和黄原胶，和粘土。
作为亲脂胶凝剂，可以提及的是改性粘土例如有机皂土、脂肪酸的金属盐例如硬脂酸铝、和疏水性二氧化硅、或者乙基纤维素和聚乙烯。
各种佐剂的用量是化妆品和/或皮肤病领域中常用的那些，例如是组合物总重量的0.01wt％～20wt％。根据它们的性质，可以将这些佐剂引入到脂肪相、水相和/或脂囊泡中。
根据本发明的化妆品方法可以通过根据本发明组合物的局部应用实施，例如每日，所述组合物例如可以配制为凝胶、洗液或者乳液的形式。
因此，根据本发明的方法可以包含单一应用。
根据另一个实施方案，重复该应用，例如每日2-3次，施用超过一天或者更多天，并且通常超过至少4周或者甚至4-15周的持续期，适合的时候存在一个或者多个中断期。
在口服施用根据本发明的组合物的情况中，使用可吸收的载体是有利的。
为了吸收，口服组合物，尤其是食品增补剂的许多实施方案，是可以的。通过生产糖衣丸、明胶胶囊、凝胶、乳液、片剂或胶囊剂的常用方法实施它们的制剂。在口服施用前，粉末能够稀释在可吸收的液体例如水中。
具体实施方式下文中出现的实施例用于非限制性举例说明本发明的领域。
实施例1在维持在存活条件下的人皮肤模型中，用根据本发明的提取物评估皮肤色素沉着和CGRP(降钙素基因相关肽)诱导的黑素生成的调节。
材料和方法所用提取物是由SILAB公司以商标名CALMISKIN配销的产品。这是薄荷(辣薄荷)叶提取物在水中的100％(v/v)溶液。以2wt％的比率使用。
以黑素细胞和邻近角质形成细胞的水平，通过由Fontana-Masson染色显示后，在光学显微镜下组织学评估皮肤色素沉着。活性黑素细胞的数目也在全部表皮上的多巴反应后进行量化。
除色素或抗色素(propigmenting)产品的具体化在于评估存在于使用该产品处理的皮肤中黑素细胞和邻近的角质形成细胞中的黑素色素量，并与未处理的皮肤进行比较。
试验方案将来自6位不同供者的正常人皮肤的碎片置于插入物中，所述插入物自身被置于培养孔中。将尤其适合维持在存活条件(抗生素，FCS)下的培养基加入到孔底部，在两个隔室间通过多孔膜(3μm)的慢扩散形成通道。
将10-7M浓度的CGRP加入到D0上的培养基上。以2％(D0、D1和D2)局部应用根据本发明的产品。
进行以下的比较-对照组(未处理)皮肤-皮肤+10-7M CGRP-皮肤+10-7M CGRP+2％薄荷提取物全部在存活条件下维持72小时。
通过Fontana-Masson染色的组织学显示在前述方案结束时，在Bouin’s溶液中固定皮肤碎片，并且包埋到石蜡中用于Fontana-Masson染色后的组织学研究。在显微镜下，在300-400个细胞的基底层上实施含黑素粒的细胞数目的定量评估。计算三种细胞的数目-等级1无色素细胞或者呈现少数粒的细胞、有空泡外观的细胞；-等级2呈现中等黑素量的细胞(分散的、非均匀的黑素粒)；-等级3呈现相当大黑素量的细胞(均匀的黑色沉积物，覆盖超过细胞中细胞质的一半)。
通过多巴反应的黑素细胞的组织学显示使用通过0.5M、pH7.5的EDTA.2Na溶液(60℃下90秒)分离的新鲜表皮评估活性黑素细胞数。
用0.1％多巴溶液显示黑素细胞(37℃下培养过夜)。
在光学显微镜下评估每个单位视界中多巴阳性细胞的数目(40倍放大下10-12个视界)。计算在每种情况中存在于每个视界的活性黑素细胞的平均数目。
统计分析基于6种皮肤获得的结果，对每个参数进行平均。统计分析通过被称为Z分数(Z-score)的t检验(Student’s test)或者配对样本检验(pairedsample test)来实施，具有5％的风险。
结果通过Fontana-Masson染色的组织学显示表1示出每个色素形成等级的上皮细胞百分数。
表1Fontana-Masson染色后的组织学分析。
该结果表示为相对于分析总数的细胞百分数(n＝6种不同的皮肤)。
*对比于对照组皮肤统计学显著的差异(配对t检验，p＜0.05)。
**对比于皮肤+CGRP统计学显著的差异(配对t检验，p＜0.05)。
在维持在存活条件下的CGRP刺激的人皮肤模型中，注意到黑素粒从黑素细胞到邻近的角质形成细胞的转移的增加。具体地，具有大量色素的细胞(等级3)的百分数在用10-7M的CGRP刺激后显著增加30.3％的Fontana阳性细胞相比于对照组皮肤中的19.7％。同时，具有很少或者没有色素沉着的细胞(等级1)的百分数在应用CGRP后相比于对照组皮肤显著减少(24.9％相比于39.8％，p＝0.03)。在应用CGRP后，等级2的细胞百分数没有改变。
因此，2％的所测试薄荷提取物显著抑制CGRP诱导的色素沉着(等级1细胞的50.1％对比用CGRP的24.9％，p＝0.004)。类似地，具有大量色素的细胞(等级3)的数目显著减少(17.3％对比用CGRP的30.3％)。
还发现等级2细胞的百分数统计学显著减少(32.6％相比于单独使用CGRP的45％)。
通过多巴反应的黑素细胞的组织学显示
表2表皮层上的黑素细胞(多巴反应后)的数目(n＝8)。
*对比于对照组皮肤统计学显著的差异(配对t检验，p＜0.05)。
**对比于皮肤+CGRP统计学显著的差异(配对t检验，p＜0.05)。
由多巴反应证实的黑素细胞数揭示黑素生成主要由CGRP诱导56个多巴阳性细胞对比于对照组皮肤的31个(p＝0.01)。
2％的所测试薄荷提取物显著抑制这种CGRP诱导的黑素生成(相应地，38个阳性细胞)。
实施例2对于体外多细胞的角质形成细胞/黑素细胞/神经细胞模型，评估在情绪应激的情境过程中使用薄荷提取物对皮肤色素沉着和CGRP(降钙素基因相关肽)诱导的黑素生成的调节。
所用的提取物是SILAB公司以商标名CALMISKIN配销的产品。这是薄荷(辣薄荷)叶提取物在水中的100％(v/v)溶液。以0.03wt％的比率使用。
多细胞的角质形成细胞/黑素细胞/经细胞模型由在24孔板的培养插入物中培养的神经细胞(N)制备第一培养物，以20000个细胞每个沉积物(ThinCertTM，Greiner bio-one ref.662 610)的比率，在补充了2mM L-谷氨酰胺(Invitrogen 25030024)、50 IU/ml青霉素-50μg/ml链霉素(Invitrogen 15070063)、N2补充物(17502-048)、神经生长因子(神经生长因子，NGF，Invitrogen 13290.010)和神经营养素3(NT-3，Tebu 450-03-b)的DMEM-HAM F12培养基(Invitrogen 21331-020)中进行，并且在37℃、被水分饱和的5％CO2的培养器中保持5天。
用在补充了无PMA(Tebu 058M-016-5)的HMGS-2和50 IU/ml青霉素与50μg/ml链霉素(Invitrogen 15070063)的混合物的培养基(培养基254(Tebu 058M-254-500))中以100000个细胞/孔的比率在24孔板上接种的角质形成细胞(K)(从整形手术中分离并且在第3通道(R3 K015)处使用的正常人角质形成细胞(NHEK))和以50000个细胞/孔的比率在角质形成细胞培养物中接种的黑素细胞(M)(在第6通道处使用的正常人表皮黑素细胞(NHEM-2))制备第二培养物。
在培养4天后，将包含神经细胞的插入物置于包含角质形成细胞/黑素细胞共培养物(在培养该共培养物1天后)的孔中，从而在N/K/M培养基存在下，获得多细胞的神经细胞-角质形成细胞-黑素细胞(N/K/M)模型。
N/K/M培养基包含50％的补充了2mM L-谷氨酰胺(Invitrogen25030024)、50IU/ml青霉素、50μg/ml链霉素(Invitrogen 15070063)、N2补充物(17502-048)、神经生长因子(NGF，Invitrogen)和神经营养素3(NT-3)的DMEM-HAM F12(Invitrogen 21331-020)、33％的补充了0.2mMCaCl2(Tebu S-013-154)和角质形成细胞生长因子(人角质形成细胞生长补充物(HKGS)Tebu S-001-5)的M 154基质(Tebu M 154 CF/PRF)和17％的M 154基质(Tebu M 154 CF/PRF)。
因此获得的多细胞模型在培养物中维持至少10天。
每天更新50％的孔和插入物的培养基。
去甲肾上腺素能型的情绪应激对黑素生成的作用如上所获得的多细胞模型的细胞在不存在或者存在10-5M去甲肾上腺素的情况下维持10天，根据类似于上述的方案，向其中加入或者不加入0.03％CALMISKIN或者10-6M CGRP8-37。
CGRP8-37是参照CGRP受体拮抗剂。
培养结束时，用0.5N NaOH溶液从角质形成细胞/黑素细胞共培养物中提取黑素，然后通过测量光密度(405nm)进行分析，并且与外源黑素(0.39-100μg/ml的黑素，Sigma M8631)的标准曲线比较。
通过PRISM软件(Graph Pad Software)分析试验数据。
使用Dunnett’s多重对比实验，通过方差分析法(ANOVA)进行组间比较。
通过使用T检验的分析进行两个样品间的比较。
获得的结果在下表中给出。它们代表4个独立试验的平均值。它们以μg黑素/ml表示。
10-5M去甲肾上腺素的存在显著刺激(#；p＜0.01)在共培养物中合成的黑素量(+15％)。
在存在去甲肾上腺素的情况下，0.03％浓度的CALMISKIN产品以及CGRP-受体拮抗剂CGRP8-37显著减少(*；p＜0.05以及#；p＜0.01)黑素量(分别为-7.3％和-17.2％)。
CGRP释放的测量前述试验结束时，分别收集孔和插入物中的上清液，并且立即在-80℃下冷冻以便分析CGRP含量。
根据供应商推荐的方案，通过ELISA试验(大鼠CGRP酶免疫测定试剂盒，Spi Bio A05482)测量培养物上清液中的CGRP含量。
以pg CGRP/ml基质表示结果。
如前所述进行结果分析。
*p＜0.05在去甲肾上腺素存在的情况下，在对照组培养物插入物中释放的CGRP量非常大。CALMISKIN产品略微调节CGRP释放。
在孔的培养基(与角质形成细胞/黑素细胞共培养物接触)中测试的CGRP量显示CGRP扩散或者被横跨多孔插入物的神经末梢释放。在这种水平下，CALMISKIN产品显著减少CGRP释放(对照组的-21％；p＜0.05)。
结论根据本发明向多细胞模型加入去甲肾上腺素通过神经细胞诱导释放到培养基的CGRP量增加。
尽管在该神经细胞水平下的该量更大，但是也可以在接近角质形成细胞/黑素细胞共培养物处测量。
因此，通过CGRP释放在角质形成细胞/黑素细胞共培养物中，去甲肾上腺素表现出以可测量的方式(+15％)增加黑素生成。
应用0.03％浓度的CALMISKIN产品来减少这种刺激。
实施例3用于各种皮肤的增白乳清制剂的实施例。
以本领域技术人员常规的方式制备水包油乳液，并且具有以下的组成
角质层分离剂 1.1％抗氧化剂 0.2％抗NO剂 0.01％增白剂 2.5％薄荷提取物*0.05％油 7％增稠剂 1％乳化剂 2.6％胶凝剂 1.6％螯合剂 0.05％中和剂 0.8％防腐剂 1％芳香物 0.1％乙二醇 3.5％粉末 0.5％缓冲剂 0.35％水 qs 100％*以CALMISKIN产品的形式
权利要求
1.用于预防和/或减少由情绪型应激所诱导的黑素的合成和/或释放的非治疗性处理方法，其中使用包含至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物作为活性剂的化妆品组合物。
2.用于预防和/或治疗由情绪型应激所诱导的过量皮肤色素沉着的非治疗性处理方法，其中使用包含至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物作为活性剂的组合物。
3.用于预防和/或治疗由情绪型应激所诱导的与过量黑素生成相关的皮肤疾病的非治疗性处理方法，其中使用包含至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物作为活性剂的组合物。
4.根据前述权利要求
中任一项的方法，其中所述提取物得自源于选自水薄荷、野薄荷、欧薄荷、辣薄荷、唇萼薄荷和留兰香的属的薄荷的细胞。
5.根据前述权利要求
的方法，其中所述提取物得自源于辣薄荷属的薄荷的细胞。
6.根据前述权利要求
中任一项的方法，其中所述提取物得自源于体外培养而得到的薄荷植物材料的细胞。
7.根据前述权利要求
中任一项的方法，其中所述提取物的使用量以干活性物质计为0.001wt％～0.4wt％，尤其是0.002wt％～0.35wt％，特别是0.003wt％～0.1wt％，相对于所述组合物的总重量。
8.一种化妆品组合物，其包含在生理可接受介质中的至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物，并与至少一种除色素剂组合，所述除色素剂根据酪氨酸酶的抑制机理或者间接刺激黑素生成的第二信使的抑制机理起作用。
9.根据前述权利要求
的组合物，其中所述除色素剂选自曲酸、熊果苷、鞣花酸、lucinol、S亚油酸、凝血酸、4-甲氧基水杨酸钾、一磷酸腺苷二钠OT或者二羟基二丙基联苯(DDB)。
10.根据权利要求
8或9的组合物，其还包含至少一种角质层分离脱落、抗NO、抗UV、增白、消炎、螯合和/或抗氧化剂。
11.一种化妆品组合物，其包含在生理可接受介质中的至少一种辣薄荷属植物的至少一种细胞提取物，并与至少是抗坏血酸(维生素C)或至少一种其衍生物如抗坏血酸磷酸镁(维生素C PMg)、抗坏血酸糖基酯(维生素CG)、抗坏血酸磷酸钠(维生素C PNa)和3-O-乙基抗坏血酸组合。
12.一种化妆品组合物，其包含在生理可接受介质中的至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物，并与至少一种角质层分离脱落、抗NO和/或螯合剂组合。
13.一种化妆品组合物，其包含在生理可接受介质中的至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物和至少一种除色素剂，并与至少一种角质层分离脱落、抗NO、抗UV、增白、消炎、螯合和/或抗氧化剂组合。
14.根据权利要求
8-13中任一项的组合物，其中所述提取物的存在比例以干活性物质计小于0.4wt％，相对于组合物的总重量。
15.根据权利要求
8-10和12-14中任一项的组合物，其中至少一种薄荷科植物的细胞提取物如权利要求
4-6中任一项所定义。
16.根据权利要求
8-15中任一项的组合物，其中所述提取物的用量以干活性物质计为0.001wt％～0.4wt％，尤其是0.002wt％～0.35wt％，特别是0.003wt％～0.1wt％，相对于组合物的总重量。
17.根据权利要求
10和12-16中任一项的组合物，其中角质层分离剂是酚衍生物、尤其是水杨酸或者其衍生物之一或者山毛榉树芽提取物。
18.根据前述权利要求
的组合物，其中角质层分离剂选自扑热息痛、水杨酸和水杨酸衍生物、尤其是5-正辛酰基水杨酸、5-正癸酰基水杨酸和5-正十二烷酰基水杨酸或者它们的盐中的一种。
19.根据权利要求
8-18中任一项的组合物，其包含至少一种选自水杨酸和/或山毛榉树芽提取物的化合物。
20.根据权利要求
10和12-19中任一项的组合物，其中抗NO剂是银杏提取物。
21.根据权利要求
8-20中任一项的组合物，其包含至少一种选自以下的抗UV剂对氨基苯甲酸(PABA)、对氨基苯甲酸甘油酯、对氨基苯甲酸乙基二羟基丙酯、辛基甲氧基肉桂酸酯、对甲氧基肉桂酸2-乙氧基乙酯、2，4-二羟基二苯酮、2-羟基-4-甲氧基二苯酮、2-羟基-4-甲氧基-4-甲基苯精二苯酮、2-羟基-4-甲氧基-4-甲基二苯酮-5-磺酸酯、尿刊酸乙酯、2-苯基-5-甲基苯并唑、4-甲氧基-4-叔丁基二苯酰甲烷和对甲氧基肉桂酸乙基己酯及其类似物。
22.根据权利要求
10和12-21中任一项的组合物，其中螯合剂是乙二胺四乙酸四钠和/或柠檬酸。
23.根据权利要求
10和12-22中任一项的组合物，其中增白剂是维生素CG和/或甘草提取物。
24.根据权利要求
8-23中任一项的组合物，其包含至少一种辣薄荷提取物、银杏提取物、维生素C G、甘草提取物、水杨酸和山毛榉树芽提取物。
25.如权利要求
8-24所定义的组合物的用途，作为除色素剂。
26.如权利要求
8-24所定义的组合物的用途，作为皮肤增白剂。
27.至少一种薄荷科植物的细胞提取物和/或如权利要求
8-24所定义的组合物的用途，作为抑制由情绪型应激诱导的黑素生成的试剂。
28.根据前述权利要求
的用途，其特征在于所述提取物如权利要求
4-6中任一项所定义。
专利摘要
本发明涉及一种预防和/或减少尤其是由情绪型应激所诱导的黑素的合成和/或释放的非治疗性处理方法，其中使用包含至少一种薄荷科植物的至少一种细胞提取物作为活性剂的化妆品组合物。
文档编号A61K8/49GK1994272SQ200710000016
公开日2007年7月11日 申请日期2007年1月4日
发明者法妮·普利斯米, 埃马纽埃勒·拉布鲁斯 申请人:欧莱雅公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan