专利名称：口服雷怕霉素制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含雷怕霉素或其可药用盐的制剂，该制剂适于口服给药，用于引起免疫抑制以及治疗移植排斥、宿主对抗移植物疾病、自免疫疾病、炎症、实体瘤、真菌感染、成熟T-细胞白血病/淋巴瘤和过度增生性血管疾病。
雷怕霉素是由吸水链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)产生的大环内酯抗菌素，首次发现其活性是作为杀真菌剂。它对于真菌如白色念珠菌和石膏样小孢子菌的生长有不利影响。美国专利3，929，992(1975年12月30日授予SurendraSehgal等人)描述了雷怕霉素、其制备及其抗菌活性。1977年，Martel,R.R.等人在CanadianJournalofPhysiologicalPharmacology，55，48-51(1977)中报道了雷怕霉素对实验过敏性脑炎和辅助关节炎的免疫抑制性质。1989年Calne,R.Y.等人在Lancet(1989,no.2,p.227)中，以及Meiser,B.M.在MedicinalScienceResearch(1989,No.17,P.609-10)中分别报道了雷怕霉素抑制体内同种移植物移植排斥的效力。其后许多论文描述了雷怕霉素的免疫抑制和排斥抑制性质，并且已经开始了对使用雷怕霉素抑制人体移植排斥的临床研究。
已发现单独使用雷怕霉素(US4，885，171)或将其与溶链菌(US4，401，653)结合显示出抗肿瘤活性。R.Martel等人[Can.J.Physiol.Pharmacol.55,48(1977)]公开了雷怕霉素在实验过敏性脑脊髓炎模型、多种硬化模型中；在佐剂关节炎模型、类风湿关节炎模型中是有效的；并且雷怕霉素有效地抑制IgE样抗体形成。
在FASEB3(3411(1989))中已经公开了雷怕霉素的免疫抑制作用。环孢菌素A和FK-506(其他的大环分子)也表明是有效的免疫抑制剂，因而适用于预防移植排斥[FASEB3，3411(1989);FASEB3，5256(1989);R.Y.Calne等人，Lancet1183(1989);和US5，100，899]。
雷怕霉素还表明适用于预防或治疗全身红斑狼疮[US5，078，999]、肺炎[US5，080，899]、胰岛素依赖性糖尿病[FifthInt.Conf.Inflamm.Res.Assoc.121(摘要)，(1990)]、以及平滑肌细胞增殖和血管损伤后内膜增厚[Morris,R.J.HeartLungTransplant11(pt.2)∶197(1992)]。
雷怕霉素的一和二酰化衍生物(在28和43位酯化)已表明适于用作抗真菌剂(US4，316，885)，并且可用于制备雷怕霉素的水溶性前药(US4，650，803)。近来，有关雷怕霉素的位置编号惯例已经改变；因此根据化学文摘的命名法，上述酯应该在31-和42-位。US5，118，678公开了雷怕霉素的氨基甲酸酯适于用作免疫抑制剂、抗炎药、杀真菌剂和抗肿瘤剂。US5，100，883公开了雷怕霉素的氟化酯。US5，118，677公开了雷怕霉素的酰胺酯。US5，130，307公开了雷怕霉素的氨基酯。US5，117，203公开了雷怕霉素的磺酸酯和氨基磺酸酯。US5，194，447公开了雷怕霉素的磺酰氨基甲酸酯。
US5，100，899(Calne)公开了用雷怕霉素及其衍生物和前药抑制哺乳动物移植排斥的方法。所列出的与雷怕霉素一起使用的其他化疗剂是硫唑嘌呤、皮质类甾醇、环孢烯(cyclosporen)(和环孢菌素A)以及FK-506，或其任意结合。
目前用于抑制人同种移植物器官移植排斥的主要免疫抑制剂是环孢菌素(Sandimmune )。环孢菌素是由11个氨基酸组成的环多肽。Sandimmune 的静脉注射制剂(Ⅳ)是无菌安瓿，其中每ml含有50mg环孢菌素、650mg Cremophor EL和乙醇ph Helv.(32.9%体积)(在氮气氛下)。使用前将该混合物用0.9%NaCl注射液或5%葡萄糖注射液进一步稀释，以便用药。(Physicians′Desk Reference，45th ed。，1991，pp.1962-64,Medical Economics Company,Inc.)目前还在对大环内酯分子FK 506进行抑制人体同种移植物器官移植排斥的临床研究，FK 506与雷怕霉素具有某些结构相似性。FK 506是从津岛链霉菌(Streptomyces tsuskubaensis)分离的，并且已经描述于1990年1月16日授予Okuhara等人的US 4，894，366中。R.Venkataramanan等人在Transplantation Proceedings,22，No.1,Suppl.,1 pp 52-56(1990年2月)中报道，以FK 506在聚氧乙基化蓖麻油(HCO-60，表面活性剂)和乙醇中的溶液(10mg/ml)形式提供了FK 506的静脉注射制剂。该静脉制剂必需用盐水或葡萄糖稀释，并以输注液的形式用药1-2小时。
Physicians′Desk Reference(45th ed.,1991,p.2119,Medical Economics Company，Inc.)列出了以Sandimmune 商品名出售的25mg和100mg装量胶囊以及于50ml瓶中的口服溶液形式的环孢菌素。25mg胶囊含有25mg环孢菌素(USP)和最多12.7%(体积)的无水乙醇(USP)。100mg胶囊含有100mg环孢菌素(USP)和最多12.7%(体积)的无水乙醇(USP)。口服胶囊中的非活性成分是玉米油、明胶、甘油、Labrafil M 2125 CS(聚氧乙基化糖解甘油酯)、红色氧化铁、山梨醇、二氧化钛和其他成分。口服溶液是于50ml瓶中的市售产品，其中含有100mg环孢菌素(USP)和溶于橄榄油、ph.Helv./LabrafilM1944CS(聚氧乙基化油酸甘油酯)赋形剂中的12.5%(体积)的ph.Helv.乙醇，口服前必需用牛奶、巧克力奶或桔汁将其进一步稀释。
硫唑嘌呤(由Burroughs Wellcome Co.以商品名Imuran 出售，Research Triangle Park,N.C.)是另一种口服免疫抑制剂，它可以单独处方或与其他免疫抑制剂结合使用。Physicians′Desk Reference(45th ed.,1991,pp.785-787,Medical Economics Company,Ine)列出了硫唑嘌呤(为6-[1-甲基-(4-硝基咪唑-5-基)硫基]嘌呤)，它以刻痕片剂的形式口服，其中含有50mg硫唑嘌呤以及非活性成分乳糖、硬脂酸镁、土豆淀粉，聚乙烯吡咯酮和硬脂酸。
设计药物释放方法以给患者施用可接受剂量的药物。对于口服制剂，极为需要提供符合此标准的剂型，并且它可以在临床或非临床状况下被有效地服用，优选自己服用。本发明涉及适用于口服雷怕霉素的制剂。已表明雷怕霉素具有体内免疫抑制、杀真菌和抗炎活性，以及抑制胸腺细胞增殖。因此，这些制剂适用于治疗白色念珠菌感染、炎症和移植排斥自体免疫疾病，包括狼疮、类风湿性关节炎、糖尿病和多种硬化等。
由于本发明公开的制剂含有雷怕霉素、其可药用盐或其结合，因此认为它们具有抗肿瘤、杀真菌和抗增殖活性。与此相同，本发明的制剂适用于治疗移植排斥，例如心、肾、肝、骨髓和皮肤移植；自免疫疾病如狼疮、类风湿性关节炎、糖尿病、重症肌无力和各种硬化；炎症如牛皮癣、皮炎、湿疹、皮脂溢、炎性肠疾病和眼色素层炎；实体瘤；真菌感染；和过度增生性血管疾病如再狭窄。因此本发明还提供了适用于需要免疫抑制的哺乳动物引发免疫抑制的制剂。所述引发包括给所述哺乳动物施用免疫抑制量的一种或多种本文所讨论的制剂。
本发明制剂可以制备成为一个组成部分的易于使用的在非水体系中的雷怕霉素溶液，该体系由溶剂、表面活性剂和聚乙二醇组成，以产生与免疫抑制治疗以及抗肿瘤、杀真菌和抗增殖活性有关的长期使用可接受的剂型。该一个部分的体系可以调节，当药物浓度可以被其余成分溶解时可去除所述溶剂。本发明还可以制备成两个部分体系，该体系或者由100%雷怕霉素干燥成分填充料和稀释剂组成，或者由药物浓缩物和稀释剂组成。
通常，本发明制剂包括由下列成分a)雷怕霉素；b)N，N-二甲基乙酰胺(DMA)；c)表面活性剂和d)聚乙二醇(PEG)400。在每100ml本发明制剂中，所述成分的浓度如下a)每100ml中含约0.05至约10.0克的雷怕霉素；b)每100ml中含约0.1至约25ml的DMA；c)每100ml中含约0.1至约10ml的表面活性剂；和d)每100ml中含约65至约99.8ml的PEG400。
本发明更优选的制剂包括下述的制剂，其中各成分的浓度范围(每100ml制剂)如下a)每100ml中含约0.10至约8.0克的雷怕霉素；b)每100ml中含约0.5至约20ml的DMA；c)每100ml中含约0.5至约8ml的表面活性剂；和d)每100ml中含约72至约99ml的PEG400。
本发明最优选的制剂是具有下列浓度范围(每100ml制剂)的制剂a)每100ml中含约0.5至约5.0克的雷怕霉素；b)每100ml中含约1至约20ml的DMA；c)每100ml中含约1至约5ml的表面活性剂；和d)每100ml中含约75至约98ml的PEG400。
适用于本发明制剂的表面活性剂包括(但不限于)吐温20(聚氧乙烯20脱水山梨醇-月桂酸酯)、吐温60，司盘80 脱水山梨醇油酸酯(ICI Americas的产物，Wilmington,DE)，Cremophor 表面活性剂(由BASF Corporation生产，Parsippany,NJ)和吐温80[它在默克索引第11版(由Merck & Co.,Inc.出版，Copyright 1989)第1254页中定义为脱水山梨醇单9-十八烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物、聚氧乙烯(20)脱水山梨醇-油酸酯、脱水山梨醇-油酸酯聚氧乙烯、Sorlate、Tween 80及其他的名称，并且指明为每摩尔山梨醇及山梨醇酐与大约20摩尔环氧乙烷共聚的山梨醇和其酐的油酸酯]。吐温80是本发明优选使用的表面活性剂。
这些制剂所需的雷怕霉素剂量可以根据所表现的症状严重程度和具体接受治疗的患者而改变。本发明化合物计划的日口服剂量以每公斤患者体重计为0.005～75mg/kg，优选0.01～50mg/kg，更优选0.05～10mg/kg。
一般用低于化合物最佳剂量的小剂量开始治疗。其后增加剂量至在所达到环境下最佳效果。准确剂量要由给药医生根据对各个患者治疗的经验来确定。通常，最希望以达到有效结果而不导致伤害或有害副作用的浓度施用本发明制剂。
本发明制剂也可以采取通常使用的口服液体药物的方法施用。可以直接服用，或将其分散于液体如水或汁中服用。该制剂还可以装入胶囊，例如淀粉胶囊或软弹性明胶胶囊。还可以将雷怕霉素口服制剂以约1份制剂约9份水至约1份制剂约499份水的范围、通过混合至少约60秒钟将其分散至水中后服用。该分散可以采用在服药前混合约1小时。
当本发明制剂用作免疫抑制剂或抗炎剂时，可以将其与一种或多种其他免疫调节剂联用。其他抗排斥化疗剂包括(但不限于)硫唑嘌呤，皮质类甾醇如强地松和甲强龙，环磷酰胺，环孢菌素A，FK-506，OFT-3和ATG。通过将一种或多种本发明制剂与其他引发免疫抑制或治疗炎性疾病的药物或药剂结合，以达到所需效果，可以需要较少量的各种药剂。这种结合治疗的基础是由Stepkowski建立的，其结果表明亚治疗剂量的雷怕霉素和环孢菌素A的结合使用明显延长了心脏同种移植物的存活时间。[TransplantationProc.23:507(1991)]。
还应理解，本发明制剂可以与其他常规口服制剂使用的成分一起使用，这些成分的实例是(但不限于)增味剂、着色剂、辅剂、杀真菌剂、抗菌药等。
下面描述的优选制剂及方法仅用于举例说明、而非限制本发明的制剂实施例实施例1制备雷怕霉素口服制剂Ⅰ，包括将雷怕霉素加至DMA中，并混合至形成溶液，搅拌下向该混合物中加入吐温80直至混合物澄清，然后将此样品倒入聚乙二醇(PEG)400中，并混合至均匀。过滤除去该样品颗粒，包装，冷藏并避光保存。
制剂Ⅰ成分量雷怕霉素＠100%5.0gN，N-二甲基乙酰胺20.0ml或18.7g吐温80，NF10.0ml或10.8g聚乙二醇400，NF加至100ml制备方法一个部分1.称取雷怕霉素至合适的容器中；2.向第1步的容器中加入N，N-二甲基乙酰胺；混合至形成溶液；3.向第2步的溶液中加入吐温80；混合至均匀；4.加聚乙二醇(PEG)400至100ml；混合样品至均匀；5.经0.2微米聚四氟乙烯(PTFE)滤膜无菌过滤该样品；6.冷冻并避光保存样品。
以50mg/kg雷怕霉素的剂量给Cynomolgus猴口服制剂Ⅰ，并在服药后指定的时间测定血清浓度，结果如下
口服雷怕霉素(50mg/kg)后猴血清中的药物浓度雷怕霉素浓度(μg/ml)猴子编号No.
时间ABCDE0BDLBDLBDLBDLBDL1小时0.0630.0250.0140.0200.1502小时0.0780.0300.0060.0400.0613小时0.0780.0470.0050.0160.0774小时0.0220.0480.006BDL0.1056小时0.0250.1090.0060.0280.0159小时0.0190.020BDL0.0060.01712小时0.0140.032BDLBDL0.020BDL低于检测限(检测限相当于或等于0.006μg/ml)实施例2可以制备两个组成部分体系的口服雷怕霉素制剂Ⅱ表示在一个容器中装入的雷怕霉素干粉以及一种稀释剂，该稀释剂是通过将吐温80置于一个合适的容器中、搅拌下加入DMA至均匀并加入适量PEG400制成的；或者如制剂Ⅲ所示，通过制备一种在DMA中的药物浓缩物(其中雷怕霉素被DMA溶解)和一种有PEG400的吐温80稀释剂体系，也可制备两个组成部分体系的口服雷怕霉素。
制剂Ⅱ部分A
成分量雷怕霉素＠100%5.00g部分BN，N-二甲基乙酰胺20.0ml或18.7g吐温8010.0ml或10.8g聚乙二醇400加至100ml制备方法部分A1.将雷怕霉素装入合适的容器中。
部分B1.将吐温80装入合适的容器中；2.向吐温80中加入DMA并混合至均匀；3.加入适量PEG400并混合至均匀。
配制方法1.将部分B稀释剂加至部分A的雷怕霉素粉末中；2.混合至形成溶液；3.过滤样品；4.冷冻并避光保存制剂Ⅲ部分A成分量雷怕霉素＠100%2.5gN，N-二甲基乙酰胺加至10ml
部分B吐温805ml聚乙二醇400加至40ml制备方法部分A1.称取雷怕霉素至合适的容器中；2.加适量DMA并混合至澄清；3.将浓缩物置于合适的干净容器中并密封。
部分B1.将吐温80置于合适的容器中；2.加适量PEG400并混合至澄清。
配制方法1.合并A和B两部分并混合均匀；2.过滤样品；3.冷冻并避光保存。
比较例通常雷怕霉素具有极差的水溶性和油溶性。它仅少量溶于PEG-200和300中，并且极微溶于常用的水共溶剂体系，例如20%乙醇/水、10%DMA/水、20%Cremophor EL /水和20%吐温80/水。它不溶于口服体系常用的蓖麻油中。因此，雷怕霉素不容易置于下列所示常规体系如Sandimmune口服体系和FK-506口服体系中Sandimmune口服体系环孢菌素100mg/ml乙醇23.5%V/V橄榄油/LabrafilM1944CSFK-506口服体系FK-50620%甲基纤维素水样品可以分散于水中或包封于软弹性明胶胶囊中。
已发现，本发明口服制剂口服后可以提供比先前使用的非水溶性药物的传统溶液、悬浮液或乳液更高的雷怕霉素血液浓度。下面提供了其他用于雷怕霉素的这些传统剂型的实例及其相应得到的血液浓度比较例112.5mg/ml的雷怕霉素口服悬浮液配方成分量雷怕霉素＠100%1.25g乙醇10.0gPEG40015.0g纯水加至100方法1.称取雷怕霉素至合适的标定容器中；2.加入乙醇并混合至形成溶液；3.加入PEG400并混合至澄清；
4.在第3步搅拌样品的同时，加入适量水至100ml。
以50mg/kg雷怕霉素的剂量给下列A、B、C三只Cynomolgus猴服用雷怕霉素口服悬浮液，然后在服药后指定的时间测量血清药物浓度，结果如下口服50mg/kg雷怕霉素口服悬浮液的猴血清中雷怕霉素的浓度雷怕霉素浓度(μg/ml)猴子编号No.
时间ABC0BDLBDLBDL20分钟BDLBDLBDL40分钟BDLBDLBDL80分钟BDLBDLBDL3小时BDLBDLBDL6小时BDLBDL0.00612小时BDLBDL0.01324小时BDLBDL0.039BDL=低于检测限(检测限～或等于0.006μg/ml)比较例225mg/ml的雷怕霉素口服溶液配方成分量雷怕霉素＠100%2.5g吐温8010.0g无水乙醇10.0g
三醋精加至100ml方法1.称取吐温80和乙醇至合适的容器中；2.加适量三醋精至100ml；3.向第2步的容器中加入雷怕霉素并混合至形成溶液。
以50mg/kg的雷怕霉素剂量给下列A、B、C三只Cynomolgus猴服用雷怕霉素口服溶液，然后在给药后指定的时间测量血清药物浓度如下口服50mg/kg的雷怕霉素口服溶液猴血清中雷怕霉素的浓度雷怕霉素浓度(μg/ml)猴子编号No.
时间ABC0BDLBDLBDL20分钟BDLBDLBDL40分钟BDLBDLBDL80分钟BDLBDLBDL3小时BDLBDLBDL6小时BDLBDLBDL12小时BDLBDLBDL24小时BDLBDLBDLBDL=低于检测限(检测限～或等于0.006μg/ml)
比较例350mg/kg的雷怕霉素口服乳液配方成分量雷怕霉素＠100%5.0g二甲基乙酰胺10ml橄榄油加至100ml方法1.将雷怕霉素置于一个合适的容器中；2.向第1步的容器中加入二甲基乙酰胺，并混合至澄清；3.加适量橄榄油并混合至均匀。
以50mg/kg的雷怕霉素剂量给下列A、B、C三只Cynomolgus猴服用雷怕霉素口服乳液，然后在服药后指定的时间测量血清药物浓度如下
口服50mg/kg的雷怕霉素口服乳液猴血清中雷怕霉素的浓度雷怕霉素浓度(μg/ml)猴子编号No.
时间ABC0BDLBDLBDL20分钟BDLBDLBDL40分钟BDLBDLBDL80分钟BDLBDLBDL3小时BDLBDLBDL6小时 BDL 0.110*BDL12小时BDLBDLBDL24小时BDLBDLBDLBDL＝低于检测限(检测限～或等于0.006μg/ml)＊由实验室获得的测定结果呈现异常。
权利要求
1.一种药物组合物，每100ml该组合物中含有约0.05至约10.0克雷怕霉素、约0.1至约25mlN，N-二甲基乙酰胺、约0.1至约10ml表面活性剂和约65至约99.8ml聚乙二醇。
2.权利要求1的药物组合物，其中每100ml该组合物含有约0.10至约8.0克雷怕霉素、约0.5至约20mlN，N-二甲基乙酰胺、约0.5至约20ml表面活性剂和约72至约99ml聚乙二醇。
3.权利要求1的药物组合物，其中每100ml该组合物含有约0.5至约5.0克雷怕霉素、约1.0至约20mlN，N-二甲基乙酰胺、约1.0至约5.0ml表面活性剂和约75至约98ml聚乙二醇。
4.权利要求1的药物组合物，其中每100ml该组合物含有5.0克雷怕霉素、20mlN，N-二甲基乙酰胺、10ml表面活性剂和适量聚乙二醇400，至100ml。
5.一种多部分口服雷怕霉素制剂，它至少包括在第一部分中5.0克雷怕霉素，和在第二部分中20.0mlN，N-二甲基乙酰胺、10.0ml表面活性剂和适量聚乙二醇400，至100ml。
6.一种多部分口服雷怕霉素制剂，它至少包括在第一部分中2.5克雷怕霉素和适量N，N-二甲基乙酰胺至10ml，和在第二部分中5ml表面活性剂和适量聚乙二醇400，至40ml。
全文摘要
本发明包括新的口服雷怕霉素制剂，每100ml该制剂含有约0.05至约10.0克雷怕霉素、约0.1至约25ml N，N-二甲基乙酰胺、约0.1至约10ml表面活性剂和约65至约99.8ml PEG 400。
文档编号A61K9/00GK1109746SQ9411659
公开日1995年10月11日 申请日期1994年9月29日 优先权日1993年9月30日
发明者R·P·瓦兰尼斯, T·W·伦纳德 申请人:美国家用产品公司