含红细胞生成素和铁制剂的药物联合制剂的制作方法

专利名称：含红细胞生成素和铁制剂的药物联合制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含红细胞生成素和铁制剂的药物联合制剂。这些制剂尤其可用于治疗贫血或血液透析患者。
本发明旨在含2000-7000单位重组人红细胞生成素(rhEPO)和含1-20mg当量铁离子的生理可耐受铁制剂的药物联合制剂，其中所述rhEPO和所述铁制剂可以单独给药的形式或以整体给药的形式存在。
重组红细胞生成素在治疗患贫血，尤其是输血诱发的贫血的血液透析患者中的用途是公知的。在世界范围内，贫血是第二种高发慢性病。
由骨髓中红细胞生成素的减少或者由铁再利用性疾病而引起的贫血中，红细胞再生减少是主要特征。红细胞再生每日下降约1％，仅1-3周后即可临床检测到贫血。正常红细胞生成所需的每日铁量为25mg。其中仅有1mg来源于食物，通常主要是通过再利用老化红细胞退化后血红蛋白的铁来满足。在慢性疾病中，从网状细胞释放的铁大大减少。铁保留在网状内皮系统就不能再被红细胞生成所利用。因此，也称之为“内在性铁缺乏”，从而使正常补偿机制不完全。在贫血中典型的是补偿贫血所需的网状细胞减少和红细胞生成增加缺乏。红细胞生成素的分泌减少或活性减低或许是另一种病理因素。例如，铁代谢的明显变化是转铁蛋白形成的补偿性增加。因此，基本病症是铁从铁储库(网状内皮细胞中)向血浆中(以及由此向红细胞系中)的释放减少，故不能引发正常的补偿机制。在治疗中，施用重组红细胞生成素可明显增加红细胞数。
在临床化学中，测定血清铁蛋白的浓度以诊断贫血和铁代谢性疾病。除慢性贫血外，在真正缺铁的情况下，铁蛋白不增加(在绝大多数情况下，它仍保持低于90-95ng/ml)。当还存在感染、发炎或恶性疾病的临床信号时，该值表示铁缺乏和慢性疾病伴随的贫血。由于在该类疾病中，血清铁蛋白也对急性期(acute phase)蛋白产生反应，所以可改进红细胞铁蛋白的诊断应用。
在男性机体的总铁量为约3.5g，而女性则为约2.5g。铁发现于活性代谢和贮存室中。一名男性的活性储库中，平均分布在血红蛋白中的铁有2100mg、在肌红蛋白中有200mg、在组织酶中有150mg(血红素和非血红素)和在铁转运室中有3mg。在组织中，铁以铁蛋白(700mg)和血铁黄蛋白(300mg)的形式贮存于胞内。
有一种铁生物利用度方面的病生理疾病，会减少铁在体内的吸收。其中，通过食物每日可得到的量为约10mg，但只有1mg被成人吸收。在铁缺乏的情况下，再吸收增加，但很少超过5-6mg(除非另外补充铁)。铁再吸收的确切机理尚不清楚。主要由肠粘膜细胞进行调节。粘膜的主要信号似乎标志着机体的总铁含量。据证实，血清铁蛋白的浓度与吸收的铁量成反比。
通过肠粘膜细胞，铁转变为铁蛋白。该铁转运蛋白具有两个铁结合位点。它是在肝合成的。因此，有机理说铁是通过细胞(如肠粘膜细胞、巨噬细胞)摄取并释放到成红细胞、胎盘细胞或肝细胞的特异性膜受体上。通过细胞内吞作用，转铁蛋白/铁受体配合物进入红细胞前体细胞，铁在该前体细胞进入线粒体。至此，铁与原卟啉生成血。
红细胞生成非必需的铁通过转铁蛋白转运到两类储库中。最重要的储库是铁蛋白。这是一类包封铁核心的异质蛋白。它是可溶性的并代表了肝(肝细胞)、骨髓、脾(巨噬细胞)、红细胞和血清中活性贮存形式(约100ng/ml)。组织铁蛋白库是高度不稳定的，在需要铁的时候可迅速地被利用。循环血清铁蛋白来源于网状内皮系统，其循环浓度与机体总铁量相对应(每ng/ml对应于8mg储备铁)。
在血液透析患者中，发现使用rhEPO治疗的患者的铁需求相当令人满意。由于EPO仅在机体相应的铁储库贮存尽可能满的时候才能发挥最佳作用，因此对这些患者通常还采用其它的铁疗法。至今，为尽可能地填充铁储库，还经常施用高剂量的铁制剂。但是过量的铁制剂也会对患者产生有害副作用。尤其是由于铁离子的极端毒性，从生理学上讲，静脉应用铁制剂也不安全。在患者已知是过敏，如哮喘的情况下，甚至通常建议不使用某些铁制剂。可通过测定铁蛋白和通过测定转铁蛋白饱和度估计铁储库的填充水平(M.Wick，W，Pingerra，P.Lehmann，“Eisenstoffwechsel，Diagnose und Rherapie derAnamien”，pp.5-14，38-55，65-80，94-98，third advanced edition，September 1996，Springer Verlag，Vienna，New York)，其中所述转铁蛋白饱和度表示从储库向骨髓的铁流，而血清铁蛋白值是贮存铁的量度。
当血清铁蛋白＞150μg/l并且转铁蛋白饱和度＞20％时，铁储库被认为是“填满”的。P.Grutamacher等在临床肾病学，第38卷，第1期，1992，第92-97页中描述了在这些条件下可设想的对EPO治疗的最大反应。
目前，在采用EPO治疗的透析患者的铁疗法中有“校正期”和“维持期”的说法。在校正期期间，为尽可能快速地重新补充铁储库，铁制剂可以尽量高的剂量施用。适宜铁制剂的应用可方便地通过静脉快速浓注的方式产生作用。然后，在维持期期间采用较低铁剂量“维持填满”铁储库。在该阶段，适宜铁制剂的应用不象快速浓注那样产生作用，而是以普通输液制剂或通过口服给药形式产生作用。
采用rhEPO治疗的血液透析患者的铁需求无论在校正期或维持期均相当令人满意。在校正期期间，为合成1g/dl血红蛋白需150mg铁(由内源性铁储库释放或必须外源提供)。同样，在维持期期间，由于血液透析患者的每次治疗都会丧失少量的血，因此铁的需求增加。估计经过一年时间所丧失的铁约为1000mg铁(3mg/天)。长此以往，这种丧失只能通过外源途径来平衡。为此，一般采用口服或静脉给药形式。
由于口服铁再吸收仅为约1mg/天，在极端情况下(口服给药约300mg Fe(III)/天)也不超过3mg/天，因此优选静脉应用较大量的铁。目前，德国药品市场上有两种通过静脉途径应用的铁制剂。它们是“ferrlecit”和“ferrum vitis”药品。Ferrlecit是葡糖酸铁(III)配合物，而“ferrum vitis”是氢氧化铁(III)糖配合物。
的确，由于静脉、皮下途径安全，注射不受因患者的其它因素而产生作用，在血液透析治疗期间采用静脉、皮下施用铁(III)确实可相对缓和避免高剂量、长期口服铁治疗的多种问题。近年来，基于相对较少副作用的给药形式，采用“ferrlecit”和“ferrum vitis”的该方法越来越被广泛使用。然而同时也指出了在自体输血中与ferrlecit疗法有关的某些副作用，并且胃肠外ferrlecit疗法的标示范围也受到严格限制。引人注意的是，该方法可能引起循环反应，甚至虚脱和可发生过敏反应。另外，所允许使用的每日最大剂量为2个5ml的安瓿瓶，相当于125mg铁。
由于施用任何药物均须考虑副作用，因此静脉给药任何一种铁制剂并不常见，当不得不相对快速地注射大剂量时更是如此。此外，如果铁剂量太高或未与EPO剂量的进行最适平衡而进行了给药，静脉给药铁制剂还可引起急性反应。
显然，必须施用于EPO治疗的透析患者的高剂量铁是不利的。这增加了心肌梗塞的危险，也明显增加了发展为铁性肝硬化的危险。在透析患者的治疗中，铁的充足补充以及测定铁缺乏的适宜方法具有明显治疗意义，因为铁利用不充分是EPO不能有效产生作用和EPO耐药性的主要原因之一。
过高剂量的含铁制剂还会引起铁中毒。元素铁对胃肠道、心血管和中枢神经系统具有毒性作用。元素铁的口服致死剂量为200-250mg/kg。最常施用的铁片为硫酸亚铁(含约20％元素铁)、富马酸亚铁(含约30％元素铁)或葡糖酸亚铁(含约10％元素铁)。
铁中毒有代表性的四期。I期(中毒后头6小时)可出现呕吐、腹泻、过度兴奋、胃痛、发作、淡漠和昏迷。对胃肠道粘膜的刺激可引起出血性胃炎。在高血清水平可出现呼吸急促、心动过速、低血压、休克、昏迷和代谢性酸中毒。II期(中毒后的10-14小时)在可持续达24小时的潜伏期内，症状有明显发展。III期(中毒后12-48小时)出现休克、灌注不足和低血糖。血清铁浓度可能正常。会出现GPT升高性肝损伤、发热、白细胞增多、血凝固障碍、心电图T波倒置、方向性障碍、躁动、淡漠、发作趋向、昏迷、休克、酸中毒和死亡。IV期(随后的2-5周)主要是因胃幽门、窦或其它小肠障碍引起的可能并发症、肝硬化或中枢神经系统损伤。
本发明的目的是提供重组人红细胞生成素和铁制剂的联合制剂，该制剂含有最适调节铁代谢性疾病治疗量的EPO和铁离子。尤其是所述的危险，特别是急性期反应可通过所述联合制剂得以避免。在使用rhEPO治疗的患者中，可获得最佳EPO作用并避免EPO耐药性。
本发明的联合制剂含有2000-7000单位rhEPO和含1-20mg当量铁离子的生理可耐受铁制剂，尤其是Fe(II)和Fe(III)配合物，其中的rhEPO和铁制剂作为联合制剂存在。
在本发明的含义中，术语“联合制剂”应理解为不仅指那些其中EPO和铁制剂一起配制在即时销售的包装单位(所谓联合包装)的药品包装规格，还指那些以单独制剂形式包含适宜量EPO或适宜量铁制剂的药品包装规格，就各成分的量而言配制单独制剂的方式使得在本发明的含义中可以与各自的其它制剂联合给药。在这些情况下，在许多国家，药品制造商或药品进口商通常应提供包括法律上规定的包装说明，这包括单独制剂的联合给药说明或信息。联合制剂优选以完整的给药形式存在，其中EPO和铁制剂以其各自的量存在于同一包装容器中。
在本发明的含义中，铁制剂可以是口服或非胃肠道给药形式。通常，它们可以是含有生理可耐受铁盐或铁配合物化合物作为活性成分的单独制剂，或者也可以是除含有生理可耐受铁制剂外，还含有其它活性成分如维生素、叶酸、烟酸硫胺、核黄素、吡哆素、抗坏血酸、烟酰胺、泛酸钙等的联合制剂。
生理可耐受的铁盐或铁配合物化合物是，例如硫酸亚铁、富马酸亚铁、柠檬酸铁、葡糖酸亚铁、琥珀酸亚铁、氯化亚铁、甘氨酸硫酸亚铁配合物、天冬氨酸亚铁、葡糖酸钠亚铁配合物、氢氧化铁聚麦芽糖配合物或山梨醇柠檬酸亚铁配合物。具体而言，优选的铁制剂是Fe(III)配合物，尤其是分子量在30000-100000道尔顿的配合物。特别优选的是糖二酸铁。在此，可使用市售的“ferrun vitis”制剂(Neopharma Co.，德国)。尽管所述不稳定的铁配合物释放相对大量的离子化铁，当静脉应用时会产生毒性，但由于本发明采用低铁剂量，故在联合制剂中也可使用这类不稳定铁配合物，如葡糖酸铁(分子量约为1000道尔顿；ferrlecit)。
有关下文中铁制剂的量，应理解为铁离子，即所应用的Fe(II)或Fe(III)的当量。采用该标准，任何铁制剂的量都可根据其已知分子量来计算。例如在葡糖酸铁x2 H2O的情况下，当服用695mg量的铁制剂时，铁量为80.5mg。例如当服用280mg无水琥珀酸亚铁时，铁量为95.2mg。
也可使用分子量高于或低于34000道尔顿(尿EPO的分子量)的改性的所述蛋白、异构形式的不同糖基化的酶或蛋白代替rhEPO蛋白(参见欧洲专利说明书EP 0205564；EP 0411678)。并且，这些蛋白一般可通过缺失法、替代法或伸展法由长度为166个氨基酸的天然EPO氨基酸序列衍生。这类蛋白基本上具有与rhEPO相当的生理特性。尤其是这类蛋白具有诱导骨髓增加网状细胞和血红细胞和/或增加血红蛋白合成或铁吸收的生物特性。也可使用低分子量物质代替这些蛋白，所述低分子量物质被称为EPO类似物并结合于相同的生物受体。这些类似物优选通过口服给药。这类蛋白或类似物的给药量通过比较EPO与所述活性物质的生物活性确定。
为治疗血液透析患者，本发明的联合制剂含有3000-7000单位rhEPO，特别是4000-6000单位rhEPO和优选约5000单位的rhEPO。具体讲，铁离子的量为3-20mg，优选5-20mg，尤其优选为10mg。为治疗贫血患者，最适剂量为2000-4000单位rhEPO，优选约3000单位。在这种情况下，铁离子的量为3-15mg，尤其是约5mg。
本发明的结合形式的rhEPO和铁配合物浓度对血液透析或贫血患者提供了最适调节和治疗并且不会引起铁静脉疗法的急性期反应。
使用该联合制剂的治疗可每周进行一次至五次，优选最多四次，其中治疗血液透析患者的情况下，每位患者每周接受的铁离子总量应不超过60mg。当治疗贫血时，每周的铁离子总量应不超过20mg。在临床实践中，在血液透析患者铁疗法的校正和维持期使用本发明的联合制剂是特别有益的，并且不会引起中毒。至今，仍是在开始时服用不同剂量的铁，在校正期服用较维持期低的剂量的铁离子。出人意料的是，当使用本发明的联合制剂时，不再需使用这样的不同剂量。EPO和铁制剂量以最适方式相互调整，以致在维持剂量和校正剂量之间不需存在差异。这样，不会再混淆铁制剂的最适剂量，从而提高了血液透析或贫血患者治疗的安全性。
当应用该联合制剂时，rhEPO和铁配合物可以所谓固定联合形式给药，即以含有两种化合物的单一药物制剂形式给药。例如可以是注射液或输液或其冻干物(填充在安瓿中)形式。在给药形式的生产和贮存期间，使EPO稳定的铁配合物给药形式是有益的。在冻干物的情况下，在冻干物溶解后，铁配合物使EPO活化。冻干物形式的固定联合的两种活性物质还具有操作简便和安全的优点。通过加入普通药用注射溶剂，冻干物在安瓿中溶解，即可静脉给药。
EPO和铁配合物还可以单独药物制剂的形式提供。通常，可使用包含两种容器的一个包装单位，第一种容器中是适宜的EPO给药形式(冻干物、注射液或输液)，第二种容器中是适宜的铁制剂给药形式。以一个包装单位(药物包装)提供的自由联合制剂是有益的，这样每位被治疗的患者可分别施用一定量的EPO和铁制剂，并可直接安排。此外，这类联合制剂具有提高治疗成功安全性的优点，因为确定了各种单独制剂的最适调节量，从而在很大程度上排除了与其它市售的各种剂量的单独制剂相混淆。并且，由于国家需要，须考虑常将不同剂量的药物制剂出口到不同国家，所以很可能会混淆不同比例量的各种活性物质(EPO和铁配合物)。此外，本发明的联合制剂最大限度地降低了如果将独立药物包装规格的常规铁制剂与EPO一起联合给药可能引起的铁药物过量的错误危险性。本发明的联合制剂确保治疗的安全性和由个体负责的或由患者进行自我治疗的操作简便性。在这种情况下，也可例如将一种活性成分以注射液形式提供，而另一种活性成分(铁配合物)以口服给药形式提供。
在EPO活性成分是以冻干物形式提供的情况下，药物包装规格(联合包装)包含在玻璃安瓿或carpoules中的适宜量的EPO。铁制剂可以固体形式(片剂、粉末、颗粒、冻干物等)或液体形式存在于不同容器中。另外，为使活性物质的冻干物单独或与固体铁制剂一起溶解，该联合制剂包装规格优选包括重新配制溶液。如果EPO和铁制剂是一起应用的，在铁制剂以即时可用溶液的形式存在的情况下，该溶液可与EPO溶液混合。铁制剂通常还可以以被加到常规输液中的浓缩物形式提供，这样可在数小时内缓慢作用。在该过程中，将少量体积的含铁配合物的溶液(约0.5-10ml)加到约500-1000ml即时可用的注射溶液中。
在本发明的含义中，还可将EPO制剂和铁制剂分别以独立药品形式提供，以一种方式配制单制剂以包含本发明的EPO和铁配合物联合体所需量的各种物质。通常，该药物包装规格包括规定的包装广告，其中包括所需量的EPO和/或铁制剂联合给药的适当说明。适当说明还可作为药品包装(指外层包装)或原始包装(安瓿、blister strips等)上的包装印刷包括。这样，在含有2000-7000单位EPO药品的情况下，应包括该制剂与含1-20mg铁的铁配合物一起施用的说明。反之亦然，在铁制剂的情况下，应有与2000-7000单位EPO结合施用的说明。
该药物给药形式按照制药领域熟知的常规方法，用常用的药物辅剂制备。
当使用本发明的联合制剂进行联合治疗时，可通过测定适用于铁疾病的诊断参数，尤其是铁、转铁蛋白、转铁蛋白饱和度和铁蛋白参数以十分简单的方式确定每周最大剂量。发现当铁蛋白为 100-300μg/l(相应于800-1200mg储库铁(III))，和转铁蛋白饱和度为 20-40％时，最适于调整患者的校正期和维持期。优选铁蛋白浓度至少为125μg/l，尤其是至少150μg/l，最高为270μg/l，尤其是最高为250μg/l。有益的铁浓度为10-20μmol/l(相应于约56-112μg/dl)，转铁蛋白浓度为30-60μmol/l(相应于约240-480mg/dl)。将转铁蛋白饱和度定义为血清/血浆铁浓度与血清/血浆转铁蛋白浓度的比率(乘以校正因子1.41)。它是一种与患者水合状况无关的非量度参数。转铁蛋白饱和度按照下式计算转铁蛋白饱和度(％)＝(铁[μg/dl]×100)/(转铁蛋白[mg/dl]×1.41)在当转铁蛋白饱和度(以％表示)与铁蛋白浓度(以μg/l表示)的比率为5-40％时，适于对患者进行最佳调整。将该参数定义为转铁蛋白/铁蛋白饱和度(TfF饱和度)。它可按下式计算TfF饱和度＝(转铁蛋白饱和度[％])×100/(铁蛋白[μg/l])该参数值优选在10-40，尤其是15-25[％×l/μg]。
例如当每周给药1-6只安瓿，尤其是最多4-5只安瓿(每只安瓿含有2000-7000单位rhEPO和1-20mg铁配合物)时，可通过检测这些参数确定患者的最佳调整。
为安全地排除有害副作用，测定急性期参数CRP(5mg/l±100％)[CRP＝C反应蛋白)，目前认为CRP是炎症反应的最佳蛋白标记物。此外，可测定肝脏参数GPT(谷氨酸丙酮酸转氨酶)、GOT(谷氨酸草酰乙酸转氨酶)和γ-GT(γ-谷胺酰转移酶)，这些参数应落在下述范围内(在37℃测定)GPT＜50U/l；GOT＜50U/l；γ-GT＜40U/l，其中GPT是肝病诊断中首选的参数。
再有，可选择性地利用血液学对照参数，如血细胞比容(血红细胞占总体积的分数)或血红蛋白过少的血红细胞的增加。在对照参数增加较高的情形下，须降低每周铁剂量并应同时施用rhEPO。在对照参数尤其是转铁蛋白饱和度值较低的情形下，须增加每周铁给药。
出人意料的是，在本发明中还发现对个体贫血患者的最适治疗EPO和铁离子剂量也可通过测定可溶性TfR(转铁蛋白受体)来预先确定。当可溶性TfR的浓度不再增加时，即达到了EPO和铁(III)的最适治疗剂量。为确保有足够可迁移的铁存在，静脉铁剂量和EPO给药应交替增加直至达到稳定期。与此对应的TfR浓度为1500-2000μg/l。
当施用本发明的联合制剂联合治疗贫血时，可通过测定诊断性参数转铁蛋白受体(TfR)、铁蛋白和TfR与铁蛋白的比率十分简单地确定每周最大剂量。发现当铁蛋白是 100-300μg/l(对应于400-1200mg储库铁(III))，TfR/铁蛋白是 ＞15时，最适合调整患者的校正期和维持期。
有益的是，TfR浓度在1500-2500μg/l之间。特别是，TfR(以μg/l表示)与铁蛋白(以μg/l表示)的比率在15-35，尤其是为20以上。
例如，当每周施用1-6只安瓿，优选最多4或5只安瓿(每只安瓿含3000单位rhEPO和5mg铁配合物)时，可使用这些参数确定对患者的最适调整。在该实验中，它们不是血液透析患者，具体地说，这些患者由于其它原因的贫血而使用EPO和/或铁制剂进行治疗。
为安全排除有害副作用，测定急性期参数CRP(2-10mg/l)[CRP＝C-反应蛋白)。此外，可测定肝脏参数GPT(丙氨酸丙酮酸转氨酶)，在37℃时该参数应＜50U/l(25℃时＜30U/l)。再有，可选择性地利用血液学对照参数，例如血细胞比容(血红细胞占总体积的分数)或血红蛋白过少的血红细胞的增加，其中网状细胞可增至最多15/1000-30/1000。典型的血红蛋白浓度为约12-18g/dl。在显示可溶性TfR增加较高的情形下，须将每周的铁剂量提高到35mg。如果可溶性TfR值较低，则应增加每周的EPO剂量。
可通过分析有问题患者的体液样品(血液、血清、尿等)测定铁水平。为测定铁的水平，可具体测定铁、转铁蛋白、铁蛋白和转铁蛋白受体的浓度、转铁蛋白饱和度和转铁蛋白/铁蛋白饱和度。对于血液透析患者，铁、转铁蛋白、铁蛋白和转铁蛋白饱和度参数优选按照本身已知的普通分析方法测定。尤其是转铁蛋白/铁蛋白饱和度的测定最为相关。在非透析引起的贫血患者情况下，需先测定铁蛋白浓度和转铁蛋白受体浓度。尤其是转铁蛋白受体与铁蛋白的比率(转铁蛋白受体/铁蛋白饱和度值)的测定最为相关。
依据本发明，治疗贫血患者的最适联合制剂含有2000-4000单位EPO和3-10mg，优选5mg铁离子，优选为Fe(III)配合物，其中EPO和Fe(III)配合物可以单独给药形式或以整体给药形式存在。
为在EPO治疗前填充铁储库，本发明的给药形式还允许在应用EPO之前1-3天先应用铁制剂。
另外，本发明涉及3000-7000单位rhEPO和含5-20mg铁离子的生理可耐受铁制剂在生产治疗血液透析患者的联合制剂中的用途。
为检测铁代谢，在临床化学中测定血液铁浓度和铁结合能力。这两种测试是总要做的，因为这些测量结果之间的相互关系十分重要。通常，男性的正常血清铁水平在75-150mg/dl之间，而女性在60-140mg/dl之间。铁的总结合能力为250-450mg/dl。血清铁水平在一天里会有所变化。在铁缺乏和慢性贫血的情况下，该水平降低。在溶血或与铁过载有关的综合征(如血色素沉着或血铁黄素沉积症)情况下，该水平升高。正口服铁药物的患者具有正常的血清铁水平，尽管它们实际上缺乏铁。总铁结合能力(＝转铁蛋白×2)在铁缺乏的情况下升高，但在慢性病导致贫血的情况下降低。
此外，测定血清铁蛋白水平。铁蛋白是一种贮存铁的糖蛋白，其中存在组织型异铁蛋白，可通过免疫学方法，如放射免疫分析法(RIA)或浊度测量法测定血清中的异铁蛋白。铁蛋白是组织中铁贮存的量度。在绝大多数实验室中，正常范围在30-300ng/ml，男性的几何平均值为88，女性为49。血清铁蛋白值与机体的铁总储量有密切关系。因此，仅在铁缺乏的情况下发现有血清铁蛋白水平降低。该水平的增高发现于铁过载的情况下。同样，增高的血清铁蛋白水平也发现于肝损伤或与一些类型的肿瘤形成有关的情况下，其中铁蛋白与急性期蛋白结合。类似地，可使用酶促免疫吸收试验(酶联免疫吸收分析法＝ELISA)测定血清转铁蛋白受体，其中使用抗可溶性受体的单克隆抗体。参考范围为0.5-3mg/l。该水平在铁储库轻微不足的情况下升高。为表征铁储库，尤其是在组织损伤或由于急性反应的不能利用血清铁蛋白的情况下，可测定特异性红细胞铁蛋白浓度。
为检测铁代谢，还应测定红细胞铁蛋白水平。在加入了肝素的血液中，离心将红细胞与白细胞和血小板(也含有铁蛋白)分离。然后，将红细胞溶化并免疫学测定贮存的铁蛋白。红细胞铁蛋白反映了近3个月期间(即，红细胞存活期间)的铁储库情况。正常值通常在每个红细胞5-48 attograms(ag)。在铁缺乏性贫血中发现该值小于5，在铁过载情况下(如血色素沉着)发现该值增高(常大于100)。锌原卟啉的测定有着相似意义。
借助下面的实施例使本发明得以更详细地说明，其中在铁制剂的情况下所示量是指铁离子当量(而不是指给药铁配合物的量)。
实施例1患者A(血液透析)a)标准制剂按照常规治疗方法，给患者施用100mg铁(III)配合物，每周一次；静脉施用5000单位rhEPO，每周三次。此时，转铁蛋白、转铁蛋白饱和度、CRP、GOT/GPT和γ-GT诊断参数均在正常范围内；测得铁蛋白值过高，为800-1300μg/l。为使铁蛋白值降低至小于500μg/l，施用5000单位rhEPO，每周三次，施用3周。
b)本发明制剂随后，施用本发明的联合制剂(组成为10mg糖二酸铁(III)和5000单位rhEPO)，每周三次，测得的铁蛋白值在正常范围内并在随后的治疗中该值仍保持正常。所有其它参数也均在正常范围内。
实施例2女性患者B(血液透析)a)标准制剂按照实施例1，女性患者B接受50mg铁(III)制剂，每周一次，和5000单位rhEPO，每周三次。尽管如实施例1那样铁剂量低，但铁蛋白和转铁蛋白饱和度参数仍过高。
通过施用5000单位rhEPO，每周三次，施用三周，铁蛋白值降低到小于500μg/l，转铁蛋白饱和度降低到小于25％。
b)本发明制剂每周两至三次地施用本发明的10mg铁(III)制剂和5000单位rhEPO的联合制剂后，所有测定值均在合理范围内，甚至在进一步施用本发明的制剂治疗后也没有发现过高或过低的值。
实施例3患者C(血液透析)a)标准制剂患者C接受50mg铁(III)制剂，每周两次，和2000单位rhEPO，每周两次。在这种情况下发现铁蛋白值很高，为1500-2500μg/l并且γ-GT升高。撤掉铁输液，铁蛋白值在3周内降低到500μg/l。
b)本发明的制剂同样，随后施用10mg葡糖酸铁(III)和5000单位rhEPO的本发明联合制剂三次，铁蛋白、转铁蛋白饱和度、CRP、GOT和γ-GT的值均正常，并且这些参数在进一步的治疗中仍保持正常。
实施例4患者D(贫血患者)a)标准制剂按照常规的治疗方法，给患者施用100mg铁(III)配合物，每周一次，和静脉施用5000单位rhEPO，每周三次。此时，转铁蛋白、转铁蛋白饱和度、CRP、GOT/GPT和γ-GT诊断参数均在正常范围内；但发现铁蛋白值过高，为800-1300μg/l；而转铁蛋白受体的值太低，为100-500μg/l。
为使转铁蛋白受体值增高到1500μg/l以上并使铁蛋白值减低到500μg/l以下，施用5000单位rhEPO，每周三次，施用3周。
b)本发明制剂当随后施用组成为5mg糖二酸铁(III)和3000单位rhEPO的本发明联合制剂，每周五次时，测得的转铁蛋白受体值和铁蛋白值均在正常范围内，并且这些值在随后的治疗中仍保持正常。所有其它参数也均在正常范围内。
实施例5患者E(贫血患者)a)标准制剂按照实施例4，患者E接受50mg铁(III)制剂，每周一次，和5000单位rhEPO，每周三次。尽管如在实施例4中施用了较低的铁剂量，铁蛋白和转铁蛋白饱和度参数仍过高。
通过施用5000单位rhEPO，每周三次，施用3周，转铁蛋白受体值升高到1500μg/l以上，铁蛋白值也降至500μg/l以下并且转铁蛋白饱和度小于25％。
b)本发明制剂在施用组成为5mg铁(III)制剂和3000单位rhEPO的本发明联合制剂，每周四至五次时，所有值均在合理范围内，并且在进一步施用本发明制剂的治疗中也没有极端值出现。
实施例6患者F(贫血患者)a)标准制剂患者F接受50mg铁(III)制剂，每周两次，和接受2000单位rhEPO，每周两次，在这种情况下，发现转铁蛋白受体值过低，为100-800μg/l，铁蛋白值太高，为1500-2500μg/l并且γ-GT升高。撤掉铁输液，在3周内，转铁蛋白受体值增高到1500μg/l以上，铁蛋白值降低到500μg/l以下。
b)本发明制剂同样，随后施用组成为5mg葡糖酸铁(III)和3000单位rhEPO的本发明联合制剂五次，测得的铁蛋白、转铁蛋白受体、转铁蛋白饱和度、CRP、GOT和γ-GT值均在正常范围内，并且这些值在随后的治疗中仍保持正常。
权利要求
1.一种药物联合制剂，含有2000-7000单位EPO和含1-20mg当量铁离子的生理可耐受铁制剂。
2.根据权利要求1的联合制剂，特征在于它含有3000-7000单位的EPO和5-20mg铁离子。
3.根据权利要求1或2的联合制剂，特征在于它含有5000单位EPO和10mg铁离子。
4.根据权利要求1的联合制剂，特征在于它含有2000-4000单位的EPO和3-10mg铁离子。
5.根据权利要求4的联合制剂，特征在于它含有3000单位EPO和5mg铁离子。
6.根据权利要求1-5任一项的联合制剂，特征在于铁制剂是分子量为30000-100000道尔顿的配合物，优选糖二酸铁(III)。
7.根据权利要求1-5任一项的联合制剂，特征在于铁制剂是葡糖酸铁(III)。
8.根据权利要求1-3、6或7任一项的联合制剂，用于治疗血液透析患者。
9.根据权利要求1或4-7任一项的联合制剂，用于治疗贫血。
10.一种生产权利要求1-9的药物联合制剂的方法，特征在于将2000-7000单位rhEPO和含1-20mg当量铁离子的生理可耐受铁制剂与药用载体或辅剂一起配制，并且各制剂可以联合制剂形式提供。
11.EPO在生产治疗血液透析患者的联合制剂中的用途，所述联合制剂含有与含1-20mg当量铁离子的生理可耐受铁制剂联合给药的2000-7000单位EPO。
12.EPO在生产治疗贫血的联合制剂中的用途，所述联合制剂含有与含3-10mg当量铁离子的生理可耐受铁制剂联合给药的2000-4000单位EPO。
13.一种药物包装单位，包含2000-7000单位EPO和含1-20mg当量铁离子的生理可耐受铁制剂，它们可在一个容器中呈整体给药形式或者在单独的容器中呈单独给药形式。
14.根据权利要求13的包装单位，特征在于EPO和铁制剂各自呈注射液和/或输液或呈冻干物以单独给药形式存在。
15.根据权利要求13的包装单位，特征在于EPO和铁制剂呈注射液和/或输液或呈冻干物以整体给药形式存在。
16.一种测定体液样品中铁状况的方法，其中第一步测定铁、转铁蛋白和铁蛋白以及转铁蛋白饱和度的浓度，第二步测定转铁蛋白/铁蛋白饱和度。
17.根据权利要求16的方法，用于测定血液透析患者的铁状况。
18.一种测定体液样品中铁状况的方法，其中第一步测定铁蛋白和转铁蛋白受体(TfR)的浓度，第二步测定转铁蛋白受体/铁蛋白饱和度。
19.根据权利要求18的方法，用于测定贫血患者的铁状况。
全文摘要
本发明涉及含有2000－7000单位重组人红细胞生成素(EPO)和5－20mgFe(Ⅲ)配合物的药物联合制剂,其中rhEPO和Fe(Ⅲ)配合物可以单独给药形式或以整体给药形式存在。该药物制剂用于治疗贫血或血液透析患者。
文档编号A61K31/00GK1202113SQ96198284
公开日1998年12月16日 申请日期1996年9月12日 优先权日1995年9月14日
发明者P·勒曼 申请人:曼海姆泊灵格股份公司