专利名称：含咪唑取代基的巯基烷基肽基化合物及其用作基质金属蛋白酶(mmp)和/或肿瘤坏死因子 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的一类肽基衍生物及其在药物中的用途。
背景技术：
金属蛋白酶，包括基质金属蛋白酶(MMP)，(人成纤维细胞)胶原酶，明胶酶和肿瘤坏死因子(TNF)，及其作用方式，抑制剂和它们的临床作用被公开在WO-A-9611209中，其内容在此引作参考。
已经显示具有抑制与结缔组织损坏有关的金属蛋白酶，如胶原酶，溶基质素和明胶酶作用性质的化合物在体外和体内抑制TNF的释放。参见Gearing等人(1994)《自然》(Nature)370555-557；McGeehan等人(1994)《自然》(Nature)370558-561；GB-A-2268934；和WO-A-9320047。所有这些报道的抑制剂均含有异羟肟酸锌结合基团，正如公开在WO-A-9523790中的咪唑取代的化合物。抑制MMP和TNF的其它化合物公开在WO-A-9513289和WO-A-9611209中。
抑制胶原酶，具有类似于本发明化合物结构部分的化合物包括在US专利4,511,504(1985年4月16日颁布)和US专利4,568,666(1986年2月4日颁布)中包含的化合物中。
要求保护的抑制溶基质素(蛋白聚糖酶)的相关结构的化合物包括在US专利4,771,037(1988年9月13日颁布)中。
最近的报道说明MMP族一些新的酶也可以介导粘着分子如选择蛋白，如L-选择蛋白的排出。这些可溶性粘着分子与许多疾病包括癌症，自身免疫和炎症反应有关。已经提出，这些分子一旦裂解，选择蛋白就结合特定配体并且影响其生物活性。因此，干扰或防止配体与选择蛋白结合的药物将为治疗上述各种疾病有用的药物。
发明概述本发明包括新的式(I)巯基烷基肽基化合物，它们是基质金属蛋白酶和/或TNFα介导的疾病包括变性疾病和某些癌症的有用抑制剂。
本发明涉及新的通式(I)化合物及其盐，溶剂化物和水合物
其中R1是C1-6烷基，C2-6链烯基，(C1-6烷基)芳基，芳基，C1-6烷基杂芳基，杂芳基或C1-6烷基-AR9基团，其中A是O，NR9或S(O)m，其中m＝0-2，及R9是H，C1-4烷基，芳基，杂芳基，(C1-4烷基)芳基或(C1-4烷基)杂芳基；如果A＝NR9基团，R9可以相同或不同；R2是氢或C1-6烷基；R3是[Alk]nR6基团，其中Alk是C1-6烷基或C2-6链烯基及n是0或1；X是NR9，O或S；Y是N或CR4；R4和R5相同或不同并且是R9，COR13，C1-3烷基-R13或C1-3烷基-COR13；R7是氢或R10CO，其中R10是C1-4烷基，C1-4烷基芳基，C1-4烷基杂芳基，环(C3-6)烷基，C1-4烷基-环(C3-6)烷基，C2-6链烯基，C2-6链烯基芳基，芳基或杂芳基；R8是芳基(可有可无地被R11取代)，杂芳基(可有可无地被R11取代)，C1-4烷基芳基(可有可无地被R11取代)，C1-4烷基芳基(可有可无地被R11取代)，C1-4烷基杂芳基(可有可无地被R11取代)，环(C3-6)烷基(可有可无地被R11取代)，环(C3-6)烯基(可有可无地被R11取代)或C1-4烷基-环(C3-6)烷基(可有可无地被R11取代)，基团
其中p＝1-2，或基团
其中B和C分别选自基团O，S，C(R9)2和NR9，并且R9彼此相同或不同；R6是AR9，环(C3-6)烷基，环(C3-6)链烯基，C1-6烷基，C1-6烷氧基芳基，苄氧基芳基，芳基，杂芳基，C1-3烷基杂芳基，C1-3烷基芳基，C1-6烷基-COOR9，脒，胍，C1-6烷基-NHR10，CONHR10，NHCO2R10，NHSO2R10或NHCOR10；R11是SO2R13，SR7，CO2R9，COR9，CON(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，N(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，NR9R12，OR9，苯二甲酰亚氨基或琥珀酰亚氨基；R12是氢或COR9，CO2R9(其中R9不是H)，CONHR9，或SO2R9(其中R9不是H)；及R13是N(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，C1-4烷基，芳基，杂芳基，C1-4烷基芳基或C1-4烷基杂芳基。发明详述应当理解，本发明化合物可以含有一个或多个不对称取代的碳原子，例如，式(I)中用星号标示的那些碳原子。式(I)化合物中存在的一个或多个这些不对称中心可以产生立体异构体，应当理解本发明包括每一种情况下的所有立体异构体，包括对映异构体和非对映异构体，及其外消旋混合物。
在结构式中，～线用在可能的不对称中心以表示R-和S-构型的可能性，<和……线代表在不对称中心的唯一构型。
在本说明书中，单独或结合使用的术语“C1-6烷基”指具有1-6个碳原子的直链或支链烷基部分，包括，例如，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，叔丁基，戊基，己基等。
术语“C1-4烷基”指具有1-4个碳原子的直链或支链烷基部分，包括，例如，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，叔丁基等。
术语“C2-6链烯基”指具有2-6个碳原子的直链或支链烷基部分并且另外有E或Z立体化学(如果适当)的一个双键。该术语包括，例如，乙烯基，1-丙烯基，1-和2-丁烯基，2-甲基-2-丙烯基等。
术语“环(C3-6)烷基”指具有3-6个碳原子的饱和脂环部分，并且包括，例如，环丙基，环丁基，环戊基，环己基等。
术语“环(C3-6)链烯基”指具有3-6个碳原子的脂环部分并且另外具有一个双键。该术语包括，例如，环戊烯基或环己烯基。
术语“芳基”指可有可无地被选自例如卤素，三氟甲基，C1-6烷基，烷氧基，苯基等取代的苯基或萘基。
术语“卤素”指氟，氯。溴或碘。
术语“杂芳基”指5-10个原子或至少一个原子选自O，N，或S的芳香环系，并且包括，例如呋喃基，硫代苯基，吡啶基，吲哚基，喹啉基等。
术语“保护的氨基”和“保护的羧基”指以本领域技术人员熟悉的方式保护的氨基和羧基。例如，氨基可以用苄氧羰基，叔丁氧羰基，乙酰基等保护，或以苯二甲酰亚氨基等形式保护。羧基可以容易裂解的酯的形式保护，例如，甲基，乙基，苄基或叔丁基酯。
术语“烷氧基”指最多含有6个碳原子的直链或支链烷氧基，如甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，丁氧基，叔丁氧基等。
术语“C0-4烷基”指具有0-4个碳原子的直链或支链烷基部分，包括，例如，甲基，乙基，丙基，异丙基等。
式(I)化合物的盐包括可药用盐，例如从无机酸或有机酸衍生的酸加成盐，如盐酸盐，氢溴酸盐，对甲苯磺酸盐，磷酸盐，硫酸盐，过氯酸盐，乙酸盐，三氟乙酸盐，丙酸盐，柠檬酸盐，马来酸盐，琥珀酸盐，乳酸盐，草酸盐，酒石酸盐和苯甲酸盐。
也可以与碱形成盐。这种盐包括从无机酸或有机碱衍生的盐，例如，碱金属盐如镁盐或钙盐，及有机胺盐如吗啉，哌啶，二甲胺或二乙胺盐。
当本发明化合物中“保护的羧基”是酯化的羧基时，其可以是式CO2Z代谢不稳定的酯，其中Z可以是乙基，苄基，苯乙基，苯基丙基，a-或b-萘基，2，4-二甲基苯基，4-叔丁基苯基，2，2，2-三氟乙基，1-(苄氧基)苄基，1-(苄氧基)乙基，2-甲基-1-丙酰氧基丙基，2，4，6-三甲基苄氧基甲基或戊酰氧基甲基。
通式(I)化合物可通过任何本领域已知的适当的方法和/或下列方法制备。应当理解如果需要式(I)的特定立体异构体，在所述合成方法中可以使用适当同手型起始原料和/或用常规分离技术(例如HPLC)从混合物中拆分异构体。
本发明化合物可以通过下列方法制备。在下列描述和结构式中基团R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10，R11，R12，R13，A，B，C，X，Y和Z定义如上，除非特别说明。应当理解，在下述各种化合物中存在的，并且需要保留的功能基如氨基，羟基或羧基在任何反应开始前应是保护形式。在这种情况下，除去保护基可以是在特定反应的最终步骤。用于这种功能基适当的保护基对于本领域技术人员是显而易见的。具体描述请参见《有机合成中的保护基》(Protective Group in Organic Synthesis)，WileyInterscience，T W Greene，PGM Wuts。
制备通式(I)化合物的方法包括通式(II)化合物的脱保护(例如通过水解)
其中R7代表适当的保护基(例如叔丁基，三苯甲基，苯甲酰基或乙酸酯)。
应当理解如果需要式(I)的特定立体异构体时，其可通过常规拆分技术如高效液相色谱获得。当然，如果需要，在偶合反应中可以使用适当同手型的起始原料以产生式(I)的特定立体异构体。下面举例说明。
通式(II)化合物可以通过式(III)的酸或其活性衍生物
其中R1，R7和R8定义如上，与式(IV)的胺偶合制备，
其中R2，R3，R5，X和Y定义如上。
式(III)化合物的活性衍生物包括，例如，酸酐或酰卤，如酰氯。
偶合反应可以用这类胺化反应的标准条件进行。因此，该反应可以在溶剂，如惰性有机溶剂，例如醚如环醚如四氢呋喃，酰胺如取代的酰胺如二甲基甲酰胺，或卤代烃如二氯甲烷，在低温例如-30℃至室温，如-20℃-0℃，可有可无地在碱，例如有机碱如胺，例如三乙胺或环状胺如N-甲基吗啉存在下进行。如果使用式(III)的酸，该反应可以在附加缩合剂，例如二亚胺如N，N-二环己基碳化二亚胺存在下进行，优选在三唑如1-羟基苯并三唑存在下进行。另外，在与式(IV)的胺反应前，酸可以与氯甲酸酯例如氯甲酸乙酯反应。
式(III)的酸可以用公开在WO-A-9611209中的任何方法制备。
式(IV)的胺可以从(V)的酮通过还原胺化或相应的肟(VI)(可以容易地从式(V)制备)的还原制备。
通式(V)的酮可以从适当保护的(例如用SEM)咪唑通过用正丁基锂在-78℃锂化，接着与式R3-COOH(VII)的酸衍生物反应制备。式(VII)的适当的酸衍生物包括酸酐，酰胺或酰卤，如酰氯。
通式(VII)的酸容易从商品起始原料用本领域技术人员已知的方法获得。这些酸的一些酰胺也是商品。
作为本发明的进一步外延，可以通过适当保护的式H2N-CHR3-CHO(VIII)醛的标准环化反应，接着除去任何保护基制备杂环类如咪唑类，噁唑类，噻唑类和三唑类。例如，咪唑类可以通过适当保护的醛(VIII)与氨和乙二醛反应制备。通式(VIII)的醛可以通过相应的适当保护的α-氨基酸还原制备。
这种氨基酸及其衍生物可以光学纯或外消旋形式获得。在同手型形式中，它们提供通式(I)化合物对映有择合成的不对称结构单元。许多衍生物可容易地从商品起始原料用本领域技术人员已知的方法获得。参见《肽合成应用》(Practice of Peptide Synthesis)，M.Bodanszk等人，Springer Verlag New York，(1984)，和WO-A-9221360。
式(I)化合物可通过其它式(I)化合物的相互转化制备。因此，例如，其中R1是C1-6烷基的式(I)化合物可通过氢化(用适当溶剂例如乙醇中的钯-炭)其中R1是C2-6链烯基的式(I)化合物制备。在另一个实例中，其中R7是式R10CO基团的式(I)化合物可通过酰化(用适当的酰氯R10COCl，在碱如三乙胺的存在下，在适当的溶剂如氯代溶剂，例如二氯甲烷中)其中R7是H的式(I)化合物制备。
所得终产物或中间体的混合物可以根据其组分的物理化学差异用已知方法分离为纯的终产物或中间体，例如，通过色谱法，蒸馏，分级结晶，或在某些情况下如果需要或可能，通过形成盐方式进行分离。
本发明化合物在体外显示对溶基质素，胶原酶和明胶酶的抑制活性。本发明化合物在体外还显示抑制TNFα释放的活性。本发明化合物的活性和选择性可用适当的酶抑制试验测定，例如，在WO-A-9611209中的实施例A-H所述方法。另外，下面将给出荧光测定法。
本发明还涉及治疗患有与上述基质金属蛋白酶和/或TFNα有关的失调或疾病的患者(包括人和/或在牛奶房，肉类或皮毛工业中饲养的哺乳动物或宠物)，更具体地，该治疗方法包括给予作为活性成分的式(I)的基质金属蛋白酶抑制剂。
因此，式(I)的化合物可用于治疗骨关节炎和类风湿性关节炎，及由于这些基质金属蛋白酶(如在某些转移性肿瘤细胞系中发现的那些)过度表达引起的疾病和症状。
如上所述，由于式(I)化合物是TFNα和MMPs的活性抑制剂，它们可用于人或兽药中。因此，本发明另一方面涉及
处理(意指治疗或预防)哺乳动物，特别是人的由TFNα和/或MMPs介导的疾病或症状的方法，该方法包括给哺乳动物服用有效量的上述式(I)化合物或其可药用盐；及式(I)化合物用于人或兽药中，特别是处理(意指治疗或预防)由TFNα和/或MMPs介导的疾病或症状；及式(I)化合物在制备处理(意指治疗或预防)由TFNα和/或MMPs介导的疾病或症状的药剂中的用途。
上述疾病或症状包括炎症，自身免疫疾病，癌症，心血管疾病，涉及组织损坏疾病如类风湿性关节炎，骨关节炎，骨质疏松，神经变性，早老性痴呆，动脉粥样硬化，充血性心律衰竭，中风，脉管炎，节段性回肠炎，溃疡性结肠炎，多发性硬化症，牙周炎，龈炎和涉及组织损坏如骨吸收，出血，凝固，急性期反应，恶质病和厌食，急性感染，HIV感染，发烧，休克症状，移植宿主排异反应，皮肤病，外科伤口愈合，牛皮癣，特应性皮炎，大疱性表皮松解，肿瘤生长，继发性转移血管生成和发病，眼科疾病，视网膜病，角膜溃疡，再灌注损伤，偏头痛，脑膜炎，哮喘，鼻炎，过敏性结膜炎，湿疹和过敏症。
对于治疗类风湿性关节炎，骨关节炎，和由基质金属蛋白酶(如在某些转移性肿瘤细胞系中发现的那些酶)过度表达引起的疾病和症状，或其它由基质金属蛋白酶或TFNα产生增加介导的疾病，式(I)化合物可以被口服，表面，非肠道，通过喷雾吸入或直肠以含有无毒可药用载体，辅剂和赋形剂的单位剂量制剂进行给药。这里所用术语非肠道包括皮下注射，静脉，肌内，胸骨内注射或灌注技术。另外，除了治疗温血动物如大鼠，小鼠，马，牛，羊，狗，猫等，本发明化合物在用于人的治疗中是有效的。
含有活性成分的药物组合物可以是适于口服使用的形式，例如，片剂，锭剂，糖锭剂，水性或油性悬浮液，可分散粉剂或粒剂，乳剂，硬或软胶囊，或糖浆或酏剂。适于口服使用的组合物可以根据本领域制备药物组合物的任何已知方法制备并且这种组合物可含有一种或多种选自甜味剂，香味剂，着色剂和防腐剂的添加剂以提供精美可口的药物制剂。片剂含有活性成分及与其混合的适于制备片剂的无毒可药用赋形剂。这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂，如碳酸钙，碳酸钠，乳糖，磷酸钙或磷酸钠；成粒和崩解剂，例如玉米淀粉，或藻酸；粘合剂，例如淀粉，明胶或阿拉伯胶，和润滑剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸或滑石。片剂可以是不包衣的或用已知技术包衣以延缓在胃肠道崩解和吸收，因此，它们提供在较长时间内的缓释作用。例如，可以使用延长时间的物质如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。也可以用在US专利4,256,108；4,166,452和4,256,874中所述技术包衣以形成用于缓释的渗透治疗片剂。
用于口服的制剂也可以硬胶囊形式存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂混合，例如碳酸钙，磷酸钙或高岭土，或以软胶囊形式存在，其中活性成分与水或油介质，例如花生油，液体石蜡或橄榄油混合。
水性悬浮液含有活性成分及与其混合适于制备水性悬浮液的赋形剂。这种赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟基丙基甲基纤维素，藻酸钠，聚乙烯吡咯烷酮，黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂可以是天然磷脂，例如，卵磷脂，或烯化氧与脂肪酸的缩合产物，例如，聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如，十七乙烯氧基十六烷醇，或环氧乙烷与从脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的缩合产物，如聚氧乙烯与从脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物，例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇一油酸酯。水性悬浮液还可以含有一种或多种防腐剂，例如，乙基或正丙基，对羟基苯甲酸酯，一种或多种着色剂，一种或多种香味剂，和一种或多种甜味剂，如蔗糖或糖精。
油性悬浮剂可以通过将活性成分悬浮在植物油例如，花生油，橄榄油，芝麻油或椰子油中制备，或悬浮在矿物油如液体石蜡中制备。油性悬浮剂中可以含有增稠剂，例如，蜂蜡，硬石蜡或十六烷醇。可以加入上述甜味剂，和香味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂如抗坏血酸来防腐。
适于通过加入水制备水性悬浮液的可分散性粉剂和粒剂含有活性成分及与其混合的分散剂或润湿剂，悬浮剂和一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或润湿剂及悬浮剂已经列举，还可以存在例如，甜味剂，香味剂和着色剂。
本发明药物组合物也可以是水包油型乳剂。油相可以是植物油，例如，橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然胶，例如阿拉伯树胶或黄蓍胶，天然磷脂，例如大豆，卵磷脂，和从脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯，例如脱水山梨糖醇一油酸酯和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇一油酸酯。乳剂还可以含有甜味剂和香味剂。
与甜味剂，例如甘油，丙二醇，山梨糖醇或蔗糖可以制成糖浆和酏剂。这种制剂中还可以含有缓和剂，防腐剂和香味剂和着色剂。药物组合物可以是无菌可注射水性或油性悬浮液。这种悬浮液可根据本领域已知方法用上述适宜的分散剂或润湿剂和悬浮剂制成制剂。无菌可注射制剂还可以是在无毒非肠道可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的载体和溶剂是水，Rings溶液和等渗氯化钠溶液。另外，通常使用无菌的固定油作为溶剂或悬浮介质。为此，可以使用包括合成的一或二甘油酯在内的任何温和的固定油。另外，脂肪酸如油酸可用于可注射制剂中。
式(I)化合物还可以以用于药物直肠给药的栓剂形式给药。这些组合物可以通过混合药物和在常温是固体但在直肠的温度是液体的适宜非刺激赋形剂制备，因此其可在直肠中熔化以释放药物。这种物质是可可脂和聚乙二醇。
对于表面应用，使用含有式(I)化合物的软膏，油膏，凝胶，溶液或悬浮液。(对于这种应用目的，表面应用应包括口腔洗液和漱口液)。
对于治疗上述疾病，剂量水平在约0.05mg-约140mg/kg体重/天是有用的(每个患者每天约2.5mg-约7g)。例如，给药约0.01-50mg化合物/kg体重/天(每个患者每天约0.5mg-约3.5g)治疗炎症是有效的。
可与载体物质结合产生单剂量形式的活性成分的量依据要治疗的患者和具体的给药方式变化。例如，用于人口服给药的制剂的活性成分可在总组合物的约5-约95％的量内变化。单剂型通常含有约1mg-约500mg活性成分。
当然，应当理解，对于任何特定的患者的具体剂量将取决于许多因素，包括使用的具体化合物的活性，患者的年龄，体重，健康状况，性别，给药时间，饮食，给药途径，排泄率，联合使用的药物和要治疗疾病的严重程度。
下列非限定性实施例说明式(I)化合物的制备，但是并不意味着限制所附权利要求所述的本发明。
在实施例中，使用下列缩写RT 室温EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐TNFα 肿瘤坏死因子αLPS 脂多糖ELISA 酶联免疫吸附测定中间体1(S)-N-(苄氧羰基)亮氨醛在-78℃将(S)-N-(苄氧羰基)亮氨酸甲基酯(8.22g，29.4mmol)的无水甲苯(80ml)溶液用滴加二异丁基氢化铝(1.0M，74ml，74mmol)的甲苯溶液处理。将该溶液在-78℃搅拌30分钟，然后加入甲醇(3.5ml)淬灭反应。然后将冷的混合物加到搅拌的酒石酸氢钾(200ml)水溶液中。再搅拌1小时后，将混合物用乙醚(3×200ml)萃取，用盐水(400ml)洗涤合并的萃取液，干燥(MgSO4)并真空蒸发得到无色油状标题化合物。该物质不用纯化直接用于下步。
类似方法制备中间体2(S)-N-(苄氧羰基)苯丙氨醛从(S)-N-(苄氧羰基)苯丙氨酸甲基酯(8.0g)制备，产物为无色油状物，不用纯化直接用于下步。中间体32-[1-(N-苄氧羰基氨基)-3-甲基]丁基咪唑将中间体1(29.4mmol)和乙二醛三聚体二水合物(10.36g，49.3mmol)的甲醇(150ml)溶液在-15℃用氨气处理。在-10℃搅拌4小时后，将混合物温热至RT并搅拌过夜。将橙色悬浮液倒入水(400ml)中并过滤除去所得白色固体得到标题化合物(3.96g，47％)，为白色固体。TLC Rf0.42(5％ MeOH-CH2Cl2)类似方法制备中间体42-[1-(N-苄氧羰基氨基)-2-苯基]乙基咪唑从中间体2制备，产物为米色固体(4.1g，32％)。TLC Rf0.38(5％ MeOH-CH2Cl2)中间体5(S)-2-[1-(N-苄氧羰基氨基)-3-甲基]-1-(1，1-二甲基乙氧基羰基)丁基咪唑将二-叔丁基二碳酸酯(5.47g，25mmol)的二甲基甲酰胺(80ml)溶液滴加到在3℃搅拌着的中间体5(7.2g，25mmol)，二-异丙基乙胺(4.35ml，25mmol)和二甲氨基吡啶(92mg，0.75mmol)的二甲基甲酰胺(140ml)溶液中。将该混合物慢慢温热至RT并搅拌过夜。将棕色混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机相用水洗涤3次及用盐水洗涤1次，干燥(MgSO4)并真空蒸发得到棕色油状粗产物。用快速硅胶柱色谱纯化，用20％乙酸乙酯-己烷洗脱得到淡黄色油状所需产物。将该油状物溶解在二氯甲烷(12ml)中并加入戊烷(50ml)。将该混合物放在冰箱中2小时，然后过滤除去沉淀并真空蒸发滤液得到淡黄色油状标题化合物(7.70g，20mmol，79％)。TLC Rf 0.20(33％乙酸乙酯-己烷)；ee分析97.8％类似方法制备中间体6(S)-2-[1-(N-苄氧羰基氨基)-2-苯基]-1-(1，1-二甲基乙氧基羰基)乙基咪唑从中间体4制备，产物为淡黄色油状物(3.52g，53％)。TLC Rf 0.16(33％乙酸乙酯-己烷)；ee分析97.5％中间体7(S)-2-[1-(N-苄氧羰基氨基)-3-甲基]丁基咪唑将三氟乙酸(15.3ml，198mmol)加到3℃搅拌着的中间体5(7.5g，19.3mmol)的二氯甲烷溶液中。将混合物慢慢温热至RT并搅拌过夜。真空蒸发混合物然后从庚烷和二氯甲烷的混合物中浓缩2次得到白色泡沫状标题化合物(5.53g，100％)。TLC Rf 0.26(5％甲醇-二氯甲烷)类似方法制备中间体8(S)-2-[1-(N-苄氧羰基氨基)-2-苯基]乙基咪唑从中间体6制备，产物为淡黄色泡沫(2.5g，100％)。TLC Rf 0.32(5％甲醇-二氯甲烷)中间体9(S)-2-(1-氨基-3-甲基)丁基咪唑将中间体7的溶液在RT和大气压下用10％钯-炭(50％w/w)的乙醇溶液氢化过夜。用hyflo过滤除去催化剂并蒸发滤液得到无色泡沫状粗标题化合物，将其直接用于下步。
类似方法制备中间体10(S)-2-(1-氨基-3-苯基)乙基咪唑从中间体8制备，产物为淡黄色泡沫，不用纯化直接用于下步。中间体115-琥珀酰亚氨基戊酸乙酯将二甲基甲酰胺(800ml)加到琥珀酰亚胺(248g，2.5mol)，碳酸钾(346g，2.5mol)和5-溴戊酸乙酯(400g，1.9mol)的混合物中。将该混合物在110-120℃加热3小时然后冷却至室温。加水(2.5L)然后将混合物用甲基叔丁基醚(4X1L)萃取。用水(400ml)洗涤合并的萃取液，干燥(MgSO4并真空蒸发得到淡黄色油状标题化合物(310g，71％)。TLC Rf 0.3(甲基叔丁基醚)中间体125-琥珀酰亚氨基戊酸将中间体11(130g，572mmol)的正磷酸二氢钾(50nM，650ml)溶液用Novozyme 435(2g)处理。加入NaOH(6N)以保持pH为7。3小时后过滤除去酶并用少量水洗涤。通过加入6N盐酸酸化滤液至pHl，并真空浓缩滤液至约100ml然后用二氯甲烷(3×250ml)萃取。用盐水(100ml)洗涤合并的萃取液。干燥(MgSO4)并真空蒸发得到白色固体状标题化合物(99g，81％)。TLC Rf0.2(50％乙酸乙酯/己烷)中间体13(R，S)-2-溴-5-琥珀酰亚氨基戊酸将中间体12(60g，300mmol)的1，2-二氯乙烷(120ml)溶液在80℃用滴加亚硫酰氯(26.6ml，370mmol)处理。将该混合物搅拌30分钟，然后加入三氯化磷(2.6ml，30mmol)。然后在20分钟内滴加溴(18.6ml，360mmol)并将混合物在80℃搅拌16小时。将混合物冷却至RT并加入水(200ml)；然后在50℃搅拌2.5小时。将混合物冷却至RT，过滤收集沉淀并真空干燥得到淡橙色粉末状标题化合物(82g，98％)。TLC Rf0.3(50％乙酸乙酯/己烷)中间体14(R，S)-2-乙酰基巯基-5-琥珀酰亚氨基戊酸在5℃将中间体13(20g，72mmol)的四氢呋喃(100ml)溶液分批用硫代乙酸钾(8.21g，72mmol)处理。将该混合物温热至RT并搅拌4小时。真空蒸发溶剂并将剩余物在甲基叔丁基醚(400ml)和水(40ml)中分配。分离有机相，用水(40ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发得到黄色油状标题化合物(14.4g，78％)。TLC Rf0.3(50％乙酸乙酯/己烷)中间体15(1S)-[(N-苄氧羰基)-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑在0℃将N-苄氧羰基-L-(S-甲基)半胱氨酸(3.50g，14.8mmol)的四氢呋喃(60ml)溶液用中间体9(2.07g，13.5mmol)和EDC(2.82g，14.8mmol)处理。然后将该混合物温热至RT并搅拌过夜。真空浓缩混合物至约30ml并加入1N盐酸(20ml)。将混合物用二氯甲烷(5×100ml)萃取并用盐水(100ml)洗涤合并的萃取液，干燥(MgSO4)并真空蒸发得到无色油状标题化合物(3.40g，68％)。TLC Rf 0.3(5％ MeOH-CH2Cl2)类似方法制备中间体16(1S)-[(N-苄氧羰基)-L-正缬氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑从N-苄氧羰基-L-正缬氨酸(3.43g，15mmol)和中间体9(2.20g，14mmol)制备，产物为淡黄色油状物(94％)TLC Rf 0.4(5％ MeOH-CH2Cl2)中间体17(1S)-[L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑在0℃将中间体15(3.40g，9.2mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液用三氟乙酸(11.4ml，14.8mmol)处理。然后将该混合物温热至RT并搅拌过夜。真空蒸发溶剂并将剩余物溶解在水(50ml)中。加入1N NaOH直到溶液pH达到8。然后将混合物用二氯甲烷(3×100ml)萃取，用盐水(100ml)洗涤合并的萃取液，干燥(MgSO4)并真空蒸发得到无色油状标题化合物(0.99g，40％)。TLC Rf 0.1(5％ MeOH-CH2Cl2)
类似方法制备中间体18(1S)-(L-正缬氨酰)氨基-3-甲基-2-丁基咪唑从中间体16(5.0g，14mmol)制备，产物为白色固体(50％)。TLC Rf 0.2(5％ MeOH-CH2Cl2)实施例1(1S)-[[(2R，S)-乙酰基巯基-5-苯二甲酰亚氨基]-戊酰基-L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑将(R，S)-2-乙酰基巯基-5-苯二甲酰亚氨基戊酰基-L-亮氨酸(WO-A-9611209的中间体122，1mmol)和中间体9(1mmol)的无水四氢呋喃(30ml)溶液用N-羟基苯并三唑(1mmol)和EDC(1mmol)处理并将混合物在RT搅拌过夜。用乙酸乙酯(100ml)稀释混合物并用8％碳酸氢钠(50ml)，1N盐酸(50ml)，水(50ml)和盐水(50ml)洗涤溶液，干燥(MgSO4)并真空蒸发淡黄色泡沫。用快速硅胶柱色谱纯化，用2-3％甲醇-二氯甲烷洗脱得到无色泡沫状标题化合物(43％)。C29H39N5O5S[569.7]；MH+570类似方法制备实施例2(1S)-[[(2S)-乙酰基巯基-5-苯二甲酰亚氨基]-戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑从(S)-2-乙酰基巯基-5-苯二甲酰亚氨基戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酸(WO-A-9611209)和中间体9(0.65mmol)制备，产物为无色泡沫(46％)。C27H35N5O5S2[573.7]；MH+577实施例3(1S)-[[(2S)-乙酰基巯基-5-苯二甲酰亚氨基]-戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-2-苯基-2-丁基咪唑从中间体2和中间体12(0.65mmol)制备，产物为无色泡沫(46％)。C30H33N5O5S2[607.8]；MH+608实施例4(1S)-[[(2S)-乙酰基巯基-5-琥珀酰亚氨基]-戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑在RT，将中间体17(1.61g，5.96mmol)的四氢呋喃(32ml)溶液用中间体14(1.62g，5.96mmol)和EDC(1.25g，6.55mmol)处理。将混合物搅拌过夜。将混合物在乙酸乙酯(100ml)和水(75ml)中分配并分离有机相，用盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发得到黄色油状物。用快速硅胶柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯-己烷洗脱得到无色泡沫状标题化合物(1.60g，51％)。TLC Rf 0.3(5％ MeOH-CH2Cl2)类似方法制备实施例5(1S)-[[(2S)-乙酰基巯基-5-琥珀酰亚氨基]-戊酰基-L-正缬氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑从中间体18(1.76g，6.98mmol)和中间体14(1.90g，6.98mmol)制备，产物为白色固体油状物(45％)。TLC Rf 0.3(5％ MeOH-CH2Cl2)实施例6(1S)-[[(2R，S)-巯基-5-苯二甲酰亚氨基]-戊酰基-L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑在3℃将氨水溶液(SG 0.88，0.3ml)加到实施例1(120mg，0.21mmol)的甲醇溶液中。1小时后将混合物真空浓缩得到粗产物。用柱色谱纯化，用2-3％甲醇的二氯甲烷洗脱得到白色固体标题化合物(76mg，68％)。C27H33N5O4S[515.7]；MH+516类似方法制备实施例7(1S)-[[(2S)-巯基-5-苯二甲酰亚氨基]-戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑从实施例2(4.4g，7.67mmol)制备。用柱色谱纯化粗产物，用2-3％甲醇的二氯甲烷洗脱得到白色固体标题化合物(3.0g，74％)。C25H33N5O4S2[531.7]；MH+532实施例8(1S)-[[(2S)-巯基-5-苯二甲酰亚氨基]-戊酰基-L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑从实施例3(200mg，0.33mmol)制备。用柱色谱纯化粗产物，用2-3％甲醇的二氯甲烷洗脱得到白色固体标题化合物(148mg，79％)。C28H31N5O4S2[565.7]；MH+566实施例9(1S)-[[(2S)-巯基-5-苯二甲酰亚氨基]-戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-2-苯基-2-丁基咪唑从实施例3制备，产物为白色固体油状物(89％)。TLC Rf 0.2(5％ MeOH-CH2Cl2)实施例10(1S)-[[(2S)-巯基-5-苯二甲酰亚氨基]-戊酰基-L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑盐酸盐将盐酸的乙醚(1.0M，5ml)溶液加到搅拌着的实施例7(40mg)的四氢呋喃(4ml)和甲醇(1ml)混合物溶液中。RT1小时后，真空浓缩混合物得到淡黄色固体盐酸盐。MMP抑制活性-荧光测定法可以用下列方法测定通式(I)化合物作为胶原酶-1(MMP-1)，胶原酶-2(MMP-8)，明胶酶-A(MMP-2)，明胶酶-B(MMP-9)和溶质基素-1(MMP-3)抑制剂的效力将抑制剂溶解在含有0.02％β-巯基乙醇的二甲亚砜中并制备系列稀释液。在有和没有抑制剂存在下，将活化酶在含有50mM Tris，pH7.4，5mMCaCl2，0.002％NaN3和Brij35的分析缓冲液中温育。将样品在37℃预温育15分钟，然后加入荧光底物(Mca-Pro-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2)至最终浓度10μM。测定物在37℃温育90分钟然后用荧光扫描仪II(FluoroscanII)在λex(355nm)和λem(460nm)处读数。
将酶活性与没有抑制剂的对照组的活性进行比较并且结果用50％抑制溶质基素的抑制剂浓度(IC50)表示。
权利要求
1.通式(I)化合物及其盐，溶剂化物和水合物
其中R1是C1-6烷基，C2-6链烯基，(C1-6烷基)芳基，芳基，C1-6烷基杂芳基，杂芳基或C1-6烷基-AR9基团，其中A是0，NR9或S(O)m，其中m＝0-2，及R9是H，C1-4烷基，芳基，杂芳基，(C1-4烷基)芳基或(C1-4烷基)杂芳基；如果A＝NR9基团，R9可以相同或不同；R2是氢或C1-6烷基；R3是[Alk]nR6基团，其中Alk是C1-6烷基或C2-6链烯基及n是0或1；X是NR9，O或S；Y是N或CR4；R4和R5相同或不同并且是R9，COR13，C1-3烷基-R13或C1-3烷基-COR13；R7是氢或R10CO，其中R10是C1-4烷基，C1-4烷基芳基，C1-4烷基杂芳基，环(C3-6)烷基，C1-4烷基-环(C3-6)烷基，C2-6链烯基，C2-6链烯基芳基，芳基或杂芳基；R8是芳基(可有可无地被R11取代)，杂芳基(可有可无地被R11取代)，C1-4烷基(可有可无地被R11取代)，C1-4烷基芳基(可有可无地被R11取代)，C1-4烷基杂芳基(可有可无地被R11取代)，环(C3-6)烷基(可有可无地被R11取代)，环(C3-6)链烯基(可有可无地被R11取代)或C1-4烷基-环(C3-6)烷基(可有可无地被R11取代)，基团
其中p＝1-2，或基团
其中B和C分别选自基团O，S，C(R9)2和NR9，并且R9是相同的或不同的；R6是AR9，环(C3-6)烷基，环(C3-6)链烯基，C1-6烷基，C1-6烷氧基芳基，苄氧基芳基，芳基，杂芳基，C1-3烷基杂芳基，C1-3烷基芳基，C1-6烷基-COOR9，脒，胍C1-6烷基-NHR10，CONHR10，NHCO2R10，NHSO2R10或NHCOR10；R11是SO2R13，SR7，CO2R9，COR9，CON(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，N(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，NR9R12，OR9，苯二甲酰亚氨基或琥珀酰亚氨基；R12是氢或COR9，CO2R9(其中R9不是H)，CONHR9，或SO2R9(其中R9不是H)；及R13是N(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，C1-4烷基，芳基，杂芳基，C1-4烷基芳基或C1-4烷基杂芳基。
2.权利要求1的化合物，其中R6不是脒或胍；如果R8是芳基，烷基或烷基芳基，其可被取代；及R11是SO2R13，SR7，COR13，N(R9)2，NR9R12，OR9，苯二甲酰亚氨基或琥珀酰亚氨基。
3.权利要求1的化合物，选自(1S)-[[(2R，S)-乙酰基巯基-5-苯二甲酰亚氨基]戊酰基-L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑(1S)-[[(2S)-乙酰基巯基-5-苯二甲酰亚氨基]戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑。
4.权利要求1的化合物，选自(1S)-[[(2S)-乙酰基巯基-5-苯二甲酰亚氨基]戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-2-苯基-2-丁基咪唑(1S)-[[(2R，S)-巯基-5-苯二甲酰亚氨基]戊酰基-L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑(1S)-[[(2S)-巯基-5-苯二甲酰亚氨基]戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑和(1S)-[[(2S)-巯基-5-苯二甲酰亚氨基]戊酰基-L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑及其盐酸盐。
5.权利要求1的化合物，选自(1S)-[[(2S)-乙酰基巯基-5-琥珀酰亚氨基]-戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑和(1S)-[[(2S)-乙酰基巯基-5-琥珀酰亚氨基]-戊酰基-L-正缬氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑(1S)-[[(2S)-巯基-5-苯二甲酰亚氨基]-戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-2-苯基-2-丁基咪唑。
6.上述权利要求之一的化合物，为单一对映异构体或非对映异构体，或这种异构体的混合物。
7.一种用于治疗的药物组合物，包括上述权利要求之一的化合物，和可药用稀释剂，或载体。
8.权利要求1-6之一的化合物在制备治疗或预防与基质金属蛋白酶相关的疾病或由TNFα或L-选择蛋白sheddase介导的疾病的药物中的应用。
9.权利要求8的用途，其中疾病选自癌症，炎症和炎症疾病，组织变性，牙周疾病，眼科疾病，皮肤科疾病，发烧，心血管疾病，，出血，凝固，急性期反应，恶质病和厌食，急性感染，HIV感染，休克症状，移植宿主排异反应，自身免疫疾病，再灌注损伤，脑膜炎，偏头痛。
10.权利要求8的用途，其中疾病选自肿瘤生长，血管生成，肿瘤发作和扩散，转移，恶性腹水和恶性胸膜渗漏。
11.权利要求8的用途，其中疾病选自类风湿性关节炎，骨质疏松，骨关节炎，哮喘，多发性硬化症，神经变性，早老性痴呆，动脉粥样硬化，中风，脉管炎，节段性回肠炎和溃疡性结肠炎。
12.权利要求8的用途，其中疾病选自角膜溃疡，视网膜病和外料伤口愈合。
13.权利要求8的用途，其中疾病选自牛皮癣，特应性皮炎，慢性溃疡和大疱性表皮松解。
14.权利要求8的用途，其中疾病选自牙周炎和龈炎。
15.权利要求8的用途，其中疾病选自鼻炎，过敏性结膜炎，湿疹和过敏症。
16.权利要求8的用途，其中疾病选自ristonosis，充血性心律衰竭，子宫内膜炎，动脉粥样硬化和内硬化症(endosclerosis)。
全文摘要
由于对金属蛋白酶和肿瘤坏死因子的抑制作用,通式(Ⅰ)的含咪唑取代基的肽基化合物具有治疗用途,其中R
文档编号A61P43/00GK1202895SQ9619850
公开日1998年12月23日 申请日期1996年11月22日 优先权日1995年11月22日
发明者A·D·巴克斯特, J·G·蒙塔纳 申请人:达尔文发现有限公司