专利名称：用cm101/gbs毒素治疗慢性炎症性疾病的制作方法
技术领域：
本发明涉及慢性炎症性疾病包括类风湿性关节炎和牛皮癣的治疗。背景慢性炎症性疾病如类风湿性关节炎(RA)和牛皮癣是影响成千上万人的使人衰弱的疾病。
RA是影响大约1-2％世界人口的系统性、慢性、炎症性疾病。RA的表现通常在关节部位最为严重。最常受累及的关节是手的近心指间关节和掌指关节及足的跖趾关节。肩、肘、膝、踝和腕关节也常是RA侵及的目标。被RA侵及的关节(“活动性”关节)具有触痛特征。因此，RA患者经常有疼痛和活动受限的体验。尽管患病个体之间RA严重度和进展程度颇不相同，但RA患者作为一个群体其死亡率是不患病对照群体的两倍。寿命减少可能部分由于目前RA治疗的副作用所致。
在RA起始阶段，受累关节的滑膜变得增大和红肿。滑膜肿胀伴有血管形成和新血管化。这样，反过来，加速血浆细胞、淋巴细胞和巨噬细胞浸润该区域。由于炎症细胞在滑膜内聚集，滑膜就变得水肿和增生。中性粒细胞渗入滑膜液和聚集在滑膜表面。纤维蛋白沉积也发生在该关节腔内。随着中性粒细胞、单核细胞和偶尔红细胞的聚集使得滑膜液体积增加和变浊。
慢性炎症引起滑膜增厚和伸出关节表面，形成凸向关节腔的绒毛。这种迷乱和高度血管化的结构称为血管翳。血管翳侵及和侵蚀下面的软骨，最活跃的软骨破坏出现在血管翳和软骨之间的界面。软骨破坏是由血管翳炎症细胞分泌的胶原酶和金属蛋白酶所致。侵蚀逐渐延及到软骨下骨、关节囊和韧带。炎症细胞和滑膜细胞释放的破骨分子容许滑膜凸入骨中并形成关节旁侵蚀、软骨下囊肿和骨质疏松。
软骨被破坏后，血管翳充填整个关节腔，铺设桥接相对骨的纤维带。随着此纤维性关节强硬的钙化，导致融合相对骨的骨性关节强硬形成并妨碍关节功能。
RA是自身免疫性疾病，患者有抗核抗体和针对自体固有蛋白如免疫球蛋白G(IgG)、胶原和细胞支架丝状蛋白的抗体。类风湿因子(RF)是在血清和滑膜液中发现的结合于IgG Fc片段的自体抗体。RF已经参与了RA的发病机理。当RF结合IgG时，补体活化的免疫复合物形成。活化的补体引起将中性粒细胞和巨噬细胞吸引到免疫复合物的血管活性和趋化性物质释放。由于这些细胞消化和破坏免疫复合物，它们释放引起炎症和蛋白降解的分子并吸引其它参与RA发病机制的细胞。由于RF是在关节合成的并且IgG族的RF是自缔合性的，所以免疫复合物频繁地局限于关节。不仅如此，在某些患者中免疫复合物也循环流动并认为引起RA的关节外表现如类风湿结节、反应性淀粉样变性和急性脉管炎。
RA具有自身免疫起源的证据通过如下发现而得到支持将鸟类II型胶原给大鼠或小鼠注射引起它们产生识别啮齿类动物内源性胶原的抗体。所致自身免疫反应，称为“胶原关节炎”，模拟RA的生理症状如关节炎症(Trentham等，对II型胶原的自身免疫，实验医学杂志，(J.of Experimental Medicine)，146857(1977)；Courtenay等，自然(Nature)，283666)。胶原关节炎是研究RA的一个很好地已建立的模型系统(Staines & Wooley，Collagen arthritis-whatcan it teach us ，英国风湿病杂志(British Journal ofRheumatology)，1994，33798(1994))。
治疗RA的最初方法是通过给予抑制免疫系统或减轻炎症的药物。炎症抑制剂的两大主要类型是皮质类固醇类和非类固醇类抗炎药(NSAID)。
皮质类固醇类不优选作为RA药物治疗，这是因为，尽管它们可以达到显著的短期内改善RA的效果，但由于严重的副作用和减弱的药物疗效而不适于长期治疗。短期皮质类固醇治疗也远非理想，因为停止治疗后关节炎症状迅速再现，常常伴有加重。尽管皮质类固醇类如强的松可抑制RA的临床症状，该类药物并不能预防RA介导的关节破坏。还有，典型的皮质类固醇类副作用包括消化性溃疡、高血压、糖尿病和青光眼。
NSAID如阿司匹林、布络芬和消炎痛是RA常用处方药。尽管这些药物通过抑制前列腺素合成可以减轻活动性关节肿胀，但它们的低关节腔穿透性迫使给予高剂量，而此高剂量有引起胃肠道刺激、溃疡和出血的倾向。NSAID影响与炎症过程不相关的前列腺素调节过程。NSAID也是强的肾脏毒素，因而也不足以治疗RA。
患严重活动性RA的病人可用免疫抑制剂如环磷酰胺、氨甲蝶呤和硫唑嘌呤治疗。在减轻炎症的同时，这些药物影响患者的整个免疫系统并具有严重的副作用包括肝脏疾病、骨髓抑制和增加恶性肿瘤的危险。
其它RA药物治疗包括青霉胺、氯喹、羟氯喹和金盐。所有这些均具有潜在副作用。D-青霉胺可引起骨髓抑制、蛋白尿和肾病。已有青霉胺治疗导致死亡的报道。用羟氯喹或氯喹治疗的患者必须监测不可逆视网膜损害。金可诱导皮炎、肾衰竭或肝炎等形式的毒性反应，并且其治疗关节炎的效果可疑。
牛皮癣患者在美国约占人口的1-3％而在北欧所占百分比则更高。牛皮癣是慢性炎症性皮肤疾病，患者的皮肤展现出复发性红斑斑块。皮肤上呈现白或银色鳞屑损害，尤其是头皮、肘、膝、背和臀部区域。伴有的烧灼和痒感可引起不适。在严重型病例，也可有严重关节炎或发生表皮剥脱。
牛皮癣皮损显示表皮增生、炎症细胞浸润，和异常的真皮毛细血管网。据信是由表皮细胞过度增生、新血管形成、当然还有炎症细胞浸润此区域所致。血管形成据信是维持炎症和中性粒细胞与淋巴细胞直接浸入牛皮癣皮损所必要的。另外，牛皮癣患者有针对层角质层的自体抗体。这些自体抗体参与疾病的发病机理。
目前牛皮癣的治疗包括润滑膏或油、角质层分离剂，和局部用皮质类固醇。对于该疾病的严重型，可给予氨甲喋呤，但它的高度潜在毒性需要严格控制治疗状况，包括仔细监测血液学、肾和肝功能。牛皮癣性关节炎的治疗类似于RA的治疗，但有些例外。例如，抗疟药加剧牛皮癣。
RA和牛皮癣是以失去调节的血管形成为特征的疾病。已经推断血管内皮生长因子(VEGF)通过刺激毗邻微血管的内皮细胞基膜增生和启动导致新血管形成的过程而引导这种失调节的血管形成。证据显示供致病炎症反应的血管的内皮细胞过度表达VEGF受体。(Dvorak，Int.Arch.Allergy.Immunol.，5-6月，1995)。
对于诸如RA和牛皮癣的慢性炎症性疾病所需要的是治疗方法。需要抑制这些疾病的症状，特别是减轻疼痛、炎症、关节肿胀和疾病相关损害的化合物。进一步，需要治疗方法，和尤其是一种易于给药和无毒的化合物。
发明概述本发明一方面是治疗患慢性炎症性疾病如RA和牛皮癣患者的方法，包括施予患者CM101，一种通常无毒的细菌多糖，以减小新血管形成的可能性。
用CM101治疗的RA病人体验到疼痛、关节肿胀和急性炎症反应减轻，也体验到血管翳形成的抑制。CM101可在RA发病前，即检测出RA第一个症状时给药，和/或在RA进展后期给药。
用CM101治疗的牛皮癣患者也感受到疾病症状的减轻。除了改善伴发的牛皮癣关节炎之外，牛皮癣皮损的大小和出现减少以及相关的不适减轻。为治疗RA，可以在疾病各个时期施予CM101。
本发明另一方面是一种试剂盒和制备试剂盒的方法，所述试剂盒有含BGS毒素优选地是CM101的药物组合物，同时有如何施予此毒素治疗慢性炎症性疾病的指导。
将CM101施予患慢性炎症性疾病的病人具有很大的实用性，尤其是在抑制RA发展、减轻RA患者关节炎症、和减轻滑膜组织新血管形成方面。再者，本发明方法在抑制牛皮癣和牛皮癣关节炎发展，和特别是在减少促进引起损害的炎症反应的异常血管形成方面具有很大实用性。其它以血管形成为特征的慢性炎症性疾病也可得到有益治疗。
附图简述
图1胶原关节炎患病小鼠腕关节直径对时间的制图。小鼠接受20μg/kg CM101、60μg/kgCM101，或生理盐水。CM101治疗自第4周开始持续到第9周。开始试验前(PRE)和于2、3、4、5、7、9及11周进行测量。
图2胶原关节炎患病小鼠足关节直径对时间的制图。小鼠接受20μg/kg CM101、60μg/kgCM101，或生理盐水。CM101治疗自第4周开始持续到第9周。开始试验前(PRE)和于2、3、4、5、7、9及11周进行测量。
图3胶原关节炎患病小鼠肘关节直径对时间的制图。小鼠接受20μg/kg CM101、60μg/kgCM101，或生理盐水。CM101治疗自第4周开始持续到第9周。开始试验前(PRE)和于2、3、4、5、7、9及11周进行测量。
图4胶原关节炎患病小鼠膝关节直径对时间的制图。小鼠接受20μg/kg CM101、60μg/kgCM101，或生理盐水。CM101治疗自第4周开始持续到第9周。开始试验前(PRE)和于2、3、4、5、7、9及11周进行测量。
图5表示正常小鼠(A)、胶原关节炎患病小鼠(B)和用60μg/kgCM101治疗的胶原关节炎患病小鼠(C)膝关节横断面。
发明详述CM101，一种GBS毒素，是从B族β-溶血性链球菌(GBS)细菌中分离的多糖分子。尤其是，致病性B族β-溶血性链球菌产生一种多糖外毒素。该外毒素是推定的致GBS肺炎或“早发性疾病”状况的物质，所述状况以败血症、粒细胞减少，和呼吸窘迫为特征，即肺动脉高血压和蛋白质性肺水肿(Hellerqvist，C.G.等，对B族β-溶血性链球菌的研究I.细胞外毒素的分离和部分鉴定，儿科研究，(Pediatr.Res.)，12892-898(1981))。据信只有新生儿对早发性疾病易感，因为CM101的受体主要存在于新生儿肺部但大约在出生后4到7天受体消失。CM101对年长一些的人类未见毒性作用。
已经证明分离和提纯的CM101对模拟GBS婴儿肺炎的绵羊试验模型具有毒性作用(Hellerqvist，C.G.等，对B族β-溶血性链球菌的研究I.细胞外毒素的分离和部分鉴定，儿科研究，12892-898(1981))。在该新生儿早发性疾病的绵羊模型中，GBS毒素引起肺动脉高血压、肺血管通透性增加、粒细胞减少症，和粒细胞的肺分离。
CM101分子量大约300,000道尔顿，包含N-乙酰-半乳糖胺、N-乙酰葡糖胺、葡萄糖、半乳糖，和甘露糖残基。羧酸残基也被认为是分子的组成部分。重复性活性表位极有可能通过交联靶内皮上的受体而在对CM101的病理生理学反应中起重要作用(Hellerqvist，C.G.等，癌症病人中CM101的I期临床试验的早期结果，癌症研究年会美国协会的报告，(Proceedings of the American Association of CancerResearch Annual Meeting)，36224(1995))。
GBS毒素的提纯方法在美国专利5,010,062中提供。然而，优选地，按照在这里引入参照的国际申请PCT/US97/17535讲授的方法提纯CM101。
本发明方法使用的GBS起始物料的来源可通过培养新近感染或能够感染新生儿的B族β-溶血性链球菌的菌株而获得。这种菌株的分离物可从被感染婴儿的血液或脑溶液中获得。
本发明使用的GBS毒素限定为任何自天然或被溶解的GBS菌分离的成分或组分，或从溶解和/或高压灭菌的GBS细菌培养基上清液中提取，并且所述毒素经诱导绵羊呼吸窘迫试验证实具有生物学活性(Hellerqvist，C.G.等，对B族β-溶血性链球菌的研究I.细胞外毒素的分离和部分鉴定，儿科研究，12892-898(1981))或者通过肿瘤组织标本过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)实验证实激活补体和与新脉管系统结合。(Hellerqvist，C.G.等，GBS毒素的抗肿瘤效果一种来自B族链球菌的多糖外毒素，J.Canc Res.Clin.Onco1.，12063-70(1993)；和Hellerqvist，C.G.等，癌症病人中CM101的I期临床试验的早期结果，癌症研究年会美国协会的报告，36224(1995))。GBS毒素也指与具有前述活性任何GBS-衍生分子同样结构或功能的任何天然或合成多糖。
基本上纯的GBS毒素指GBS毒素大于40％纯度的制剂(如，以至少40％重量浓度存在)，优选地至少大约60％纯，更优选地至少90％纯，及最优选地至少95％纯。这里描述的剂量指用95％纯GBS毒素。低纯度GBS毒素的剂量应当相应地换算。GBS毒素纯度在PCT/US97/17535中作了更详细的讨论。
这里使用的类风湿性关节炎或RA包括任何符合美国风湿协会为类风湿性关节炎制定的诊断标准的任何疾病。这些标准列于表1，节选自风湿病学(Rheumatology)，Klippel和Dieppe编著，Mosby出版(1994)。RA也包括RA的变型如幼年RA、斯提耳氏病、或费耳提氏综合征。<
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这里使用的RA治疗包括预防、改善、降低严重程度、抑制进展、缓解或消除RA或它们的症状。可治疗人群包括已被诊断的RA初期患者。RA的诊断标准列于表1。也可治疗有遗传或环境性发展RA倾向的个体，特别是当它们具有升高的RF水平时。RF水平可通过凝集试验如胶乳凝集试验或皂土管稀释试验测定。如果哺乳动物患RA或有发展RA的倾向，该哺乳动物就需要CM101治疗。
RA症状的减轻可以通过观察关节肿胀或疼痛的程度，或通过关节形态学的放射照相、超声或磁共振成像来测定。GBS毒素在减轻肿胀方面特别有用。还有，发热是RA的一个症状，因而CM101的有效性可通过关节热图片来测定。
CM101监测可通过测定CD4+细胞水平的降低来完成。这可使用流式细胞计实现。监测细胞因子水平的升高，如肿瘤坏死因子(TNF)、IL-8、IL-6、IL-10和巨噬细胞炎症蛋白α(MIPα)，也是可能的。此外，磁共振成像(MRI)适于观察血管化和提供血管密度的相对测量。
为治疗慢性炎症性疾病，CM101可经包含常规无毒药学适用载体、辅剂或赋形剂的剂量单位制剂的非肠道、局部、大丸剂肠内注射、直接注入受累关节，或通过吸入喷雾而给予。这里使用的术语“非肠道”不仅包括静脉内、动脉内、肌内、胸骨内注射或滴注技术，还包括皮下、真皮内或腹膜内注射。非肠道给药是优选的，静脉内给药最优选。单次静脉内给药可维持长达120分钟，5～60分钟是优选的持续时间范围，5～30分钟是最优选的持续时间范围。
治疗慢性炎症性疾病，CM101至少按约1μg/kg病人体重的剂量给药，优选约1～约100μg/kg，更优选约1～50μg/kg，最优选约1～约25μg/kg。然而，应当理解，对任何特定患者的特定剂量水平将取决于各种因素包括年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、和炎症的严重程度或患者正在接受治疗的疾病以及CM101给药时间和给药途径。
CM101可每日、半周、每周、半月或按每月间歇给药。优选地，间隔范围为1周～1个月。最优选，间隔范围为7天～2周。在决定CM101治疗适宜间隔时可考虑患者疾病的严重程度。适宜的间隔也可通过分析患者血中成熟粒细胞水平来决定。成熟粒细胞水平与同步CM101治疗相关，因为CM101可引起粒细胞活化，如果给药太频繁的话则继后耗竭。因此，如果患者成熟粒细胞的供应已经重新补足的话，进一步CM101治疗会更为有效。监测成熟粒细胞水平的一个方法是使用CD69抗原的流式细胞计检测成熟粒细胞。
CM101治疗可在数月、一年、数年或患者有生期间持续治疗。或者，CM101可一次给药，这只是以该疾病症状不再重现为基础。优选地，患者接受至少约5、10或15次治疗。
CM101介导的关节肿胀减轻可通过外测量关节大小、触诊时触痛程度、关节活动度，或关节形态放射学或其它影像学监测。根据目测法可证实CM101介导的牛皮癣皮损大小、数量和炎症程度减轻。
应当给予足够水平的CM101以减轻患者机体的长期疼痛。本领域技术人员会认识到按递增剂量给予CM101直至患者体验到疼痛减轻和再增加CM101并不能达到更大的疼痛改善时。可这样建立静脉给药，根据CM101治疗后大约8小时患者感受的疼痛度来控制进一步的CM101剂量。
本发明另一方面是一种制成品如试剂盒，和制成品的生产方法。制成品包括一种含GBS毒素尤其是CM101和药学适用载体的药物组合物。药物组合物可被置于适宜容器中，这是本领域公知的。也包括按照本发明方法对患者治疗的指导。
不受特定理论限制，据信GBS毒素，特别是CM101，作为一个预防新血管形成的抗血管形成剂起作用。CM101通过与去分化的内皮细胞结合抑制血管形成，所述内皮细胞在缺氧条件刺激下形成新血管。CM101促进这种结合并被内皮细胞的C3调理，这些细胞变成炎症细胞的目标，最终导致内皮细胞的破坏。
血管形成在RA发病机理中起着关键作用，因为滑膜缺氧诱导引起内皮细胞去分化和新血管形成的VEGF释放。因为CM101治疗阻碍这些血管的形成，那么滑膜组织增生和淋巴细胞浸润至少被部分抑制。结果，新血管翳形成减少，和已存在的血管翳缩小。这些机制被认为是CM101介导的减轻所描述的关节肿胀、急性炎症、纤维沉积、和血管翳形成的基础。
血管形成在牛皮癣发病机理中也起着关键作用，因为它促进中性粒细胞和淋巴细胞向牛皮癣病变处浸润。因为CM101治疗阻碍这些血管的形成，那么牛皮癣病变的形成、维持和扩大就被削弱。
RA和牛皮癣均都是以炎症为特征的疾病。因为炎症分别对患RA和牛皮癣的人体有害，有证据显示CM101通过刺激炎症而奏效，可能预料CM101治疗将使疾病加剧。令人惊奇地，CM101至少部分减轻炎症性疾病如RA和牛皮癣的症状。
已经报道AGM-1470是减轻胶原关节炎大鼠关节肿胀的抗血管形成化合物(Peacock等，对血管形成的抑制可抑制胶原关节炎，实验医学杂志，1751135(1992))。AGM-1470是合成的烟曲霉素类似物，烟曲霉素是由烟曲霉fresenius提取的天然生成的真菌抗生素(Ingber等，烟曲霉素的合成类似物抑制血管生成和肿瘤生长，自然，348555(1990))。由于它不是多糖，因此AGM-1470在结构上与CM101不相关。AGM-1470的作用机制也与CM101有别据报道AGM-1470的抗血管形成活性不需要宿主免疫系统的诱导(Brem & Folkman，试验性抗血管生成治疗的分析，儿科手术杂志，(J.Ped.Surg.)，28445(1993))。
AGM-1470和CM101的另一区别是AGM-1470对生理性和病理性血管形成均抑制而CM101只是抑制病理性血管形成。正如它们的名字所提示的那样，病理性血管形成与疾病有关，而生理性血管形成在正常、健康状况下发生。伤口愈合、女性月经周期和妊娠是生理性血管形成的例子(Brem & Folkman，试验性抗血管生成治疗的分析，儿科手术杂志，28445(1993))。病理性血管形成出现在糖尿病性视网膜病、血管瘤、癌、牛皮癣、RA和骨关节炎(Folkman等，血管生成因子，科学(Science)，235442(1987)；Kimball等，会议报告血管翳形成中的血管生成，试剂和行动，(Agents & Actions)，34329(1991))。因此，除了报道的抑制病理条件下如肿瘤和RA的血管形成作用之外，AGM-1470抑制伤口愈合(Brem等，血管生成抑制剂AGM-1470对伤口愈合的时间依赖性抑制，(J.Cell Biol.)，115403a(1991))和女性生育(D’Amato，血管生成IBC研讨会摘要(Abstract from IBCConference on Angiogenesis))，很显然后者是不希望的作用。与此相比，CM101并不抑制胎盘或子宫内膜生长。CM101不仅不抑制伤口愈合，反而事实上已证明促进伤口愈合，作为共同未决的申请目前与本申请并行地提交。因而，CM101可治疗RA或牛皮癣而不会引起由AGM-1470治疗可能导致的女性不育或延缓伤口愈合能力等不希望的副作用。
下面的实施例以说明本发明的目的给出但不应当视为对本发明范围或精神的限制。实施例1CM101治疗减轻关节肿胀。
使用一种RA小鼠模型分析CM101对RA的作用(Courtenay等，对外源II型胶源的免疫在小鼠中诱发关节炎，自然283666(1980))。DBA/1品系小鼠背部4-6个位点接受皮内注射鸡II型胶原。注射的胶原如下制备100μg胶原溶于100ml 0.1M醋酸并在等体积完全弗氏佐剂(0.5 mg/ml M.butyricum)中乳化。3周后，试验0周时，给所有动物单次腹腔内注射100μg胶原予以免疫。首次注射胶原2周后，所有动物抗鸡胶原抗体检测阳性。这用作胶原关节炎初发的诊断。
抗体阳性动物分成两个试验组和一个阳性对照组。自4周到9周，所有动物接受静脉注射100μl每周3次。第一试验组小鼠(n＝10)，每次注射溶于生理盐水的CM101 20μg/kg。第二试验组小鼠(n＝10)，每次注射60μg/kg生理盐水溶解的CM101。阳性对照组(n＝10)，预先接受胶原注射且抗胶原抗体检测阳性，接受生理盐水注射以代替CM101。
用特殊的弹簧式测径规(Starrett #1015 MA2)测量记录关节炎症。实验开始之前(PRE)和第2、3、4、5、7、9和11周进行测量。第9周最后治疗后2天，来自不同组的18只动物被处死并将它们的前、后肢用甲醛固定并作切片供组织学分析。剩余的动物不被处死直至11周时对其关节进行测量。
图1、2、3和4分别显示CM101治疗小鼠和对照小鼠的腕、足、肘和膝关节的测量直径。
开始胶原注射之前(PRE)，所有小鼠具有小的关节直径。CM101治疗和对照小鼠的关节测量在第二次胶原注射后连续数周内非常相似关节直径在第2和3周围绕治疗前水平波动，然后在第3和4周之间急剧增加。第4周时，动物的关节较试验开始时增大35-70％。
CM101治疗于第4周开始并按每周3次连续注射到第9周。在这些周里，接受CM101动物的关节测量显著小于对照小鼠的关节测量，在减小关节大小方面，CM101 60μg/kg剂量组较CM101 20μg/kg剂量组更为有效。
即使在9周后不再接受CM101治疗，CM101治疗动物在9到11周期间显示出关节尺寸的进一步减小。到第11周，用20μg/kg CM101或60μg/kg CM101治疗小鼠的关节测量十分相似--它们的关节显著小于对照小鼠并且几乎恢复到试验前的大小。
由此，CM101减小预先存在的关节肿胀。虽然短时期内60μg/kg剂量较20μg/kg剂量更为有效地减轻肿胀，但这两种剂量的长期疗效相似。CM101的减轻关节肿胀的治疗作用也得到用60μg/kg或240μg/kg CM101自第2周到第9周治疗胶原关节炎患病小鼠的类似试验结果的支持(结果未予显示)。实施例2CM101减轻急性炎症和血管翳形成。
下面按上述方案进行，但CM101给药剂量改为生理盐水溶解的0μg/kg、60μg/kg和240μg/kg，和自第2周到第9周每周给药3次。在第9周最后治疗后2天制备组织学切片。
如图5所示，CM101减少RA细胞表现。
正常条件下(图5A)，关节表面呈曲线形和衬一薄层滑膜膜。滑膜之下即是厚的、平坦的透明软骨层(这些标本中被染黑)。透明软骨下是软骨下骨。
胶原关节炎小鼠的关节(图5B)显示出关节表面扁平，关节腔炎症活动、滑膜肥大和增生、血管翳形成，和轻度关节强硬。血管翳引起下面的透明软骨和骨破坏很明显。
与不治疗参照物不同，CM101治疗小鼠关节(图5C)缺乏活动性炎症和血管翳形成。透明软骨层厚且平滑。唯一关节炎形态学征象是轻度关节变平，关节软骨和软骨下骨有一些损耗，以及曾经是血管翳的区域纤维化。
因此，CM101治疗减轻了关节周炎症、血管翳形成、软骨和骨侵蚀和关节强硬。
说明书中提到的所有出版物和专利申请在此引入参考，引用的程度就象每一个单独出版或专利申请被详细说明和独特地指出的那样。
现在全部描述了本发明，很明显对一个本领域普通技术人员来说可进行不背离所附权利要求精神和范围的许多变化和更改。
权利要求
1.一种治疗慢性炎症性疾病患者的方法，所述方法包括给予患者足以减少疾病部位的新血管形成可能性量的一种B族β-溶血性链球菌(GBS)毒素。
2.权利要求1所述方法，其中慢性炎症性疾病是血管形成依赖性的。
3.权利要求1所述方法，其中慢性炎症性疾病选自类风湿性关节炎和牛皮癣。
4.权利要求1所述方法，其中GBS毒素是CM101。
5.权利要求4所述方法，其中CM101是基本上纯的。
6.权利要求5所述方法，其中CM101纯度至少约90％。
7.权利要求1所述方法，其中GBS毒素是经非肠道给予。
8.权利要求7所述方法，其中GBS毒素是经静脉给予。
9.权利要求1所述方法，其中患者至少4天大。
10.权利要求9所述方法，其中患者至少7天大。
11.权利要求1所述方法，其中治疗通过按1周～1个月的间隔重复给予GBS毒素而维持。
12.权利要求11所述方法，其中间隔范围为7天～2周。
13.权利要求1所述方法，其中GBS毒素按1μg/kg～100μg/kg体重水平给予。
14.权利要求13所述方法，其中GBS毒素按1μg/kg～25μg/kg体重水平给予。
15.权利要求1所述方法，其中GBS毒素的给予量足以使在GBS毒素给予后大约8小时减轻患者机体疼痛。
16.权利要求1所述方法，其中GBS毒素的给予量足以减轻机体的关节肿胀。
17.权利要求1所述方法，其中GBS毒素的给予量足以抑制患者滑膜组织的血管形成。
18.权利要求3所述方法，其中疾病是牛皮癣，GBS毒素的给予量足以减少牛皮癣损害。
19.一种治疗血管形成依赖性慢性炎症性疾病的方法，所述方法包括给予减小疾病部位新血管形成的可能性、但不抑制伤口愈合的化合物。
20.权利要求19所述方法，其中化合物是一种B族β-溶血性链球菌(GBS)毒素。
21.权利要求20所述方法，其中GBS毒素是CM101。
22.权利要求21所述方法，其中CM101是基本上纯的。
23.权利要求22所述方法，其中CM101具有至少约90％的纯度。
24.一种治疗患者机体类风湿性关节炎的方法，所述方法包括给予患者足以减轻类风湿性关节炎症状量的B族β-溶血性链球菌(GBS)毒素。
25.权利要求24所述方法，其中GBS毒素是CM101。
26.权利要求25所述方法，其中CM101具有至少大约90％的纯度。
27.治疗患者机体牛皮癣的方法，所述方法包括给予患者足以减轻牛皮癣症状量的B族β-溶血性链球菌(GBS)毒素。
28.权利要求27所述方法，其中GBS毒素是CM101。
29.权利要求28所述方法，其中CM101具有至少大约90％的纯度。
30.一种制成品包括(a)一种药物组合物，其含有(i)B族β-溶血性链球菌(GBS)毒素，和(ii)一种药学适用载体，和(b)将药物组合物给予患者以治疗慢性炎症性疾病的指导。
31.权利要求30所述制成品，其中GBS毒素是CM101。
32.权利要求31所述制成品，其中CM101具有至少大约90％的纯度。
33.权利要求32所述制成品，其中所述指导描述药物组合物以足以减少疾病部位新血管形成可能性的量给予。
34.权利要求30所述制成品，其中所述指导描述给予药物组合物以治疗类风湿性关节炎。
35.权利要求30所述制成品，其中所述指导描述给予药物组合物以治疗牛皮癣。
36.一种制备制成品的方法，所述方法包括联合(a)一种包含一种药物组合物的容器，所述组合物含有(i)一种B族β-溶血性链球菌(GBS)毒素，和(ii)一种药学适用载体，和(b)将药物组合物给予患者以治疗患慢性炎症性疾病患者的标记指导。
37.权利要求36所述方法，其中GBS毒素是CM101。
38.权利要求37所述方法，其中CM101具有至少大约90％的纯度。
39.权利要求36所述方法，其中所述指导描述药物组合物按足以减少疾病部位新血管形成可能性的量给予。
40.权利要求36所述方法，其中所述指导描述给予药物组合物以治疗类风湿性关节炎。
41.权利要求36所述方法，其中所述指导描述给予药物组合物以治疗牛皮癣。
全文摘要
一种治疗慢性炎症性疾病如类风湿性关节炎或牛皮癣的方法包括使用来自B族β－溶血性链球菌的毒素治疗患者。纯化的GBS毒素,或CM101,可以按重复剂量静脉注射施予患者。
文档编号A61P29/00GK1251997SQ98802905
公开日2000年5月3日 申请日期1998年1月29日 优先权日1997年1月29日
发明者C·G·赫勒奎斯特, B·D·瓦米尔 申请人:C·G·赫勒奎斯特