专利名称：：一种老年用保健口服液及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种以天然植物提取物为主要有效成分的老年用保健口服液及其制备方法，可用于预防和治疗老年常见多发病，对高血压、心血管疾病、糖尿病、支气管炎、肺炎、胃溃疡和肝损害、肿瘤和多种病原微生物感染等老年常见病都有积极的预防及治疗作用。世界人口正在变老，老化人口的速度为总人口增长速度的2倍，80岁以上高龄老人增长的速度更快，为总人口增长速度的6倍。我国现在60岁以上老年人为1.1亿，到21世纪中叶，将达到4.1亿，发达国家如美国也不例外，以前预料不到的人口老化的事实已经出现。本世纪初，4％的美国人年逾65岁，现在已上升到13％；现在的预期寿命已逾76岁，到2050年可达83岁。WHO估计，今后20年中，发展中国家人口老龄化的形势将尤为严竣，到2020年，全球10余亿以上超过60岁的人口中，2/3生活在这些发展中国家。联合国规定1999年为世界老人年，其主题仍是“健康的老龄化”。伴随着人口老化，老年性疾病的发病率也将增长，我国也不能例外，它给个人、家庭及社会带来沉重的负担和痛苦，而现有保健品中，专门考虑到老年病理生理特点的有效抗老防病的保健品并不多见，不能满足社会需求。抗衰老药物的研究由于受到以下两个主要因素的制约，至今还不能有根据地认定哪一种药物确实对人有抗衰作用？。第一是衰老的机理问题。衰老究竟是怎样发生的，还没有一个公认的学说，从而使抗衰老药物的设计失去了前提和依据；第二是抗衰老指标问题。怎样才算有抗衰老作用？目前普遍认为是要能提高最高寿命；但是能提高动物最高寿命的药物，并不能直接推及人类。目前推出的一些“抗衰老药物”，多数是参考了现有的某个衰老的学说，以及随着增龄人体内一些物质(激素、酶和自由基等)的消长情况，而设计出来的。因而，很难确切地说哪一种药物有抗衰老作用。中国老年学学会副会长吕宝璋研究员将有关抗衰老药物概括地分为激素、抗氧化剂、核酸制剂三类，特介绍如下。激素类药目前在市场上以药品或保健食品面目出现的激素类抗衰老药物不少，例如褪黑激素、生长激素、去氢表雄酮(DHEA)、性腺制剂和肾上腺皮质激素等。褪黑激素国内有人根据其英文名称Melatonin，，音译为“××宁”“××托宁”等等。它是脑内松果体分泌的一种激素，它的主要作用是调节人体的昼夜节律，此外该激素还对体内其他内分泌腺有调节作用。近年来的研究发现，褪黑激素除维持正常的睡眠规律外，还具有①清除自由基的作用它能透过种种生理屏障，到达身体各个脏器，特别是脑，并能深入到细胞内，直达细胞核，它清除自由基的能力非其他抗氧化剂所能比拟。②增强免疫功能对产生T细胞的胸腺有促进作用，从而使体内T细胞增多。由于T细胞与体内一些生物活性因子产生有关，是细胞免疫的主要角色，因而它的这一作用，颇引人重视。临床和动物实验证明，癌症患者血中该激素水平降低，服用该激素后，有加强抗癌药效的作用，并能延长生命。③抗衰老作用将年轻动物的松果体移植到衰老动物体内，可使之年轻；反之，将衰老动物的松果体移植给年轻动物，能加速其衰老乃至死亡。但是，移植松果体所显示的效果，不等于是褪黑激素的作用，因为除该激素外，松果体还能合成和分泌十几种其他生物活性物质。而且由于褪黑激素在正常情况下除调节昼夜节律外，还对其他内分泌腺有调节作用，它的分泌也受松果体细胞上肾上腺素能受体的调节；因此，它对人体的长远影响还有待观察，至少在目前还不能作为一种抗衰老药物长期服用。因为松果体作为一个内分泌器官，它对褪黑激素的分泌取决外周对该激素的需求，需求多就多分泌、多供应，需求少就少分泌。如果体内本来已有足够的褪黑激素，又盲目地引进外来的“产品”，势必使该激素过量，这种情况会及时地影响到松果体，松果体生产该激素的功能就会逐渐消失，松果体本身也就会因此而萎缩，这就是用进废退。其结果是本来是为了抗衰老，却加速了松果体的衰退，对机体带来不良的影响。更何况有报道表明，该激素有肿瘤刺激作用，这就很值得提高警惕了。去氢表雄酮(DHEA)它是睾酮的代谢物之一，曾是轰动一时的“抗衰老药”。1988年美国的一项研究表明，DHEA有减少中年男子患心血管病的作用；后又有人经过临床观察，发现它对大多数病人有改善睡眠、情绪和承受生活压力能力的作用；在1995年6月美国纽约科学院举办的“DHEA与衰老”研讨会上，大多数与会者认为DHEA有抗癌和延年益寿的作用。此结论经过各方面的炒作，曾经形成一股抢购DHEA产品的浪潮。但是，DHEA的研究和发现者博利本人，对此却持十分谨慎的态度，他认为DHEA可以提高生活质量，缓解因衰老而产生的疲劳和虚弱等，但并不会延长人的寿命。他特别强调，人的衰老是由多种因素引起的，仅靠一种药物不可能达到抗衰老的目的。更何况，最近有人报告，如不受重大疾病影响，人体在老化过程中DHEA合成和代谢的调节并没有变化。德国的科学家通过对77名59～81岁男性的对比研究发现，DHEA对人体的状态(如心血管系统)并无改善。显然，对DHEA的抗衰老作用尚无定论。第二类为抗氧化剂这类药物开发的依据是目前受到广泛重视的衰老发生的自由基学说，产品已面市的主要有维生素E、C和β-胡萝卜素。维生素E维生素E之所以被认为有抗衰老作用，主要是源于它对脂褐素生成的影响。脂褐素是细胞中脂类的多不饱和脂肪酸，在自由基的作用下，生成的脂质过氧化物。据研究，在出生一周的小鼠脊神经节细胞中，脂褐素的量为0，8个月时增至1100，到18个月可达到近2500，即随着增龄而增多；在小鼠的心肌细胞中，若以2.5月龄时的脂褐素量为基准，则到18个月时增加了2.5倍，到28个月时增加了7倍，也是随龄增加；而当在食物中加入占食物重量0.25％的维生素E时，则各个年龄组小鼠心肌细胞中的脂褐素却有所减少，如2.5月龄者减少了近40％。以含维生素E的食物喂养动物，证明可增加平均寿命，但不能提高最高寿命。因此，目前还没有充分证据说明维生素E有抗衰老作用。但是，有的研究证实，维生素E对于提高老年人免疫系统的功能大有益处。例如《美国医学会杂志》报告，将88名65岁以上老年人分成4组，分别每天服用维生素E60毫克、200毫克、800毫克及安慰剂，4个月后，发现每天服用200毫克维生素E的老年人，T细胞的功能比服安慰剂组的提高65％，免疫系统对乙肝疫苗的反应能力提高了6倍；每天服用800毫克者，与服用200毫克的效果相同；而服用60毫克的效果不佳。因而认为，仅靠每天从食物中获得的维生素E，不足以提高免疫能力，应在医生指导下加大用量。有人建议，将它与维生素C同时服用，可以增强效果。维生素C维生素C也具有较强的抗氧化作用。但是，它不太容易进入细胞内，且大剂量服用会导致细胞内DNA的损伤。最近，日本的一个研究小组，将磷酸基引入到维生素C分子中，并改变其部分结构，形成“维生素C前体”，后者容易进入细胞内，并释放出维生素C；用人体细胞进行的实验表明，它可以使端粒缩短的速度降低27％，并增强端粒酶的活性；这一处理可使细胞的寿命延长50％，这也同衰老发生的端粒学说相符。看来，这可能是一种有发展前途的抗衰老药物。β-胡萝卜素β-胡萝卜素的抗衰老作用，可能是因为其分子结构中含有较多的双键，容易被氧化，被认为可能有抗氧化作用；也确实有的研究证明，服用胡萝卜素的动物体内SOD活性高，细胞中脂褐素含量低等。现在已知，β-胡萝卜素对预防心血管疾病、癌症和老年白内障等疾病，以及提高免疫功能，都有一定作用；从这个意义上说，也可能有抗衰老作用。最后是核酸制剂，人体内的核酸有两大类，即脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)，这是20多年以来分子生物学的生长点。50年代初首先阐明核酸结构和遗传密码的沃森和克里克，因此而获得诺贝尔奖。可以说，现代生物学、医学的很多重大进展，诸如艾滋病毒的发现、病毒性肝炎的疫苗以及基因治疗等，无不与这一成就有关。给动物注射这两种核酸的混合制剂，能明显地提高其最高寿命。我国学者进行的实验表明，核酸制剂能明显增加老年人的抗氧化能力，降低过氧化脂质含量。国外有人观察了数千人注射核酸制剂后的效果，发现它能使人的皮肤显得年轻，增强体力，对冠心病、糖尿病和高脂血症等的症状有所改善。日本学者松永政司总结了对核酸防病抗衰的研究成果，写了《生命之源——核酸的奇迹》一书，对核酸的作用推崇备加。看来，核酸制剂的抗衰老作用是很值得重视的，这些作用与衰老发生的基因程控学说和端粒学说有什么关系，也值得进一步探讨。总之，以上的介绍说明，迄今还没有哪一种药物具有全面的抗衰老效果，人们对此也不应寄以过高的期望。而研究表明，有些食品中含有“类黄酮”(栎皮醇)和番茄红素，它们的抗氧化和抗癌作用优于维生素E和C，是一种极有前途的抗老防病类药物。从天然植物中寻找抗老防病的有效成分已是大势所趋，天然植物提取液已经成为我们预防和治疗老年常见病的一条有效途径。因此，本项发明从“类黄酮”具有保护老年生理机能、抑制脂加氧酶、抗氧化、清除人体内过氧化自由基，保护维生素C免被氧化破坏、增强人体免疫力和抑制变态反应、提高核酸代谢水平、抗促癌、抗致突、抗病毒、抗炎、抗多种病源微生物等方面出发，采用独特的标准和方法，经对大量植物长时间筛选，鉴定，从天然植物提取物中总结出一种老年用保健口服液配方，小量生产在国内外试用获满意效果，经与业内人士研讨后拟大规模生产，为保护本发明人的经济利益，特对该老年用保健口服液配方及其制备方法申请专利。本发明的目的在于提供一种从天然植物中提取的具有抑制脂加氧酶、抗氧化、清除人体内过氧化自由基，保护维生素C免被氧化破坏、抗衰老、增强人体免疫力和抑制变态反应、提高核酸代谢水平、抗促癌、抗致突、抗病毒、抗炎、抗多种病源微生物等生物活性的老年用保健口服液，用于保护老年生理机能、预防和治疗老年常见病，其基本配比如下(1)黄芩10公斤(2)地龙(蚯蚓)10公斤(3)淫羊藿10公斤(4)甘草10公斤(5)沙棘10公斤(6)蜂胶液30公斤(7)乙醇60升；(8)苯甲酸钠100-300g；(9)蒸馏水加至100升；其制备方法为先取(1)-(5)号原料洗净并粉碎后，先用水浸渍30分钟，在加5倍量水，煎煮1小时，共2次，合并煎液，过100目筛，滤液于70度已下减压浓缩成30升，放冷，在搅拌下，缓缓加入乙醇，使含醇量达60％(体积分数)，静置冷藏48小时，过滤，回收乙醇，浓缩至1∶1，药液冷藏24小时，过滤，滤液在搅拌下加浓氨水调整pH值至7.0～8.0，冷藏24小时，过滤，滤液加热搅拌去氨，药液保持在100～102度，2～2.5小时，至药液pH值为5.8，冷藏过夜，过滤备用。取上述药液，用100g/L碳酸钠溶液调整pH至5～7，加苯甲酸钠100克及蜂胶液30升，充分搅拌均匀，通过G3垂熔玻璃漏斗过滤，测定含量，再加水至100L，搅匀，灌装，塞胶塞，轧易拉盖，灭菌，经质量检查，贴签即得。功效讨论如前所述，现代医学研究表明，有些食品中含有“类黄酮”(栎皮醇)和番茄红素，它们的抗氧化和抗癌作用优于维生素E和C等其他药物。也更为经济、安全和有效。它们能直接捕获氧自由基和羟自由基，抑制脑MAO-B活性、减少自由基反应，同时增强机体免疫功能和提高核酸代谢水平，从而有利于提高人体抗衰老能力，是一条可行的抗老防病的途径。本口服液的特殊效果，是以“类黄酮”广泛且高效的抗过氧化、抗癌、抗生作用、抗炎和抗变态反应，增强和调整免疫功能、提高核酸代谢水平、促进组织再生为基础的。地龙又称蚯蚓等，以其去内脏和泥沙的干燥体入药，性咸寒，具清热、定惊、平喘、通络、活血之功效，有广泛的药理作用[1￣3]。我们在临床上发现地龙液能减少渗出，缩短炎症期，加速伤口的愈合，其良好的抗炎能力与巨噬细胞的活化状态有关。巨噬细胞是一种多功能细胞，具有趋化杀菌作用。甘草为豆科植物甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)、光果甘草(G.glabraL.)或胀果甘草(G.inflata)的干燥根和根茎。其主要有效成分为三萜和黄酮类化合物。有关甘草总黄酮及其单体的药理研究最新进展表明甘草黄酮对肿瘤、胃溃疡和肝损害、病原微生物以及对酶等方面的药理作用具有极高的临床价值。黄芩为常用中药，有清热泻火、解毒、止血、安胎等作用，其有效成分为黄酮类。目前从黄芩中提取并鉴定出结构的黄酮类成分已有10几种，其中含量较高的是黄芩苷及其苷元黄芩素，汉黄芩苷及其苷元汉黄芩素。药理上已经证实黄芩苷有抑菌、清热、降压、镇静、利尿、利胆、抗炎抗变态反应、解毒等作用；黄芩素有抑菌、利尿、抗炎抗变态反应、利胆等活性；汉黄芩素有抑菌、利尿、解痉作用。黄芩素还是是特异性12-脂加氧酶抑制剂，黄芩作为传统中药，其生理活性是多方面的。国内在细胞水平对黄芩的活性部分黄酮的生理活性及作用机制的研究还很少。除利用其清热解毒功能作用抗菌消炎药外，其扩张血管、抗氧化功能在作为心血管疾病治疗药物上具有极大的潜力；其抗病毒作用在治疗病毒相关疾病如肝炎、艾滋病方面的前景也是广阔的。蜂胶是蜜蜂从植物的芽胞、树皮或茎叶伤口上采集来的粘性分泌物树脂与部分蜂蜡、花粉和蜜蜂自身上颚腺分泌的多种分泌物等的固体状混合物。国内外研究证明，蜂胶含30蜂蜡、55松脂类、香脂类、10香精油类和5花粉，还含有38种黄酮类物质等活性物质。对多种细菌、真菌具有抗菌作用，对某些病毒和原虫的生长也有抑制或杀灭作用，同时能增加机体免疫力、促进组织再生。大量研究已经证明蜂胶具有很高的抗微生物作用。蜂胶至少能够抑制21种细菌(包括MRSA)、19种真菌(包括鹅口疮，癣和脚癣)和3种病毒的致病作用。蜂胶在抗癌，抗过氧化剂，皮肤和组织损伤康复治疗等方面已经显示出良好的治疗效果，由于具有高浓度的黄酮，在清除人体内过氧化自由基，保护维生素C免被氧化破坏、增强及调节人体免疫机能和提高核酸代谢水平等方面具有极高的医疗价值。临床上已将蜂胶用于支气管炎；流行性感冒和疱疹；癣和皮肤真菌感染；各种牙病疾患；皮肤溃疡，烧伤和脓肿；耳部炎症；胃溃疡、胃炎和结肠炎；髋关节炎和阴道炎的和肩周炎等多种疾患的治疗。淫羊藿是小蘖科多年生草本植物朝鲜淫羊藿的干燥地上部分。含淫羊藿甙及去甲淫羊藿甙等黄酮类物质。并含挥发油、固醇、生物碱等。具有雄性激素样作用，能促进精液分泌。有降压及增加冠状动脉流量和提高耐缺氧能力、扩张外周血管，增加肢端血流量，改善微循环，以及扩张脑血管，增加脑血流量、降血脂及降血糖、对机体免疫功能有促进及双向调节作用。有一定镇咳、祛痰、平喘、抑菌、抗炎、和明显镇静作用。沙棘(HippophaerhamnoidesL.SP.PL)为落叶灌木植物，属胡颓子科。我国云南、四川、弱等地荒山有分布。我国是世界上沙棘医用记载最早的国家，是我国古代藏医、蒙医用来治病的常用药物。1977年，我国卫生部首次将沙棘正式列入《中国药典》，并相继公布为药食两用品种。现代营养成份分析、化学成份分析、药效学与毒理学等一系列研究初步证实了沙棘富含多种维生素和多种微量元素、多种氨基酸和其它多种生物活性成份。沙棘果实酸甜，含有丰富的蛋白质，在其所含的20多种氨基酸中，包括8种人体必需氨基酸。维生素C的含量为中华猕猴桃的3倍，山楂的20倍，苹果的100倍。维生纱E的含量为豆油的30倍。维生素B1的含量是草莓的2倍；其他还含有维生素B2，维生素P，叶酸，叶酰胺以及微量元素和不饱和脂肪酸。沙棘果中的5-羟色胺，有显著的抗肿瘤活性作用。沙棘籽油中不饱和脂肪酸高这80％(其中亚麻酸达30％)。沙棘含有12种人体必须的微量元素，其中钙、铁、锌、钾、硒的含量较高。沙棘果具有滋补肝肾，补脾健胃，温经活血的功效。富含抗炎生肌、抗辐射、抗肿瘤、抗衰老、抗动脉硬化、抗多种老年病的生物活性成分，已被国内外专家所证实。对心脑血管疾病、脑动脉硬化、慢性胃炎、胃溃疡、慢性肝炎、肝硬化、均有其显著疗效、并对放疗、化疗引起的损伤及美容等方面有特殊作用，特别适合老人，妇女、儿童食用。有“长寿珍果”之称。本口服液采用上述原料，经反复对比研究筛选其配比、提取手段，最后实验表明它们在抗衰老、抑制MAO等氧化酶、抗过氧化、抗癌、抗病原微生物、抗炎和抗变态反应，增强和调整免疫功能、提高核酸代谢水平等方面面作用都超过或达到原单味原料的效果、在预防和治疗老年常见病高血压及心血管疾病、糖尿病、支气管炎、肺炎、胃溃疡和肝损害、肿瘤和多种病原微生物感染等疾病方面具有极高的综合应用价值。而本口服液的主要原料又大多为药食两用品种，因而更具有较高的安全实用价值。因此说本口服液的重要意义在于提出了一种安全、可靠的抗老防病保健品新途径。在充分吸收、应用现有各种抗衰老学说及经验的基础上，解决了目前抗衰老保健品市场生化合成药物给人们带来潜在危险的难题。同时也将提高老年人健康、延年益寿的重点放在防病治病上来。实施例一本口服液的免疫作用及促愈合机制研究。方法给小鼠ip不同浓度的本口服液，测定腹腔巨噬细胞的活化率；用不同浓度的本口服液提取液培养巨噬细胞，测定其吞噬中性红的能力及Fc受体活化的数量。结果本口服液能显著地提高巨噬细胞活化率、细胞表面Fc受体功能增强、提高其吞噬中性红的能力。结论本口服液能明显地增强巨噬细胞的免疫活性，可能对缩短炎症周期、促进伤口愈合起重要作用。1实验动物、试剂、仪器昆明种小鼠52只，体重(22.5±2.5)g，鼠龄6周～8周，全部为♂。本口服液原料取(1)黄芩10公斤；(2)地龙(蚯蚓)10公斤；(3)淫羊藿10公斤；(4)甘草10公斤；(5)沙棘10公斤；(6)蜂胶液30公斤；(7)乙醇60升；(8)苯甲酸钠100-300g；(9)蒸馏水加至100升；方法为先取(1)-(5)号原料洗净并粉碎后，先用水浸渍30分钟，在加5倍量水，煎煮1小时，共2次，合并煎液，过100目筛，滤液于70度已下减压浓缩成30升，放冷，在搅拌下，缓缓加入乙醇，使含醇量达60％(体积分数)，静置冷藏48小时，过滤，回收乙醇，浓缩至1∶1，药液冷藏24小时，过滤，滤液在搅拌下加浓氨水调整pH值至7.0～8.0，冷藏24小时，过滤，滤液加热搅拌去氨，药液保持在100～102度，2～2.5小时，至药液pH值为5.8，冷藏过夜，过滤备用。取上述药液，用100g/L碳酸钠溶液调整pH至5～7，加苯甲酸钠100克及蜂胶液30升，充分搅拌均匀，通过G3垂熔玻璃漏斗过滤，测定含量，再加水至100L，搅匀，灌装，塞胶塞，轧易拉盖，灭菌，经质量检查，贴签即得。厌氧棒状杆菌菌苗(简称厌棒菌苗，上海生物制品所)；绵羊红细胞(自制)；兔抗羊红细胞抗体(Sigma)。511型酶标分析仪(上海第三分析仪器厂)。2实验方法2.1巨噬细胞活化率将小鼠24只随机分为4组，分别ip不同浓度的本口服液2ml，次日重复注射，隔日采用眼眶放血法处死小鼠，剖开腹腔，做腹腔液片，每只小鼠印左、中、右3张，自然晾干，待细胞固定后，做Wright-Giemsa混合染色[4]，每个样本观察100个巨噬细胞，计数活化细胞与不活化细胞数量，做数理统计，与对照组(用0.02mol·L-1pH值为7.4磷酸缓冲液)比较。细胞活化程度的分级标准I型细胞的直径在10μm以上，有伪足，胞浆内有吞噬颗粒或有吞噬空泡，这类细胞为极活化细胞。II型①细胞的直径在10μm以上。②有伪足。③胞浆内有吞噬颗粒或有吞噬空泡。凡具备上两项者为活化细胞。III型细胞个小，没有伪足，不含吞噬颗粒或有吞噬空泡，这类细胞为不活化细胞。每个样本统计100个巨噬细胞，分出I型、II型、III型细丙，计算I型、II型细胞之和与III型细胞的比率，做统计学处理。2.2巨噬细胞对中性红的吞噬作用2.2.1小鼠腹腔巨噬细胞的制备[5]选用10只♂昆明种小鼠，断颈髓处死后浸于体积分数为75％的乙醇溶液中消毒。剪开小鼠腹部外层皮肤，向ip消毒Hanks液约8ml，轻揉小梭腹部后用注射器将腹腔液抽出，置于消毒试管中，离心，计数，用含100ml·L-1小牛血清的RPMI1640液制成细胞悬液(2×106个细胞·ml-1)，将该细胞悬液加入96培养板内，每孔0.1ml，37℃，5％二氧化碳培养2h，倾去上清液，洗涤细胞，以除去非贴壁细胞。2.2.2巨噬细胞吞噬中性红的测定[6]取细胞培养于96培养板内，每孔0.1ml含2×105个巨噬细胞，经贴壁除去非粘附细胞后，加入含有不同浓度本口服液、100ml·L-1小牛血清的RPMI1640培养基，37℃、5％氧化碳培养24h，然后向每孔加入0.1％的中性红生理盐水液100μl，继续培养0.5h。倾去上清液，用磷酸钾葡萄糖缓冲液冲洗3遍，每孔加入细胞溶解液(体积分数为50％的乙酸和体积分数为50％的无水乙醇)200μl，使细胞溶解。用酶标仪在波长550nm处测吸光度(A)值，用药组与对照组比较。2.3本口服液对巨噬细胞Fc受体的作用2.3.1巨噬细胞的收集小鼠18只，腹腔注射5％本口服液2ml，隔日注射，4d后采用眼眶放血法处死小鼠，ip2mlRPMI1640冲洗小鼠腹腔，轻揉小鼠腹部，用注射器抽出腹腔液。对照组分别注射2ml厌棒菌苗和2ml0.02mol·L-1pH7.4磷酸缓冲液。2.3.2单层巨噬细胞的制备将小鼠腹腔冲洗液0.5ml置于清洁的盖玻片上，于37℃水浴培养箱中平置培养2h，使具有粘附能力的巨噬细胞贴附于玻片上，用生理盐水冲洗，除去非粘附细胞及杂质。2.3.380ml·L-1绵羊红细胞的制备在无菌条件下，从健康绵羊的颈外静脉采血，装入无菌瓶内，离心，用生理盐水将细胞稀释而成。2.3.4EA-花环形成试验取羊红细胞悬液，加入等量1∶600的lgG，于37℃中孵育30min，用生理盐水洗涤3次除去游离的lgG，制成抗体包被的羊红细胞(EA)。最后配成5％的EA悬液，滴在单层巨噬细胞的细胞玻片上，每片约0.2ml，于4℃冰箱中静置2h，然后轻轻洗涤玻片以除去游离的EA。经固定，HE染色，即成EA-花环。镜下检查，以周围粘附有5个或5个以上EA的巨噬细胞计作一个花环。随机计数200个巨噬细胞，算出花环形成百分率。3实验结果实验组巨噬细胞中I型、II型细胞的数量明显多于对照组，细胞的个较大，有伪足，胞内含吞噬空泡或吞噬颗粒，说明本口服液能良好地促进巨噬细胞活化作用。本口服液提取液组对小鼠腹腔巨噬细胞Fc受体的影响与厌棒菌苗组相似，形成的花环较大，花环上的EA较多，与对照组有明显的区别，EA花环形成的百分率有显著的提高，花环大，与厌棒杆菌相近。本口服液能显著地促进巨噬细胞吞噬中性红。本口服液组的A值明显高于空白对照组，即使在很小的浓度1.0mg·ml-1也有较强的促巨噬细胞吞噬中性红的作用。4讨论巨噬细胞是一种主要的免疫细胞，它具吞噬异物、杀伤细菌的作用，同时还具趋化作用，分泌多种因子，使其它免疫细胞，如淋巴细胞、粒细胞等活化、趋向伤口部位，共同参与炎症反应，加快愈合[7]。巨噬细胞活化后，细胞体积增大，酸性水解酶活性增高，对细菌的杀伤和异物的吞噬消化能力大大增加，并能促进中性粒细胞等向伤口部位趋化，共同杀伤细胞、吞噬异物，缩短炎症期，促进愈合。我们选用巨噬细胞的活化率来评价本口服液的免疫作用，结果表明，本口服液具有明显地促进免疫细胞-巨噬细胞活化的作用。药物的作用强度依次为50g·L-1＞100g·L-1＞200g·L-1，其中，前两浓度与对照组有显著性差异(50g·L-1P＜0.01，100g·L-1P＜0.05)，浓度为200g·L-1药液对巨噬细胞亦有活化作用(资料未显示)。药物浓度过高或过低都不能促进巨噬细胞的活化或作用较弱，只有在浓度适中时才能促进巨噬细胞的活化，实验提示，本口服液对巨噬细胞具有双向调节作用。4.2Fc受体是巨噬细胞的一组最重要的表面标志，其功能状态可随机体的免疫水平而改变。以绵羊红细胞做为指示细胞，使其与相适应的抗绵羊红细胞抗体结合形成EA。巨噬细胞可通过Fc受体与EA结合形成花环。其花环形成的数量和活性变化可在一定程度上反应机体的免疫水平。巨噬细胞Fc受体结合抗体，形成抗原抗体复合物，借抗体的Fab段再与细菌结合，在巨噬细胞的周围，使细菌-巨噬细胞-抗体“桥联”起来。在C3b受体的协同下，使巨噬细胞激活并发挥强大的调理作用，抑制或杀死细菌。因此，巨噬细胞Fc受体的数量和活性变化可作为检测巨噬细胞活力的一个指标。实验表明本口服液能显著地促进巨噬细胞Fc受体的活化，增强其吞噬中性红的能力。实施例二本口服液治疗老年人呼吸道细菌感染目的评价本口服液片治疗呼吸道感染的临床疗效及其安全性。方法采用单盲对照方法，将104例呼吸道细菌感染患者配对并随机分入试验和对照组。试验组给予本口服液20毫升，每日二次，对照组给予琥乙红霉素0.375g，tid，po。疗程为7～10d。结果试验组的综合临床疗效显著优于对照组(P＜0.01)；试验组痊愈率为71.2％，有效率为94.2％，均显著高于对照组(P＜0.05)；试验组未见不良反应，对照组不良反应率为15.4％。结论本口服液用于呼吸道细菌感染的治疗是有效、安全的。材料与方法1病例选择所观察的对象均为经临床及细菌学检查确诊的急性呼吸道细菌感染患者。年龄48～70岁，性别不限。正在接受有效抗菌药物治疗者不予入选。入选病例104例。试验组(T)52例中，男26例，女26例，平均年龄(55.48±14.52)岁；病情轻、中、重度者分别为9，31和12例，平均体温为(37.64±0.69)℃，平均体重(59.60±8.50)kg；病种上呼吸道感染28例，下呼吸道感染11例，细菌性肺炎13例。对照组(C)52例患者中，男23例，女29例，平均年龄(56.07±14.04)岁，病情轻、中、重者分别为14，28和10例，平均体温(37.73±0.82)℃，平均体重(57.72±6.59)kg；病种上呼吸道感染28例，下呼吸道感染29例，细菌学肺炎4例。经统计学检验，患者治疗前有关症状、体征，如咳嗽、咯痰、呼吸困难、肺部罗音、咽痛、扁桃体肿大、颌下淋巴结肿痛等单项指标的平均记分值之间无显著性差异。2给药方法T组患者给予本口服液，20毫升，每日二次，其制备方法同实施例一。C组患者给予西安制药厂生产的琥乙红霉素(0.125g/片，商品名利君沙)3片，tid，po。3观察项目3.1实验室检查所有受试患者治疗前、后均作血、尿常规，肝、肾功能和胸部X线检查。3.2细菌学检查所有受试患者治疗前、后均采集深部痰标本作细菌培养和种属鉴定。采用纸片法作本口服液、红霉素、诺氟沙星、头孢唑啉、庆大霉素及苯唑青霉素等药物的敏感试验。结果按NCCLS标准判断。并检测了本口服液、红霉素对分离出致病菌的MIC50和MIC90值。3.3临床观察指标逐日观察并记录所有受试患者治疗前、后临床症状、体征的变化情况。咳嗽、咯痰、呼吸困难和肺部罗音的记录采用记分法无-，轻度+，中度，重度。观察记录所有受试患者中出现的不良反应，包括其临床表现、程度、发生及持续时间、处理及转归，并判断其与受试药物间的关系属下列何种情况①肯定有关，②可能有关，③肯定无关，④可能无关，⑤难以判断。根据①和②两种情况的病例数计算不良反应发生率。4疗效判断标准临床疗效按卫生部1993年颁发的《抗菌药物临床研究指导原则》按痊愈、显效、进步、无效4级进行评定。以痊愈和显效合计为有效，据此计算有效率。细菌学疗效分细菌清除、未清除、部分清除、替换、再感染(治疗结束时分离到1种新的致病菌，并出现感染的症状和体征，需给予治疗者)5级。5统计学方法采用χ2或精确概率法检验，半定量资料采用秩和检验，计数资料采用t检验。结果1临床疗效综合临床疗效见附表1。经秩和检验，T组患者的综合临床疗效显著地高于C组(P＜0.01)。χ2检验结果显示，T组的痊愈率(71.2％)也显著地高于C组(40.4％)，P＜0.01。1.2单项指标的疗效①T组患者治疗后咳嗽症状的平均下降分(2.09)显著大于C组(1.60)，P＜0.05；②T组患者咳嗽症状的消失率(75.0％)和肺部罗音的消失率(88.0％)分别显著高于C组(42.4％和40.0％)，P值均＜0.01；③T组患者咯痰平均消失天数为(5.87±2.34)d，显著少于C组(8.07±2.75)d，P＜0.05。2细菌学疗效104例受试患者中共分离出105株致病菌。这些菌株对本口服液、红霉素、诺氟沙星、头孢唑啉、庆大霉素和苯唑青霉素的敏感率分别为98.8％、90.1％、84.0％、85.2％、72.8％和49.4％。本口服液MIC50和MIC90值分别为0.25mg/L和8.00mg/L，红霉素对该组致病菌的MIC50和MIC90值分别为0.50mg/L和16.0mg/L。前者仅为后者的一半。本口服液片对52例致病菌的清除率为94.2％，琥乙红霉素片对53株致病菌的清除率为88.7％。本组患者中未见菌群替换和再感染的病例。两组患者用药后细菌平均清除天数分别为(5.41±2.14)d和(5.39±1.90)d，P＞0.05。3不良反应T组52例患者服药后未出现不良反应。C组52例患者服药后，8人出现9例次不良反应，不良反应发生率17.3％。这些不良反应均轻微、短暂，无需特殊处理，也未影响继续用药。T、C两组患者服药后均未出现血、尿常规和肝、肾功能检查的异常。琥乙红霉素是红霉素的琥珀酸乙酯，不被胃酸所破坏，肝损发生率低是其优点。因此，我们选择该药作为本口服液的对照药。本试验结果显示出本口服液临床疗效优于琥乙红霉素。这与细菌学指标检测结果是一致的。本口服液对上、下呼吸道感染和肺炎均有确切的疗效，这与本口服液对社区获得性呼吸道感染的大多数致病菌的50s亚单位均有强大抑制作用有关。本试验结果还显示，本口服液具有较好的安全性。该药对肝、肾功能，血、尿常规检查结果未产生不良影响。实施例三本口服液调节老年人血脂的临床研究对象与方法1病例选择1996年9月～1997年6月，检查血清总胆固醇(TC)≥5.69mol/L和(或)甘油三酯(TG)≥1.76mmol/L和(或)高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)男性≤1.04mmol/L，女性≤1.17mmol/L的高脂血症患者中，经询问病史、体检及有关检验，除肾病、肝、胆、胰及甲状腺疾患、未控制的糖尿病、药物性高脂血症、半年内曾患心肌梗死、脑血管病、严重创伤、重大手术及8周内曾服用影响血脂水平的药物者外，共114例进入本研究。其中男69例，女45例，年龄47～73岁，平均57岁。伴高血压者57例，冠心病者66例，糖尿病者4例。2给药方法按血清TC及TG水平随机分为2组治疗组57例，服本口服液，20毫升/次，早晚各1次。对照组57例，服安慰剂胶囊，1粒/次，bid。疗程均为8周。服药前及服药后4及8周末，均询问症状、检测体重、血压、心率、心律、肝脾触诊，查心电图、尿糖、血及尿常规、血小板计数及空腹取静脉血测血脂、载脂蛋白、脂蛋白(a)(Lp(a))、胆红质、ALT、血糖、BUN或肌酐。3血脂、载脂蛋白及Lp(a)测定取血前最后一餐禁酒及忌高脂饮食，空腹12h以上取静脉血，及时分离血清，取血后6h内以速率免疫化学比浊法，用Beckman公司“ICS”仪器及配套试剂完成载脂蛋白A-I(ApoA-I)及载脂蛋白B(ApoB)测定。剩余血清置于薄膜封口的试管内，贮于-20℃冰箱，72h内用上海生化试剂研究所供应的酶试剂及方法进行TC、TG及HDL-C测定。有关测定的CV值均＜5％，Lp(a)用双抗体夹心ELISA法测定，批内CV值为5.2％，批间CV值为9.9％。LDL-C计算公式如下(单位为mmol/L)LDL-C＝TC-HDL-C-TG/2.24统计分析用t检验，χ2检验及方差分析。结果1治疗前后血脂、脂蛋白、载脂蛋白及Lp(a)水平见附表2。表中治疗前各项指标的数值，在两组间均无明显差别(P＞0.05)。由此，治疗后两组间的数值有可比性。2个体疗效分析见附表3。讨论本研究结果提示，本口服液有良好而可靠的调节血脂作用，其调脂效果与报道的潘特生、益多酯及乐脂平相当。附表1T、C两组患者用药后疗效分析</tables>附表2治疗前后血清脂质，脂蛋白，载脂蛋白及Lp(a)水平与治前比a∶P＜0.05；b∶P＜0.01；c∶P＜0.001。组间比d∶P＜0.05；e∶P＜0.01；f∶P＜0.001。+示上升，-示下降。附表3调节血脂的个体效分析a单位mmol/L，()括号内数字为评定疗效标准。NS无统计学意义。权利要求1.一种老年用保健口服液，其特征在于它是由下述重量配比的原料制成的外用软膏(1)黄芩10～20公斤(2)地龙(蚯蚓)10～20公斤(3)淫羊藿10～20公斤(4)甘草10～20公斤(5)沙棘10～20公斤(6)蜂胶液30～60公斤(7)乙醇60～120升；(8)苯甲酸钠100-300g；(9)蒸馏水加至100～200升；2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于先取(1)-(5)号原料洗净并粉碎后，先用水浸渍30分钟，在加5倍量水，煎煮1小时，共2次，合并煎液，过100目筛，滤液于70度已下减压浓缩成30升，放冷，在搅拌下，缓缓加入乙醇，使含醇量达60％(体积分数)，静置冷藏48小时，过滤，回收乙醇，浓缩至1∶1，药液冷藏24小时，过滤，滤液在搅拌下加浓氨水调整pH值至7.0～8.0，冷藏24小时，过滤，滤液加热搅拌去氨，药液保持在100～102度，2～2.5小时，至药液pH值为5.8，冷藏过夜，过滤备用。取上述药液，用100g/L碳酸钠溶液调整pH至5～7，加苯甲酸钠100克及蜂胶液30升，充分搅拌均匀，通过G3垂熔玻璃漏斗过滤，测定含量，再加水至100L，搅匀，灌装，塞胶塞，轧易拉盖，灭菌，经质量检查，贴签即得。全文摘要本发明涉及一种老年用保健口服液及其制备方法,其基本成分有黄芩、地龙、淫羊藿、蜂胶、沙棘、甘草等,其制备简单,具有抑制脂加氧酶、抗氧化、清除人体内过氧化自由基,保护维生素C免被氧化破坏、抗衰老、增强人体免疫力和抑制变态反应、提高核酸代谢水平、抗促癌、抗致突、抗病毒、抗炎、抗多种病源微生物等生物活性,在预防和治疗老年常见多发病等方面具有较高的医疗价值。对高血压、心血管疾病、糖尿病、支气管炎、肺炎、胃溃疡和肝损害、肿瘤和多种病原微生物感染等多种老年常见病的作用尤为显著。文档编号A61P1/00GK1248461SQ99104258公开日2000年3月29日申请日期1999年4月26日优先权日1999年4月26日发明者罗萌,梁峰申请人:罗萌,梁峰